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1 緒 論 細 胞 內 鈣 濃 度 的 升 降, 調 控 著 胞 內 不 同 的 生 理 機 制, 如 神 經 訊 息 傳 導 肌 肉 收 縮 分 泌 作 用 細 胞 移 動 與 黏 著 細 胞 增 生 與 分 化, 基 因 表 現 調 控, 與 細 胞 死 亡 (Ghosh and Greenberg, 1995; Clapham, 1995; Santella and Carafoli, 1997; Marks, 1997; Berridge, 1997; Berridge, 1998; Berridge et al., 2000), 所 以 胞 內 鈣 濃 度 之 升 降, 嚴 格 且 精 準 的 被 調 控, 以 便 行 使 上 列 的 諸 功 能 胞 內 鈣 濃 度 的 變 化 則 受 不 同 蛋 白 質 調 控, 使 細 胞 能 進 行 正 常 的 功 能 當 細 胞 接 受 外 來 訊 息, 會 使 得 胞 內 鈣 離 子 上 升, 其 鈣 離 子 上 升 的 機 制, 一 則 可 藉 由 細 胞 膜 上 的 攝 入 系 統, 使 胞 外 鈣 內 流, 另 一 則 為 鈣 庫 的 鈣 釋 放 胞 外 鈣 內 流 可 藉 由 細 胞 膜 上 四 種 鈣 離 子 通 道 開 啟 而 達 成 :(1) 電 感 性 鈣 離 子 通 道 (voltage-operated Ca 2+ channel; VOC), 在 激 活 性 的 細 胞, 可 藉 由 動 作 電 位 的 產 生 來 活 化 開 啟 此 類 通 道, 已 知 的 亞 型 有 :L,N,P/Q, R, S 和 T 型 (Meir et al., 1999) (2) 受 體 本 身 即 是 鈣 離 子 通 道 (receptor-operated Ca 2+ channel; ROC) 又 稱 ligand- gated ion channel, 當 ligand 與 受 體 結 合 後, 直 接 開 啟 受 體 本 身 的 離 子 通 道 如 麩 氨 酸 (glutamate) 受 體,ATP 受 體 等 (Penner et al., 1993; Barnard, 1996) (3) 二 級 訊 息 調 控 的 鈣 離 子 通 道 (second messenger-operated Ca 2+ channel) 當 致 活 劑 結 合 細 胞 膜 上 受 體 後, 會 活 化 G 蛋 白 而 產 生 二 級 訊 息, 再 由 二 級 訊 息 開 啟 鈣 離 子 通 道 例 如 : 在 嗅 覺 神 經 細 胞 中,cAMP 可 開 啟 鈣 離 子 通 道 (Miyamoto, 1992) (4) 鈣 庫 調 控 的 鈣 離 子 通 道 (store-operated Ca 2+ channel; SOC): 又 稱 capacitative Ca 2+ entry channel 為 transient receptor potential (TRP) gene 之 產 物 當 細 胞 鈣 庫 釋 空 後 會 活 化 SOC, 使 胞 外 鈣 內 流 來 補 充 釋 空 的 鈣 庫 (Hoth and 1

2 Penner, 1992,Friel, 1996; Zhu et al., 1996) 細 胞 內 質 網 鈣 庫 的 鈣 釋 放, 可 經 由 (1)IP3-sensitive Ca 2+ pool: 細 胞 經 訊 息 刺 激 活 化 phospholipase C 產 生 IP3, 結 合 於 內 質 網 上 的 IP3 受 器 後, 便 可 開 啟 此 通 道 使 鈣 庫 釋 放 鈣 離 子 (Tsien, 1990) (2)GTP- sensitive Ca 2+ pool: 由 GTP 引 發 釋 放 鈣 庫 鈣 離 子, 另 外 GTP 可 開 啟 IP3 敏 感 性 以 及 GTP 敏 感 性 鈣 庫 間 的 通 道, 進 而 增 加 IP3 可 釋 出 的 鈣 量 (Gill, 1986; 1989) (3)Ca 2+ -induced Ca 2+ release (CICR): 胞 內 鈣 上 升 後, 引 發 鈣 庫 釋 放 更 多 鈣 此 種 鈣 釋 放 的 通 道, 可 受 植 物 鹼 ryanodine 活 化 而 稱 為 ryanodine receptor, 而 且 鈣 和 咖 啡 因 (caffeine) 是 其 致 活 劑 (McPherson and Campbell, 1993) (4)cyclic ADP ribose (cadpr) - sensitive Ca 2+ pool(galione, 1992, Lee et al., 1989) (5) 其 他 訊 息 者 媒 介 的 鈣 庫 : 有 些 二 級 信 使 可 誘 發 鈣 庫 釋 放 鈣 離 子, 如 一 種 sphingolipid 的 代 謝 物 (Ghosh et al., 1990) 花 生 四 烯 酸 (arachidonic acid)(wu et al., 1994) 和 nicotinic acid adenine dinucleotide phosphate (Dousa et al., 1996) 細 胞 內 鈣 離 子 濃 度 平 均 維 持 在 100nM 的 範 圍, 胞 外 則 有 1.3 mm 的 鈣 細 胞 需 維 持 在 基 礎 低 濃 度 狀 況 下 才 能 調 控 正 常 生 理 功 能 (Carafoli, 1987; Blaustein,1988), 因 此 需 藉 由 細 胞 膜 上 的 排 除 系 統 或 內 質 網 粒 線 體 等 鈣 庫 的 攝 入, 來 移 除 細 胞 質 內 累 積 過 高 的 鈣 離 子 細 胞 受 到 刺 激 後 胞 內 鈣 離 子 的 上 升, 可 由 細 胞 膜 上 的 (1) 鈣 幫 浦 (Plasma membrane Ca 2+ pump; PMCA), 利 用 水 解 ATP 將 鈣 離 子 主 動 運 輸 排 出 (Carafoli, 1994) 目 前 已 發 現 有 四 種 isoform,pmca1,pmca2, PMCA3 及 PMCA4, 皆 可 受 Camodulin 活 化 以 及 PKG,PKA 調 控 (2) 鈉 鉀 交 換 器 2

3 (Na + /Ca 2+ exchanger), 利 用 鈉 的 濃 度 以 (3:1) 將 鈣 主 動 運 至 胞 外 由 於 鈣 幫 浦 對 鈣 的 Km 較 小, 所 以 基 礎 態 鈣 濃 度 的 維 持 主 要 靠 鈣 幫 浦 的 運 作 ; 而 在 胞 內 鈣 濃 度 大 增 時, 鈉 鈣 交 換 器 亦 可 參 與 維 持 鈣 的 恆 定 (Philipson and Nicoll, 1992; Reeves, 1992) 內 質 網 鈣 庫 則 可 經 由 其 上 之 鈣 幫 浦 ( Sarcoplasmic endopalsmic reticulum Ca 2+ pump; SERCA) 吸 收 細 胞 質 (cytosol) 中 的 鈣 離 子, 利 用 水 解 ATP 主 動 將 二 分 子 鈣 打 入 內 質 網, 目 前 已 知 有 SERCA1 主 要 表 現 在 骨 骼 肌 細 胞,SERCA2a SERCA2b 主 要 在 心 肌 細 胞,SERCA3 則 存 在 於 平 滑 肌 以 及 一 般 的 細 胞 中 (Carafoli, 1987; Pozzan et al., 1994) 粒 線 體 吸 收 鈣 離 子, 一 者 可 經 由 單 一 轉 運 子 (uniporter), 由 膜 電 位 調 控, 即 依 賴 粒 線 體 內 外 的 氫 離 子 濃 度 梯 度 造 成 的 驅 動 力, 而 將 細 胞 質 中 的 鈣 離 子 與 氫 離 子 一 併 送 入 粒 線 體 內 (Denton and McCormack, 1990; Gunter et al., 1994); 另 一 種 為 快 速 吸 收 模 式 (Rapid uptake mode) 另 外 經 粒 線 體 釋 放 鈣 的 機 轉 有 二 種, 一 則 經 由 其 上 之 Na + /Ca 2+ 交 換 器, 另 一 則 是 經 由 與 鈉 無 關 的 permeability transition pore (PTP) (Babcock and Hille, 1998) 粒 線 體 比 內 質 網 能 吸 取 更 多 的 鈣, 但 其 對 鈣 的 親 和 力 較 低, 正 常 狀 況 胞 內 低 鈣 狀 況 時 並 無 鈣 吸 收 現 象, 而 粒 線 體 吸 收 鈣 離 子 的 作 用, 被 認 為 可 能 是 用 來 控 制 氧 化 呼 吸 的 速 率 另 外, 粒 線 體 也 可 調 節 細 胞 內 鈣 離 子 濃 度 的 變 化, 如 在 許 多 神 經 細 胞 glutamate 引 起 的 鈣 上 升 作 用, 粒 線 體 可 吸 取 大 量 的 鈣, 避 免 胞 內 鈣 離 子 瞬 間 過 高 (Khodorov et al., 1999; Stout et al., 1998) 另 外, 在 細 胞 質 或 內 質 網 中 還 有 一 些 鈣 結 合 蛋 白 質 (Ca 2+ -binding proteins), 也 可 以 當 作 胞 內 鈣 變 化 時 的 緩 衝 者 (sensors) (Baimbridge et al., 1992) 例 如 在 嗜 鉻 細 胞 (Chromaffin cells) 中, 胞 外 鈣 進 入 3

4 細 胞 後 有 將 近 98-99% 的 鈣 會 與 paravalbumin calretinin 或 calbindin 等 鈣 結 合 蛋 白 結 合 (Neher and Augustine, 1992) 此 外, 當 鈣 被 幫 浦 進 入 內 質 網 中, 會 與 鈣 結 合 蛋 白 質 如 calsequestrin (CSQ) 和 calreticulin (CR) 結 合,CSQ 主 要 存 在 於 肌 肉 細 胞 和 Purkinij neurons 中, 而 CR 在 大 部 分 真 核 細 胞 中 皆 有 這 些 鈣 結 合 蛋 白 質 對 鈣 的 親 和 性 很 小,Kd 約 為 mm, 但 其 結 合 能 力 很 大, 每 分 子 蛋 白 質 可 結 合 約 個 鈣 離 子 (Pozzan et al., 1994) 因 此 這 些 鈣 結 合 蛋 白 在 胞 鈣 濃 度 增 加 時 也 可 調 控 鈣 恆 定 細 胞 內 有 許 多 由 鈣 離 子 調 控 的 生 理 機 制, 如 賀 爾 蒙, 生 長 激 素 的 作 用, 都 需 藉 由 鈣 離 子 依 賴 的 傳 導 途 徑 當 胞 內 鈣 離 子 大 量 增 加 時, 會 破 壞 胞 內 外 鈣 離 子 的 平 衡, 便 會 阻 斷 這 些 胞 外 來 的 訊 息 傳 導, 而 影 響 正 常 生 理 功 能, 因 此, 細 胞 內 鈣 離 子 增 加 的 時 間 長 短 以 及 大 小 是 決 定 其 造 成 傷 害 程 度 的 關 鍵 另 外, 胞 內 持 續 鈣 離 子 濃 度 的 上 升, 會 造 成 粒 腺 體 的 功 能 受 損, 也 會 造 成 細 胞 的 死 亡 此 外, 較 大 量 的 鈣 離 子 增 加 會 造 成 細 胞 內 離 子 不 平 衡, 也 會 瓦 解 細 胞 骨 架 蛋 白 (cytoskeleton) 的 組 成, 或 活 化 許 多 需 要 鈣 離 子 參 與 的 代 謝 過 程, 如 蛋 白 質 的 分 解 (proteolysis), 膜 的 降 解 (degradation), 染 色 質 的 斷 裂 等 (fragmentation), 進 而 造 成 細 胞 死 亡 細 胞 死 亡 (apoptosis) 被 分 為 兩 類, 一 者 為 經 由 接 受 器 傳 導 的 途 徑, 傳 遞 此 類 訊 息 的 接 受 器 如 CD95 與 TNF 接 受 器 被 活 化 後, 會 與 FADD 與 procaspase 8 形 成 複 合 體, 活 化 caspase 8, 而 進 一 步 活 化 下 游 caspase 造 成 死 亡 ; 另 一 者 為 經 由 粒 線 體 的 傳 導 途 徑, 當 受 到 細 胞 內 外 刺 激 後, 可 經 由 pro-apoptotic Bcl-2 familiy 蛋 白 質 作 用, 最 後 訊 息 傳 導 至 粒 線 體, 釋 放 cytochrome C, 形 成 apoptosome 啟 動 下 游 死 亡 訊 息 不 論 是 經 由 接 受 器 或 粒 腺 體 引 起 死 亡 的 傳 導 途 徑, 都 會 造 成 caspase 3 的 活 化, 故 4

5 caspase 3 的 活 化 被 認 為 是 細 胞 死 亡 的 指 標 之 一 近 年 來 文 獻 對 於 粒 線 體 主 導 細 胞 死 亡 的 原 因, 主 要 認 為 是 粒 線 體 的 完 整 性 (mitochondria membrane permibilty,mmp) 受 到 破 壞 所 導 致, 包 括 粒 線 體 內 外 膜 的 改 變, 如 粒 線 體 內 膜 的 膜 電 位 的 消 失, 以 及 由 粒 線 體 外 膜 通 透 而 釋 放 出 的 蛋 白 質, 如 cytochrome C (Liu et al., 1996), apoptosis-inducing factor(aif)(susin, 1999),caspase 3 (Kraewski, 1999) 與 Smac/DIABLO(Du, 2000; Verhagen, 2000), endonuclease G(Li, 2001) 等 可 啟 動 死 亡 的 訊 號 而 膜 電 位 的 消 失 會 使 得 電 子 傳 遞 鏈 以 及 氧 化 磷 酸 化 失 去 功 能, 使 細 胞 缺 乏 能 量 ; 釋 放 至 細 胞 質 的 cytochrome C 也 會 和 Apaf-1 形 成 apoptosome 的 結 構, 進 一 步 活 化 procaspase 9; 活 化 的 caspase 9 再 去 活 化 caspase 3;caspase 3 亦 會 促 成 DNA 斷 裂, 最 後 引 發 細 胞 死 亡 然 而 除 了 由 粒 線 體 以 及 接 受 器 造 成 的 細 胞 死 亡 外, 各 胞 器 如 內 質 網 溶 小 體 等 參 與 的 角 色 也 逐 漸 被 研 究 (Ferri and Kroemer, 2001; Bratton and Cohen, 2001) 目 前 已 知 由 內 質 網 所 引 起 的 細 胞 死 亡 (apoptosis) 有 兩 種 模 式, 一 者 主 要 由 於 內 質 網 釋 放 出 大 量 鈣 離 子 所 導 致, 胞 內 增 加 的 大 量 鈣 離 子 會 進 入 粒 線 體 或 活 化 m-calpain, 而 破 壞 粒 線 體 的 完 整 性, 使 得 粒 線 體 的 PTP 開 啟, 釋 放 cytochrome C 等 蛋 白 質, 或 是 經 由 直 接 間 接 活 化 內 質 網 膜 外 側 的 procaspase 12, 兩 者 皆 可 進 而 活 化 caspase, 啟 動 apoptosis (Kaufman, 1999) 另 一 種 模 式 則 是, 內 質 網 合 成 蛋 白 質 的 功 能 在 受 阻 之 情 況 下, 如 給 予 N-glycosylation 抑 制 劑 Tunicamycin, 或 用 Brefeldin A 抑 制 ER-Golgi transport, 以 及 SERCA 抑 制 劑 TG 耗 空 鈣 庫 等, 都 會 影 響 正 常 的 蛋 白 質 折 疊 過 程, 產 生 unfolded protein response 的 反 應 不 正 常 折 疊 蛋 白 質 的 堆 會 活 化 JNK pathway 以 及 5

6 caspase 12, 甚 至 減 少 bcl-2 的 表 現, 進 而 造 成 細 胞 死 亡 (Patil et al., 2001) Caspase 為 起 始 與 執 行 細 胞 死 亡 的 重 要 蛋 白 質, 為 cysteine aspartase, 屬 於 cysteine protease 的 家 族 成 員, 可 以 切 斷 含 有 Asparte 特 定 序 列 的 蛋 白, 目 前 發 現 的 caspase 有 14 種, 彼 此 具 有 相 似 的 胺 基 酸 序 列 結 構 以 及 受 質 專 一 性 (Stennicke and Salresen, 1998) 在 細 胞 內 是 以 proenzyme 的 形 式 存 在 (30-50KD), 含 有 3 個 單 元 : 一 為 N 端 prodomain, 另 為 large subunit (20KD) 以 及 small subunit (10KD) 受 訊 息 刺 激 後 可 經 切 斷 單 元 (subunit) 間 而 活 化, 切 斷 後 由 large 與 small subunits 組 合 成 heterodimer 在 caspase 1 caspase 3 還 可 由 heterodimer 組 合 成 tetramer, 執 行 其 催 化 能 力 不 同 的 caspase 其 prodomain 的 胺 基 酸 序 列 及 長 度 略 有 不 同 ; 有 較 長 prodomain, 如 caspase-2,8,9,10 可 利 用 蛋 白 質 間 交 互 作 用 (proximity) 當 成 initiator caspase, 較 短 prodomain 如 caspase-3,6,7,14 則 可 當 成 effector caspase caspase 在 受 質 的 選 擇 上, 都 可 作 用 在 類 似 的 4 個 胺 基 酸 構 築 下 的 motif, 除 了 適 合 的 受 質 胺 基 酸 序 列 外, 還 需 適 當 的 四 級 結 構 才 可 使 caspase 催 化 作 用 caspase 在 活 化 過 程 上, 可 由 (1) 蛋 白 質 間 交 互 作 用 (proximity), 如 procaspase 8 與 FADD 的 蛋 白 質 間 交 互 作 用 (proximity) 會 使 caspase 8 活 化 ; 或 者 (2) 透 過 形 成 holoenzyme 而 活 化, 如 procaspase 9 與 Apaf-1 cytochrome C 會 形 成 apoptosome 的 複 合 體 使 caspase 9 活 化 ; 還 可 由 (3) 上 游 的 caspase 或 使 其 protease 切 斷 而 活 化, 如 caspase 3 會 催 化 並 活 化 caspase 6, 而 granzyme B 會 活 化 caspase 8 (Medema et al., 1997); 由 於 proenzyme 的 切 斷 點 為 consensus site( 含 有 Aspartate 的 序 列 ), 因 此 一 旦 活 化 也 可 以 進 行 自 我 催 化 並 活 化, 或 是 啟 動 瀑 布 式 的 活 化 (caspase cascade) 此 外, 近 來 研 究 也 發 現 許 多 可 抑 制 caspase 活 性 6

7 的 蛋 白, 如 inhibitor of apoptosis protein (IAPs) 可 抑 制 caspase-3,6,9, 而 Smac /DIABLO 則 可 抑 制 IAP 的 作 用 (Du et al., 2000; Verhagen et al., 2000) 目 前 瞭 解 到 caspase 造 成 細 胞 死 亡 的 作 用, 可 透 過 將 胞 內 抗 死 亡 的 蛋 白 質 去 活 化, 如 切 斷 ICAD/DFF45 而 活 化 caspase-activated deoxyribonuclease (CAD), 造 成 DNA 斷 裂 (Enari et al., 1998; Liu et al., 1997), 或 作 用 於 Bcl-2 家 族 蛋 白 使 其 失 去 功 能, 甚 至 切 斷 的 片 段 可 以 引 發 更 多 死 亡 訊 息 Caspase 也 可 瓦 解 細 胞 架 構, 如 切 斷 nuclear lamina 造 成 chromatin condensation (Takahashi et al.,1996; Orth et al., 1996) Caspase 亦 可 作 用 在 cytoskeleton 的 調 節 過 程, 而 重 組 細 胞 架 構, 如 調 節 actin 的 gelsolin 可 受 caspase 作 用 而 持 續 活 化, 其 他 如 focal adhesion kinase (FAK) p21-activated kinase (PK2) 也 可 受 caspase 調 控, 而 切 斷 與 其 他 細 胞 的 聯 絡, 形 成 apoptotic bodies 等 構 造 上 的 改 變 (Kothakota et al., 1997; Wen et al., 1997; Rudel and Bokoch, 1997) 此 外,caspase 可 以 使 細 胞 內 的 蛋 白 質 失 去 活 性 或 使 其 調 節 失 常, 如 作 用 DNA 修 補 的 DNA-PKcs mrna splicing 的 U-70K, 以 及 DNA 複 製 的 replication factor C 等 都 可 受 caspase 作 用 (Cryns and Yuan, 1998; Rheaume et al., 1997) 此 外,caspase 也 會 誘 導 細 胞 表 現 訊 息 給 吞 噬 細 胞 (phagocytes) 而 使 細 胞 死 亡 (Wiegand et al., 2001) Permeability transition pore, 簡 稱 PTP, 由 在 粒 腺 體 外 膜 上 的 voltage-dependent anion channel(vdac) 以 及 在 內 膜 的 the adenine nucleotide translocator (ANT) 與 cyclophilin-d 以 及 其 他 的 蛋 白 所 組 成 在 in vitro 的 實 驗 中, 給 予 高 濃 度 鈣 離 子 和 低 ATP 狀 態 下,PTP 會 開 啟 容 許 分 子 量 (<1.5KD) 物 質 通 透 內 膜 (Massari and Azzone, 1972), 經 由 7

8 電 生 理 實 驗 可 將 PTP 的 開 啟 分 為 兩 類 模 式, 一 者 具 較 高 傳 導 性 (1 ns) 的 全 開 模 式, 為 較 無 選 擇 性 的 通 透 狀 態 ; 另 一 者 為 低 傳 導 性 的 單 一 通 道 (channel) 模 式, 具 較 高 的 物 質 選 擇 性 (Zoratti and Szabo, 1994; Broekemeier and Pfeiffer, 1995) PTP 在 開 啟 上 是 可 逆 的, 目 前 被 認 為 是 經 由 內 膜 的 膜 電 位 以 及 粒 線 體 基 質 ph 所 調 控 當 PTP 短 暫 開 啟 而 關 閉 後, 粒 線 體 的 膜 電 位 通 透 性 及 粒 線 體 體 積 都 會 再 恢 復, 而 PTP 開 閉 的 主 要 功 能 可 能 是 為 了 要 調 控 鈣 離 子 的 平 衡 (Bernardi and Petronilli, 1996), 但 目 前 對 於 其 機 制 所 知 不 多 然 而,PTP 過 度 開 啟 的 結 果, 會 使 得 氫 離 子 濃 度 梯 度 失 去 以 致 於 無 法 合 成 ATP 粒 線 體 的 鈣 釋 放 滲 透 性 的 粒 線 體 漲 大 以 及 ATPase 水 解 ATP 等 現 象, 最 後 造 成 粒 線 體 功 能 喪 失 而 造 成 許 多 病 理 情 況 產 生, 如 在 缺 血 再 灌 (ischemia/reperfusion) 的 情 況,PTP 的 開 啟 造 成 大 量 鈣 離 子 釋 放, 造 成 細 胞 死 亡 (Di and Bernardi, 1998) 另 外,Bcl-2 家 族 的 Bax 也 會 與 PTP 作 用, 協 助 開 啟 PTP, 釋 放 cytochrome C AIF 與 procaspase, 造 成 細 胞 死 亡 (Martinou and Green, 2001) 本 論 文 採 用 的 NG 細 胞 株 是 在 1970 年 代 初 期 被 建 立, 經 由 N18TG2( 源 自 mouse 神 經 母 細 胞 株 C-1300) 與 bromo-deoxyuridine-resistant 神 經 膠 細 胞 株 C6-BU-1( 源 自 rat 神 經 膠 細 胞 瘤 C6) 融 合 而 得 N18TG2 和 C6-BU-1 的 平 均 染 色 體 數 目 分 別 是 81 和 49, 而 NG 細 胞 的 染 色 體 平 均 有 160 個, 所 以 NG 細 胞 主 要 表 現 N18TG2 的 特 性 以 及 被 活 化 的 其 他 神 經 性 質 ( Hamprecht, 1977; Rosenberg et al., 1978; Nirenberg et al., 1983) 而 NG 的 細 胞 膜 具 可 激 性 (excitability ), 有 神 經 傳 導 劑 的 接 受 器 ( neurotransmitter receptor ), 以 及 豐 富 的 鴉 片 受 體 (opioid receptor), 也 可 合 成 乙 醯 膽 鹼 (acetylcholine)(nelson et al., 1976) 等 因 此,NG 已 經 被 廣 泛 使 用 當 作 神 經 細 胞 的 模 型 系 統 8

9 最 近 我 們 實 驗 室 研 究 發 現 在 NG 細 胞 中, 使 用 鈣 幫 浦 抑 制 劑 Thapsigargin(TG), 將 其 內 質 網 鈣 離 子 耗 空 後, 會 活 化 phospholipase A2 以 及 sphingosine kinase 前 者 產 物 arachidonic acid 會 促 使 突 觸 生 長, 而 後 者 的 產 物 shingosine 1-phosphate(S1P) 則 會 保 護 細 胞 使 死 亡 延 後 (chin et al., 2002) 由 實 驗 中 已 確 定 TG 造 成 內 質 網 鈣 耗 空, 而 使 細 胞 內 鈣 濃 度 上 升, 同 時 也 會 活 化 caspase 3 因 此, 接 下 來 本 論 文 想 探 討 的 是,TG 所 造 成 的 鈣 庫 耗 空, 活 化 caspase 3, 以 及 胞 內 鈣 離 子 濃 度 上 升, 何 者 為 造 成 細 胞 死 亡 的 主 要 條 件 或 起 始 條 件? 另 外, 也 採 用 豬 大 動 脈 平 滑 肌 細 胞, 來 研 究 此 死 亡 的 條 件 是 否 普 遍 存 在, 以 及 引 起 死 亡 的 機 制? 9

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