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- 铄 茆
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1 驱动性突变的发现 靶向药物的上市要求对样品进行分子分型 分子诊断与驱动性突变的一次性检测 组织学 驱动性突变 NSCLC 的分群治疗 Non-squamous 阮力 Ph.D 福建省专利奖一等奖获奖者福建省第十一届青年科技奖获奖者厦门市科学技术进步奖一等奖获奖者厦门市青年双百人才厦门市海沧拔尖人才厦门艾德生物医药科技有限公司技术副总 Adenocarcinoma -cell carcinoma Large cell carcinoma No mutation detected KRAS (22%) (17%) EML4-ALK (4-7%) Double mutants (3%) BRAF (2%) ROS1 RET MEK1 MET AMP HER2 PIK3CA ALK+ ALK+ WT KRAS KRAS 2012 Other nonsquamous WT NCCN Other nonsquamous ROS WT NCCN Current Standard of NSCLC Care 2010 NCCN NCCN Guidelines Version of Non-Small Cell Lung Cancer Horn L, Pao W. J Clin Oncol. 2009;26: 多种癌症中驱动性突变的不断发现预示着分子诊断时代的到来 更多靶向药物上市分子诊断的检测需求将越来越多 Iressa Tarceva, Icotinib, Afatinib 等也将成为一线药 ALK 等抑制剂上市 MEK1 PI3K 抑制剂 ( 阿司匹林 ) 靶向药物药价逐渐降低 新的药物靶点新的诊断试剂新的治疗方案 Levi A. Garraway, J Clin Oncol 2013, 31 检测 - 药物 - 检测 药物 - 1. 治疗前尽可能检测多个靶标 2. 治疗监测 多次检测 肿瘤治疗模式的改变分子诊断将承担更重要的角色 肿瘤临床治疗模式悄然改变 ( 肿瘤变为慢性病来治疗 ) 好的分子检测平台将助力分子诊断的快速发展 提前做好准备平台选择 空间 人员早做早强做好更强 二次活检 微创手术 - 多次活检 治疗过程监测 --cfdna 监测 ( 血浆一致性约 70% ) 循环肿瘤细胞药物治疗压力下的进化变异 - 耐药 LeviA. Garraway. J Clin Oncol Mitsudomi, T. et al. Nat. Rev. Clin. Oncol ,2013 N Engl J Med 368:9 Feb N Engl J Med 368:13 Mar Nature Reviews/Cancer Vol. 13 April 2013 NatureVolume: 497, ,May
2 检测平台选择的 3 个考虑因素 1. 仪器有资质, 配套试剂易于标准化, 有认证 2. 检测准确 通量足够 方便快速易开展 1. 仪器有资质, 配套试剂易于标准化, 有认证 a. 国家法规要求, 仪器 试剂有 CFDA 认证 b. 实验室标准化要求 ( 卫生部临床基因扩增实验室要求 CAP CNAS ) 8 EML4-ALK ROS1 9 c.dna/rna 水平 biomarker K-ras B-raf PI3K EML4-ALK ROS1 RET c.dna/rna 水平 biomarker d. 治疗等待床位周转 2
3 a. 临床样品复杂 数量受限 DNA/RNA 质和量多变化 PCR 产物长度 可扩增 DNA C. 肿瘤临床治疗模式悄然改变 ( 肿瘤变为慢性病来治疗 ) 检测 - 药物 - 检测 药物 - 1. 治疗前尽可能检测多个靶标 2. 治疗监测 多次检测 ; 活检样品增多 ;cfdna;ctc 3. 适用于多种临床样本类型 C. 肿瘤临床治疗模式悄然改变 d. 同一份样品同时得到 DNA/RNA 信息? ARMS 技术 被临床证明的肿瘤基因检测技术 FFPE 样品 RNA 质量能够满足检测需要 是 PCR 平台上的特异扩增技术 ( 易开展 ) 共发表 258 篇文献 著名的大型临床研究 - 如 IPASS INFORM CTONG0806 等 灵敏度与临床意义正好契合 ( 突变丰度 ) 大型临床研究 IPASS 4 家医院的 FFPE 样品的 RNA 质量 医院 1 医院 2 医院 3 医院 4 有无 检测经验 No Yes Yes Yes 总样品数量 差样品数量 不合格样品 数量 国际肺癌协会专家共识中国基因突变检测专家共识日本临床专家共识 INFORM 差样品 FFPE 样品数量 : 外控 Ct >24 不合格的 FFPE 样品数量 : 外控 Ct 没有升起 sample 260/280 Con. Result CL Yes CL Yes CL Yes CL Yes CL Yes CL Yes 及时将组织保存于 10% 的中性福尔马林中, 采用标准石蜡包埋程序, 使用高品质的商业化提取试剂盒可以轻轻松松的获得足够量的高品质 DNA 和 RNA. 18 3
4 EML4-ALK 在 RNA 水平的检测是准确的也是专家共识推荐的方法之一 RNA 水平上 ALK 阳性患者可以从克唑替尼获益 临床标本 196 例 RT-PCR( 艾德 ) Vs FISH( 雅培 ) 阳性符合率 :98.4% 阴性符合率 :94.6% RT-PCR( 艾德 ) Vs IHC ( 罗氏 ) 阳性符合率 :98.5% 阴性符合率 :96.2% RT-PCR 阳性率略高于 IHC 和 FISH 克唑替尼 I 期臨床 FISH 陽性客觀反應率為 57% RT-PCR 客觀反應率為 80% PROFILE 1001 PROFILE 1005 英国第三方临检中心 LAB21 艾德试剂检测与雅培 FISH 试剂平行对比临床标本 87 例, 符合率 100% Median time to response: 8 wk % 相比基线的增减 Shen et al., N Engl J Med Feb 24;364(8):777-8 J. Ying,Annals of Oncology, July 31, 2013 Tuononen et al., BioM Res Int Thomas et al Ann Oncol Mar;24(3): Camidge et al., ASCO 2011; Abs #2501 Riely et al., IASLC 2011; Abs #O 已上市靶向药物 panel +ALK+ROS1+RET=69 种突变 2. 靶向药物 panel 3 个 panel 方案涵盖 DNA/RNA 水平 Biomarker +K-ras + B-raf + ALK + ROS1+ RET =90 种突变 3. 靶向药物相关 panel +k-ras+braf+mek1+pi3k+her2+nras+akt1+alk+ros1+ret=107 种突变 1. One slide 2. One extraction getting DNA/RNA DNA 4. One adding DNA/cDNA 6. One analysis by our software 检测流程 (One Kit Fit All) RNA RT 5min 3. One fast RT reaction cdna 96-well plate 5. One run 一份标本一次提取两种核酸多重基因一次实验 One therapy 2013 年 NCCN 指南建议 NSCLC 患者检测 +ALK+ROS1 基因 大肠癌靶向药物组合检测 4 小时 DNA/RNA 共提试剂盒, 基因突变检测套餐 节约临床样本, 时间, 金钱 DNA/RNA 共提试剂盒, 基因突变检测套餐 节约临床样本, 时间, 金钱 简化操作流程 : 当天知道结果 简化操作流程 : 当天知道结果 4
5 标准的技术平台及配套的试剂保证检测结果的准确性 小结 RNA 制备 认证的核酸抽提试剂 微量紫外分光光度计 Q-PCR 好流程才有好结果 中性福尔马林组织保护液快速低温放置 选用 CFDA 认证的检测试剂逆转录 EML4-ALK K-ras B-raf PI3K 驱动突变的发现改变了肿瘤治疗模式也预示着分子诊断时代的到来 分子诊断必将快速发展, 也将在肿瘤治疗中扮演更重要的角色 ARMS 技术是最适合分子诊断临床实践的分子检测平台 DNA RNA DNA/RNA 血清病理小样本 / 血浆游离 DNA 标准流程下一次实验中完成 DNA/RNA 水平的多重分子检测 厦门艾德 医学专家长期可靠的合作伙伴 谢谢! 厦门艾德生物医药科技有限公司
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