中国中西医结合杂志年月第卷第期! 01 信号通路介导养精种玉汤有效部位调节猪卵巢颗粒细胞雄激素水平的作用机制叶丹凤马红霞吴婉婷赖毛华刘华郑艳华马婉莹摘要目的通过丝裂原活化蛋白激酶 ' *$) $ $ ) ) $ 01 信号通路探讨养精种玉汤正丁醇 - 及乙酸乙酯 232

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正幸葛
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1 01 信号通路介导养精种玉汤有效部位调节猪卵巢颗粒细胞雄激素水平的作用机制叶丹凤马红霞吴婉婷赖毛华刘华郑艳华马婉莹摘要目的通过丝裂原活化蛋白激酶 ' *$) $ $ ) ) $ 01 信号通路探讨养精种玉汤正丁醇 - 及乙酸乙酯 232 提取物降低猪卵巢颗粒细胞雄激素水平的作用机制方法分离并培养猪卵巢颗粒细胞将细胞按不同浓度的 01 抑制剂 1-4"4 孵育分为空白对照 ' /5 共组培养 % ( 后采用实时荧光定量 16 6$ '$ 16 法检测羟化酶 / 裂解酶 ( '$ 1% 21 '6!0 表达水平应用放射免疫测定法 60 检测细胞上清液雄激素睾酮含量筛选最佳的 1-4"4 作用浓度采用 ' /5 1-4"4 干预卵巢颗粒细胞 % ( 后将细胞培养液更换成含或不含有不同浓度 '*/'5 的养精种玉汤有效成分提取物 - 及 232 干预不同的时间 #"% ( 后采用 $ $ ) 7 法检测各组磷酸化的细胞外信号调节激酶 &6 / 8 及 21 蛋白表达水平 60 法检测细胞上清液睾酮含量结果 ' /5 1-4"4 可明显降低猪卵巢颗粒细胞 &6 / 蛋白表达增加 21 '6!0 表达并可增加细胞上清液睾酮含量 1 9 当养精种玉汤 -232 提取物浓度为 )*/'5 作用时间为 # ( 时可增加猪卵巢颗粒细胞 &6 / 8 蛋白水平并降低 21 蛋白的表达降低细胞上清液睾酮含量 1 9 结论养精种玉汤有效成分通过增加 01 的活性从而降低猪卵巢颗粒细胞的雄激素生成关键词养精种玉汤雄激素猪卵巢颗粒细胞丝裂原活化蛋白激酶 &::$ $ )* $ $) : 2 )*; )* ()* -$ ) 6$* $ 0) *$) ) ($ $ 7 *$)0 $ 1 $ ) ) $ 1 ( ) 1 )$ ) $ $ 2& - ):$)* 0 )* + ) )* 50 ( 5 &! 2 )( ) 0 ) )* ) * ( $ ) $ )* ( -$ '$) : ) ( )$ $ $ )$ 8 0: : $ : )* ( $ ) $ )* ( ) $ : ) $* $ ) ) $ $ ) $ )$ )* ( $ ) $ )* ( ;$ $ ($ ' $ '$ ( ) ' : 2 )*; )* ()* -$ ) 2 - )7 ) $+ - ) $ ( $ $ $+ 232 ) $ )* ) *$) ) )$ * ) $ $ 7 ' *$) $ $ ) ) $ 01 ( $ ( 1 )$ * ) $ $ $ $ $ ) $ ($ $ $ ) $ 7 01 )( 7 1-4"4 ::$ $) ) $) ) ) ($) ($ $ $ $ ) ($ 7 ) ) * ) ' /5 * 0: $ %( $ ($ ( '$ 1% 21 '6!0 $+ $ ) $ $ $ $ $ )* 6$ '$ : $ $) < ) $ 16 ) $) : ) *$) $ $ )$ ) ($ $ ) $ $ $ $ $ $ )* 60 ) ' 1-4"4 ) $) ) $$)$ 0: $ ) $ $)$ 7 ' /5 1-4"4 : % ( ($ $ ) ) $ $)$ 7 $: :$ $ )* $ $) : ( ( ) $) ) '*/'5 '$ ) # " % ( &+ $ ) $ $ : &6 / 8 ) 21 $ $ $ $ $ 7 $ $ ) 7 $ $ )$ ) $) ) ($ $ ) $ $ $ ' )$ 7 '' ) 60 6$ $) ' /5 1-4"4 7 $ $ $ &6 / $ ) $+ $ ) ) ) $ $ 21 '6 0 $+ $ ) ) $ $ $ $ $ )$ ) $) ) ($ $ ) $ ) 232 )*/'5 ) $ $ 基金项目国家自然科学基金资助项目! ""# 作者单位广州医科大学研究生院广州广州医科大学附属第一医院中医科广州广州医科大学中西医结合研究所广州通讯作者马红霞 $ "#% &' ()*+,# ' -. ##/ "%

2 中国中西医结合杂志年月第卷第期! &6 / $ ) $+ $ ) ) 8 $ $ ) $ $ 21 $ ) $+ $ ) ) $ $ $ )$ ) $) ) ($ $ ) $ : $ #( ) $ $) ) 1 9 ) ) &::$ $ )* $ $) : 2 - $ $ ) *$) ) ) )$ * ) $ $ ( *( ) $ )* $ : 01 & )*; )* ()* -$ ) ) *$) )$ * ) $ $ ' *$) $ $ ) ) $ 多囊卵巢综合征 ) ) '$ 1.3 又称 3 $ )5$ $) ( 综合征在 4 年由 3 $ )5$ $) ( 提出是一组表现为肥胖不孕闭经多毛双侧卵巢呈多囊样改变的综合征 1.3 的主要病理生理改变为体内雄激素增多由于雄激素的来源复杂 1.3 患者抗雄激素的治疗也是多方面的如口服避孕药雄激素受体拮抗剂还原酶抑制剂等但这些药物本身存在一些不良反应如长期口服避孕药可能导致血脂异常糖耐量异常胰岛素抵抗血栓形成以及停药后复发等中药复方具有多效应及不良反应小的特点对于复杂的病症可经多途径多环节多靶点进行调节养精种玉汤出自傅青主女科用于补肾养血为调经种子的有效方剂本课题组前期研究表明养精种玉汤能降低 1.3 大鼠模型血清睾酮 $ $ )$ 及相应底物羟孕酮浓度水平升高血清雌二醇 & 水平并促进卵巢颗粒细胞增殖分化相关基因的表达其主要有效部位是正丁醇 - 和 232 提取物 % 本研究从雄激素生成关键酶羟化酶 / 裂解酶 21 的基因表达及其调控因子 8 与主要信号转导途径丝裂原活化蛋白激酶 ' *$) $ $ ) ) $ 01 探讨养精种玉汤主要有效部位 - 及 232 提取物降低猪卵巢颗粒细胞雄激素合成的机制材料与方法动物 % =# 月龄大白猪猪卵巢在保温条件下小时内从当地的屠宰场带回实验室猪卵巢颗粒细胞从猪卵巢中提取药物与试剂养精种玉汤组成大熟地 * 当归 * 白芍 * 山萸肉 * 采用 - 和 232 提取有效部位样品浓度为 */'5 即每毫升含 * 生药由广东药学院制备冰冻保存使用前先室温自然解冻 /' ) 以上转速离心 ' ) 取上清液再用 ' 微孔滤膜过滤除菌青链霉素混合液双抗青霉素含量为 /'5 链霉素含量为 '*/'5 由 3 7 公司提供批号 1% 01 抑制剂 1-4"4 购自 3$ $ ($' 批号 3 培养基 -& &/8 批号 36 和胎牛血清购自 )$ 公司批号 3 "% 兔抗 1%%/ % 01 &6 / ( ( %%/% ' *$) $ $ ) ) $ $+ $ $* $ $ ) ) $ 购自 $ 3 *) )* $ () * 批号 43 兔抗人 8 8 $ ' ) *$)$ 购自美国 3 ) 公司批号 3 ## 兔多克隆抗体 21 购自英国. 2 公司批号 74%" 兔抗 01- * $ $ ( $ ( ( $ $( *$) $ 购自 0 ' 7"# $ $ ) 7 所需试剂购自上海碧云天生物技术有限公司山羊抗兔 * 二抗 61 辣根过氧化物酶标记购自 & (.+ 公司批号 & 猪卵巢颗粒细胞的分离与培养取新鲜的猪卵巢置于含高浓度双抗每 '5 生理盐水含 '5 的青链霉素混合液生理盐水中用含有 > 双抗的 1 3! '' /5 '' /5! 1. % '' /5 1. % '' /5 =% 反复冲洗遍放入含有少量培养基的培养皿中选取未成熟的直径小或中等大小的卵泡 =% '' '5 注射器刺破并吸出卵泡液加入含有 '5 生理盐水的离心管 '5 中以 /' ) 离心 ' ) 弃上清液采用培养基 - & /8 > 8 3 洗涤细胞次离心去上清获得的细胞即为较纯的颗粒细胞 # 将上述方法获得的颗粒细胞悬浮于 > 8 3 的培养基中反复吹打使之分散以 # /5 的细胞浓度接种于 # 孔板后将细胞放入 >. 4> 空气的培养箱中培养 %1-4"4 有效浓度筛选参照文献通过 1-4"4 作用颗粒细胞检测 21 '6!0 以筛选 1-4"4 最佳浓度上述方法培养的卵巢颗粒细胞按照含有不同浓度的 1-4"4 分为空白对照 ' /5 组共组各组培养 % ( 后提取细胞 6!0 采用 6$ '$ 16 法检测 21 '6!0 的表达用 6 提取细胞总 6!0 并按反转录试剂盒说明进行反转录在 0 4 荧光定量 16 系统中对 21 的水平进行检测以

3 ) 为对照 21 上游引物 00 下游引物引物长度 % 7 内参 ) 上游引物下游引物引物长度 7 < 6 16 循环参数 4 预变性个循环 4 # % 个循环溶解曲线 4 # ' )4 21 '6!0 表达量以来表示其值为以 21 '6!0 表达量与 ) 表达量的比值再将对照组的量设为其余样本的数值与其相除得到相对定量值每个目的基因重复测定次含量测定将培养细胞分为两组实验组 1- 组为最佳浓度的 1-4"4 干预卵巢颗粒细胞 % ( 对照组为无药物干预组收集各组的细胞上清液并保存于冰箱中采用 60 法检测细胞上清液的含量每组重复测定次 # 养精种玉汤有效成分 - 和 232 最佳作用浓度及作用时间的探索 # 最佳作用浓度的探索将细胞分为两大组第组为 - 干预组第组为 232 干预组根据含或不含有效成分 - 或 232 及干预浓度各组再分为 # 个小组分别为 1- - 组 1-? - 组 1-? - 组 1-? - 组 1-? - 组及 1-? - 组或组 1-? 232 组 1-? 232 组 1-? 232 组 1-?232 组及 1-? 232 组第小组不进行任何药物干预其余组为上述实验筛选出的最佳浓度 ' /5 的 1-4"4 干预 % ( 后换成含有不同浓度 '*/'5 的 - 或 232 培养基中干预 % ( 收集各组细胞上清液采用 $ $ ) 7 检测各组 &6 / 蛋白水平每组实验重复次筛选 - 及 232 的最佳作用浓度 # 最佳作用时间的探索将上述 - 干预组和 232 干预组分别分为 " 个小组各组卵巢颗粒细胞经 ' /5 1-4"4 干预 % ( 后更换成含有或不含有 # 实验筛选出的最佳浓度的 - 或 232 分别干预不同时间 #"% ( 其分组为 1-? - ( 组 1-? - (? 组 1-? - # ( 组 1-? - # (? 1-? - " ( 组 1-? - " (? 组 1-? - % ( 组及 1-? - % (? 组或 1-? 232 ( 组 1-? 232 (? 组 1-? 232 # ( 组 1-? 232 # (? 组 1-? 232 " ( 组 1-? 232 " (? 组 1-? 232 % ( 组 1-? 232 % (? 组收集各组细胞上清液采用 $ $ ) 7 法检测各组 &6 / 蛋白表达每组实验重复次筛选 - 及 232 的最佳作用时间实验分组将培养的猪卵巢颗粒细胞分为 - 及 232 干预组各组在 ' /5 1-4"4 干预 % ( 后更换成含有或不含有最佳浓度的养精种玉汤有效成分提取物后干预最佳作用时间收集各组蛋白质及细胞上清液采用 60 检测细胞上清液的睾酮含量每组实验重复次 " 卵巢颗粒细胞 &6 / 8 及 21 蛋白表达检测采用 $ $ ) 7 法将 # 孔板中的细胞用预冷的 1 3 洗遍后加入 610 裂解液及蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟 1 38 冰上孵育 ' ) 收集细胞裂解产物 % % * 离心 ' ) 将上清移至另一预冷的 '5 &1 管中 0 法测定蛋白质浓度并分装蛋白质与 5 )* 7 ::$ 混合沸水煮 ' ) 置冰上 ' ) 取 * 蛋白上样 > & 在 " ' ' ) 下进行电泳并于 % 冷库 '0 ( 条件下转膜 1-8 膜用封闭液含 > 脱脂奶粉的磷酸盐缓冲液室温孵育 ( 倒去封闭液加入一抗 % 孵育过夜 3 ::$ $ 3 )$ ) $$) 洗膜次每次 ' ) 加入辣根过氧化物酶标记的二抗室温孵育 ( 3 洗膜次每次 ' ) 膜稍干后加入化学发光试剂孵育 ' ) 于暗室曝光曝光时间 = ' ) 以 01- 为内参其中兔抗 &6 / 稀释比例为兔抗 8 为 % 兔抗 21 为 " 兔抗 01- 为山羊抗兔 * 二抗比例为采用 ' *$ 对 $ $ ) 7 图片进行灰度分析计算目的基因 / 内参基因灰度值比值 4 统计学方法采用 3133 统计学软件进行数据分析计量资料以 + 表示各组间比较采用单因素方差分析两两比较采用 53- 法 1 9 为差异有统计学意义结果卵巢颗粒细胞培养图卵巢颗粒细胞呈单层贴壁性生长培养 % ( 后细胞开始贴壁增殖倒置显微镜下观察可见细胞核大胞浆饱满颗粒丰富均匀透光好细胞生长呈星形或梭形细胞与细胞间有延长的伪足相互连接

中国中西医结合杂志年月第卷第期! 表不同浓度的 - 与 1-4"4 共孵育后各组细胞上清 &6 / 蛋白表达比较 + 1- - 1-? - % 1-? - " # 1-? - #4 1-? - 1-? - " 注与 1- - 组比较 1 9 与 1-? - 组比较 1 9 图培养 % ( 贴壁生长的卵巢颗粒细胞倒置显微镜不同浓度的 1-4"4 作用下各组 21 '6!

4 中国中西医结合杂志年月第卷第期! 表不同浓度的 - 与 1-4"4 共孵育后各组细胞上清 &6 / 蛋白表达比较 ? - % 1-? - " # 1-? - #4 1-? - 1-? - " 注与 1- - 组比较 1 9 与 1-? - 组比较 1 9 图培养 % ( 贴壁生长的卵巢颗粒细胞倒置显微镜不同浓度的 1-4"4 作用下各组 21 '6!0 表达水平比较表与空白对照组比较各组 21 '6!0 表达均增加 1 9 且当 1-4"4 浓度为 ' /5 时 21 '6!0 的表达增加倍左右故后续实验 1-4"4 均采用此浓度表不同浓度的 1-4"4 作用下各组 21 '6!0 相对表达量比较 + 组别 ) 21 '6!0 空白对照 1-4"4 ' /5 # #% ' /5 % % ' /5 ' /5 " 注与空白对照组 1 9 ) 为实验重复次数下表同对照组与 1- 组含量比较对照组含量为 % )*/'51- 组含量为 " )*/'51- 组较对照组明显升高 1 9 % 不同浓度的 - 和 232 提取物干预后各组卵巢颗粒细胞 &6 / 蛋白水平比较 % 不同浓度的 - 提取物与 1-4"4 共孵育后各组 &6 / 蛋白水平比较表图与 1- - 组比较 1-? - 组 &6 / 表达减少 1 9 与 1-? - 组比较 1-? - 组 &6 / 表达增加且增加最明显 1 9 因而后续 - 的浓度选取 '*/'5 % 不同浓度的 232 提取物与 1-4"4 共孵育后各组 &6 / 蛋白水平比较表图与组比较 1-? 232 组 &6 / 表达减少 1 9 与 1-? 232 组比较 1-? 232 组 &6 / 表达增加最明显 1 9 注为 1- - 组为 1-? - 组为 1-? - 组 % 为 1-? - 组为 1-? - 组 # 为 1-? - 组图不同浓度的 - 与 1-4"4 共孵育后各组 &6 / 蛋白表达表不同浓度的 232 与 1-4"4 共孵育后各组细胞上清 &6 / 蛋白表达比较 % # 1-? ? ? # 1-? ? 232 " 注与组比较 1 9 与 1-? 232 比较 1 9 注为组为 1-? 232 组为 1-? 232 组 % 为 1-? 232 组为 1-? 232 组 # 为 1-? 232 组图不同浓度的 232 与 1-4"4 共孵育后各组细胞上清 &6 / 蛋白表达水平故后续 232 的浓度选取 '*/'5 养精种玉汤有效部位与 1-4"4 共孵育不同时间后各组细胞上清 &6 / 蛋白水平比较 - 与 1-4"4 共孵育不同时间后各组细胞上清 &6 / 蛋白水平比较表 % 图 %1-? - # (? 组与 1-? - # ( 组 1-? - " (? 组与 1-? - " ( 组比较前者 &6 / 表达水平均高于后者 ?

- # ( 组比较 1-? - # (? 组 8 表达增加 21 表达减少 1 9 与 1-? 232 # ( 组比较 1-? 232 # (? 组 8 表达增加 21 表达减少 1 9 表 # 各组卵巢颗粒细胞 8 及 21 蛋白表达水平比较 + 注为 1-? - ( 组为 1-? - (? 组为 1-? -# ( 组 % 为 1-? -# (? 组为 1-? -" ( 组 # 为 1-?

5 - # (? 组较 1-? - # ( 组 &6 / 表达增加约倍表 % - 与 1-4"4 共孵育不同时间后各组细胞上清 &6 / 蛋白表达水平比较 + 1-? - ( 1-? - (? % 1-? - # ( " 4 1-? - # (? 4 1-? - " ( 1-? - " (? 1-? - % ( 1-? - % (? "" % 注与 1-? - # ( 比较 1 9 与 1-? - " ( 比较 1 9 注为 1-? 232 ( 组为 1-? 232 (? 组为 1-? 232 # ( 组 % 为 1-? 232 # (? 组为 1-? 232 " ( 组 # 为 1-? 232 " (? 组为 1-? 232 % ( 组 " 为 1-? 232 % (? 组图 232 与 1- 共孵育不同时间后 &6 / 蛋白表达 # 各组卵巢颗粒细胞 8 及 21 蛋白水平比较表 # 图 # 与 1-? - # ( 组比较 1-? - # (? 组 8 表达增加 21 表达减少 1 9 与 1-? 232 # ( 组比较 1-? 232 # (? 组 8 表达增加 21 表达减少 1 9 表 # 各组卵巢颗粒细胞 8 及 21 蛋白表达水平比较 + 注为 1-? - ( 组为 1-? - (? 组为 1-? -# ( 组 % 为 1-? -# (? 组为 1-? -" ( 组 # 为 1-? -" (? 组为 1-? - % ( 组 " 为 1-? -% (? 组图 % - 与 1-4"4 共孵育不同时间后各组细胞上清 &6 / 蛋白表达 232 与 1-4"4 共孵育不同时间后各组细胞上清 &6 / 蛋白水平比较表图 1-? 232 # (? 组与 1-? 232 # ( 组 1-? 232 " (? 组与 1-? 232 " ( 组比较前者 &6 / 表达均高于后者 ? 232 # (? 组较 1-? 232 # ( 组 &6 / 表达增加约倍表 232 与 1-4"4 共孵育不同时间后各组细胞上清 &6 / 蛋白表达比较 + 1-? 232 ( 4 " 1-? 232 (? %% 1-? 232 # ( % 1-? 232 # (? 4 1-? 232 " ( 1-? 232 " (? 1-? 232 % ( 1-? 232 % (? 注与 1-? 232 # ( 比较 1 9 与 1-? 232 " ( 比较 1 9 组别 ) 8 蛋白 21 蛋白 1-? - # ( 4 "% 1-? - # (? # 1-? 232 # ( % # % # 1-? 232 # (? % 4 4# 注与 1-? - # ( 8 蛋白比较 1 9 与 1-? 232 # ( 8 蛋白比较 1 9 与 1-? - # (21 蛋白比较 1 9 与 1-? 232 # ( 21 蛋白比较 1 9 注为 1-? - # ( 组为 1-? - # (? 组为 1-? 232 # ( 组 % 为 1-? 232 # (? 组图 # 养精种玉汤有效成分提取物作用后 8 及 21 蛋白表达电泳养精种玉汤有效成分提取物作用 # ( 后各组颗粒细胞水平比较表与 1-? - # ( 组比较 1-? - # (? 组细胞上清液含量降低 1 9 与 1-? 232 # ( 组比较 1-? 232 # (? 组细胞上清液中含量降低 1 9

6 中国中西医结合杂志年月第卷第期! 表养精种玉汤有效成分提取物作用 # ( 后颗粒细胞水平比较 + 组别 ) )*/'5 1-? - # ( " 1-? - # (? " 1-? 232 # ( 1-? 232 # (? # % 注与 1-? - # ( 比较 1 9 与 1-? 232 # ( 比较 1 9 讨论根据中医肾藏精主生殖女子血海盈亏有期及女性月经周期中阴阳消长转化规律经后期予以滋肾养精血治疗以促进卵泡发育养精种玉汤是滋肾养精血的代表方是调经种子的有效方剂 "4 有研究表明养精种玉汤能增加颗粒细胞孕酮与雌二醇的分泌提高子宫内膜对胚泡种植的接受性有助于提高试管婴儿成功率 % 本课题组前期的研究表明养精种玉汤有效成分 232 和 - 提取物可以促进雄激素向雌激素的转化又可以降低雄激素的生成 % 本研究主要探讨养精种玉汤主要有效部位降低猪卵巢颗粒细胞雄激素生成的机制 1.3 为生育年龄女性常见疾病 1.3 常表现为高胰岛素血症雄激素增多等其发病机制尚未阐明但研究认为高雄激素血症在 1.3 的发病机制中发挥着重要的作用在卵巢和肾上腺类固醇合成的核心途径涉及到细胞色素 1% 基因家族 1% 具有羟化酶和裂解酶活性在肾上腺类固醇和性腺雄激素的合成中起到关键的限速作用 1.3 妇女中分离出的膜细胞与正常膜细胞比较毛猴素刺激的 21 增加更加明显 1.3 膜细胞长期培养后 21 基因的转录及 1% 羟化酶 / 裂解酶的活性增强表明 1.3 膜细胞中增加的 21 导致生成雄激素的类固醇生成酶的升高 # 21 的调节涉及多种分子途径的相互作用研究表明在 5 水平升高的典型 1.3 中升高的 5 水平可能导致裂解酶的增加近年有研究认为 01 途径也可能参与了类固醇的生成 01 是一种使信号从细胞质到细胞核的信号转导介质 " 本实验中颗粒细胞在含有 01 抑制剂 1-4"4 的培养基中培养后 21 '6 0 的表达升高表明 01 途径的抑制可增加 21 '6!0 的活性研究表明 1.3 卵巢中分裂原活化抑制剂 & / 和 &6 / 信号降低并且降低的 & / 和 &6 / 的活性可导致 21 基 4 因表达的增加和雄激素合成增多在本研究中颗粒细胞在含有 01 抑制剂 1-4"4 的培养基中培养后 &6 / 蛋白减少睾酮水平增高以上表明猪卵巢颗粒细胞中雄激素的调控可能是通过 01 途径来调控 21 的表达从而调节雄激素的生成因此本课题组从 01 途径来研究养精种玉汤有效成分降低雄激素的机制笔者假设养精种玉汤有效成分可以通过活化 01 途径来降低 21 和雄激素的合成当 01 抑制剂浓度为 ' /5 时与对照组比较 21 '6!0 表达增加最明显因而本实验后续实验采用 ' /5 的 1-4"4 干预颗粒细胞结果表明颗粒细胞经 ' /5 01 抑制剂 1-4"4 处理后再用 - 或 232 提取物干预当其浓度均为 '*/'5 时 &6 / 表达的增加相对于其他组最明显当 - 或 232 提取物作用于颗粒细胞的时间为 # ( 时磷酸化 &6 / 表达的增加相对于其他组最明显颗粒细胞在 ' /5 1-4"4 干预后 '*/'5 的 - 或 232 提取物作用于细胞 # (21 和睾酮的表达水平降低在人类卵巢膜细胞模型中 8 可能是抑制 21 表达的一种因子 8 属于激活蛋白家族的转录因子 8 / ; ) 异源二聚体可以阻止 38 与 21 基因启动子的结合研究表明 01 途径的阻断导致 21 的增加可能涉及到 8 本研究结果表明养精种玉汤 232 提取物和 - 提取物均增加了颗粒细胞 8 基因的表达综上所述本实验表明养精种玉汤 232 和 - 提取物可能通过增加磷酸化 &6 的活性而抑制 21 和雄激素的生成并且其对 21 的抑制机制可能涉及 8 表达的增加参考文献 3 $ $) 3 $' 0 ( $ 6 : $) ( '7$'7 ' ) '$) ( ) '$ )7 $ ' ($ ( ) 0 " *$) 1 ( - & ( 10 $ 0 ) 7$ $$) ($ $) $ : $ ) $ $ ) $ $ $ '$ ) ) &) )

7 $ 7 4 "# " 丁涛养精种玉汤促卵泡发育机制及其药效物质基础研究 - 广州广州医科大学 % 马红霞谢军赖毛华等养精种玉汤对多囊卵巢综合征大鼠模型卵巢颗粒细胞分泌功能的影响中国中西医结合杂志 % 5 $ 0 '$ - 6! $ ) $ $ $* ) : $) $ ) $ $ *$)$ $+ $ ) 7 : $ ' )* ( ')$ ) ) ) $ * ( : ) )$ * ) $ ' $ ) '$ $)*$ 7 ) $ 7 ) $ :$$ 7 &) ) * 444 % " "# # 0 12 *$ 5 3 ) * 0 $ 6$ '$ 16 < ) : ) : $*) ) $ ' $ )0 '6!0 7 ) ) $ ) 7 )$ * ) ) ($ $ $::$ : ( ')$ ) - '$ 0) ' &) ) # % 1 $ 33 $ ( & & 7 $ $ '$ ( ) ' : $ $ ) : ( + $ $+ $ ) ) ) $)$ )$ ) ) * ) $ ) &) ) $ 7 4 4% # #" " 马红霞赖毛华黄婉怡等中医药促卵泡发育成熟的研究思路湖南中医药大学学报 44 % " 4 包文斐浅析傅青主女科调经种子证治特色浙江中医杂志 4 %% %"% %" 张玮王京花程龙庆等养精种玉汤加减提取液对离体培养的兔卵巢颗粒细胞雌二醇生成的影响中国中西医结合杂志 44# 3# 谷长任张玮周健秋等养精种玉汤对兔卵巢颗粒细胞孕酮生成的影响及机制中医药学报 # 吴瑞瑾周馥贞养精种玉汤对原因不明不孕患者子宫内膜基质金属蛋白酶 4 表达及性激素调节的影响中国中西医结合杂志 % %% 4% 4" 吴瑞瑾周馥贞养精种玉汤对原因不明不孕症患者子宫内膜胰岛素样生长因子及其受体表达的影响中国中西医结合杂志 %4 %4 % 姜萍傅萍傅萍运用养精种玉汤治疗试管婴儿术前后临床经验浙江中医杂志 4 %%!$ ) 5 5$* $ 0 * '$) $ ) *$) ) 7 $ $ *$) ($) $ : * $ ($ $ : ' $ &) ) 444 # 4%# 4 #!$ ) )! 6 $): $ 65 $ ($ 7 ($' 7 : ) $ $ $ $ )$ ) ) ($ $ * $ : ' $) ( ) '$ ) &) ) $ 7 "# 4 )! 6 $): $ 65 6 $ : ( '$ 1% ) ) '$ $ &) ) 44" % " ( ' ( 0-6 ) ) : 01 $* ) 7 ' *$) $ $ ) ) $ *) ) ) ( $ 44# % "4 # 4 $)($ $!$ )-$ $ )) 1 $ ) $ $ ( '$ 1% ( + $ ' $ : ) ) ) ($ $ $ : ' $) ( ) '$ ) $ ) $ : &) ) % " "" #!$ )-$* $ 5 ($)($ $ $) 5 $ 0 $ ) ) ' *$) $ $ ) ) $ ) $+ $ $* $ ) $ *) )* ) ($ $ ) 7 $ $+ $ $ ) *$) ) ) ) '$ &) ) 收稿修回

实验室常用培养基的配制方法

实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin( 氨卡青霉素 )(100 mg/ml) 100 mg/ml Ampicillin 50 ml 配制方法 1. 称量 Ampicillin 置于 50 ml 离心管中 ; 2. 加入 40 ml 灭菌水, 充分混合溶解后, 定容至 50 ml; 3. 用 0.22 µm 过滤膜过滤除菌 ; 4. 小份分装 (1 ml/ 份 ) 后,-20 保存 IPTG(