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蝴焘雷
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1 Vol.39 高等学校化学学报 No 年 2 月 CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 219 ~ 225 doi: / cjcu 基于 UPLC Q Orbitrap MS / MS 研究人参皂苷在发酵过程中的生物转化乔梦丹, 刘尚, 张琰, 李晶, 郑飞, 戴雨霖, 越皓 ( 长春中医药大学吉林省人参科学研究院, 长春 ) 摘要应用超高效液相色谱四极杆静电场轨道阱串联质谱 ( UPLC Q Orbitrap MS / MS) 联用技术分析鉴别人参发酵前后的皂苷类化合物, 研究了整体人参皂苷在自然发酵过程中的生物转化规律. 通过鉴定 45 种人参皂苷, 比较了生晒参和发酵人参中人参皂苷种类及含量的差异, 在发酵人参中检测到 20(S) Rg 3 和 20(R) Rg 3, 20(S) Rh 1 等异构体人参皂苷, 其中 10 余种人参皂苷在自然人参状态下不存在或未被检出. 本研究对于人参发酵前后的化学成分变化进行了高通量的精准分析, 对同类天然产物发酵研究具有借鉴意义, 可指导人参炮制品生晒参和发酵人参的安全有效使用. 关键词发酵 ; 人参皂苷 ; 生物转化 ; 液相色谱质谱联用中图分类号 O657 文献标志码 A 人参为五加科植物人参 Panax ginseng C.A. Mey. 的干燥根和根茎, 主要化学成分为人参皂苷 [1]. 人参皂苷属于三萜类化合物, 主要有原人参二醇型皂苷 (PPD) 原人参三醇型皂苷 (PPT) 和齐墩果烷型人参皂苷 (Oleanolic acid). 人参皂苷母核 20 位的碳原子为手性碳, 按照 C 20 位构型的不同, 又可以分为 20(S) 和 20(R) 型, 天然人参皂苷构型均为 20(S) 构型. 人参有生晒参红参大力参及黄泥煨制人参等炮制品 [2~ 5]. 已有研究采用反复高温蒸制晒干的方法炮制人参 [6,7], 但蒸制时间干燥时间和温度不尽相同, 炮制工艺并不统一. 研究证明, 人参发酵后稀有人参皂苷 Rg 3 和 Rh 1 等会显著增多, 并能提高人参的药效活性 [8] [9]. Chi 等利用乳酸菌对人参发酵, 发现人参皂苷主要通过 C 3 和 C 20 位脱水断裂转化成稀有人参皂苷. 稀有人参皂苷有较强的药效活性, 从而达到增加疗效的作用. 一些学者利用肠道菌转化人参中的有效成分, 其机制主要是通过 C 3 和 C 20 位脱水断裂以达到转化的效果 [10,11]. [12] 然而, 无论是添加菌种还是生物菌群, 均受菌群提取分离难, 无法准确控制活性的制约. Sato 等采用发酵的方法炮制黑蒜, 将鲜蒜在温度为 60 ~ 70 及相对湿度为 85% ~ 95% 环境下, 不添加任何菌群, 自然发酵 40 d. 至今尚未见报道应用该方法炮制人参. 新鲜人参在缺少空气并在一定温度条件下自然发酵, 化学成分是否发生变化, 对于研究人参皂苷在发酵过程中的化学键断裂或形成具有重要意义. 超高效液相色谱四极杆静电场轨道阱串联质谱 ( UPLC Q Orbitrap MS / MS) 联用技术应用于天然产物的化学成分分析领域, 具有分辨率高特异性强及灵敏度高等优点, 能够快速有效地得到相应化合物的精确分子量及结构信息 [13~ 15]. 本文利用液相色谱质谱联用技术对生晒参和发酵人参中的人参皂苷类成分进行分析比较, 为人参炮制品的进一步开发和合理应用提供了理论依据. 1 实验部分 1.1 试剂与仪器鲜人参 (5 年参 ) 购于吉林省抚松县万良人参市场, 经长春中医药大学王淑敏教授鉴定为五加科植收稿日期 : 网络出版日期 : 基金项目 : 国家自然科学基金 ( 批准号 : ) 和吉林省科学技术发展计划项目 ( 批准号 : JC) 资助. 联系人简介 : 戴雨霖, 男, 助理研究员, 主要从事中药分析方面的研究. E mail: dyltcm@ 163.com 越皓, 男, 博士, 研究员, 主要从事中药分析方面的研究. E mail: yuehao@ sohu.com

2 220 高等学校化学学报 Vol.39 物人参 Panaxginseng C.A.Mey. 的干燥根和根茎 ; 实验所用人参标本 (Voucher specimen) 存于长春中医药大学人参科学研究院. 人参皂苷 Rg 1, Rg 3, Rb 1, Rb 2, Rb 3, Rc, Rd, Re, Rf, F 2, 20 ( S) Rh 1 和 20(R) Rh 1 等对照品 ( 纯度均 >98%, 南京泽朗医药科技有限公司 ); 甲醇乙腈和甲酸 ( 色谱纯, 美国 Fisher 公司 ); 其它试剂均为分析纯. Thermo Ultimate 3000 型超高效液相色谱系统和 Thermo Q Orbitrap 质谱仪 ( 美国 Thermo 公司 ). 1.2 样品的制备发酵人参 (FBG) 由鲜人参炮制获得 : 将鲜人参用锡纸包裹后置于加热器皿中, 控制温度为 60 ~ 70, 在加热器中放置吸水海绵调节相对湿度在 50% ~ 60% 范围内, 无任何添加剂及添加菌, 自然发酵 70 d, 每隔一段时间取一次样品, 晒干, 即得发酵人参. 精密称取发酵人参干燥粉末 1 g, 加入 20 ml 70%( 体积分数 ) 甲醇, 浸泡过夜, 超声 60 min, 以 5000 r / min 转速离心 10 min, 上层清液过 0 22 μm 滤膜, 备用. 将鲜人参按照药典炮制方法制成生晒参 [16], 提取方法同发酵人参. 1.3 实验条件液相色谱条件 Thermo Syncronis C 18 色谱柱 (100 mm 3 mm, 1 7 μm), 梯度洗脱 ; 流动相为 0 1% 甲酸水溶液 (A) 和乙腈 (B); 流动相梯度 : 0 ~ 8 min, 19% ~ 25%B; 8 ~ 10 min, 25% ~ 30%B; 10 ~ 25 min, 30% ~ 50%B; 25 ~ 28 min, 50% ~ 70%B; 28 ~ 30 min, 70% ~ 90%B; 30 ~ 35 min, 90% ~ 90%B; 35 ~ 38 min, 90% ~ 19%B; 38 ~ 40 min, 19% ~ 19%B; 柱温 30 ; 流速 0 2 ml / min; 进样量 0 5 μl 质谱条件采用电喷雾负离子扫描模式 (ESI - ), 干燥气温度 350, 雾化气流速 35 arb, 辅助气流速 10 arb, 质量扫描范围 m / z 200 ~ 结果与讨论 2.1 线性范围检出限和回收率以人参皂苷 20(S) Rh 1 为对照品, 通过液相色谱质谱联用技术分析计算线性范围和检出限. 以浓度 (μg / ml) 为横坐标, 峰面积 (A) 为纵坐标, 绘制标准曲线. 结果表明, 在 ~ 100 μg / ml 的浓度范围内, 对照品 20(S) Rh 1 的相关系数为 , 标准曲线线性关系良好. 在 ~ 105 μg / ml 的浓度范围内, 对照品 20(R) Rh 1 的相关系数为 , 标准曲线线性关系良好. 以信噪比的 3 倍 (S / N = 3) 计算分析 2 种对照品的检出限 (LODs), 对照品 20(S) Rh 1 的检出限为 0 1 μg / kg, 对照品 20(R) Rh 1 的检出限为 0 1 μg / kg( 见表 1). Table 1 Ginsenoside Linear ranges, regression equations, relative standard deviations( RSD) and limits of detection( LOD) of ginsenosides 20(S) Rh 1 and 20(R) Rh 1 Linear range / (μg ml -1 ) Regression equation Correlation coefficient, r LOD / (μg kg -1 ) Recovery(n = 5, %) 20(S) Rh y = x (R) Rh y = x 精密称取已知人参皂苷 20( S) Rh 1 和 20( R) Rh 1 含量的样品 9 份, 分别加入人参皂苷对照品 20(S) Rh 1 适量, 配制成 80%, 100% 和 120% 的低中高浓度的待测溶液. 将样品按 1.3 节方法测定, 进行 6 次平行实验, 计算 3 个添加水平范围内的平均回收率, 得到人参皂苷 20( S) Rh 1 的平均回收率为 99 54%; 人参皂苷 20(R) Rh 1 的平均回收率为 98 04%, 可见, 本实验方法的回收率良好, 结果列于表不同发酵时间发酵人参中人参皂苷类成分的分析比较由于人参中人参皂苷成分种类很多, 极性相似, 较多人参皂苷的色谱峰保留时间十分接近, 造成分辨困难. 通过提取离子流图 (EIC) 的方法, 分别将生晒参和发酵参的人参皂苷类成分提取展示, 图 1 中的色谱峰与表 2 中的保留时间和峰号相对应, 图 1(A 1 ), (A 2 ) 和 (A 3 ) 分别为生晒参提取离子流图, 图 1(B 1 ) 和 (B 2 ) 为发酵参的提取离子流图. 主要人参皂苷类成分在质谱负离子模式下所得分子离子以及 ESI - MS / MS 裂解产生的主要碎片离子列于表 2, 通过将主要成分的色谱行为结构信息与对照品及 Mean RSD

3 No.2 乔梦丹等 : 基于 UPLC Q Orbitrap MS / MS 研究人参皂苷在发酵过程中的生物转 221 文献 [2 ~ 5] 对照鉴定出了 45 个成分 ( 见表 2). Fig.1 UPLC Q Orbitrap MS EIC of the extract of white ginseng(a 1 A 3 ) and FBG(B 1, B 2 ) on the molecular ions in negative ion mode Table 2 UPLC MS / MS data of 45 kinds of ginsenosides in negative ion mode No. Retention time / min Identity Molecular formula WG a FBG b 13 d 31 d 70 d [M-H] - / [M+HCOOH-H] - (m / z, mass accuracy<10-5 ) MS / MS fragment ion(m / z) 1 c 17.0 Ra 0 C 60 H 102 O 28 + g + - h / ,945,783,621,459 2 c 15.4 Ra 1 C 58 H 98 O i / ,945,783,621,459 3 c 15.4 Ra 2 C 58 H 98 O / ,945,783,621,459 4 c 19.1 Ra 3 C 59 H 100 O / ,1077,945,783,621,459 5 c 18.2 Rb 1 C 54 H 92 O / ,783,621,459 6 c 19.4 Rb 2 C 53 H 90 O j / ,783,621,459 7 c 19.5 Rb 3 C 53 H 90 O / ,783,621,459 8 c 18.8 Rc C 53 H 90 O / ,783,621,459 9 c 11.0 Re C 48 H 82 O / ,621, c (S) Rg 3 C 42 H 72 O / , c (R) Rg 3 C 42 H 72 O / , c 19.2 Rs 1 C 55 H 92 O / ,1059,945,783,621, c 19.7 Rs 2 C 55 H 92 O / ,1059,945,783,621, c 29.7 Rs 3 C 44 H 74 O / ,621, c 18.6 mrb 1 C 57 H 94 O / 1107,945,783,621, c 20.1 mrb 2 C 56 H 92 O / 1077,915,783,621, c 21.1 mrb 3 C 56 H 92 O / 1077,915,783,621, c 19.2 mrc C 56 H 92 O / 1077,915,783,621, c 21.2 mrd C 51 H 84 O / 945,783,765,621, c 18.5 F2 C 42 H 72 O / , c 31.0 Rh 2 C 36 H 62 O / c 31.2 CK C 36 H 62 O / d 10.8 Rg 1 C 42 H 72 O / , d 17.0 Rf C 42 H 72 O / , d 16.2 Rg 2 C 42 H 72 O / , d 20.6 Rd C 48 H 82 O / 799,783,637, d 12.7 mrg 1 C 45 H 74 O / 781,637, d 13.9 mrf C 45 H 74 O / 781,619,475

4 222 高等学校化学学报 Vol.39 Continued No. Retention time / min Identity Molecular formula WG a FBG b 13 d 31 d 70 d [M-H] - / [M+HCOOH-H] - (m / z, mass accuracy<10-5 ) MS / MS fragment ion(m / z) 29 d 21.0 mre C 51 H 84 O / 945,799,637, d Glc Rf C 48 H 82 O / ,637, d 16.5 F3 C 41 H 70 O / 637, d 17.1 F1 C 36 H 62 O / d (S) Rh 1 C 36 H 62 O / d (R) Rh 1 C 36 H 62 O / d 30.3 PPT C 30 H 52 O / e 19.1 Ro C 48 H 76 O / 793,613,569, f 24.2 Rg 4 / Rg 6 C 42 H 70 O / , f 24.7 Rg 4 / Rg 6 C 42 H 70 O / , f 29.1 Rg 5 / Rk 1 C 42 H 70 O / , f 29.3 Rg 5 / Rk 1 C 42 H 70 O / , f 25.2 Rh 4 / Rk 3 C 36 H 60 O / f 25.8 Rh 4 / Rk 3 C 36 H 60 O / f 23.1 Rf 3 C 42 H 74 O / f 18.0 Rg 8 / Rg 9 C 42 H 70 O / f 17.7 Rg 8 / Rg 9 C 42 H 70 O / a. WG: White ginseng; b. FBG: fermented black ginseng; c. panaxadiol ginsenosides; d. panaxatriol ginsenosides; e. oleanolic acid; f. others; g. + : peak area (0 8) 10 6 ; h. - : not detected; i. peak area (8 20) 10 6 ; j. +++ : peak area above 人参皂苷在 ESI 负离子模式下的一级质谱图中, 准分子离子主要以 [M-H] - 和 [ M+HCOOH-H] - 的形式存在 [17]. 通过 UPLC Q Orbitrap MS / MS 技术, 可获得标准对照品的质谱信息和供试品一级谱中的分子质量信息, 通过二级串联质谱分析可得到碎片信息, 并确定苷元类型和所连糖基的种类和数量, 从而确定人参皂苷结构. 人参皂苷的命名规则引自 Domon and Costello 的方法 [18]. 以丙二酰基人参皂苷 mrb 2 为例说明人参皂苷的鉴定方法. 人参皂苷 mrb 2 是二醇型人参皂苷, C 3 位取代基为 1 分子丙二酰基和 2 分子葡萄糖形成的侧链, C 20 位由 1 分子葡萄糖和 1 分子阿拉伯糖连接而成. 丙二酰基人参皂苷 mrb 2 的二级串联质谱示于图 2. mrb 2 的理论分子质量为 , 在一级质谱图中主要以 [M-H] - 离子的形式存在, [M-H] - 理论值为 , 实测值为 , 误差为在图 2 中可以观察到 m / z 1163, 1077, 915, 783, 621 和 459 等碎片离子. 其中, 分子离子 m / z 1163 脱去丙二酰基 (86u) 产生了 m / z 1077[ M -malonyl -H] - 特征碎片离子 ; 脱去丙二酰基和 1 分子葡萄糖基碎片形成了 Y 1 β m / Fig.2 MS / MS spectrum of ginsenoside mrb 2 CID: 30 ev. z 915 离子 ; 陆续脱去 1 分子葡萄糖基碎片分别产生了 Y 1 β / Y 1 α m / z 783, Y 0 α m / z 621 和 Y 0 β / Y 0 α m / z 459 碎片离子. 离子 Y 0 β / Y 0 α m / z 459 是二醇型人参皂苷的特征离子, 故推断该物质为人参皂苷 mrb2, 采用相同方法可以判定测得的人参皂苷 UPLC MS / MS 数据 ( 表 2). 由于生晒参在炮制过程中未经高温蒸制, 因此生晒参的皂苷类成分中存在天然的丙二酰基类人参皂苷. 丙二酰基人参皂苷的酰基键能低, 易脱羧, 而发酵人参在发酵过程中会有一部分丙二酰基类人参皂苷水解脱去了丙二酰基, 生成相应的人参皂苷, 如 mrb 2 经水解生成 Rb 2. 因此, 在短时间发酵的发酵人参样品中类似 Rb 2 的人参皂苷含量会明显增加, 在发酵第 13 天左右达到峰值. 随着发酵的进行, 到第 70 天, 发酵人参样品中不能检测到此类人参皂苷, 这可能是由于活性菌的增加持续消化分解皂苷所致 [19]. 此外, 发酵人参中还存在一些生晒参中未检测出的稀有皂苷类成分, 且有 R 和 S 构型的转化, 如

5 No.2 乔梦丹等 : 基于 UPLC Q Orbitrap MS / MS 研究人参皂苷在发酵过程中的生物转 (S) Rh 1 等. 20(S) Rg 3 在生晒参中含量很少, 属于稀有人参皂苷. 20(S) Rb 1 可通过 [20] 断裂 C 20 位的糖基转化成 20(S) Rg 3 和 20(R) Rg 3, 这与 Kwon 等的研究结果一致 ; 20(S) Rb 1 还可通过断裂 C 20 的糖基转化成 Rk 1 和 Rg 5 [21]. 发酵前期, 20 ( S) Rh 1, 20 ( R) Rh 1, 20 ( S) Rg 3 和 20(R) Rg 3 4 种人参皂苷的含量均随发酵时间的延长而增大, 在发酵 31 d 左右 4 种人参皂苷含量达到最大值. 随着发酵时间的延长, 自然菌增加, 一些人参皂苷被活性菌消化, 继续失去糖基碎片直至分 [22] 解, 含量明显减少. 最新的研究显示, 人参通过 Paecilomyceshepiali 发酵产生的人参皂苷转化行为能够增加药效活性. 除发酵外, 通过加热等特殊方法处理, 也可使人参皂苷发生转化形成稀有人参皂苷 [5]. 由于稀有人参皂苷具有较强的药理活性 [23,24], 使得自然发酵人参的活性研究具有较大开发潜力. 以人参皂苷 S Rh 1, R Rh 1 和 Rg 1 为例, Rg 1 通过脱去 C 20 位的葡萄糖基转化生成 20( S) Rh 1, 其发酵时间浓度曲线如图 3 所示, 可以看出自然发酵过程中稀有人参皂苷含量最大的时间范围. 2.3 发酵炮制品中原人参三醇型皂苷的转化途径 Fig.3 Kinetics of the formation of ginsenosides 20(S) Rh 1 ( a) or 20 ( R) Rh 1 ( b) during fermentation with ginsenosides Rg 1 (c) 天然的原人参三醇型皂苷主要有 Re 和 Rg 1, 以 Re 和 Rg 1 为例说明其转化过程. 人参皂苷 Re(946) 的 C 6 位由 1 分子葡萄糖和 1 分子鼠李糖连接而成, C 20 位为 1 分子葡萄糖. 由图 4 可见, 人参皂苷 Re 在 UPLC Q Orbitrap MS 一级谱中的准分子离子为 [M-H] - (m / z ), 在 ESI MS / MS 条件下发生碎裂产生一系列碎片离子, 其中离子 Y 1 β m / z 799 是分子离子 m / z 945 失去 C 6 位鼠李糖基 C 6 H 10 O 4 (146 u) 碎片产生的, 离子 Y 0 β m / z 783 是 m / z 945 离子失去 C 20 位葡萄糖基 C 6 H 10 O 5 (162 u) 碎片产生的, 离子 Y 1 β m / z 637 是 m / z 945 离子失去 C 20 位葡萄糖基和鼠李糖基碎片产生的, 离子 Fig.4 MS / MS spectrum of ginsenoside Re( A) and its fragmentation pathways( B) CID: 25 ev. Y 0 β m / z 475 是 m / z 945 离子失去 C 6 位和 C 20 位取代糖基碎片产生的. 人参在发酵炮制过程中, 人参皂苷 Re 有 2 条转化途径 : 第一条途径是失去 C 6 位鼠李糖基, 转化成人参皂苷 Rg 1 ; 第二条途径是失去 C 20 位葡萄糖基, 转化成人参皂苷 Rg 2. Rg 1 继续失去 C 6 位葡萄糖基转化成 F1, 或者失去 C 20 位葡萄糖基生成 R / S 构型的 Rh 1 ( 提取离子流图见图 5), 人参皂苷 Rh 1 也可由 Rg 2 失去 C 6 位鼠李糖基转化而成, Rg 2 经过水合作用或者脱水作用可以生成人参皂苷 Rg 4 / Rg 6, Rh 1 经过水合作用或 Fig.5 Extract ion chromatography( EIC) of FBG at m / z

6 224 高等学校化学学报 Vol.39 者脱水作用可以生成人参皂苷 Rh 4 / Rk 3. 人参皂苷 F1 和 R / S 构型的 Rh 1 最终均可失去所有取代糖基碎片转化成原人参三醇型皂苷元 PPT( 见图 6). Fig.6 Chemical transformation pathway of protopanaxatriol typed ginsenosides in FBG 3 结论利用 UPLC MS / MS 技术检测分析了生晒参和发酵人参的皂苷类化学成分. 结果表明, 一些皂苷类成分发酵后糖苷键断裂, 发生转化. 如人参皂苷能够转化成稀有人参皂苷, 还有部分稀有人参皂苷呈现出 R 和 S 构型的转化, 如 20(S) Rg 3 和 20(R) Rg 3, 20(S) Rh 1. 发酵人参中的人参皂苷转化为稀有皂苷的原因可能是在发酵过程中, 自然界存在的活性菌对皂苷的糖苷键进行切割, 导致化学成分转化. 发酵人参炮制方法简单, 只需要单一稳定的热源, 不需要添加任何有机试剂添加剂及菌类, 是一种绿色的, 具有广阔应用前景和开发价值的新方法. 参考文献 [ 1 ] Choi K. T., Acta Pharmacologica Sinica, 2008, 29(9), [ 2 ] Hao Y., Yu S. S., Dai Y. L., Zhang Y., Zhong W., Liu S. Y., Yue H., J. Chinese Mass Spectr. Soc., 2014, 35(4), ( 郝颖, 于珊珊, 戴雨霖, 张颖, 钟薇, 刘淑莹, 越皓. 质谱学报, 2014, 35(4), ) [ 3 ] Zhong W., Dai Y. L., Li X. Y., Wang Y. B., Yue H., Liu S. Y., J. Chinese Mass Spectr. Soc., 2015, 36(6), ( 钟薇, 戴雨霖, 李晓宇, 王一博, 越皓, 刘淑莹. 质谱学报, 2015, 36(6), ) [ 4 ] Dai Y. L., Yue H., Sun C. J., Guo Y. L., Zheng F., Li J., Liu S. Y., Chinese J. Anal. Chem., 2015, 43(8), ( 戴雨霖, 越皓, 孙长江, 郭云龙, 郑飞, 李晶, 刘淑莹. 分析化学, 2015, 43(8), ) [ 5 ] Dai Y. L., Pang B., Yan Q., Qiao M. D., Zheng F., Yue H., Liu S. Y., J. Chinese Mass Spectr. Soc., 2017, 38(1), 60 66( 戴雨霖, 庞博, 阎琪, 乔梦丹, 郑飞, 越皓, 刘淑莹. 质谱学报, 2017, 38(1), 60 66) [ 6 ] Sun B. S., Gu L. J., Fang Z. M., Wang C. Y., Wang Z., Lee M. R., Li Z., Li J. J., Sung C. K., J. Pharm. Biomed. Anal., 2009, 50(1), [ 7 ] Ban Y. J., Yang B. W., Baik M. Y., Hahm Y. T., Kim B. Y., J. Korean Soc. Appl. Biol. Chem., 2010, 53(1), [ 8 ] Lin Y. W., Mou Y. C., Su C. C., Chiang B. H., J. Agric. Food Chem., 2010, 58, [ 9 ] Chi H., Ji G. E., Biotechnol. Lett., 2005, 27, [10] Wang H. Y., Hua H. Y., Liu X. Y., Liu J. H., Yu B. Y., J. Pharm. Biomed. Anal., 2014, 98, [11] Ruan J. Q., Leong W. I., Yan R., Wang Y. T., J. Agric. Food Chem., 2010, 58,

7 No.2 乔梦丹等 : 基于 UPLC Q Orbitrap MS / MS 研究人参皂苷在发酵过程中的生物转 225 [12] Sato E., Kohno M., Hamano H., Niwano Y., Plant Food Hum. Nutr., 2006, 61(4), [13] Ke M. F., Han J., Zhu T. G., Liu W. J., Zhang H., Kou W., Liang D. P., Chem. J. Chinese Universities, 2017, 38(5), ( 柯牡芳, 韩京, 朱腾高, 刘文杰, 张华, 寇伟, 梁大鹏. 高等学校化学学报, 2017, 38(5), ) [14] Li P. H., Deng L. L., Luo J., Li W., Ning J., Ding J. H., Wu X. P., Chem. J. Chinese Universities, 2016, 37(4), ( 李鹏辉, 邓伶莉, 罗娇, 李巍, 宁晶, 丁健桦, 邬小萍. 高等学校化学学报, 2016, 37(4), ) [15] Pi Z. F., Wang Q. Q., Zhang J., Song F. R., Liu Z. Q., Chem. J. Chinese Universities, 2015, 36(3), ( 皮子凤, 王倩倩, 张静, 宋凤瑞, 刘志强. 高等学校化学学报, 2015, 36(3), ) [16] Chinese Pharmacopoeia Commission, Pharmacopoeia of the People s Republic of China ( 2015 edition), China Medical Science and Technology Press, Beijing, 2015( 国家药典委员会. 中华人民共和国药典, 2015 年版, 一部, 北京 : 中国医药科技出版社, 2015) [17] Li L., Liu C. M., Wu W., Yue H., Liu Z. Q., Liu S. Y., Tian C., Chinese J. Anal. Chem., 2005, 33(8), ( 李丽, 刘春明, 吴巍, 越皓, 刘志强, 刘淑莹, 田成. 分析化学, 2005, 33(8), ) [18] Domon B., Costello C. E., Glycoconj. J., 1988, 5, [19] Wang H. Y., Hua H. Y., Liu X. Y., Liu J. H., Yu B. Y., J. Pharm. Biomed. Anal., 2014, 98, [20] Kwon S. W., Han S. B., Park I. H., Kim J. M., Park M. K., Park J. H., J. Chromatogr. A, 2001, 921, [21] Qi L. W., Wang C. Z., Yuan C. S., Biochem. Pharmacol., 2010, 80, [22] Dan X., Yang X., Hao Y., Sun X. L., Zhao H. X., Liu S. Y., J. Ginseng Res., 2017, 41, [23] Yang Z., Zhao T., Liu H., Zhang L., Sci. Rep., 2016, 6, [24] Chen X. J., Liu W. J., Wen M. L., Liang H., Wu S. M., Zhu Y. Z., Zhao J. Y., Dong X. Q., Li M. G., Bian L., Zou C. G., Ma L. Q., Sci. Rep., 2017, 7, Biotransformation of Ginsenosides in Fermented Ginseng Using UPLC Q Orbitrap MS / MS QIAO Mengdan, LIU Shang, ZHANG Yan, LI Jing, ZHENG Fei, DAI Yulin, YUE Hao ( Jilin Ginseng Academy, Changchun University of Chinese Medicine, Changchun , China) Abstract This work aims to analyze and compare the ginsenosides contents from white ginseng and fermented black ginseng( FBG) using UPLC Q Orbitrap MS / MS( ultra performance liquid chromatography coupled with quadrupole orbitrap tandem mass spectrometry). FBG was processed by spontaneous short term fermentation, along with the biotransformation of ginsenosides. The samples were separated by liquid chromatography using a Thermo Syncronis C 18 column at 30. Moreover, 0 1%( volume fraction) formic acid and acetonitrile were used as mobile phases A and B, respectively. The flow rate was 0 2 ml / min, and the injected sample volume was 0 5 μl. By the use of the UPLC Q Orbitrap MS / MS, 52 kinds of ginsenosides were identified. The contents of main ginsenosides, especially in malonylated ginsenosides, were decreased, because of hydrolyzed. The method of spontaneous short term fermentationdid doesn t require any additives, and provides the theoretical basis for spontaneous short term fermentprocessed ginseng. Keywords Fermentation; Ginsenoside; Biotransformation; Liquid chromatography mass spectrometer (Ed.: N, K) Supported by the National Natural Science Foundation of China( No ) and the Jilin Provincal Science and Technology Develop ment Project, China( No JC).

DOI /j.issn Food Research And Development UPLC-MS/MS 5 0.

DOI /j.issn Food Research And Development UPLC-MS/MS 5 0. 118 217 5 38 1 DOI 1.3969/j.issn.5-6521.217.1.28 Food Research And Development 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 1. 731 2. 731 - UPLC-MS/MS 5. 1 mol/l ProElut PXC 5 % - Thermo Hypersil Gold mm 2.1 mm 1.9 μm ESI