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1 讲课标题 讲课教师

2 诊断酶学 董雷鸣

3 诊断酶学 通过检测机体中某一种或几种特殊的酶的活性或含量进行相关疾病诊断的方法

4 一 概述 ( 一 ) 酶的概念 酶 (Enzyme) 是活细胞产生的一类具有催化性质 的蛋白质 核酶

5 ( 二 ) 酶促反应动力学 1 酶促反应的原理 :

6 2 酶促反应的特点 (1) 高效性 (2) 特异性 (3) 酶活性的可调节性

7 (1) 高效性 酶的催化效率较一般化学催化剂高 10,000,000-10,000,000,000,000 倍 ; 脲酶尿素 NH 3 + CO 2 H + 脲酶的催化效率是 H + 的 倍

8 (1) 特异性 1) 绝对特异性 一对一 脲酶对尿素的催化作用

9 2) 相对特异性 一对一类 磷酸酶对磷酸脂键的催化作用 3) 立体异构特异性 一对一种构型 乳酸脱氢酶对 L- 乳酸的催化作用

10 (3) 酶活性的可调节性 酶活性主要影响因素 : 温度 ph 酶浓度, 底物浓度激活剂 抑制剂

11 1) 温度对酶活力的影响 在酶促反应在一定温度范围内, 速度随温度的升高而加快 但超过一定的温度范围后, 由于酶的失活而使反应减慢

12 2)pH 对酶促反应速度的影响 只有在特定的 ph 条件下, 酶 底物和辅酶的解离状况, 最适宜于它们的结合并发生催化作用, 才能使酶反应速度达最大值 这个 ph 值称为酶的最适 ph

13 应速度酶浓度反3) 酶浓度对酶促反应速度的影响 在一定的温度和 ph 条件下, 当底物浓度远大于酶浓度时, 反应速度和酶浓度成正比

14 4) 底物浓度对酶促反应速度的影响

15 1913 年,Michaelis 和 Menten 经过大量的研究, 总结出了著名的米 - 曼方程式, 正确地说明了底物浓度对酶反应速度的影响

16 米 - 曼氏方程式 : 反应速度 V= 最大反应速度 V max [S] K m + [S] 底物浓度米氏常数

17 Km 酶促反应速度 (V) 等于最大反应速度 (V max ) 一半时的底物浓度 意义 酶的特征性常数 反映酶和底物的亲和力 km 值越小, 亲和力越大

18 5) 激活剂和抑制剂酶的激活剂 提高酶活力的物质 激活剂分类 : 必需激活剂 Mg 2+ 对激酶催化的作用 ; 非必需激活剂 Cl - 对唾液淀粉酶的激活 ;

19 酶的抑制剂 能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白变性的物质 抑制作用的分类 : 不可逆性抑制 可逆性抑制 竞争性抑制 非竞争性抑制 反竞争性抑制

20 二 诊断酶学 ( 一 ) 诊断酶学的发展简史 20 世纪初, 临床开始测定体液中的酶 ; 1908 年测尿液淀粉酶 (AMY) 活力 诊断急性胰腺炎 20 世纪 30 年代, 碱性磷酸酶 (ALP) 用于诊断骨骼疾病 ;

21 20 世纪 50 年代, 用分光光度法建立了连续监测酶活性方法, 诊断酶学的真正发展 ; 20 世纪 70 年代起, 随免疫学和技术方法的开展, 用抗原抗体反应有可能直接测定微量的酶蛋白, 为酶学在临床医学上的发展开拓了一个新的领域

22 ( 二 ) 广泛利用酶诊断的原因 1. 测定酶活力的方法灵敏度 准确性较好 2. 酶活力的变化早于临床体征或其他诊断指标

23 ( 三 ) 诊断酶学的作用 各种疾病的诊断 预后和随访观察

24 ( 四 ) 血清酶的分类 1 血浆特异酶 在血中发挥催化作用的酶类, 有明确的生理功能, 血中的含量高于其他组织

25 2 非血浆特异酶 在血中不起任何生理作用, 浓度明显低于组织和细胞中含量 外分泌酶 血清中来源于外分泌腺的酶 细胞酶 存在于机体各种组织细胞中进行物质代谢的酶类

26 ( 五 ) 血清酶变化的病理生理机制 1 细胞酶的释放 细胞膜功能异常, 导致酶从细胞内向外溢出, 其速度和数量受多种因素影响

27 影响因素 : 细胞内外酶浓度的差异 酶在细胞内外浓度差可在千倍以上, 只要有少量细胞坏死或者细胞有轻度病变, 血中酶浓度就可能明显升高 酶在细胞内定位与存在形式 胞质中游离的酶易释放入血的是, 而在细胞亚显微结构中的酶则较难溢出 酶蛋白分子量的大小 酶的释放速度大致与酶的分子量成反比

28 2 酶在细胞外间隙的分布和运送 细胞中的酶经过三种途径进入血液 直接进入血液 既和组织间隙, 也和血液直接相接触 大部分进入组织液, 经淋巴系统入血

29 3 血中酶的清除 一般以血中酶的半寿期代表酶从血中清 除的快慢

30 酶 半寿期 酶 半寿期 AST 17±5h CK-MB 12±4h ALT 47±10h CK-BB 约 5h LD1 113±60h LD5 10±2h CK-MM 17±4h ALP 3-7d GGT 3-4d AMY 3-6h

31 4 酶合成异常 对于血浆特异酶, 细胞内酶合成的变 化是引起血中酶变化的重要因素 eg: 合成减少 : 肝功能障碍时的胆碱酯酶合成增加 : 前列腺癌时的酸性磷酸酶

32 5 其它 抑制剂和活化剂

33 ( 六 ) 血清酶的生理变异 性别 年龄 进食 运动 妊娠与分娩

34 ( 七 ) 测定方法 标本处理等对测定结果的影响 1 酶测定方法及条件 固定时间法连续监测法平衡法免疫学方法

35 1 固定时间法 ( 两点法 ) 测定反应开始后某一时间内 (t1 到 t2) 产物或底物浓度的总变化量来求取酶反应初速度的方法 特点 : 需加终止剂 ; 应做预试验确定线性时间 ; 比色计或分光光度计无需保温装置

36 2 连续监测法 ( 动力学法或速率法 ) 连续测定 ( 每 15s-20min 监测一次 ) 酶反应过程中某一反应产物或底物的浓度随时间的变化来求出酶反应初速度的方法

37 特点 : 结果准确 ; 无需终止反应 ; 仪器必须有保温装置 ; 产物或底物应是可直接测定的化合物

38 3 平衡法( 终点法 ) 通过测定酶反应开始至反应达到平衡时产物或底物浓度总变化量来求出酶活力的方法 特点 : 无需终止反应 ; 反应时间长, 影响因素多 ; 适合零级反应期很短的酶促反应

39 4 免疫学方法 随免疫技术发展, 出现利用酶的抗原性, 通过抗原抗体反应直接测定酶的质量 特点 : 灵敏度高 ; 特异性高 ; 能测定一些不表现酶活性的酶蛋白质

40 2 标本的采集 处理与贮存 (1) 体外溶血 (2) 一般采用血清标本 (3) 酶蛋白不稳定, 易失活

41 ( 八 ) 疾病时血清酶活力改变的机制 1 酶合成异常 (1) 合成减少 : 肝功能损伤 (2) 合成增多 : 恶性肿瘤

42 2 酶从损伤细胞中释放增加 疾病时大多数血清酶增高的主要机理 主要原因 : 缺氧能量供应缺乏

43 3 其他 缺血炎症坏死肿瘤等

44 ( 九 ) 血清酶的选择原则 可靠 可行的测定方法 特异性 灵敏度高 明确诊断和早期诊断

45 ( 十 ) 检测同工酶及其亚型的临床意义 同工酶 (isoenzyme) 催化功能相同, 但酶蛋白的组成与结构等均不同的一组酶 同工酶之所以有较高的诊断价值主要是由于某些同工酶有明显的组织分布差异

46 脾和肺 H 型亚基 M 型亚基 LDH 1 LDH 2 LDH 3 LDH 4 LDH 5 心肌和红细胞 肝脏和骨骼肌

47 心肌 B 型亚基 M 型亚基 CK-BB CK-MB CK-MM 脑, 平滑肌 骨骼肌和心肌

48 ( 十一 ) 血清酶测定在临床诊断中的应用

49 1 肝脏疾病的酶学诊断 (1) 转氨酶 丙氨酸氨基转移酶 (ALT) 天冬氨酸氨基转移酶 (AST)

50 1) 组织分布 AST 含量 : 心 > 肝 > 骨骼肌 > 肾 ALT 含量 : 肝 > 肾 > 心 > 骨骼肌 肝中 ALT 主要存在于细胞质中 肝中 AST 主要存在于线粒体中

51 2) 临床意义 主要用于肝胆疾病的诊断和鉴别 诊断

52 1ALT 急性肝炎时, 血清 ALT 活性高低与临床病情轻重相平行 ; ALT 半寿期较长, 往往是肝炎恢复期最后降至正常的酶, 是判断急性肝炎是否恢复的一个很好指标

53 2AST 急性肝炎 ALT,AST 慢性肝炎 ( 肝硬化 ) ALT, AST 心肌梗死

54 3DeRitis 比值 ( 即 ALT/AST) 临床意义 : 急性肝炎 DeRitis 比值 <1 肝硬化 DeRitis 比值 2 肝癌 DeRitis 比值 3

55 (2) γ- 谷氨酰转肽酶 (GGT,γ-GT) 1) 组织分布 组织含量顺序 : 肾 >( 前列腺 >) 胰 > 肝 > 脾 > 肠 > 脑 血清中 GGT 主要来自于肝脏

56 2) 临床意义 肝胆疾病的诊断和鉴别诊断 肝胆疾病中阳性率最高的酶 恶性肿瘤肝转移 乙醇中毒判定等

57 (3) 胆碱酯酶 (ChE) 由肝脏合成分泌入血, 是肝脏合成蛋白质功能的指标 临床意义 肝病 有机磷中毒的诊断

58 (4) 碱性磷酸酶 (ALP) 1) 组织分布 组织含量顺序 : 肝 > 肾 > 胎盘 > 小肠 > 骨骼 血清中 ALP 主要来自于肝脏和骨骼

59 2) 临床意义 生理性增高 骨生长, 妊娠等 病理性增高 肝胆系统疾病 : 急慢性肝炎等 骨骼系统疾病 : 骨折, 骨损伤等 其他

60 其它酶学指标 : 精氨酸代琥珀酸裂解酶 (ASAL) 酰苷脱氨酶 (ADA) 5 - 核苷酸酶 甘露醇脱氢酶等

61 2 心脏疾病的酶学诊断 (1) 肌酸激酶 (CK)

62 1) 组织分布 心肌 B 型亚基 M 型亚基 CK-BB CK-MB CK-MM 脑, 平滑肌 骨骼肌和心肌

63 2) 临床意义 主要用于心肌, 骨骼肌和脑疾患的诊断和鉴别诊断

64 (2) 乳酸脱氢酶 (LDH)

65 1) 组织分布 脾和肺 H 型亚基 M 型亚基 LDH 1 LDH 2 LDH 3 LDH 4 LDH 5 心肌和红细胞 肝脏和骨骼肌

66 2) 临床意义 主要用于心, 肝和骨骼肌的诊断和 鉴别诊断

67 正常血清含量 LDH 2 >LDH 1 >LDH 3 >LDH 4 >LDH 5 急性心梗,LD 1 >LD 2 肝实质病变,LD 5 >LD 4

68 急性心梗后 CK-MB,AST,ADH 变化情况 开始升高时间达峰时间持续时间 CK-MB 4-8h 24h 48h AST 6-12h 24-48h 3-6d LDH 8-10h 2-3d 5-6d

69 3 胰腺疾病的酶学诊断 α- 淀粉酶 (AMY) 1) 组织分布 胰腺 唾液腺 肝 肾及肌肉等

70 2) 临床意义 升高 急性胰腺炎 流行性腮腺炎 ; 急性胆囊炎 肠梗阻 胰腺癌 胆石症 溃疡病穿孔及吗啡注射后 降低 肝炎 肝硬化 肝癌 ; 肾功能障碍

71 急性胰腺炎时血 尿淀粉酶升高的不同表现 开始升高时间高峰时间恢复时间 血清 8-12h 12-24h 2-5d 尿液 12-24h 5-7d 1-2w

72 4 骨骼疾病的酶学诊断 碱性磷酸酶 (ALP) 1) 组织分布 肝 胎盘 骨骼 肾等 血清中的 ALP 主要来自于肝脏和骨骼

73 2) 临床意义 常为肝胆疾病和骨骼疾病的临床辅助诊断指标 活性升高 骨 paget 病 恶性肿瘤骨转移或肝转移 佝偻病 骨软化 骨折愈合期 成骨细胞瘤 ; 胆道梗阻 甲旁亢等 活性降低 ( 少见 ) 呆小病 磷酸酶过少症 维生素 C 缺乏症等

74 5 前列腺疾病的酶学诊断 酸性磷酸酶 (ACP) 1) 组织分布 前列腺, 血小板, 肾, 肝等 2) 临床意义 主要用于前列腺癌的诊断

75 主要临床疾病肝实质疾病肝胆疾病心肌梗死胰腺疾病骨骼疾病前列腺癌 酶 ALT AST ChE LDH γ-gt 5 -NT ALP AST CK LDH AMY ALP ACP PSA

76 谢谢!

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