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縻阎
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1 复旦学报医学版易善复与游泳运动对高脂饮食小鼠脂肪肝的预防作用比较王智超刘歆阳朱亦淳梁勇臻虞娇俞彰复旦大学上海医学院级临床医学八年制复旦大学上海医学院电子显微镜中心实验室上海摘要目的分别观察保肝药易善复和游泳运动对于高脂饮食小鼠脂肪肝的预防作用通过细胞超微结构和显微结构的比较为临床脂肪肝的预防提供依据方法高脂饮食性脂肪肝模型通过小鼠进食高脂饲料来诱导将只正常小鼠随机分为组即正常饮食对照组高脂饮食模型组高脂饮食加药物组 0 高脂饮食加游泳组和正常饮食加药物组 0 皮下注射易善复 2!2 游泳运动为小鼠每天水温游泳连续实验周后测定小鼠体重并观察肝细胞组织切片和超微结构形态变化以体重变化肝细胞中脂滴的大小和多少肝细胞超微结构的变化为主要衡量指标比较保肝药易善复和游泳运动对于脂肪肝的预防效果结果组小鼠肝脏内出现了明显的脂肪变性胞质内出现大量脂滴和胆固醇结晶体重明显高于对照组组小鼠肝脏的显微结构和超微结构无显著变化体重增加 0 组小鼠体重有明显下降同时肝脏出现了相对较为明显的脂肪变性 0 组小鼠在肝脏形态结构无明显变化的前提下体重有明显降低结论周的高脂饮食成功建立了小鼠脂肪肝模型游泳运动和易善复对于抑制脂肪肝的形成有一定积极作用游泳运动的保护作用优于易善复易善复对于正常肝脏影响较小可以用于脂肪肝的预防性治疗关键词高脂饮食性脂肪肝小鼠易善复游泳运动中图分类号, 文献标志码 ) % " " "! # " # " # #"" "* 3) 9#% # 2 ;!%! 9 8% # 2 ) 8!%5# 8 89#! $!! % ' $% % '% %! ' $%! *$! % '$ 1 "!" "# " " " "/ " # " " "! ' ##" ' #' " " " " ' "#!# ''" " " " " 1# '" ' '/ "# "" ' 0 " ' ' / #!#" " " ' ' "! # # ' " ' #!#" " '! #!#" " "## " " "!! 0#!#" " "#!! ' " "## " " "!! 0 0 0! '! ' ##" ' #'!! " " )" / "#!#" "# #! '" " " #""#'! ' ' "!"# $%'5 #

组高脂饮食加药物组 0 高脂饮食加游泳组和正常饮食加药物组 0 皮下注射易善复 2!

2 王智超等易善复与游泳运动对高脂饮食小鼠脂肪肝的预防作用比较 "# ' #'! " " / " "!# "#! "# ' /' " " "#' #' " ' ' ""# "'"#!#" #!#! "# " " '" " " ' " #! "' #! "#!#" #!# 0! "#!#" # "# ' '" ' /" " 0! "# " " '" " " "# ' # / #! "#!#" "#! " " ' ' ' "/'# / #!#" "'! "#" "/'! ' ##" ' #' '" ' " '" "/' ' "# "" ' *' ##" ' #' "# '""# "" " # '"# ' "# ' ""# " / " "#"" ' " " " ' ' ##" ' #'! 随着生活水平的提高和人群饮食结构的改善加之运动量的减少我国脂肪肝的发病率逐年上升高脂饮食性脂肪肝所占的比例大大增加统计数据表明 44 的肝纤维化和肝硬化与脂肪肝有关同时脂肪肝患者中约有 4 十年后可发展为肝硬化并可能进一步导致肝癌的发生因此在早期进行脂肪肝的预防尤其是高脂饮食性脂肪肝的预防对延缓和阻止慢性肝病的进展和改善预后有着积极的意义保肝药易善复和游泳运动均可治疗高脂饮食性脂肪肝或延缓病程进展但是两者的比较区别与研究却相对较少能否利用保肝药易善复对正常肝脏进行脂肪肝预防也是一个没有解决的问题本实验通过建立高脂饮食性脂肪肝小鼠模型以透射电子显微镜为主要观察手段结合苏木精 % 伊红 $ 染色光学显微镜观察研究保肝药易善复和游泳运动对高脂饮食性小鼠脂肪肝的预防效果比较两者预防效果的异同同时观察保肝药易善复对正常肝脏和脂质代谢的影响从而为临床中预防高脂饮食下脂肪肝的发生和演变提供一定的参考依据材料和方法试剂与仪器高脂饮食饲料由复旦大学上海医学院电镜室提供易善复赛诺菲安北京万特制药有限公司苏木精 % 伊红 $ 切片的制作和记录由复旦大学上海医学院病理学系完成电镜照片的制作和记录由复旦大学上海医学院电镜室完成试验动物清洁级昆明种小鼠只雌性体重! 由复旦大学实验动物中心提供小鼠随机分组分别是正常对照组高脂饮食模型组高脂饮食及保肝药组 0 高脂饮食及适度运动组和正常饮食及保肝药组 0 小鼠每日称重取平均值实验周后处死组小鼠只用于制备肝组织 $ 切片判断是否形成脂肪肝高脂饮食性脂肪肝动物模型将以上随机分组的小鼠按照如下方法建模组用普通饲料喂养组用高脂饲料喂养组用高脂饲料喂养每日进行无负重游泳泳池为水温 0 组用高脂饲料喂养根据药量换算原理将药物浓度稀释倍后皮下注射 2 每日注射药物! 0 组用普通饲料喂养同样药物浓度和剂量皮下注射上述各组保持饲养环境温度湿度恒定电镜检测电镜样品采用 4 戊二醛和 4 双固定小鼠处死后迅速剪下肝脏切成的组织块置于 4 戊二醛电镜固定液中 # 经 '2 磷酸缓冲液漂洗后用 4 固定 # 接着 '2 磷酸缓冲液漂洗冰箱内梯度乙醇脱水置于 4 乙醇和 4 丙酮混合液中 4 丙酮室温下脱水重复次环氧树脂包埋 27-% 型超薄切片机瑞典 2 公司切片切片厚度枸橼酸铅和醋酸双氧铀染色 $ %$; 透射电镜日本电子株式会社观察并照相光镜检测小鼠肝脏组织经常规福尔马林固定制成石蜡切片 $ 染色后光镜观察所有光镜

随着生活水平的提高和人群饮食结构的改善加之运动量的减少我国脂肪肝的发病率逐年上升高脂饮食性脂肪肝所占的比例大大增加统计数据表明 44 的肝纤维化和肝硬化与脂肪肝有关同时脂肪肝患者中约有 4 十年后可发展为肝硬

3 复旦学报医学版年月照片均为倍肝细胞脂肪变性程度分级标准无脂变肝小叶结构完好基本无脂变轻度单位面积见肝细胞脂变中度单位面积见以上肝细胞脂变重度单位面积见几乎所有肝细胞脂变统计学分析采用 * 统计软件进行分析实验期间各组小鼠体重变化均经线性回归分析组间体重差异经多元回归分析结果各组小鼠体重变化分析各组小鼠经过周饲养之后日均体重经线性回归得到数据图正常饮食对照组小鼠组体重的线性回归斜率为高于高脂饮食小鼠组的值但是高脂饮食组组的 4 的最低值仍高于组的最高值高脂饮食加游泳组小鼠组体重的线性回归斜率最高为其 4 与组所涵盖范围基本一致最高值甚至超出组无论是正常饮食还是高脂饮食的给药组小鼠体重的增长速度都有明显下降是体重增长速度最慢的两组但是同样在药物治疗的作用下高脂饮食小鼠体重的 4 仍然超过正常饮食小鼠各组小鼠肝组织光镜观察组小鼠的肝脏肉眼观察为红褐色明亮而富有光泽 $ 染色后光镜下观察肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列排列整齐而有规律细胞质红染肝细胞的细胞核位于细胞中央图 ) 组小鼠肝脏的体积有明显增大肝脏切面略微泛黄有油腻感光镜下观察肝细胞中度或重度肿胀胞质中存在大泡或者小泡样的脂滴细胞质整体染色偏淡肝窦变窄有一定程度的炎症细胞浸润图 - 组小鼠肝脏略偏大镜下观察肝细胞数量显著增多近中央静脉的肝细胞中有散在的微小脂肪微粒近门管区的肝细胞形态无明显变化图 0 组小鼠的肝脏切片中也存在中等数量的含有脂肪微粒的肝细胞主要分布于近门管区的部分与其他肝细胞相比靠近中央静脉处的肝细胞形态较为正常图 0 图各组小鼠体重变化线性回归分析 -* " * "! * 0 组小鼠的肝脏切片镜下观察结果与 0 组类似但是肝组织脂肪变性的程度略轻图 $ 各组小鼠肝细胞电镜观察组小鼠肝脏的超微结构图 ) 细胞核呈圆形或椭圆形单核胞质中滑面内质网相对较多粗面内质网较为散在胞质中线粒体丰富排列紧密内嵴较为明显线粒体间存在大量呈片状分布的肝糖原胞质中极少见脂滴直径组小鼠肝脏的超微结构图 - 细胞核内异染色质相对较多核周的染色质中存在大片状分布的絮状空洞为细胞质中的胆固醇结晶体堆积所致细胞质中可见大小不一的散在脂滴长轴细胞质中的线粒体含量大幅度减少仅有若干散在的线粒体存在且内嵴不明显中央出现固缩现象细胞质中的糖原基本消失内质网明显减少

值但是高脂饮食组组的 4 的最低值仍高于组的最高值高脂饮食加游泳组小鼠组体重的线性回归斜率最高为其 4 与组所涵盖范围基本一致最高值甚至超出组无论是正常饮食还是高脂饮食的给药组小鼠体重的增长速度都有明显下降是

4 ! 王智超#等 ;易善复与游泳运动对高脂饮食小鼠脂肪肝的预防作用比较!) 图 N! 各组小鼠肝脏光镜图 E ) % 0/< % -2 ) * 5 * 4$ 4 1B %3/ BN!H B >3 6$ >/H3 0"2;!!A$!!@!/, 组小鼠的肝脏超微结构$图 $/! 细胞核体积较大#呈椭圆形#存在散在的异染色质%胞质原残余%细胞质中存在的脂滴体积较小#直径一般中线粒体极为丰富#数量超过 > 组#且体积较大#内在 #'8 以下% 细胞质中线粒体数量中等#散在分外嵴分界明显粗面内质网的含量非常丰富糖原含布#稍有固缩% 量丰富#呈大片状分布在线粒体之间有少量脂滴存 >/H 组小鼠肝脏的超微结构 $图 $6! 细胞核内染色质与异染色质分界明显#细胞质中线粒体组小鼠肝脏超微结构$图 $H! 细胞核内染色质固缩现象较为明显%细胞质中存在胆固醇结晶堆积形成的网状结构#在细胞膜下还有少量糖和粗面内质网含量丰富#在核周有糖原分布#稍远处有圆形或椭圆形脂滴% 图 T! 各组小鼠肝脏电镜图 E 1 0 0/< % -2 ) * 5 * 4$ 4 1B %3/ BT!J5 B >3 6$ >/H3 0"2;!!A$

量丰富#呈大片状分布在线粒体之间有少量脂滴存 >/H 组小鼠肝脏的超微结构 $图 $6! 细胞核内染色质与异染色质分界明显#细胞质中线粒体在于胞质之中% @!/H 组小鼠肝脏超微结构$图 $H!

5 复旦学报医学版年月讨论成功建立小鼠脂肪肝模型组与 1- 组的比较本研究通过周的高脂饮食饲养组小鼠的平均体重超过组 $ 染色切片和电镜超微结构均显示组小鼠的肝脏细胞质中存在大量胆固醇结晶和脂滴糖原等物质减少细胞器变化较显著线粒体和粗面内质网的含量都有较大幅度下降这些指标综合显示出该模型的肝脏病理状态和代谢状态均与人类因饮食而造成的脂肪肝相似说明在本实验中脂肪肝建模成功游泳运动对于高脂饮食小鼠脂肪肝形成的干预作用 1-A 组与 1- 组的比较本研究发现组和组的小鼠经过周的培养体重达到相同水平组的小鼠体重增长斜率甚至高于组组和组小鼠的肝脏大体上虽均有增大但是仅有组的肝脏切面有明显油腻感 $ 切片显示组小鼠的肝脏中脂肪空泡较少细胞排列比较紧密肝脏体积增大可能源于肝细胞数量的增多电镜下的超微结构同样显示组的肝细胞中不存在明显的胆固醇结晶脂滴也相对较少且散在分布线粒体和粗面内质网等维持肝细胞功能的重要细胞器有增无减提示肝功能有一定的增强趋势通过对以上指标的分析与对比提示适量游泳运动对于高脂饮食小鼠脂肪肝的形成是有着积极的干预作用可以增强肝脏代谢功能有效避免脂肪肝的发生发展药物对于高脂饮食小鼠脂肪肝形成的干预作用 1-A, 组与 1- 组的比较实验数据显示在周的饲养时间中 0 组小鼠的体重平均增长速率和终末体重均小于组说明易善复的皮下注射在一定程度上抑制了体重过快增长和增长到过高水平两组电镜照片显示的超微结构虽然有一定差异但并不明显 $ 染色切片显示在近中央静脉区的肝细胞中脂滴含量较少形态相对正常而在近门管区的肝细胞中脂肪变性比较显著这说明皮下注射的易善复经血液运输到肝脏后对血液供应丰富的中央静脉区肝细胞的保护作用更明显以上实验数据提示易善复可以较为有效地防治体重过快过多增长同时降低血脂含量但是对于肝细胞的保护作用较弱药物与游泳运动的干预作用比较 1-A, 组与 1-A 组的比较根据以上分析与讨论我们认为游泳运动和易善复皮下注射对于脂肪肝都有一定的抑制作用两者有各自的优缺点游泳运动可以选择性调节血脂的各项指标增强肝脏功能反之则会造成体重过快增长易善复虽然可以全面降低血脂调节体重但是对于肝脏的保护功能比较局限两者共同作用是否可以取长补短仍有待进一步实验的证明药物对于正常饮食小鼠肝脏的作用 A, 组与组的比较在正常饮食的条件下增加易善复皮下注射同样对体重有抑制作用在 $ 染色切片和电镜显示的肝脏超微结构中未发现其与单纯正常饮食组的显著差异说明易善复可以在不显著影响肝脏正常功能的情况下实现其积极作用提示易善复可以作为预防脂肪肝的药物来使用游泳运动和易善复对于脂肪肝干预的可能机制可能有很多因素参与脂肪肝的形成导致脂肪肝的发生其中游泳运动和易善复可能通过调节肝脏的脂质代谢紊乱来预防脂肪肝的形成与发展正常情况下脂质以极低密度脂蛋白 ' % " ' " 202 的形式由肝脏输出而由微粒体三酰甘油转移蛋白 ' "!' " " 1* 生成的 202 必先通过与三酰甘油 "!' 1 结合进入载脂蛋白才能完成上述过程因此当 1* 活性下降或者载脂蛋白合成分泌减少时导致 1 在肝内堆积另外载脂蛋白 - 在肝脏的脂质排泄中也起到积极的作用游泳运动调节脂质代谢的可能机制是通过运动提高脂蛋白脂酶的活性促进血中 1 的水解加速骨骼肌及其他组织对于脂肪酸的利用进而加快肝内 1 的代谢而易善复降低血糖的可能机制是利用其中最主要的成分 % 不饱和脂肪酸促进体内 202 的合成加速肝脏对脂质的代谢随着人们生活水平的进一步提高脂质代谢紊乱所导致的脂肪肝的发病率逐年攀升本研究的结果提示人们只有通过合理调整饮食结构积极参加体育运动并在必要情况下予以一定的药物支持才能真正生活得健康快乐

作用 1-A 组与 1- 组的比较本研究发现组和组的小鼠经过周的培养体重达到相同水平组的小鼠体重增长斜率甚至高于组组和组小鼠的肝脏大体上虽均有增大但是仅有组的肝脏切面有明显油腻感 $ 切片显示组小鼠的肝脏中脂肪空泡

6 王智超等易善复与游泳运动对高脂饮食小鼠脂肪肝的预防作用比较致谢复旦大学病理学系张志刚老师生物化学系吴国强老师在整个项目的进展过程中给予我们巨大的帮助与支持参考文献 * *,,# %# * ' ' $ % $ # 0 "" * $ # $ %$ $$) % ' % '$ $ " /" / ' '! # $ $, $ $ #) 0 ' '$ % $ $ -* 翁小刚朱晓新杨庆等非酒精性脂肪肝的实验研究进展中国实验方剂学杂志冯王炳芳田培营等载脂蛋白载脂蛋白含量和脂蛋白脂肪酶肝脂肪酶活性在大鼠脂肪肝模型中的变化实用临床医药杂志许寿生健步走对非酒精性脂肪肝患者血液生化指标的影响西安体育学院学报重庆重庆医科大学赵肖宪颜宜傅小锁等运动干预对饮食性高胆固醇血症大鼠肝脂肪变的影响中国运动医学杂志沃兴德崔小强唐利华姜黄素对食饵性高脂血症大鼠血浆脂蛋白代谢相关酶活性的影响中国动脉硬化杂志倪鸿昌李俊金涌等大鼠实验性高脂血症和高脂血症性脂肪肝模型研究中国药理学通报李斌刘朝奇史继静等木瓜对小鼠非酒精性脂肪肝形成的预防作用食品科学曾民德降血脂药物在脂肪肝治疗中的应用中华肝脏病杂志王继峰李峨李贡宇等大豆总黄酮对实验性大鼠高脂血症及脂肪肝的治疗作用中国医药报乔海灵张莉蓉贾琳静等中华大蒜油对大鼠实验性高脂血症的防治作用郑州大学学报医学版收稿日期编辑王蔚魏来番茄红素对大鼠非酒精性脂肪肝的作用研究上接第页 %$ #,#$ " 0 # * 5 % $$' $ )# $ )$ ' #$/ "#!# $ " ' # ' "!$ $ % $!$ $ )'" $ 1# ' ' 1 # $ *)!11*!"# $ # $$' # ' ' # / "%# $)#!$!$ % $ / 3 " %$ '$,##! #! #!' ' ' # $)%%" # " ' '! "!$ $% $ '$ " # " $" " # #$ " %$ '$ 收稿日期编辑王蔚

# $ $, $ $ #) 0 ' '$ % $ $ -* 翁小刚朱晓新杨庆等非酒精性脂肪肝的实验研究进展中国实验方剂学杂志冯王炳芳田培营等载脂蛋白载脂蛋白含量和脂蛋白脂肪酶肝脂肪酶活性在大鼠脂肪肝模型中的变化实用临床医药杂志许寿

说明为了反映教运行的基本状态, 为校和院制定相关政策和进行教建设与改革提供据依据, 校从程资源 ( 开类别开量规模 ) 教师结构程考核等维度, 对 2015 年春季期教运行基

说明为了反映教运行的基本状态, 为校和院制定相关政策和进行教建设与改革提供据依据, 校从程资源 ( 开类别开量规模 ) 教师结构程考核等维度, 对 2015 年春季期教运行基内部资料东北师范大教运行基本状态据报告 2015 年春季期教务处 2015 年 10 月 27 日说明为了反映教运行的基本状态, 为校和院制定相关政策和进行教建设与改革提供据依据, 校从程资源 ( 开类别开量规模 ) 教师结构程考核等维度,

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