LTQ Series Getting Started Guide Version A [ZH]

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1 LTQ A

2 2012 Thermo Fisher Scientific Inc. 保留所有权利 Foundation Data Dependent Ion Max LTQ XL Velos Velos Pro Wideband Activation 和 ZoomScan 均为商标, 而 Accela LTQ LXQ Thermo Scientific 和 Xcalibur 均为 Thermo Fisher Scientific Inc. 在美国的注册商标 下列是在美国和其它国家的注册商标 : Microsoft 和 Windows 是 Microsoft Corporation 的注册商标 Teflon 是 E.I. du Pont de Nemours & Co 的注册商标 下列是在美国和可能在其它国家的注册商标 : Hamilton 是 Hamilton Company 的注册商标 Kimwipe 是 Kimberly-Clark Corporation 的商标 Tygon 是 Saint-Gobain Performance Plastics Corp 的注册商标 PEEK 是 Victrex plc 的注册商标 所有其他商标都是 Thermo Fisher Scientific Inc. 及其子公司的财产 Thermo Fisher Scientific Inc. 为购买产品的客户提供本文档, 供其在操作产品时参考 本文档受版权保护, 未经 Thermo Fisher Scientific Inc. 书面许可, 严禁复制本文档或本文档的任何部分 本文档的内容可能随时更改, 恕不另行通知 本文档中的所有技术信息仅供参考 本文档中的系统配置和规格将取代购买者先前获得的所有信息 Thermo Fisher Scientific Inc. 不保证本文档的完整性和准确性, 而且对于可能因使用本文档 ( 即使是在正确遵循本文档中的说明信息的情况下 ) 而导致的任何错误 疏忽 损害或损失, Thermo Fisher Scientific Inc. 概不负责 本文档不是 Thermo Fisher Scientific Inc. 和购买者之间的销售合同的一部分 任何情形下, 都不得使用本文档来取代或修改任何 销售条款与条件, 若两份文档信息发生冲突, 则以 销售条款与条件 中的信息为准 发行历史 : 修订版 A, 2012 年 5 月 软件版本 :Thermo LTQ Tune Plus 及以后版本 ;Microsoft Windows 7 Professional (32 bit) SP1 Thermo Foundation 2.0 及以后版本, Thermo Xcalibur 2.2 及以后版本 ;Windows XP Workstation SP3 Foundation SP2 或者更早版本, Xcalibur 2.1 SP1 或更早版本 仅供研究使用 不可用于诊断

3 合规性 Thermo Fisher Scientific 对其产品进行了全面测试和评估, 确保完全符合相应的国内和国际法规 在系统交付时, 系统符合所有下一部分或产品名称部分说明的下列 electromagnetic compatibility (EMC) ( 电磁兼容性 ) 和安全标准 对系统所做的改动可能违反一项或多项 EMC 及安全标准 对系统的改动包括更换零件或增加未经 Thermo Fisher Scientific 专门授权和认定的部件 选项, 或外围设备 为保证继续符合 EMC 和安全标准, 更换的零件和增加的部件 选项和外围设备必须从 Thermo Fisher Scientific 或其授权代理处订购 下列 Thermo Scientific 产品的合规性结果 : LXQ 质谱仪 (2005 年 2 月 ) LTQ XL 质谱仪 (2006 年 9 月 ) LTQ XL/ETD 系统 (2008 年 11 月 ) MALDI LTQ XL 系统 (2007 年 8 月 ) LTQ Velos 质谱仪 (2008 年 8 月 ) LTQ Velos/ETD 系统 (2008 年 11 月 ) Velos Pro 质谱仪 (2011 年 4 月 ) Velos Pro/ETD 系统 (2011 年 4 月 ) LXQ 质谱仪 (2005 年 2 月 ) EMC 指令 89/336/EEC, 如 92/31/EEC 和 93/68/EEC 中所修正 EMC 合规性已经通过 Underwriters Laboratories, Inc. 的评估 EN 55011:1998 EN :2002, A1:2002 EN :1995, A1:1998, A2:1998, A14:2000 EN :1995, A1:2001, A2:2001 EN :1995 EN :1995, A1:2001 EN :1997 EN :1996, A1:2001 EN :1995, A1:1998, A2:2001 EN :1994, A1:2001 FCC Class A, CFR 47 Part 15, Subpart B:2004 CISPR 11:1999, A1:1999, A2:2002 低压安全符合性 本设备符合低压指令 73/23/EEC 和协调标准 EN :2001

4 EMC 指令 89/336/EEC LTQ XL 质谱仪 (2006 年 9 月 ) EMC 合规性已通过 TÜV Rheinland of North America, Inc. 评估 EN 55011:1998, A1:1999, A2:2002 EN :2002 EN :1995, A1:1998, A2:1998, A14:2000 EN :1995, A1:2001, A2:2001 EN :1995, A1:2001 EN :1995, A1:2001 EN :1997, A1:1998, A2:2001, A3:2003 EN :2003 EN :2001 EN :2001 FCC Class A, CFR 47 Part 15:2005 CISPR 11:1999, A1:1999, A2:2002 低压安全符合性 本设备符合低压指令 73/23/EEC 和协调标准 EN :2001 EMC 指令 89/336/EEC LTQ XL/ETD 系统 (2008 年 11 月 ) EMC 合规性已通过 TÜV Rheinland of North America, Inc. 评估 EN :2006 EN :2004 EN :1995, A1:2001, A2:2005 EN :2005 EN :2006 EN :2007 EN :1995, A1:1999, A2:2001 EN :1993, A1:2001 EN :2006 EN :2004 FCC Class A, CFR 47 Part 15:2007 CISPR 11:1999, A1:1999, A2:2002 低压安全符合性 本设备符合低压指令 73/23/EEC 和协调标准 EN :2001

5 EMC 指令 2004/108/EC MALDI LTQ XL 系统 (2007 年 8 月 ) EMC 合规性已通过 TÜV Rheinland of North America, Inc. 评估 EN 55011:1998, A1:1999, A2:2002 EN :2002 EN :2000 EN :1995, A1:2000, A2:2001 EN :1995, A1:2001 EN :2001 EN :1998, A2:2001, A3:2003 EN :2003 EN :2001 EN :2001 FCC Class A, CFR 47 Part 15:2006 CISPR 11:1998, A1:1999, A2:2002 低压安全符合性 本设备符合低压指令 2006/95/EC 和协调标准 EN :2001 激光产品安全性 Thermo Fisher Scientific 的专有责任宣布了激光产品安全的规范性 本设备符合协调标准 IEC/EN /A2:2001 EMC 指令 2004/108/EEC LTQ Velos 质谱仪 (2008 年 8 月 ) EMC 合规性已通过 TÜV Rheinland of North America, Inc. 评估 EN 55011:2007, A2:2007 EN :2006 EN :2006 EN :2004 EN :1995, A1:2001, A2:2005 EN :2005 EN :2006 EN :2007 EN :1995, A1:1999, A2:2001 EN :2004 FCC Class A, CFR 47 Part 15:2007 低压安全符合性 本设备符合低压指令 2006/95/EEC 和协调标准 EN :2001

6 EMC 指令 2004/108/EEC LTQ Velos/ETD 系统 (2008 年 11 月 ) EMC 合规性已通过 TÜV Rheinland of North America, Inc. 评估 EN :2006 EN :2004 EN 55011:2007 EN :2005 EN :2006 EN :2007 EN :2005 EN :2004 EN :2001 FCC Part 15:2007 EN :2006 EMC 指令 2004/108/EEC Velos Pro 质谱仪 (2011 年 4 月 ) EMC 合规性已通过 TÜV Rheinland of North America, Inc. 评估 EN :2006 EN :2006 EN 55011:2007, A2:2007 EN :2004 CFR 47, FCC Part 15, Subpart B, Class A:2009 EN :2005 EN :2006 EN :2007 EN :1995, A1:2001, A2:2005 EN :2004 EN :1995, A1:1999, A2:2001 低压安全符合性 本设备符合低压指令 2006/95/EEC 和协调标准 EN :2001

7 EMC 指令 2004/108/EEC Velos Pro/ETD 系统 (2011 年 4 月 ) EMC 合规性已通过 TÜV Rheinland of North America, Inc. 评估 EN :2006 EN :2006 EN 55011:2007, A2:2007 EN :2004 CFR 47, FCC Part 15, Subpart B, Class A:2009 EN :2005 EN :2006 EN :2007 EN :1995, A1:2001, A2:2005 EN :1993, A1:2001 EN :1995, A1:1999, A2:2001 EN :2004 低压安全符合性 本设备符合低压指令 2006/95/EEC 和协调标准 EN :2001 符合 FCC 声明 本设备符合 FCC 法规第 15 章 操作必须符合以下两个条件 :(1) 设备不会造成有害干扰, 和 (2) 设备必接受收到的任何干扰, 包括可能引起误操作的干扰 警告使用本设备之前, 仔细阅读并了解本手册内有关本产品的安全使用和操作的各种防范措施注释 标记和符号 抬举和搬运 Thermo Scientific 仪器的注意事项 为了安全, 同时为了符合相关国际标准, 抬举和 / 或移动 Thermo Fisher Scientific 仪器时, 要求多人合作 本仪器很重 很庞大, 一个人无法独自安全搬运 正确使用 Thermo Scientific 仪器的注意事项 符合国际法规 : 本仪器的使用条件与 Thermo Fisher Scientific 指定的方式不同时, 可能消弱仪器提供的任何保护

8 电磁传输磁化率注意事项 仪器设计用于在受控电磁环境中工作 勿在仪器附近使用无线电射频发送器, 例如手机 有关生产地址的信息, 参阅仪器上的标签

9 WEEE Compliance This product is required to comply with the European Union s Waste Electrical & Electronic Equipment (WEEE) Directive 2002/96/EC. It is marked with the following symbol: Thermo Fisher Scientific has contracted with one or more recycling or disposal companies in each European Union (EU) Member State, and these companies should dispose of or recycle this product. See for further information on Thermo Fisher Scientific s compliance with these Directives and the recyclers in your country. WEEE Konformität Dieses Produkt muss die EU Waste Electrical & Electronic Equipment (WEEE) Richtlinie 2002/96/EC erfüllen.das Produkt ist durch folgendes Symbol gekennzeichnet: Thermo Fisher Scientific hat Vereinbarungen mit Verwertungs-/Entsorgungsfirmen in allen EU- Mitgliedsstaaten getroffen, damit dieses Produkt durch diese Firmen wiederverwertet oder entsorgt werden kann.mehr Information über die Einhaltung dieser Anweisungen durch Thermo Fisher Scientific, über die Verwerter, und weitere Hinweise, die nützlich sind, um die Produkte zu identifizieren, die unter diese RoHS Anweisung fallen, finden sie unter

10 Conformité DEEE Ce produit doit être conforme à la directive européenne (2002/96/EC) des Déchets d'equipements Electriques et Electroniques (DEEE).Il est marqué par le symbole suivant: Thermo Fisher Scientific s'est associé avec une ou plusieurs compagnies de recyclage dans chaque état membre de l union européenne et ce produit devrait être collecté ou recyclé par celles-ci.davantage d'informations sur la conformité de Thermo Fisher Scientific à ces directives, les recycleurs dans votre pays et les informations sur les produits Thermo Fisher Scientific qui peuvent aider la détection des substances sujettes à la directive RoHS sont disponibles sur WEEE 合规性 本产品需要符合欧盟的 Waste Electrical & Electronic Equipment (WEEE)( 废弃电气与电子设备 ) 指令 2002/96/EC 它以下列符号标示 : Thermo Fisher Scientific 与每个欧盟 (EU) 成员国的一家或更多家循环利用或处理公司签订合同, 这些公司应该处理或循环利用此产品 查看 以获取有关 Thermo Fisher Scientific 符合这些指令以及用户国家中的循环利用规定的更多信息

11 目录 相关文档 获得 Trap-HCD 许可证 获得新许可码 安装新许可码 安全和特殊注意事项 联系我们 LTQ 系列质谱仪特征 线性离子阱质量分析器 电荷态测定的 ZoomScan 和 UltraZoom 分析 Wideband Activation 可切换的离子源 用于复杂样品基质的可选的离子吹扫挡锥和离子吹扫气 鞘气 辅助气和吹扫气 电离技术 使用 ESI 或 H-ESI 使用 APCI 进样技术 直接进样 高流速进样 定量环进样 ( 流动注射分析 ) 液相色谱 缓冲溶液类型 LC 流速范围 调谐和校正质谱仪 离子极性模式 数据类型 扫描功率和扫描模式 扫描速率 扫描类型 全扫描 选择离子监测 选择反应监测 连续反应监测 Thermo Scientific LTQ 15

12 实验类型 General MS or MS n 实验 数据依赖实验 Ion Mapping 实验 Ion Tree 实验 质荷比范围 API 打开 Tune Plus 窗口 让质谱仪处于待机模式 API 离子源室的安装和拆卸 安装 API 离子源室 拆卸 API 离子源室 API 离子源室废液装置 ESI 或 HESI-II 探针安装和拆卸 安装 ESI 或 HESI-II 探针 拆卸 ESI 或 HESI-II 探针 APCI 探针安装和拆卸 安装 Corona 针和 APCI 探针 拆卸 APCI 探针和 Corona 针 调整 Ion Max API 离子源室中的探针位置 ESI 为调谐和校正设置注射泵 为调谐校正设置质谱仪 在 ESI 模式下测试质谱仪 在 ESI 模式下自动调谐质谱仪 保存 ESI 调谐方法 在普通质量数范围内自动校正 ESI 在 ESI 模式下设置高流速进样的入口 设置注射泵 高流速进样的管线连接 在 ESI 模式下设置质谱仪以利用被分析物进行调谐 自动调谐质谱仪 保存 ESI 调谐方法 Tune Plus ESI 设置以采集全扫描 MS/MS 数据 优化 MS/MS 实验的分离宽度 手动优化 MS/MS 实验的碰撞能量 自动优化 MS/MS 实验的碰撞能量 在 ESI 模式下设置流动注射分析的入口 在 SIM 扫描模式下采集 ESI 数据 APCI 在 APCI 模式下设置高流速进样的入口 在 APCI 模式下设置质谱仪以利用被分析物进行调谐 LTQ Thermo Scientific

13 自动调谐质谱仪 保存 APCI 调谐方法 Tune Plus APCI 在 APCI 模式下设置流动注射分析的入口 在 SIM 扫描模式下采集 APCI 数据 清洁日用品和化学品 冲洗样品传输线 样品管和 API 探针 移除和清洁注射器 清洁离子吹扫挡锥 喷雾锥和离子传输管 A LXQ LTQ XL 为 ESI 模式制备普通质量数范围校正溶液 咖啡因储备溶液 制备 MRFA 储备溶液 制备 Ultramark 1621 储备溶液 为 ESI 模式制备普通质量数范围校正溶液 制备 ESI 和 APCI 模式下的利血平调谐和样品溶液 制备高质量范围校正溶液 B Velos Pro 为 ESI 模式制备普通质量数范围校正溶液 咖啡因储备溶液 制备 MRFA 储备溶液 制备 Ultramark 1621 储备溶液 制备 N- 丁胺储备溶液 为 ESI 模式制备普通质量数范围校正溶液 制备 ESI 和 APCI 模式下的利血平调谐和样品溶液 制备高质量范围校正溶液 C 利用普通质量数范围校正溶液确认高质量数范围的初步校正情况 利用普通质量数范围校正溶液校正高质量数范围 执行两点手动初步校正 使用普通质量数范围校正溶液的高质量数范围模式 利用高质量数范围校正溶液校正高质量数范围 在校正之后清洁系统 Thermo Scientific LTQ 17

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15 图 图 1. 使用注射泵直接进样 图 2. 在 ESI 模式下采用高流速进样 图 3. 在 APCI 模式下采用定量环进样 图 4. 在 ESI 模式下采用自动进样器直接进样 图 5. Thermo Xcalibur Instrument Setup 窗口显示 New Method 页面 ( 带 ETD 的 Velos Pro 实验类型 ) 图 6. MS Detector Setup 页面上的 General MS 实验模板 图 7. MS Detector Setup 页面上的 Data Dependent Triple-Play 实验模板 图 8. Total Ion Map 页面上的 Ion Mapping 实验模板 图 9. Data Dependent Ion Tree 页面上的 Ion Tree 实验模板 图 10. Velos Pro 的 Tune Plus 窗口 图 11. Ion Max-S API 离子源室 ( 后视图 ) 图 12. 显示导向针的 API 离子源安装组件 图 13. Ion Max-S API 离子源室显示锁定杆和废液管 ( 前视图 ) 图 14. API 离子源废液组件和废液容器 图 15. Ion Max API 离子源室 ( 左视图 ) 图 16. ESI 探针显示导向针和锁定环 图 17. HESI-II 导针探针显示导向针和锁定环 图 18. ESI 探针显示导向针插入互锁块插槽 图 19. HESI-II 探针显示导向针插入互锁块插槽 图 20. 安装在 Ion Max API 离子源室中的 ESI 探针 图 21. 安装在 Ion Max API 离子源室中的 HESI-II 探针 图 22. HESI-II 探针连接 图 23. 从接地两通断开样品传输线 图 24. 从 ESI 探针拆卸 8 kv 电缆接头 图 25. 从 HESI-II 探针拆卸 8 kv 电缆接头 ( 放大图 ) 图 26. HESI-II 探针显示断开的气化器和 8 kv 电缆 ( 顶视图 ) 图 27. 具有 HESI-II 探针的 API 离子源室 ( 左视图 ) 图 28. 具有 ESI 探针的 API 离子源室 ( 左视图 ) 图 29. Corona 针 图 30. Ion Max API 离子源室 图 31. 接触锁定环的 APCI 探针导向针 图 32. APCI 探针导向针插入互锁块插槽 图 33. 安装在 Ion Max API 离子源室中的 APCI 探针 图 34. APCI 探针连接 图 35. Corona 针 图 36. Ion Max API 离子源室显示探针调整控制 图 37. 注射器的管线连接 图 38. LC 两通和接地两通的管线连接 图 39. Define Scan 对话框 图 40. Syringe Pump 对话框 图 41. LTQ XL 的校正溶液质谱 Thermo Scientific LTQ 19

16 图 42. Velos Pro 的校正溶液质谱 ( 更低范围 ) 图 43. Velos Pro 的校正溶液质谱 ( 更高范围 ) 图 44. Tune 对话框显示 Automatic ( 自动 ) 页面 图 45. Tune Plus 窗口和 Tune 对话框将 Velos Pro 设置为在 m/z 进行调谐 图 46. Calibrate 对话框显示 Automatic 页面 图 47. LTQ XL 的 Tune Plus 窗口和 Calibrate 对话框 图 48. LC/ESI/MS 进样到 LC 泵的溶剂流路的管线设置 图 49. 注射器的管线连接 图 50. LC 两通和三通之间的管线连接 图 51. 六端口转向 / 进样阀连接 图 52. LC 三通和转向 / 进样阀之间的连接 图 53. LC 三通和接地两通之间的连接 (ESI 探针 ) 图 54. 高流速进样模式下的 ESI/MS 进样管路设置 图 55. 将接地两通连接到 ESI 探针的样品入口 图 56. 在 ESI 模式下采集利血平 SIM 数据的 Define Scan 对话框 图 57. Tune 对话框显示 Automatic ( 自动 ) 页面 图 58. Divert/Inject Valve 对话框 图 59. 用于 ESI 模式下 Velos Pro 自动调谐的 Tune Plus 窗口和 Tune 对话框 图 60. 采集利血平全扫描数据的 Define Scan 对话框 图 61. Syringe Pump 对话框 图 62. Define Scan 对话框 ( 全扫描数据 ) 图 63. Tune 对话框显示 Collision Energy 页面 图 64. Tune Plus 窗口和 Tune 对话框显示 Collision Energy 页面 图 65. Accept Optimized Value 对话框 图 66. 转向 / 进样阀, 用于定量环进样 图 67. 从 LC 到 ESI 探针的溶剂流路中定量环进样的管路图 图 68. Define Scan 对话框 ( 利血平 SIM 扫描数据 ) 图 69. Acquire Data 对话框 图 70. Qual Browser 窗口的 ESI SIM 色谱图和质谱图 图 71. 高流速进样模式下的 APCI/MS 进样管路设置 图 72. 注射器的管线连接 图 73. 对于 LC 三通的 APCI/MS 管线连接 图 74. Define Scan 对话框 (APCI 模式下的利血平 SIM 数据 ) 图 75. Tune 对话框显示 Automatic ( 自动 ) 页面 图 76. Divert/Inject Valve 对话框 图 77. 用于 APCI 模式下 Velos Pro 自动调谐的 Tune Plus 窗口和 Tune 对话框 图 78. 转向 / 进样阀, 用于定量环进样 图 79. APCI 探针 图 80. Define Scan 对话框 ( 利血平 SIM 扫描数据 ) 图 81. Acquire Data 对话框 图 82. Qual Browser 窗口的 APCI SIM 色谱图和质谱图 图 83. APCI Source 对话框 图 84. ESI Source 对话框 图 85. LXQ 和 LTQ XL 的离子源接口组件 ( 剖面图 ) 图 86. 离子传输管拆卸工具 图 87. API 锥体密封圈内的吹扫气供应端口 图 88. Define Scan 对话框 图 89. 普通质量数范围质谱的校正溶液 (LTQ XL 初步校正 ) LTQ Thermo Scientific

17 图 90. 普通质量数范围质谱的校正溶液 (Velos Pro, LTQ XL 初步校正 ) 图 91. Calibrate 对话框显示 High Mass Range Calibration ( 高质量数范围校正 ) 页面 图 92. Calibrate 对话框显示 Calmix 校正混合物 ( 只适用于 LXQ 和 LTQ XL) 图 93. Define Scan 对话框 ( 默认 ESI 设置 ) 图 94. Diagnostics 对话框 图 95. Diagnostics 对话框显示质量数校正页面 (Velos Pro) 图 96. Calibrate 对话框显示 High Mass Range Calibration 页面 Thermo Scientific LTQ 21

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19 前言 LTQ Series Getting Started Guide (LTQ 系列入门手册 ) 说明如何设置 校正和调谐下列 LTQ 系列质谱仪 (MSs): LXQ, 单段二维线性离子阱质谱仪 LTQ XL, 三段二维线性离子阱质谱仪 LTQ Velos, 双室二维线性离子阱质谱仪 Velos Pro, 双室二维线性离子阱质谱仪 除非其他注意事项 : 对于 LTQ 质谱仪, 遵守 LTQ XL 信息 对于 LTQ Velos 质谱仪, 遵守 Velos Pro 信息 相关文档 获得 Trap-HCD 许可证 安全和特殊注意事项 联系我们 Help 点击下面的链接完成有关本文档的简短调查 在此先对您的帮助表示感谢 Thermo Scientific LTQ 23

20 除了本手册, Thermo Fisher Scientific 在为 LTQ 系列质谱仪提供表 1 列出的文档 这些 PDF 文件可以从数据系统计算机中获得 1. LTQ LXQ LTQ XL Velos Pro LTQ Series Hardware Manual (LTQ 系列硬件手册 ) LXQ LTQ XL Velos Pro LTQ XL/ETD 系统 Velos Pro/ETD 系统 MALDI LTQ XL 系统 ETD 模块 MALDI 离子源 LTQ Series Preinstallation Requirements Guide (LTQ 系列预安装要求手册 ) LTQ Series Getting Connected Guide (LTQ 系列建立连接手册 ) ETD Module Getting Started Guide (ETD 模块入门手册 ) ETD Module Hardware Manual (ETD 模块硬件手册 ) MALDI Source Getting Started Guide (MALDI 离子源入门手册 ) MALDI Source Hardware Manual (MALDI 离子源硬件手册 ) 若要获得质谱仪手册, 可从 Microsoft Windows 任务栏选择 Start ( 开始 ) > All Programs ( 所有程序 ) > Thermo Instruments (Thermo 仪器 ) > Manuals ( 手册 ) > model ( 模块 ), 其中 model 是特殊的模块, 然后点击要查看的 PDF 文件 从 Thermo Xcalibur 数据系统版本 或者更早版本 (Microsoft Windows XP 操作系统 ), 选择 Start > All Programs > Xcalibur > Manuals > LTQ > model 软件也提供 Help ( 帮助 ) 若要进入 Help, 从菜单栏选择 Help Trap-HCD Ion trap higher energy collision-induced dissociation ( 离子阱更高能量碰撞诱导解离, Trap-HCD) 裂解是 Velos Pro 质谱仪的一个可选特征 如果购买此选项, 必须从 Thermo Fisher Scientific 获得一个新许可证, 在使用这个特征之前将其安装到系统内 Velos Pro 质谱仪包括一个 90 天的 Trap-HCD 许可证试用版 如果没有购买这个许可证, 则出现提示对话框, 通知用户试用期即将失效 24 LTQ Thermo Scientific

21 可以通过邮件或者传真要求新的许可码 ( 参阅第 28 页 ) 用户只需将邮件说明发送到特定的 Thermo Fisher Scientific 电子邮件地址 Trap-HCD 1. 选择 Start ( 开始 ) > Programs ( 程序 ) > Thermo Foundation > Instrument Configuration ( 仪器配置 ) 打开 Thermo Foundation Instrument Configuration 窗口 2. 在 Available Devices ( 可用设备 ) 下面, 选择 Velos Pro MS (Velos Pro 质谱仪 ) 图标并单击 Add ( 添加 ) 3. 在 Configured Devices ( 已配置设备 ) 下面, 选择 Velos Pro MS 图标并单击 Configure ( 配置 ) 打开 Velos Pro Configuration (Velos Pro 配置 ) 对话框 4. 选择许可证并单击 Change License ( 修改许可证 ) 打开 LTQ License (LTQ 许可证 ) 对话框 5. 高亮显示 License ( 许可证 ) 框内的许可证码 6. 要将许可证码复制到 Windows 剪贴板, 按下 CTRL+C 7. 单击 Close ( 关闭 ) 不要单击 LTQ License 对话框内的 Reset ( 重置 ) 如果不小心点击了 Reset, 必须重新打开 LTQ License 对话框, 为步骤 8 复制一个新的许可证码 Thermo Scientific LTQ 25

22 8. 发送电邮讯息至 在 Subject ( 主题 ) 行键入 License Request ( 许可证请求 ) 在电邮讯息内容中, 贴上该许可证码, 然后键入您的姓名 公司名称和电话号码 如果购买了 Trap-HCD 选项, 在仪器随附的 License Trap-HCD for Velos Pro (Velos Pro 的 Trap-HCD 许可证 ) 卡上找到条形码 在电子邮件信息的正文中输入条形码下方的产品码 如果没有随仪器一起购买 Trap-HCD 选项, 联系本地的 Thermo Fisher Scientific 技术销售代表 当 Thermo Fisher Scientific 客户支持发送新的许可证给您时, 参阅 安装新许可码 接到新的许可码后, 遵守下列程序 HCD 1. 打开 LTQ License 对话框 ( 参阅第 25 页的步骤 1 到步骤 4) 2. 在 License 框内, 粘贴从电子邮件中复制的新许可码, 然后单击 Set ( 设置 ) 3. 当下列信息出现时单击 OK ( 确定 ): The new license number has been set. ( 新的许可码已经设置 ) 4. 在 Velos Pro Configuration 对话框内, 证实 Ion Trap HCD (Full) ( 离子阱 HCD, 完整 ) 特征的添加, 单击 OK 5. 重启数据系统, 然后重启 Velos Pro 质谱仪 26 LTQ Thermo Scientific

23 确保遵循本手册中发布的事先声明 在方框内出现的安全和其他特别注意事项 安全和其他特别注意事项包括下列内容 强调对人体 财产或环境可能会造成危害 每个 警告 事项都会标有适当的 警告 符号 强调防止软件损害 数据丢失或无效测试结果必需的信息 ; 或可能包含获得系统最佳性能的重要信息 强调普遍关注的信息 强调能够帮助简化工作的信息 表 2 列出 LTQ Series Getting Started Guide 中其他特别需要注意事项的符号 2. 化学品 : 仪器中可能出现危险化学品 在处理致癌物质 腐蚀性 刺激性 诱导有机体突变的物质 或者毒性化学产品时, 务必戴上手套 只能使用认可的容器和程序来处理废油 触电 : 仪器中存在触电危险 处理时须小心 对眼睛的危害 : 飞溅的化学产品或空传颗粒物可能会导致眼睛损害 处理化学产品或对仪器进行维修服务时, 务必戴上防护眼镜 热表面 : 对仪器进行接触或者维修前, 让变热的组件先冷却 锐利物件 : 仪器中存在锐利物件 处理时须小心 Thermo Scientific LTQ 27

24 可以通过多种方式联系 Thermo Fisher Scientific, 获取所需信息 电话 传真 电子邮件 知识库 若要下载更新和配套软件, 访问 :mssupport.thermo.com 电话 传真 电子邮件 网站 转至 转至 mssupport.thermo.com, 同意相关条款和条件, 然后单击窗口左侧空白处的 Customer Manuals ( 用户手册 ) Help 在 中在线填写问卷调查 向技术出版编辑发送电子邮件, 邮箱地址 techpubs-lcms@thermofisher.com 28 LTQ Thermo Scientific

25 1 本章提供有关 LTQ 系列质谱仪的一般信息 对于其他信息, 例如日常操作 维护和系统启动以及关闭的程序, 参阅 LTQ Series Hardware Manual (LTQ 系列硬件手册 ) 除非其他注意事项 : 对于 LTQ 质谱仪, 遵守 LTQ XL 信息 对于 LTQ Velos 质谱仪, 遵守 Velos Pro 信息 第 149 页的 术语表 定义了本手册中使用的一些术语 LTQ 系列质谱仪特征 鞘气 辅助气和吹扫气 电离技术 进样技术 缓冲溶液类型 LC 流速范围 调谐和校正质谱仪 离子极性模式 数据类型 扫描功率和扫描模式 扫描速率 扫描类型 实验类型 质荷比范围 Thermo Scientific LTQ 1

26 1 LTQ LTQ LTQ 系列质谱仪具有下列特征 : 线性离子阱质量分析器 电荷态测定的 ZoomScan 和 UltraZoom 分析 Wideband Activation 可切换的离子源 用于复杂样品基质的可选的离子吹扫挡锥和离子吹扫气 所有 high performance liquid chromatography ( 高效液相色谱, HPLC) 系统可以根据保留时间提供色谱分离和化合物检测 如果只有保留时间, 这并无法真正识别某个化合物, 因为在相同的实验条件下, 许多化合物具有相同的保留时间 另外, 样品中的其他化合物可以和目标物一起洗脱 共洗脱的化合物导致定量错误 这种属性使 LTQ 系列质谱仪和其他与 LC 系统连用的检测器区分开, 例如 UV-Vis 检测器或者单级 mass analyzer ( 质量分析器 ) 质谱仪, 它具有高水平的分析特异性 除了 mass-to-charge ratio( 质荷比,m/z),LTQ 系列质谱仪可以提供多级 mass analysis ( 质量分析 ) 每级质量分析为明确的化合物识别增加了一个尺度的特异性 LTQ 系列质谱仪提供下列级数的质量分析 : 单级质量分析 ( 提供分子质量信息 ) 两级质量分析, MS/MS ( 提供结构信息 ) 多级质量分析, MS n ( 提供结构信息 ) 单级质量分析根据分子质量信息识别待测物 一般 atmospheric pressure ionization ( 大气压电离, API) 生成提供分子质量信息的质谱图 两级质量分析可以更加可靠地识别化合物 当母离子进行另一级激发时, MS/MS 分析监测 parent ion ( 母离子 ) 如何裂解 有两类 MS/MS 分析 : 全 scan ( 扫描 ) MS/MS 监测来自某一特定母离子所有 product ion ( 子离子 ) 的生成 选择反应监测 (SRM) MS/MS 分析监测特定的反应路径, 即某个特定母离子生成某个特定子离子 使用任意类型的 MS/MS 分析, 可以定量分析复杂基质, 例如植物或者动物组织 血浆 尿液 地下水或土壤中的目标物 由于 MS/MS 测量的特异性, 以及消除初级质量选择阶段的干扰的能力, LTQ 系列质谱仪很容易完成目标化合物的 quantitative analysis ( 定量分析 ) 多级质量分析提供的独特能力, 可以获得结构信息, 这些信息对于代谢物 天然产物和糖的结构解析非常有用 LTQ 系列质谱仪的 MS n 技术支持逐步的裂解方式, 使得 MS n 质谱图的解析相对直观 LTQ 系列质谱仪具有多个高级特征, 使其 MS n 功能对于 qualitative analysis ( 定性分析 ) 极其有效 有关详细信息, 参阅第 18 页的 实验类型 2 LTQ Thermo Scientific

27 1 ZoomScan UltraZoom Wideband Activation ZoomScan scan type (ZoomScan 扫描类型 ) 和 UltraZoom 扫描类型分析提供有关一个或多个离子的电荷态信息 通过可提供更高分辨率的更低扫描速率采集 ZoomScan 数据 这个水平的分辨率可以明确测定某个离子的电荷态 UltraZoom 比 ZoomScan 类型提供更高的分辨率, 因此可以测定更高的电荷态 有关详细信息, 参阅第 15 页的 扫描速率 LTQ 系列质谱仪可使用 Wideband Activation ( 宽带激活 ) 选项在一个固定质量数范围 20 Da 内的 MS/MS 裂解过程中将 collision energy ( 碰撞能量 ) 应用到离子 利用这个选项可以将碰撞能量应用到母离子和由于水 (18 Da) 和氨 (17 Da) 丢失而生成的子离子, 或者由于小于 20 Da 碎片丢失形成的子离子 对于采取 MS 3 分析的增强结构信息, 为定性 MS/MS 分析选择 Wideband Activation ( 宽带激活 ) 选项 由于 Wideband Activation 导致裂解效率一定程度的降低, 必须增加碰撞能量 有关示例步骤, 参阅第 88 页的 自动优化 MS/MS 实验的碰撞能量 可以为 LTQ 系列质谱仪配置一个标准 electrospray ionization ( 电喷雾电离, ESI) 探针 ( 参阅第 36 页的图 16), heated-electrospray ionization ( 加热电喷雾电离, H-ESI) 探针 ( 参阅第 37 页的图 17), 或者 atmospheric pressure chemical ionization ( 大气压化学电离, APCI) 探针 ( 参阅第 49 页的图 31) 通过使用其他离子源套件, 可以在 atmospheric pressure photoionization ( 大气压光电离, APPI) 模式和 nanospray ionization ( 纳喷雾电离, NSI) 模式下操作质谱仪 有关为待测物选择离子源的信息, 参阅第 4 页的 电离技术 有关安装 ESI 或 APCI 探针的说明, 参阅第 2 章, 设置 API 离子源 ion sweep cone ( 离子吹扫挡锥 ) 是一个遮盖离子传输管的金属锥盖 离子吹扫挡锥可沿着 API ion transfer tube (API 离子传输管 ) 入口引导吹扫气体 这有助于保护离子传输管的入口免受污染 结果是分析样品的数量会有显著提高, 不损失信号强度 此外, 保持离子传输管入口的清洁, 以减少离子源的维护需求 有关安装离子吹扫挡锥的说明, 参阅 LTQ Series Hardware Manual LTQ 系列质谱仪使用氮气作为鞘气 辅助气和吹扫气 ESI 和 APCI 探针具有鞘气 (S) 和辅助气 (A) 的入口 可选的离子吹扫挡锥具有吹扫气的入口 NSI 探针不使用去溶剂气体 Thermo Scientific LTQ 3

28 1 这些气体的说明如下 : 鞘气 当溶剂从探针喷嘴出来时, 帮助样品溶液雾化为细雾的内同轴气体 辅助气 通过聚焦蒸汽, 降低离子源的湿度, 帮助鞘气雾化以及样品溶液蒸发的外同轴气体 吹扫气 从可选的离子吹扫挡锥后面流出的离轴气体 当分析复杂基质, 例如血浆或者非挥发性盐缓冲溶液时, 安装离子吹扫挡锥提高耐用性 对于低溶剂流速的应用不要求使用辅助气 对于高溶剂流速的应用, 首先优化鞘气流速, 然后是辅助气流速, 最后是吹扫气流速 ( 如果有 ) 第 11 页的表 3 和第 11 页的表 4 列出操作参数的参考指南 一般, 对于极性化合物 ( 如胺类 肽类和蛋白质 ) 最好使用 ESI 或者加热 ESI (H-ESI) 电离模式 对于非极性化合物 ( 例如类固醇 ) 最好使用 APCI 电离模式 ESI H-ESI ESI 是一种软电离技术 ESI 离子源将溶液中的离子转换成气相 许多先前不适合于质谱分析的样品 ( 例如热稳定性差的化合物或高分子量的化合物 ) 可以通过 ESI 进行分析 可以使用 ESI 分析任何作为溶液中离子的极性化合物, 包括加合离子 此类化合物包括生物聚合物 ( 例如蛋白质 肽类 糖蛋白和核苷酸 ), 药物及其代谢物, 以及工业聚合物 例如, 可以在含乙酸铵的溶液中分析出聚乙二醇, 因为溶液中的 NH 4 + 离子与聚合物中的氧原子之间能形成加合物 采用 ESI 电离模式, 如果存在多电荷, LTQ 系列质谱仪能够分析的分子质量范围超过 Da ESI 离子源可以生成多电荷离子, 这取决于待测物和溶剂的结构 例如, 蛋白质或肽类的质谱一般包括多电荷待测离子 还可以采用数学手段处理质谱图, 测定样品的分子质量 ESI 既可以在正离子化模式下工作, 也可以在负离子化模式下工作 溶液中的离子极性决定离子极性模式 : 酸性分子在高 ph 溶液中形成负离子, 碱性分子在低 ph 溶液中形成正离子 ESI 喷针可以加载正电荷或者负电荷 当加载正电荷时, ESI 喷针生成正离子 当加载负电荷时, ESI 喷针生成负离子 在 μl/min 的范围内改变进入质谱仪的流速 参阅第 11 页的表 3 在 ESI 模式下, 由于缓冲溶液类型和缓冲溶液浓度对于灵敏度具有明显的影响, 必须正确选择这些变量 大液滴具有高表面张力 低挥发性 低表面电荷 强离子溶剂化作用, 以及高传导率均对 ESI 过程产生负面影响 相反, ESI 适合具有低表面张力 高挥发性 高表面电荷 弱离子溶剂化作用, 以及低传导率的小液滴 4 LTQ Thermo Scientific

29 1 为了获得良好的 ESI 结果, 遵守下列原则 : 除去溶剂系统中的非挥发性盐类和缓冲溶液 例如, 避免使用包含磷酸盐 钾 或者钠的盐 使用醋酸盐或者铵类 不要使用强无机酸和碱 它们会损害仪器 使用有机相 / 水相溶剂系统和挥发性酸和碱 尽量避免使用 100% 的水相溶液 如有可能, 优化目标分析物溶剂体系的 ph 值 例如, 如果分析物含有伯胺或仲胺, 那么流动相应该为弱酸性 (ph 2-5) APCI 与 ESI 类似, APCI 是一种气相软电离技术 因此, 被分析物和溶剂蒸气的酸碱度在 APCI 分析过程中起着至关重要的作用 APCI 可以给出稍具挥发性的 中等极性化合物的分子量信息 APCI 一般用于分析分子质量约 2000 Da 的小分子 APCI 既可以在正离子化模式下工作, 也可以在负离子化模式下工作 对于大多数分子, 正离子模式生成更高的离子电流 这对于含一个或多个碱性氮 ( 或者其他碱性 ) 原子的分子尤其如此 一般生成强负离子, 具有酸性点的分子, 例如羧酸和酸醇, 不适用于这个规则 一般, APCI 生成的负离子少于正离子 但是, 负离子极性模式具有更好的特异性, 因为相比正离子模式, 它产生更低的化学噪声 因此, signal-to-noise ratio ( 信噪比, S/N) 在负离子模式下更出色 在 APCI 模式下从 LC 进入 LTQ 系列质谱仪的溶剂流速通常很高 (0.2 2 ml/min) 参阅第 11 页的表 4 APCI 是一种非常耐用的电离技术 它不会受到大多数变量的细微变化的影响, 比如缓冲溶液类型或者缓冲溶液强度等 LTQ 系列质谱仪具有一个 divert/inject valve ( 转向 / 进样阀 ) 和一个 syringe pump ( 注射泵 ) 下列技术适用于 API source (API 离子源 ) 内的进样 : 直接进样 高流速进样 定量环进样 ( 流动注射分析 ) 液相色谱 Thermo Scientific LTQ 5

30 1 直接进样技术使用注射泵将样品直接注入离子源, 如图 1 使用这种技术为 ESI 模式下的自动调谐校正注入校正溶液 还可以采用这个技术在 ESI 模式下以稳定的速率引入纯分析物溶液, 并利用注射泵在低流速下进行实验 1. ESI 6 LTQ Thermo Scientific

31 1 高流速进样技术使用 LC 三通将溶剂流路从注射泵引入 LC pump (LC 泵 ) 产生的溶剂流路 合并的溶剂流路通过转向 / 进样阀进入离子源 采用这种技术在 ESI 或者 APCI 模式下对某个被分析物进行调谐 ( 为这个被分析物创建方法 ), 使用 LC/MS 实验中的相同流速和流动相组分 使用高流速进样方法以及 LC 系统在较高流速下执行实验 高流速进样方法使得相对大量的溶剂进入质谱仪, 这意味着可能需要更加频繁地清洁 API 喷雾锥 图 2 显示 ESI 模式下高流速进样的入口连接 当转向 / 进样阀位于 Load ( 上样 ) 位置, 来自 LC 泵的溶剂流路通过端口 2 进入阀门, 然后通过连接离子源的端口 3 流出阀门 当转向 / 进样阀位于 Inject ( 进样 ) 位置, 来自 LC 泵的溶剂流路通过端口 2 进入阀门, 然后通过连接废液的端口 1 流出阀门 2. ESI 3 LC 2 1 ESI LC 有关设置入口执行高流速进样的说明, 参阅第 72 页的 在 ESI 模式下设置高流速进样的入口 Thermo Scientific LTQ 7

32 1 当样品量有限时采用定量环进样技术 为了使用这个技术, 要将 sample loop ( 样品定量环 ) 进样口接头 以及 LC 泵连接到转向 / 进样阀, 然后将转向 / 进样阀连接到离子源 ( 图 3) 当阀处于 Load 位置, 使用注射器通过进样口接头将样品载入样品定量环, 然后将进样阀的位置切换到 Inject 位置 将阀门切换到 Inject 位置, 使来自 LC 泵的溶剂流路将样品反冲出定量环, 然后进入离子源 在 ESI 或者 APCI 模式下采用这个技术 3. APCI APCI Load Detector Inject Waste 8 LTQ Thermo Scientific

33 1 通过使用液相色谱 (LC) 技术执行定量环进样, 在离子源的样品入口和转向 / 进样阀的端口 3 之间安装 LC 色谱柱, 或者将带有 autosampler ( 自动进样器 ) 的 LC 系统连接到 LTQ 系列质谱仪 4. 若要自动进样一系列样品, 将具有自动进样器的 LC 系统连接到转向 / 进样阀, 并将转向 / 进样阀连接到离子源, 如图 4 所示 使用自动进样器将样品溶液注入 LC 泵的流路 在典型的 LC/MS 试验中, 在混合物被导入离子源之前, 使溶剂流路通过 LC 色谱柱使混合物分离 在 ESI 或者 APCI 模式下采用这个技术 ESI 3 LC 2 1 Thermo Scientific LTQ 9

34 1 许多 LC 应用使用非挥发性缓冲溶液, 如磷酸盐或硼酸盐缓冲溶液 避免使用非挥发性缓冲溶液, 因为它们会导致离子源内的盐沉积, 例如离子传输管和电离探针的喷嘴 使用非挥发性缓冲溶液, 而不清洁离子源去除盐沉积, 可能损害喷雾的完整性 对于 LC/MS 实验, 采用下列挥发性缓冲溶液代替非挥发性缓冲溶液 : 乙酸 醋酸铵 甲酸铵 氢氧化铵 三乙胺 (TEA) 法律规定化学品生产商和供应商必须以化学品安全说明书 (MSDS) 的形式为客户提供最新的健康和安全信息 MSDS 必须对实验室人员开放, 可供他们随时检查 MSDS 说明了化学品并总结了特定化合物的有毒有害信息 MSDS 也提供了正确处理化合物的方法 发生意外时的救护方法和溅出或泄漏时的补救措施 阅读所使用的每一种化学品的 MSDS 根据标准安全程序存储和处理所有化学品 当使用溶液或腐蚀性物质时, 务必戴上保护手套和防护眼镜 还要根据 MSDS 的指导容纳废液 使用正确的通风以及处理所有实验室试剂 LC ESI 探针可以使 μl/min 的液流 1 离子挥发 这个流速范围适用于各种分离技术 :CE CEC 分析 LC 毛细管 LC 以及微孔 LC 2 APCI 探针可以使 μl/min 的液流离子挥发 这个流速范围适用于分离技术 : 分析 LC 微孔 LC 以及半制备 LC 当改变进入质谱仪的溶剂流速时, 调整下列参数 : 对于 ESI 模式, 调整离子传输管温度和鞘气 辅助气和吹扫气的流速 对于 APCI 模式, 调整离子传输管和气化室温度, 并调整鞘气 辅助气和吹扫气的流速 对于这两种电离模式, 当提高进入质谱仪的液体流速时, 增加离子传输管的温度和气体流速 表 3 列出在 ESI 模式以及不同 LC 溶剂流速下, 离子传输管温度和气体流速的使用原则 1 ESI 探针可以使 1 μl/min 的液流离子挥发 但是, 低于 5 μl/min 的液流需要更加小心, 特别是 ESI 探针内熔融石英样品管的位置 2 对于 APCI 探针, 低于 200 μl/min 的液流需要更加小心地维持稳定的喷雾 10 LTQ Thermo Scientific

35 1 3. 表 4 列出在 APCI 模式以及不同 LC 溶剂流速下, 离子传输管温度 气化室温度和气体流速的使用原则 LC/ESI/MS a LC 直接进样或 LC, < 10 μl/min LC, μl/min LC, μl/min LC, ml/min 毛细管 ( mm) 1 mm ID ( 微孔色谱柱 ) 2 3 mm ID ( 窄孔色谱柱 ) 4.6 mm ID ( 标准色谱柱 ) C ( F) C ( F) C ( F) C ( F) a 根据第 3 页的 鞘气 辅助气和吹扫气 的建议选择辅助气 吹扫气或者两者 / 不需要一般为 5-15 个单位 需要 一般为 个单位 需要 一般为 个单位 不需要 一般为 0 个单位 不需要, 但是某些情况可能有帮助 一般为 0-20 个单位 不需要, 但是通常有助于减少溶剂背景离子 一般为 0-20 个单位 需要需要一般为 个单位一般为 个单位 4. LC/APCI/MS a LC LC, μl/min LXQ: C LTQ XL 和 Velos Pro: C LXQ: C LTQ XL 和 Velos Pro: C 需要 个单位 5-20 个单位 0-5 个单位 a 根据第 3 页的 鞘气 辅助气和吹扫气 的建议选择辅助气 吹扫气或者两者 校正 LTQ 系列质谱仪确保其质量精度 分辨率 隔离效率 以及裂解效率 在校正之前, 利用 ESI 校正溶液调谐质谱仪, 优化离子传输并确保长期性能 Thermo Fisher Scientific 推荐每周检查一次校正, 并根据需要进行校正 校正参数是那些与实验类型无关的仪器参数 自动和半自动校正 ( 包括检查校正 ) 需要在校正时以稳定流速将校正溶液引入质谱仪 在 ESI/MS 模式下将溶液从注射泵直接引入质谱仪 调谐参数是那些与实验类型有关的仪器参数 为了获得目标分析物的最高灵敏度或者最低检测限, 利用目标分析物调谐质谱仪 另外, 合适的调谐可以确保离子光学组件上的电压梯度设置适用于一系列条件, 提高长期性能 Thermo Scientific LTQ 11

36 1 所有 LTQ 系列仪器装运时配备了与特定仪器型号和离子源类型 ( 例如 ESI APCI 或者 NSI) 匹配的默认调谐值 在大多数情况下, 这些调谐值足够获得高灵敏度和长期性能 可能可以通过目标分析物的调谐扩展某个特定被分析物的性能 通过使用在 LC/MS 实验的色谱方法中相同的溶剂组分和流速, 为被分析物创建调谐方法 调谐待测物质谱图中某个特殊峰, 或者选择校正溶液中与目标离子的质荷比最接近的一个离子 如果修改调谐参数, 而没有在切换到另一个离子源探针之前保存它们, 则这些修改都丢失了 另外, 当从一个离子源探针切换到另一个时, Tune Plus 应用程序自动为新安装的离子源探针载入最近保存的调谐值, 并覆盖之前安装的探针的调谐值 自动和半自动调谐程序 ( 包括优化碰撞能量 ) 需要以下列两种方式之一, 以稳定流速将被分析物引入质谱仪 : 直接进样 ( 参阅第 6 页 ) 高流速进样 ( 参阅第 7 页 ) 在大多数情况下, 使用待测物实验的自动或半自动程序中得到的调谐文件 但是, 对于某些应用, 可能需要手动调谐某些参数 对于 ESI 操作, 大多数影响信号质量的重要参数是离子传输管温度 API tube lens offset voltage (API 套管透镜补偿电压 )( 除了 LTQ Velos 和 Velos Pro 质谱仪 ) 气体和溶剂流速 对于最佳灵敏度, 在准备用于实验的操作模式下调谐质谱仪 LTQ Velos 和 Velos Pro 质谱仪没有 API tube lens (API 套管透镜 ) 在为某个特殊应用创建调谐方法之后, 将这个方法添加到仪器方法中 可以为仪器方法的每个部分添加不同的调谐方法 例如, 如果被分析物 A 和 B 分别在 2 和 4 分钟洗脱, 可创建一个两段的仪器方法 : 在第一段指定为 A 优化的调谐方法, 在第二段指定为 B 优化的调谐方法 表 5 列出每个校正和调谐程序的进样方法 5. / Check Auto Semi-auto Auto Semi-auto Manual Collision Energy 校正溶液 / 直接进样 调谐溶液 / 直接进样 调谐溶液 / 高流速进样 12 LTQ Thermo Scientific

37 1 LTQ 系列质谱仪既可以在正离子模式下工作, 也可以在负离子模式下工作 通过改变应用到 API 离子源 ion optics ( 离子光学 ) 以及 ion detection system ( 离子检测系统 ) 的电压极性, 质谱仪控制将正离子或负离子传输到质量分析器进行质量分析 离子光学组件位于 API 离子源和质量分析器之间 从正离子质谱获取的信息, 和从负离子质谱获取的信息不同, 并相互作为补充 第 4 页的 电离技术 说明了这两种极性模式的质谱特点 在单一扫描运行期间获得正离子和负离子质谱图的能力, 减少了样品完整定性分析的时间 可以使用 LTQ 系列质谱仪, 以两种数据类型之一采集和显示质谱数据 ( 强度 vs. 质荷比 ): 轮廓图数据 在轮廓图数据类型中, 可以看到质谱峰的形状 质谱图将每个原子质量单位分割为数个取样间隔 在每个取样间隔处确定离子电流强度 每个取样间隔处的强度显示是一条连续的线条 一般, 调谐和校正质谱仪时使用轮廓图扫描数据类型, 这样可以轻松观察和测量质量分辨率 棒状图数据 棒状图数据将质谱图显示为条形图 这个扫描数据类型加合了每个取样间隔系列的强度 显示图是使用这个总和 vs. 取样间隔质量数的整数中心 棒状图数据的硬盘空间要求大约是轮廓图数据的十分之一 因此, 棒状图的数据处理比轮廓图数据更快 Thermo Scientific LTQ 13

38 1 离子源内产生的离子通常被指为母离子或者子离子 若要生成质谱图, 质量分析器扫描其 dc 和 rf 电压, 根据离子的 m/z 值从阱连续发射离子 或者, 通过改变 rf 电压并将一个额外的独立波形电压应用到质量分析器上, LTQ 系列质谱仪可以首先发射所有离子, 除了某些选中的母离子, 然后使这些离子与质量分析器内的氦气碰撞 氦气就是缓冲气体 碰撞可以使所选的母离子或者前体离子裂解成子离子 离子阱可以根据子离子的 m/z 值连续发射这些子离子, 以生成子离子的质谱图 MS n 代表质量分析的级数, 其中 n 是 scan power ( 扫描能力 ) 质量分析的 n > 1 的每级包括一个离子选择步骤 质谱仪支持 n = 1 到 n = 10 的扫描能力 当提高扫描能力时, 可以获得有关被分析物的更多结构信息 质谱仪的标准配置支持多个扫描能力 MS 扫描模式 质谱仪 (MS) 扫描模式对应单级质量分析 即 n = 1 MS scan modes ( 质谱扫描模式 ) 只包括母离子, 母离子不发生裂解 MS 扫描模式可以做全扫描实验或者 selected ion monitoring (SIM) scan type ( 选择离子监测 (SIM) 扫描类型 ) 实验 ( 参阅第 17 页的 选择离子监测 ) MS/MS 扫描模式 MS/MS 扫描对应着两级质量分析 (n = 2) 在 MS/MS 扫描中, 母离子裂解为子离子 MS/MS 扫描可以做全扫描实验或者 selected reaction monitoring (SRM)scan type ( 选择反应监测 (SRM) 扫描类型 ) 实验 ( 参阅第 17 页的 选择反应监测 ) MS n 扫描模式 MS n 扫描包括 3 到 10 级质量分析 (n = 3 到 n = 10) 但是, 这个模式也可以应用单级质量分析 (n = 1) 或者两级质量分析 (n = 2) MS n 扫描可以做全扫描实验或者 consecutive reaction monitoring (CRM) scan type ( 连续反应监测 (CRM) 扫描类型 ) 实验 ( 参阅第 17 页的 连续反应监测 ) 14 LTQ Thermo Scientific

39 1 LTQ 系列质谱仪可以以下列扫描速率运行 :Turbo Rapid ( 快速 )( 只用于 Velos Pro) Normal ( 普通 ) Enhanced ( 增强 ) ZoomScan 和 UltraZoom 表 6 列出 LTQ 系列质谱仪的扫描速率及其峰宽 ( 分辨率 ) 对于扫描速率的其他信息, 参阅数据系统的 Help ( 帮助 ) 6. LTQ LXQ LTQ XL LTQ Velos Velos Pro Turbo a Rapid ( 快速 ) Normal ( 普通 ) Enhanced ( 增强 ) ZoomScan UltraZoom 扫描速率 (Da/sec): 峰宽 (FWHM): 扫描速率 (Da/sec): N/A N/A 峰宽 (FWHM): N/A N/A 0.6 扫描速率 (Da/sec): 峰宽 (FWHM): 扫描速率 (Da/sec): 峰宽 (FWHM): 扫描速率 (Da/sec): 峰宽 (FWHM): 扫描速率 (Da/sec): 峰宽 (FWHM): a 同位素部分没有分开 实际观察的峰宽与同位素丰度有关 如果离子的电荷态未知, 那么从其质荷比确定离子质量数比较复杂 ZoomScan 和 UltraZoom 是使质谱仪获得较高分辨率的扫描速率 这个分辨率足以测定 12 C/ 13 C 同位素分离, 然后使系统确定电荷态 : 如果同位素峰分开 1 Da, 则离子电荷态为 ±1 如果同位素峰分开 0.5 Da, 则离子电荷态为 ±2 如果同位素峰分开 0.33 Da, 则离子电荷态为 ±3 如果同位素峰分开 0.25 Da, 则离子电荷态为 ±4 如果同位素峰分开 0.2 Da, 则离子电荷态为 ±5 使用 UltraZoom 扫描速率, 上述列表可以持续到电荷态 ±10 然后可以根据离子的电荷态和质荷比确定离子的分子量 Thermo Scientific LTQ 15

40 1 LTQ 系列质谱仪可以以下列扫描模式运行 : 全扫描 选择离子监测 选择反应监测 连续反应监测 full-scan type ( 全扫描类型 ) 在特定的扫描时间内提供整个或者很宽范围的被分析物的质谱图 在全扫描模式下, 质量分析器从第一个质量数扫描到最后一个质量数, 在质量分析的最后一步中没有中断 ( 离子扫描结束 ) 全扫描比 SIM 或者 SRM 提供更多被分析物的信息 但是由于全扫描在特定的扫描时间内扫描整个质量范围, 它的灵敏度不如其他扫描类型 单级全扫描 (MS 1 ) 单级全扫描具有一级质量分析 (n = 1) 在单级全扫描下, 质量分析器存储离子源内形成的离子 依次扫描从质量分析器出去的这些离子, 生成全扫描质谱图 ( 在分析中特定时间点下特定质量范围内可观察离子的质谱图 ) 单级全扫描分析是一种非常有用的定性分析工具 利用单级全扫描实验确定未知化合物的分子量, 或含有未知化合物的混合物中的每个组分的分子量 在确定目标化合物的分子量之后, 可以使用 SIM 或者 SRM 扫描类型执行化合物日常定量分析 ( 参阅第 17 页的 选择离子监测 和第 17 页的 选择反应监测 ) 两级全扫描 (MS/MS) 两级全扫描具有两级质量分析 (n = 2) 在第一级, 质量分析器存储离子源内形成的离子 然后选择某个质荷比 ( 母离子 ) 的离子, 所有其他离子被发射出质量分析器 母离子被激发, 与质量分析器内的背景气体碰撞 母离子的碰撞导致其裂解为一个或多个子离子 在质量分析的第二级中, 质量分析器存储子离子 依次扫描从质量分析器出去的这些离子, 生成完整的子离子质谱图 两级全扫描可比 SRM 提供更多样品信息, 但是速度更低 若要使用 SRM 扫描, 必须了解要观察的母离子和子离子 若要获得这个信息, 可以使用单级全扫描确定母离子质谱图, 使用两级全扫描确定目标母离子的 product mass ( 子离子质量数 ) 质谱图 对于以后的日常定量分析, 可以根据单级和两级全扫描结果使用 SRM 扫描类型 16 LTQ Thermo Scientific

41 1 SIM 是一种监测特定离子或者系列离子的单级 (n = 1) 技术 在 SIM 扫描中, 质量分析器存储离子源内形成的离子 质谱仪然后选择一个或多个质荷比的离子, 将其他所有离子从质量分析器射出 然后依次扫描从质量分析器出去的所选的这些离子, 生成 SIM 质谱图 当已知目标化合物质谱时, SIM 实验适用于检测复杂混合物中的微量目标化合物 SIM 在痕量分析和大量样品中快速筛选目标化合物时很有用 由于 SIM 扫描仅监测几个离子, 因此它比全扫描模式提供更低的检测限和更快的速度 SIM 可实现较低的检测限, 因为可以花更多时间来监测目标分析物图谱中肯定存在的重要离子 SIM 可实现更快的速度, 因为它仅监控几个感兴趣的离子, 并且忽略不含感兴趣离子的质谱区域 SIM 可以提高检测限并减少分析时间, 但与 MS/MS 扫描相比, 它也会降低目标化合物的特异性 SIM 分析缩短分析时间, 因为它只监测特殊的离子 SIM 分析降低特异性, 因为任何生成待监测的 m/z 离子的化合物都可能成为目标化合物 当使用 SIM 进行日常分析时, 为了避免假阳性结果, 首先验证 SIM 监测的是目标化合物的离子 SRM 是一种监测母离子和子离子对的两级技术 (n = 2) 在质量分析的第一级, 质量分析器存储离子源内形成的离子 质谱仪然后选择一个质荷比的离子 ( 母离子 ), 将其他所有离子从质量分析器射出 母离子被激发, 与质量分析器内的背景气体碰撞 母离子的碰撞导致其裂解为一个或多个子离子 在质量分析的第二级中, 质量分析器存储子离子 然后依次扫描从质量分析器出去的所选 m/z 范围的这些离子, 生成 SRM 子离子质谱图 和 SIM 一样, SRM 可快速分析复杂混合物中的痕量组分 但是, 由于正在监测离子对 ( 每个子离子对应一个母离子 ), 在 SRM 中获得的特异性远远优于 SIM 模式 在 SRM 模式下几乎不会得到假阳性结果 如果得到假阳性结果, 干扰化合物必须与目标化合物的所选母离子形成相同质荷比的母离子 这个化合物还必须裂解形成与目标化合物的所选子离子相同质荷比的子离子 CRM 是一种监测多步骤反应路径的多级 (n = 3 到 n = 10) 技术, 与 SIM (n = 1) 和 SRM (n = 2) 类似 在质量分析的第一级, 质量分析器存储离子源内形成的离子 质谱仪然后选择一个质荷比的离子 ( 母离子 ), 将其他所有离子从质量分析器射出 母离子被激发, 与质量分析器内的背景气体碰撞 母离子的碰撞导致其裂解为一个或多个子离子 在质量分析的第二级中, 质量分析器存储子离子 质谱仪然后选择一个质荷比的子离子, 将其他所有离子从质量分析器射出 所选的子离子现在成为了下一级质量分析的母离子 新的母离子被激发, 与背景气体碰撞 新的母离子的碰撞导致其裂解为一个或多个新的子离子 Thermo Scientific LTQ 17

42 1 在质量分析的第三级中, 质量分析器存储新的子离子 这个过程再重复 7 次, 直到质谱仪生成最终的目标子离子 在质量分析的第 n 级中, 质量分析器存储最终的子离子 质谱仪然后连续扫描来自质量分析器的 m/z 范围的离子, 生成一个 CRM 最终子离子质谱图 在 CRM 模式下, 当提高监测的连续反应数目时, 特异性增加 但是, 当提高监测的连续反应数目时, 尤其是如果母离子具有许多裂解路径, 灵敏度下降 5. LTQ 系列质谱仪 ( 图 5) 的 Thermo Xcalibur Instrument Setup (Thermo Xcalibur 仪器设置 ) 窗口的 New Method ( 新方法 ) 页面包括各种类型实验的模板的链接 为了节省输入仪器方法参数的时间, 打开想要执行的实验类型的模板, 输入实验特定的参数, 然后将这个条目保存为 Xcalibur 仪器方法 (.meth 文件 ) 的一部分 Thermo Xcalibur Instrument Setup New Method ETD Velos Pro 18 LTQ Thermo Scientific

43 1 本部分说明了 LTQ 系列质谱仪的实验类型 实验分类如下 : General MS or MS n 实验 数据依赖实验 Ion Mapping 实验 Ion Tree 实验 General MS or MS n 一个 General MS or MSn ( 普通 MS 或 MS n ) 实验最适合于采集结构分析的定性数据 但是, 也可以对未知化合物的定量分析采用 General MS 实验 Xcalibur 数据系统在 General MS or MS n 实验的 Instrument Setup ( 仪器设置 ) 窗口内包括 Instrument Method ( 仪器方法 ) 模板 ; 在 Xcalibur 应用程序的 New Method 页面上单击 General MS or MSn ( 第 18 页的图 5) 图 6 显示一个 General MS or MS n 实验模板的示例 在 General MS 定量实验中, 指定下列参数 : 被分析物的质量范围 裂解为特征子离子的母离子 所有子离子的质荷比 LTQ 系列质谱仪可以采集质量范围内的离子数据, 或者母离子的子离子数据, 或者指定的离子数据 如果正在使用 General ( 普通 ) 实验采集定性 ( 结构 ) 分析数据, 在 Scan Event 1 Settings ( 扫描事件 1 设置 ) 下的 MS Detector Setup ( 质谱检测器设置 ) 页面上指定数据的扫描模式 (MS 到 MS n )( 图 6) 如果指定 MS/MS 或者 MS n, 在 MS n Settings (MS n 设置 ) 下的 MS Detector Setup 页面上选择母离子或者目标离子 在 MS n Settings 下面指定这些裂解方法之一 :collision-induced dissociation ( 碰撞诱导解离, CID) pulsed Q collision-induced dissociation ( 脉冲 Q 解离, PQD), 对于 Velos Pro 还有 higher energy collision-induced dissociation ( 更高能量碰撞诱导解离, HCD)( 需要激活的 Trap-HCD 许可证 ; 参阅第 24 页的 获得 Trap-HCD 许可证 ) LTQ 系列质谱仪然后为结构分析或者质谱参考采集特征的定性信息 质谱仪可以生成可重复的特定待测物的质谱 因此, 可以使用 LTQ 系列质谱仪生成的参考质谱确认另一个 LTQ 系列质谱仪生成的化合物结构 Thermo Scientific LTQ 19

44 1 6. MS Detector Setup General MS 20 LTQ Thermo Scientific

45 1 Data Dependent ( 数据依赖 ) 实验最适用于为结构解析或者确认进行未知化合物的定性分析 当需要最少的用户输入时, 这些实验最大化得到的数据 LTQ 系列质谱仪使用 Data Dependent 实验中的信息自动确定后续实验 ( 第 18 页的图 5) 包括 Data Dependent 实验的 Instrument Method 模板 Data Dependent 实验从一次样品分析中生成大量数据 在 Data Dependent 实验中, 指定裂解的母离子或者让质谱仪自动选择要裂解的离子 质谱仪可以自动采集样品中每个母离子的结构信息, 即使样品是化合物的混合物 利用最简单的 Data Dependent 实验,Data Dependent MS/MS 自动找到有用的化合物结构信息 在此实验中, 只指定 MS 扫描范围 无需指定母离子 质谱仪然后采集全扫描 MS 数据, 挑选质谱图中最强的母离子, 然后将其裂解为子离子 Data Dependent Triple-Play 实验与 Data Dependent MS/MS 相同, 但是包括利用 ZoomScan 特性识别母离子的电荷态 Data Dependent Triple-Play 实验采集全扫描 MS 数据, 然后使用 ZoomScan 确定母离子的电荷态, 并计算分子量 母离子然后被裂解为子离子 (MS/MS) 例如, 如果质谱仪确定电荷态等于 2, 母离子的质荷比为 m/z 500, 然后子离子的质荷比可以高达并且包括 m/z 1000 ( 或者 2 500) 图 7 显示 Data Dependent Triple-Play 实验模板的示例 Ion Mapping ( 离子映射 ) 实验也可以是 Data Dependent 但是, Total Ion Map ( 总离子映射 ) Neutral Loss Ion Map ( 中性丢失离子映射 ) 和 Parent Ion Map ( 母离子映射 ) 实验不是 Data Dependent Data Dependent Zoom Map ( 数据依赖缩放映射 ) 实验在指定质量范围内每次扫描间隔上采集 ZoomScan 数据 自动对每个 ZoomScan 间隔的最强离子执行 MS/MS 实验 有关详细信息, 参阅第 23 页的 Ion Mapping 实验 Ion Tree ( 离子树 ) 实验都是 Data Dependent 实验类型 这些实验提供自动解析 MS n 数据, 以及使数据具有易处理格式的方法 有关详细信息, 参阅第 25 页的 Ion Tree 实验 以下列两种方式之一设置 Data Dependent 实验 : 如果对母离子有些概念, 或者如果期望获得某种母离子, 可以设置可能的母离子列表 然后, 在检测到所指定的其中一个母离子时, 就可以采集子离子图谱, 然后分析该信息 相反地, 也可以设置不关心的离子列表 如果化合物信息少, 可以设置 Data Dependent 实验的参数, 这样如果离子信号强度高于指定阈值, 则质谱仪生成子离子质谱 ( 如果该信息有用可以稍后决定 ) 参数可能包括 MS 或者 MS n 离子信号强度的阈值 无论选择什么阈值, 都应该隔离目标母离子 使用 Data Dependent 实验执行下列任务 : 在高纯度化合物中识别低水平杂质 (Data Dependent MS/MS) Data Dependent MS n 实验可以识别过程杂质 在阿斯匹林的品质保证过程中, 例如, 质谱仪可以识别小于 0.1 % 的杂质 Thermo Scientific LTQ 21

46 1 识别复杂混合物中的代谢物 ( 利用 Data Dependent MS/MS 进行色谱分离 ) 某个复杂混合物的 Data Dependent MS/MS 实验可以提供高度特异性的结构信息 例如, 某个药物代谢路径的特征质量数可以生成 MS n 质谱, 这个质谱对应着药物及其代谢物的结构 这些质谱对于代谢物识别非常关键 建立一个合成 MS n 质谱 (Ion Tree) ( 离子树 ) 的自定义库 7. Data Dependent 实验可以生成一个合成质谱图, 例如 MS/MS MS 3 和 MS 4 数据 质谱仪可以在自定义的 MS n 库谱中保存 MS n 指纹质谱 该数据对于过程控制 质量保证或者研究特别具有价值 MS Detector Setup Data Dependent Triple-Play 22 LTQ Thermo Scientific

47 1 Ion Mapping 一个 Ion Mapping 实验最适合于得到复杂混合物中未知分子的完整的结构特征 在 Ion Mapping 实验中, 可以在指定质量范围内得到每个母离子的子离子扫描 Ion Mapping 实验有助于自动识别那些母离子被裂解生成了指定的子离子 通过使用来自子离子扫描的信息, 这个实验 映射 一个或多个母离子 这些实验要求进入质谱仪的样品溶液组分保持恒定 因此, 为这些实验的进样使用一种注射技术 图 8 显示 Ion Mapping 实验模板的示例 LTQ 系列质谱仪在 Instrument Setup 窗口上包括用于 Ion Mapping 实验的下列 Ion Mapping 模板 : Total( 或者 Full-scan) Ion Map Total ( 或者 Full-scan) Ion Map 实验在特定质量范围内为每个可能的母离子生成子离子扫描, 以确定哪个母离子丢失了特殊的碎片而生成了某个特定子离子 ( 中性丢失扫描信息 ) 另外, 可以使用数据结果确定哪个母离子与特定子离子相关 ( 母离子扫描信息 ) 例如, 映射所有 m/z 的质量数, 在每个质荷比 每五分之一质荷比, 或者每十分之一质荷比的递进步骤中为 MS/MS 子离子指定所有可能的扫描 Neutral Loss Ion Map Neutral Loss Ion Map 实验采集某个特定中性碎片的可能丢失的质量数扫描 Neutral Loss Ion Map 识别哪个母离子丢失了特定质量数的中性碎片 例如, 指定中性丢失 80 Da( 正如磷酸化肽的情况 ) Neutral Loss Ion Map 实验可以一步步处理混合物中的每个子离子质量 这个实验搜索质量数 80 Da 的中性碎片的丢失证据 Neutral Loss Ion Map 产生的数据是 Total Ion Map 产生数据的子集, 但是所需时间更短 Parent Ion Map Parent Ion Map 实验识别生成指定的子离子的所有母离子 例如, 如果指定子离子质量 m/z 250, Parent Ion Map 包括产生指定的 m/z 250 子离子的所有母离子 Parent Ion Map 产生的数据是 Total Ion Map 产生数据的子集, 但是所需时间更短 Data Dependent Zoom Map Data Dependent Zoom Map 是一种 Ion Map ( 离子映射 ) 实验, 可在指定质量范围内采集每个扫描间隔的 ZoomScan 数据, 而且 Data Dependent MS/MS 在每次 ZoomScan 时对超过强度阈值的最强峰生成质谱 可以在 Xcalibur Qual Browser (Xcalibur 定性浏览器 ) 窗口中查看任何 Ion Mapping 实验的结果 Thermo Scientific LTQ 23

48 1 8. Total Ion Map Ion Mapping 24 LTQ Thermo Scientific

49 1 Ion Tree 在 Ion Tree 实验中,LTQ 系列质谱仪可以自动采集 MS n 数据 为了最大化某个特殊样品所需的结构信息, 执行 Ion Tree 实验 为 MS n 裂解指定特殊的母离子, 或者让质谱仪自动找到母离子并将其裂解为 MS/MS 和 MS 10 之间的任一水平 通过决定实验的下一行动, 质谱仪自动采集数据 图 9 显示 Ion Tree 实验模板的示例 在 Ion Tree 实验中, 为了优先考虑质谱仪如何在允许时间内采集信息, 选择两选项之一 : Depth focus( 深度聚焦 ) 通过执行一系列 MS n - 水平的裂解 ( 例如, MS/MS MS 3 MS 4 等等 ) 表征某个离子, 然后在 MS n 系列中表征下一个最强离子 Breadth focus( 宽度聚焦 ) 在相同 MS n 水平下表征所有离子, 然后进入下一个 MS n 水平 例如, 如果指定 Ion Tree 实验中的 Maximum Depth ( 最大深度 ) 为 3, Maximum Breadth ( 最大宽度 ) 为 2, 则如下 : 任一情况下, 质谱仪首先在指定质量范围内扫描母离子 (MS) 然后, 它选择 MS 质谱图的第一个最强离子进行裂解 (MS/MS) 对于深度聚焦, 在裂解 MS 质谱图的最强离子之后 生成 MS/MS 质谱图 质谱仪选择并裂解 MS/MS 质谱图中的最强离子 这样生成了 MS 3 质谱图, 正如本例中最大深度指定的水平数 质谱仪然后倒退一个水平, 裂解 MS/MS 质谱图中的第二个最强离子, 在 MS 3 水平创造更多这个母离子的子离子 对于 MS 质谱图中的第二个最强离子重复这个过程 对于宽度聚焦, 在裂解 MS 质谱图的最强离子之后 生成 MS/MS 质谱图 质谱仪选择并裂解同一 MS 质谱图中的第二个最强离子 母离子的裂解持续到 Max Breadth 水平 ( 本例为 2) 在裂解 MS 水平上的两个最强峰之后, 质谱仪选择并裂解第一个 MS/MS 质谱图中的两个最强离子 这样生成了 MS 3 水平的子离子, 正如本例中最大深度指定的水平数 对于第二个 MS/MS 质谱图中的第二个最强离子重复这个过程 可以在 Xcalibur Qual Browser 窗口中查看 Data Dependent Ion Tree ( 数据依赖离子数 ) 实验的结果 结果表示为来自某个特殊母离子的结构树 Thermo Scientific LTQ 25

50 1 9. Data Dependent Ion Tree Ion Tree LTQ 系列质谱仪具有三个质荷比范围模式 : 低 : Da 常规 : Da 高 : Da 26 LTQ Thermo Scientific

51 2 API 本章提供为 ESI HESI-II 或者 APCI 模式设置 API 离子源的信息 API 离子源包括 Ion Max 或者 Ion Max-S API 离子源室, 以及一个 ESI HESI-II 或者 APCI 探针 在 ESI HESI-II 或者 APCI 模式下采集数据之前, 在 ESI HESI-II 模式下调谐和校正 LTQ 系列质谱仪 打开 Tune Plus 窗口 让质谱仪处于待机模式 API 离子源室的安装和拆卸 API 离子源室废液装置 ESI 或 HESI-II 探针安装和拆卸 APCI 探针安装和拆卸 调整 Ion Max API 离子源室中的探针位置 Thermo Scientific LTQ 27

52 2 API Tune Plus Tune Plus 有多个打开 Tune Plus 窗口 ( 图 10) 的方法 Tune Plus 执行下列操作之一 : 10. 在 Windows 任务栏上选择 Start ( 开始 ) > All Programs ( 所有程序 ) > Thermo Instruments (Thermo 仪器 ) > LTQ > model Tune ( 型号调谐 ), 其中 model ( 型号 ) 是特定的 LTQ 系列型号 对于 LTQ 系列版本 或者更早版本, 选择 Start > All Programs > Xcalibur > model Tune 在 Xcalibur 应用程序中, 单击 Roadmap View ( 导航图 ) 图标, Instrument Setup ( 仪器设置 ) 图标, model MS ( 型号质谱 ) 图标, 然后是 Tune Plus 或 在 Xcalibur 应用程序中, 单击 Roadmap View 图标, Instrument Setup 图标, model MS 图标 然后从主工具栏选择 model ( 型号 )> Start Tune Plus ( 启动 Tune Plus) Velos Pro Tune Plus 28 LTQ Thermo Scientific

53 2 API 在拆卸离子源探针或者 API 离子源室之前总是将 LTQ 系列质谱仪置于待机模式 当质谱仪处于待机模式, API 气体 高压和注射泵都关闭 Standby ( ) 1. 完成所有数据采集 2. 打开 Tune Plus 窗口 ( 参阅第 28 页 ) 3. 如果提供了 LC 泵, 关闭到 API 离子源的溶剂流路 当通过 Xcalibur 数据系统控制 LC 泵时, 可以从 Inlet Direct Control ( 入口直接控制 ) 对话框关闭溶剂流路 例如, 若要关闭 Accela 泵的溶剂流路, 执行下列程序 : a. 选择 Setup ( 设置 ) > Inlet Direct Control ( 入口直接控制 ), 然后单击 LC 泵的选项卡 b. 选择 Take Pump Under Control ( 控制泵 ) 复选框, 然后单击 Stop ( 停止 ) 按钮 4. 在 Tune Plus 窗口中, 进行下列操作之一 : 如果质谱仪关闭, 选择 Control ( 控制 ) > Standby ( 待机 ) 或 On Standby 如果质谱仪开启, 则点击 On/Standby ( 开机 / 待机 ) 按钮将质谱仪设置为 Standby 模式 单击这个按钮时, 质谱仪的电源模式就如左边空白显示进行周期性切换 LC/MS 系统现在处于待机模式, 在它冷却到室温之后, 可以安全拆卸离子源探针或者 API 离子源室 如果正在使用 APPI, 而质谱仪处于待机模式, 关闭 LC 或者其他液体传输设备 否则, 当仪器处于待机模式, 鞘气和辅助气的缺失可能导致热的 VUV 真空灯在接触液体时发生破裂 质谱仪关闭 electron multiplier ( 电子倍增器 ) consecutive reaction monitoring (CRM)scan type ( 连续反应监测 (CRM) 扫描类型 ) API 离子源的 8 kv 电源 主 rf 电压, 和离子光学 rf 电压 质谱仪也关闭辅助气和鞘气流路 当质谱仪处于待机模式时, 参阅 LTQ Series Hardware Manual (LTQ 系列硬件手册 ) 的第 3 章了解质谱仪组件的 On/Off ( 开 / 关 ) 状态 质谱仪前面板上的 System LED ( 系统 LED) 会在系统处于待机模式时呈黄色 Thermo Scientific LTQ 29

54 2 API API API API Ion Max 或者 Ion Max-S API 离子源室容纳 ESI HESI-II 或者 APCI 探针 Ion Max 具有两个 Ion Max-S 所没有的特性 : 一个可调整的探针端口和一个带窗口的前门 除了这两个特点, 这两种离子源室具有相同的功能, 而且以同样方式安装到 LTQ 系列质谱仪 无需工具拆卸或安装 API 离子源室或者离子源废液管 本部分包含下列程序 : 这些说明适用于 Ion Max 和 Ion Max-S API 离子源室, 除非有其他注释 第 30 页的 安装 API 离子源室 第 31 页的 拆卸 API 离子源室 API 1. 将质谱仪置于 Standby 模式 ( 参阅第 29 页 ) 2. 将 API 离子源室上的锁定杆置于解锁位置 ( 图 11) 3. 将 API 离子源室 ( 图 11) 背面的两个导向针孔对准安装在质谱仪 ( 图 12) 前方的 API 离子源的 API 离子源室导向针, 然后小心按压离子源室直到它与底座齐平 从后方看, Ion Max 和 Ion Max-S 的外观相同 11. Ion Max-S API API 30 LTQ Thermo Scientific

55 2 API API 12. API API 4. 将 API 离子源室锁定杆朝离子源室旋转 90 度, 将其锁定 5. 按照以下步骤安装离子源废液管 : 防止溶剂废液回流到离子源和质谱仪中 务必确保废液管中的液体可以排放到废液容器中, 并且废液管出口要在废液容器内液面的上方 API a. 将离子源废液组件连接到 API 离子源室废液接头 ( 参阅第 33 页 ) b. 将此管的另一端插入废液容器, 将废液容器排放至一个排放系统 若要接触 APCI corona 针或者离子源接口, 必须拆卸 API 离子源室 意外接触离子源室内的 API 探针可能导致烫伤, 因为探针的这个区域温度可能达到 350 C (662 F) 另外, 尽管离子源室的外表面以及探针的暴露部分降低到可接触金属表面的限制温度 70 C (158 F), 它们仍有烫伤的危险 因此, 要特别小心处理探针和离子源室的所有部件 在拆卸 API 探针或离子源室之前, 一定要让其冷却到室温 ( 约 20 分钟 ) 才可碰触 若将质谱仪连接到 LC 系统, 在探针冷却到室温时, 保持 LC 泵上的溶剂液流打开 API 1. 将质谱仪置于 Standby 模式 ( 第 29 页 ), 使其冷却到室温 参阅上述的注意事项 2. 如果 API 离子源室上连接着探针, 则在拆卸 API 离子源室之前断开外部液体线路的连接 Thermo Scientific LTQ 31

56 2 API API 3. 从 API 离子源室废液装置卸下废液管 ( 参阅图 13) 13. Ion Max-S API API API 4. 将 API 离子源室锁定杆远离离子源室旋转 90 度, 将其解锁 5. 将 API 离子源室从 API 离子源安装组件中拉出 6. 将离子源室暂时存放在比较安全的地方 32 LTQ Thermo Scientific

57 2 API API API 当安装 API 离子源时, 将 API 离子源室底部的废液装置连接到溶剂废液容器 ( 图 14) 14. API API Tygon 1 in. ID [ 1 m 3 ft ] Tygon 0.5 in. ID 表 7 列出溶剂废液系统的组件 在初次安装质谱仪时, Thermo Fisher Scientific 现场服务工程师会安装溶剂废液系统 Thermo Scientific LTQ 33

58 2 API API 7. 盖子, 填充 / 排出 MS 装运套件 厚壁, 4 L Nalgene 瓶 MS 装运套件 异径接头, 单倒钩式管接头, MS 装运套件 1 in. ID 到 0.5 in. ID 离子源废液管接头, Teflon MS 附件套件 软管, Tygon, 0.5 in. ID, 3/4 in. OD MS 装运套件 软管, Tygon PVC, 1 in. ID, 1-3/8 in. OD MS 装运套件 当重新连接 API 离子源废液管和 API 离子源室底部的废液装置时, 确保首先连接 Teflon 离子源废液接头 这个接头可以耐受 H-ESI 或者 APCI 离子源产生的高温 对于 API 离子废液装置管遵守下列指南 : 使用溶剂废液容器提供的 PVC 管, 将废液容器连接到排放系统 勿将硅胶管连接到 API 离子源废液装置 如果硅胶管连接到废液管出口, 可能观察到 m/z 和 684 的背景离子 使用 LTQ Series Getting Connected Guide (LTQ 系列建立连接手册 ) 中说明的 Teflon 离子源废液管接头 勿将 Tygon 软管直接连接到 API 离子源废液装置 在高温时, Tygon 会释放挥发性污染物 为了防止溶剂废液倒流到质谱仪内, 确保所有管高于废液容器内的液面水平 : 从质谱仪到溶剂废液容器的 Tygon 管 从废液容器到排放系统的 PVC 管 至少为实验室配备两个排放系统 : 若将 API 离子源废液管和一个或多个前级泵的 ( 蓝色 ) 废气管连接到同个排放系统, 将会使分析器光学组件受到污染 将 ( 蓝色 ) 前级泵废气管连接到专用的排放系统 切勿使 PVC 废液管 ( 或连接到废液容器的任何废液管 ) 排出到与前级泵连接的同个排气系统 使废液容器排出到专用的排放系统 Ion Max 或 Ion Max-S API 离子源的排放系统必须能采纳 30 L/min (64 ft3/h) 的流速 34 LTQ Thermo Scientific

59 2 API ESI HESI-II ESI HESI-II ESI HESI-II Ion Max 和 Ion Max-S API 离子源室具有相同的互锁插座 探针互锁块 探针锁止旋钮和探针锁定环 无需工具拆卸或安装或者离子源探针 本部分包含下列程序 : 第 35 页的 安装 ESI 或 HESI-II 探针 第 41 页的 拆卸 ESI 或 HESI-II 探针 这些说明适用于 ESI 和 HESI-II 探针 所有步骤用于两种探针类型, 除非有其他注释 意外接触离子源室内的 API 探针可能导致烫伤, 因为探针的这个区域温度可能达到 350 C (662 F) 另外, 尽管离子源室的外表面以及探针的暴露部分降低到可接触金属表面的限制温度 70 C (158 F), 它们仍有烫伤的危险 因此, 要特别小心处理探针和离子源室的所有部件 在拆卸 API 探针或离子源室之前, 一定要让其冷却到室温 ( 约 20 分钟 ) 才可碰触 若将质谱仪连接到 LC 系统, 在探针冷却到室温时, 保持 LC 泵上的溶剂液流打开 ESI HESI-II 1. 将质谱仪置于 Standby 模式 ( 参阅第 29 页 ), 使其冷却到室温 参阅上述的注意事项 2. 如果质谱仪设置为 APCI 模式, 遵守第 51 页的 拆卸 APCI 探针和 Corona 针 的步骤 3. 如有必要, 在安装之前检查和清洁所选探针 4. 如果正在安装 ESI 探针, 确保它安装了石英或者金属针样品管 ( 第 42 页的图 23) 参阅 LTQ Series Hardware Manual 或者金属针套件中提供的安装手册 Thermo Scientific LTQ 35

60 2 API ESI HESI-II 5. 逆时针旋转探针锁止旋钮, 直到探针锁定环打开至其最大位置 ( 图 15) 15. Ion Max API 8 kv 6. 将探针放入 API 离子源室探针端口, 操作如下 : a. 握住探针, 使喷嘴朝下和导向针朝向左边, 慢慢将探针插入端口, 直到探针接触离子源室上的锁定环 图 16 显示 ESI 探针, 而图 17 显示 HESI-II 探针 16. ESI 36 LTQ Thermo Scientific

61 2 API ESI HESI-II 17. HESI-II b. 将探针稍微向上拉, 直到导向针与互锁块左侧的插槽对齐, 然后顺时针旋转探针, 直到导向针碰到来自互锁块的阻力 图 18 显示 ESI 探针, 而图 19 显示 HESI-II 探针 18. ESI C D A B A B C D Thermo Scientific LTQ 37

62 2 API ESI HESI-II 19. HESI-II C D A B A B C D c. 将探针向下推入端口至探针上标示的适当深度 A B C 和 D 深度标记处 将探针插入到深度 B C 或 D 对于高溶剂流速, 调整探针深度, 这样喷嘴远离离子接口 ( 深度 C 或 D) 相反的, 对于低溶剂流速, 则调整探针深度, 使喷嘴更靠近离子接口 ( 深度 B 或 C) 探针位置 A 只用于仪器校正 ( 流速低于 10 μl/min) 7. 顺时针转动探针锁止旋钮直到感觉到阻力, 将探针锁定到位 8. 按照下列步骤将氮气气路连接到探针 : 将鞘气接头 ( 蓝色 ) 连接到鞘气入口 (S) 将辅助气接头 ( 绿色 ) 连接到辅助气入口 (A) 9. 将 8 kv 电缆接头连接到探针上的 8 kv 电缆插座, 然后顺时针旋紧锁定环 为了防止电击, 在断开或者连接 8 kv 电缆之前确保质谱仪处于待机模式 10. 如果安装 HESI-II 探针, 执行下列程序 : 从互锁插座上拔下气化器电缆接头, 然后将它连接到探针上的气化器电缆接头插座 ( 第 46 页的图 28) 若要对齐插座插针, 可将气化器电缆接头上的红点对准互锁插座上的红点 11. 确保接地两通位于接地两通杆内 12. 用两个手拧接头, 将一段红色 PEEK 软管连接至 LC 出口, 然后连接至接地两通的左边 13. 如果正在安装 HESI-II 探针, 用两个手拧接头, 将一段红色 PEEK 软管连接至探针样品入口, 然后连接至接地两通的右边 38 LTQ Thermo Scientific

63 2 API ESI HESI-II 图 20 显示安装在 Ion Max API 离子源室中的 ESI 探针 第 40 页的图 21 显示安装在 Ion Max API 离子源室中的 HESI-II 探针 LTQ 系列质谱仪自动感应安装的探针类型 20. Ion Max API ESI 8 kv A S LC Thermo Scientific LTQ 39

64 2 API ESI HESI-II 21. Ion Max API HESI-II 8 kv A S LC 40 LTQ Thermo Scientific

65 2 API ESI HESI-II ESI HESI-II 这些说明适用于 ESI 和 HESI-II 探针 所有步骤用于两种探针类型, 除非有其他注释 API 1. 将质谱仪置于 Standby 模式 ( 参阅第 29 页 ), 使其冷却到室温 参阅第 35 页的注意事项 2. 如果有, 关闭从可选的 LC 泵到 API 离子源的溶剂流路 ( 参阅第 29 页的步骤 3) 3. 如果拆卸 HESI-II 探针, 断开 HESI-II 探针接地两通左侧的管线 ( 图 22) 22. HESI-II 8 kv LC Thermo Scientific LTQ 41

66 2 API ESI HESI-II 4. 从位于接地杆 ( 图 23) 的接地两通断开样品传输线 除非要替换样品管, 否则当从 API 离子源室拆卸探针时, 不要断开样品管和探针或者不锈钢接地两通的连接 kv PEEK 42 LTQ Thermo Scientific

67 2 API ESI HESI-II 5. 从探针断开 8 kv 电缆 ( 图 24 和图 25) 如下 : 为了防止电击, 在断开或者连接 8 kv 电缆之前确保质谱仪处于待机模式 a. 逆时针方向旋转探针锁定环, 解锁电缆接头 b. 从探针的高电压插座中拔出 8 kv 电缆接头 24. ESI 8 kv 25. HESI-II 8 kv 8 kv Thermo Scientific LTQ 43

68 2 API ESI HESI-II 6. 从探针气化器电缆插座拔下气化器电缆 ( 图 26) 26. HESI-II 8 kv 8 kv A S 44 LTQ Thermo Scientific

69 2 API ESI HESI-II 7. 将气化器电缆接头连接到互锁块上的互锁插座, 然后将气化器电缆接头上的红点对准互锁插座上的红点, 使插座插针对齐 ( 图 27) 27. HESI-II API 8. 按照下列步骤从探针断开氮气气路 : 从辅助气入口 (A) 断开辅助气接头 ( 绿色 ) 连接 从鞘气入口 (S) 断开鞘气接头 ( 蓝色 ) 连接 Thermo Scientific LTQ 45

70 C D 2 API ESI HESI-II 9. 如果拆卸 ESI 探针, 从接地杆移除接地两通 图 28 显示从 ESI 探针断开氮气气路和 8 kv 电缆连接, 并从接地两通杆移除接地两通 28. ESI API PEEK A B 10. 逆时针转动探针锁止旋钮, 打开探针锁定环 11. 按以下步骤拆卸探针 : a. 慢慢将探针从端口拉出, 直到感觉到探针导向针接触互锁块时产生的阻力 b. 逆时针转动探针, 直到探针导针离开互锁块 c. 当探针导向针离开互锁块时, 将探针从端口拉出 12. 如果需要, 在将探针保存在原始的装运容器中之前, 清洁探针 46 LTQ Thermo Scientific

71 2 API APCI APCI 拆卸或安装 corona 针唯一需要的工具是一套钳子 本部分包含下列步骤 : 第 47 页的 安装 Corona 针和 APCI 探针 第 51 页的 拆卸 APCI 探针和 Corona 针 意外接触离子源室内的 API 探针可能导致烫伤, 因为探针的这个区域温度可能达到 350 C (662 F) 另外, 尽管离子源室的外表面以及探针的暴露部分降低到可接触金属表面的限制温度 70 C (158 F), 它们仍有烫伤的危险 因此, 要特别小心处理探针和离子源室的所有部件 在拆卸 API 探针或离子源室之前, 一定要让其冷却到室温 ( 约 20 分钟 ) 才可碰触 若将质谱仪连接到 LC 系统, 在探针冷却到室温时, 保持 LC 泵上的溶剂液流打开 这部分的图显示 Ion Max API 离子源室 Corona APCI 若要在 APCI 模式下操作系统, 安装 corona 针和 APCI 探针 corona 1. 将质谱仪置于 Standby 模式 ( 参阅第 29 页 ), 使其冷却到室温 参阅上述的注意事项 2. 如果质谱仪设置为 ESI 或 H-ESI 模式, 遵守第 41 页的 拆卸 ESI 或 HESI-II 探针 的步骤 3. 移除 API 离子源室 ( 参阅第 31 页 ) 4. 使用钳子抓住干净的 corona 针, 并小心将较大的那端直接推入 corona 针接触点 ( 图 29) corona 放电针非常尖锐, 可能刺伤皮肤 处理时请小心 Thermo Scientific LTQ 47

72 2 API APCI 29. Corona corona Corona 5. 确保针尖与 APCI 探针和离子源接口之间的传输路径对齐 6. 重新安装 API 离子源室 ( 参阅第 30 页 ) APCI 1. 将 8 kv 电缆接头连接至 API 离子源室的高电压插座, 操作如下 : a. 在 API 离子源室右侧, 移除用于 corona 针的高电压插座上方的盖 b. 将 8 kv 电缆接头连接至 API 离子源室的高电压插座 ( 图 30) c. 顺时针方向旋转锁定环将 8 kv 电缆锁住 30. Ion Max API 8 kv corona 2. 逆时针旋转探针锁止旋钮, 直到探针锁定环打开至其最大位置 48 LTQ Thermo Scientific

73 2 API APCI 3. 将探针放入 API 离子源室探针端口, 操作如下 : a. 握住探针, 使喷嘴朝下和导向针朝向左边, 慢慢将探针插入端口, 直到导向针接触 API 离子源室上的锁定环 ( 图 31) 31. APCI b. 将探针稍微向上拉, 直到导向针与互锁块左侧的插槽对齐, 然后顺时针旋转探针, 直到导向针碰到来自互锁块的阻力 ( 图 32) 32. APCI A B C D A B C D c. 将探针向下推入端口至探针上标示的适当深度 A B C 和 D 深度标记处 将探针插入到深度 B C 或 D 对于高溶剂流速, 调整探针深度, 这样喷嘴远离离子接口 ( 深度 C 或 D) 相反的, 对于低溶剂流速, 则调整探针深度, 使喷嘴更靠近离子接口 ( 深度 B 或 C) 探针位置 A 只用于仪器校正 ( 流速低于 10 μl/min) Thermo Scientific LTQ 49

74 2 API APCI 4. 顺时针转动探针锁止旋钮直到感觉到阻力, 将探针锁定到位 5. 按照下列步骤将氮气气路连接到探针 : 将鞘气接头 ( 蓝色 ) 连接到鞘气入口 (S) 将辅助气接头 ( 绿色 ) 连接到辅助气入口 (A) 6. 从互锁插座上拔下气化器电缆接头, 然后将它连接到 APCI 探针上的气化器电缆接头插座 ( 图 33) 7. 若要对齐插座插针, 可将气化器电缆接头上的红点对准互锁插座上的红点 8. 将样品传输线连接至探针样品入口 33. 图 33 显示安装在 Ion Max API 离子源室中的 APCI 探针 Ion Max API APCI APCI A S 8 kv corona APCI 50 LTQ Thermo Scientific

75 2 API APCI APCI Corona 本部分说明如何拆卸 APCI 探针和 corona 针 APCI 1. 将质谱仪置于 Standby 模式 ( 参阅第 29 页 ), 使其冷却到室温 参阅第 35 页的注意事项 2. 如果提供了 LC 泵, 关闭到 API 离子源的溶剂流路 ( 参阅第 29 页的步骤 3) 3. 从探针气化器电缆插座拔下气化器电缆 ( 图 34) 34. APCI A S 4. 按照下列步骤从探针断开氮气气路 : 从辅助气入口 (A) 断开辅助气接头 ( 绿色 ) 连接 从鞘气入口 (S) 断开鞘气接头 ( 蓝色 ) 连接 5. 将气化器电缆接头连接至互锁块上的互锁插座 6. 若要对齐插座插针, 可将气化器电缆接头上的红点对准互锁插座上的红点 ( 第 48 页的图 30) 7. 逆时针转动探针锁止旋钮, 打开探针锁定环 Thermo Scientific LTQ 51

76 2 API APCI 8. 从 API 离子源室的探针端口卸下探针, 操作如下 : a. 慢慢将探针从端口拉出, 直到感觉到探针导向针接触互锁块时产生的阻力 b. 逆时针转动探针, 直到探针导针离开互锁块 c. 当探针导向针离开互锁块时, 将探针从端口拉出 9. 如果需要, 在将探针保存在原始的装运容器中之前, 清洁探针 corona corona 放电针非常尖锐, 可能刺伤皮肤 处理时请小心 1. 将质谱仪置于 Standby 模式 ( 参阅第 29 页 ), 使其冷却到室温 参阅第 35 页的注意事项 2. 拆卸 APCI 探针 ( 参阅第 51 页 ) 3. 从 API 离子源室的高电压插座上断开 8 kv 电缆 4. 将高电压插座盖插入 API 离子源室上的高电压插座 5. 移除 API 离子源室 ( 参阅第 31 页 ) 6. 使用钳子抓住干净的 corona 针, 并小心将针从 corona 针接触点拉出 ( 图 35) corona 针位于 API 离子源室内部的 corona 组件内 35. Corona corona Corona 7. 重新安装 API 离子源室或将其暂时存放在比较安全的地方 8. 如果需要, 在将探针保存在原始的装运容器中之前, 清洁 corona 针 52 LTQ Thermo Scientific

77 2 API Ion Max API Ion Max API 如果 LTQ 系列质谱仪具有 Ion Max API 离子源室, 则可以通过左右或者前后调整探针位置几个毫米, 从而获得最大灵敏度 ( 图 36) Ion Max-S API 离子源室上的探针位置不可调 为了调整探针的前后位置, 使用 Ion Max 离子源室前方的测微计 为了调整探针的左右位置, 使用离子源室左侧的凸边螺钉和 Ion Max 离子源室前顶方向的 -1 到 +1 标记 使用探针上的 A B C 和 D 标记作为指导, 调整探针深度 36. Ion Max API S CAUTION - HOT SURFACE Thermo Scientific LTQ 53

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79 3 ESI 本章提供如何调谐和校正 LTQ 系列质谱仪的信息 首先, 在 ESI 模式下调谐和校正质谱仪 即为 ESI 模式设置质谱仪 ( 参阅第 35 页的 安装 ESI 或 HESI-II 探针 ) 然后, 为全扫描 单级质量分析设置扫描参数 对于大多数应用, 在运行数据系统内提供的自动调谐和自动校正选项时, 直接将校正溶液注入离子源 一般, 每运行 1-3 个月必须校正质谱仪, 以保持整个检测器质量范围的最佳性能 为调谐和校正设置注射泵 为调谐校正设置质谱仪 在 ESI 模式下测试质谱仪 在 ESI 模式下自动调谐质谱仪 保存 ESI 调谐方法 在普通质量数范围内自动校正 Thermo Scientific LTQ 55

80 3 ESI 利用 LTQ 系列质谱仪前方的注射泵注入调谐校正溶液 为了最小化交叉污染的可能, 为每类溶液使用不同的注射器和不同长度的 PEEK 管 1. 在干净的 500 μl Unimetrics 注射器中加入 450 μl 的 ESI 校正溶液 若要制备 ESI 校正溶液, 遵守下列程序之一 : 对于 LXQ 和 LTQ XL, 参阅第 122 页的 为 ESI 模式制备普通质量数范围校正溶液 对于 Velos Pro, 参阅第 128 页的 为 ESI 模式制备普通质量数范围校正溶液 为了将交叉污染的可能性降至最低, 重新将注射器插入注射器接头组件中之前, 一定要用干净的无尘纸擦拭针尖 2. 固定注射器活塞, 将注射器针尖小心插入带有手拧接头和连接 ( 黑色 )LC 两通的套圈的 4 cm (1.5 in.)teflon 管的末端 ( 图 37) LC 两通具有一个 10-32, 锥底的接收端口 37. LC Teflon 3. 将注射器装入注射泵的注射器架中 4. 使用一个手拧接头和套圈连接红色 PEEK 管 (0.005 in. ID, 1/16 in. OD) 的进样管线, 这个 PEEK 管位于 LC 两通和由离子源的接地杆支撑的接地两通之间 图 38 显示建议的用于连接 LC 两通和接地两通的接头和套圈 LC 两通和接地两通均具有 锥底接收端口 56 LTQ Thermo Scientific

81 3 ESI 38. LC in PEEK LC 5. 在按压注射泵手柄上的蓝色释放按钮时, 压下手柄, 直到它刚好接触到注射器活塞 在运行 LTQ 系列质谱仪的自动校正程序之前, 采用校正溶液手动调谐, 建立稳定的溶液喷雾, 确保质量分析器正在传递足够水平的离子到质量检测器上 在建立这些条件之后, 自动校正质谱仪, 优化影响离子检测的参数 若要在 ESI 模式下设置质谱仪进行调谐和校正, 遵守下列步骤 : 在开始每天的质谱仪日常操作之前, 确保 ESI 离子源具有足够的氮气 如果氮气不足, 质谱仪将会自动关闭以防止大气氧气进入损坏离子源 打开质谱仪电源后, 离子源内存在的氧气是危险的 此外, 如果质谱仪在运行分析时自动关闭, 可能会丢失数据 1. 若要在 ESI 模式下打开调谐方法 2. 若要查看预调谐的 ESI 离子源设置 3. 若要定义扫描参数 4. 若要设置数据类型和离子极性模式, 第 59 页 ESI 1. 打开 Tune Plus 窗口 ( 参阅第 28 页 ) 2. 单击 Open ( 打开 ) 按钮 3. 浏览到 drive:\thermo\instruments\ltq\methods 文件夹, 然后选择一个仪器上工作的最近保存的调谐文件 ( 推荐 ), 或者使用默认调谐文件, Default_ESI 4. 点击 Open 调谐方法参数下载到质谱仪 Thermo Scientific LTQ 57

82 3 ESI ESI 1. 在 Tune Plus 窗口中, 选择 Setup ( 设置 ) > ESI Source (ESI 离子源 ) 2. 观察设置 3. 完成后单击 OK ( 确定 ) 1. 在 Tune Plus 窗口中, 单击 Define Scan ( 定义扫描 ) 按钮显示 Define Scan 对话框 ( 图 39) 39. Define Scan 2. 在 Scan Description ( 扫描说明 ) 下面执行下列步骤 : 在 Mass Range ( 质量数范围 ) 列表中选择 Normal ( 普通 ) 在 Scan Rate ( 扫描速率 ) 列表中选择 Normal 在 Scan Type ( 扫描类型 ) 列表中选择 Full ( 全扫描 ) 3. 在 Scan Time ( 扫描时间 ) 下面执行下列步骤 : 在 Microscans ( 微扫描 ) 框中输入 1 在 Max. Inject Time (ms)( 最大进样时间, ms) 框内输入 在 Source Fragmentation ( 离子源裂解 ) 下面执行下列操作 : 对于 LXQ 和 LTQ XL, 清除 On ( 开 ) 复选框 选择 Source Fragmentation 复选框允许离子源内发生碰撞诱导解离 由于离子源内的碰撞诱导解离特异性一般, 因此很少使用 对于 Velos Pro, 清除 On 复选框 必须选择 Source Fragmentation 复选框产生 m/z 138 的校正峰, 这是咖啡因 m/z 195 的一个碎片离子 58 LTQ Thermo Scientific

83 3 ESI ESI 5. 在 Scan Ranges ( 扫描范围 ) 下面执行下列步骤 : a. 在 Input ( 输入 ) 列表中选择 From/To ( 从 / 到 ) b. 在 First Mass (m/z)( 开始质量数, m/z) 列中输入 c. 在 Last Mass (m/z)( 最终质量数, m/z) 列中输入 确保 Define Scan 对话框中的设置与第 58 页的图 39 中的显示相同 7. 单击 OK Centroid Profil Positive Negative 1. 在 Tune Plus 窗口中, 点击 Centroid/Profile ( 轮廓图 / 棒状图 ) 按钮以选择 Profile ( 轮廓图 ) 数据类型 2. 单击 Positive/Negative ( 正 / 负 ) 按钮选择 positive ( 正 ) 离子极性模式 这样完成了 ESI 模式下利用校正溶液进行调谐的设置 ESI 若要测试 LTQ 系列质谱仪的运行, 将校正溶液注入 ESI 离子源, 监测校正溶液质谱的实时显示 为了在 ESI 模式下测试质谱仪的操作, 遵守下列步骤 : 不要使注射泵注入校正溶液的速率超过 10 μl/min 如果使用高浓度的 Ultramark 1621, 则可能污染样品 1. 若要将校正溶液注入离子源 2. 若要监测质谱和喷雾电流 1. 在 Tune Plus 窗口中, 选择 Setup ( 设置 ) > Syringe Pump ( 注射泵 ) 打开 Syringe Pump 对话框 ( 图 40) 40. Syringe Pump Thermo Scientific LTQ 59

84 3 ESI ESI 2. 在 Flow Control ( 流路控制 ) 下面执行下列步骤 : a. 选择 On 选项 b. 在 Flow Rate (μl/min) ( 流速, μl/min) 框内输入 在 Type ( 类型 ) 下面执行下列步骤 : a. 选择注射器类型 随 LTQ 系列质谱仪提供 500 μl Unimetrics 注射器 如果选择 Hamilton 或者 Unimetrics 选项, Syringe ID (mm)( 注射器内径, mm) 保持不可用 ; 数据系统使用预定义的注射器内径 如果选择 Other ( 其他 ) 选项, Syringe ID (mm) 框可以使用, Volume (μl)( 体积, μl) 列表不可用 b. 执行下列操作之一 : 4. 单击 OK 对于 Hamilton 或 Unimetrics 注射器, 在 Volume (μl) 列表中选择注射器的体积 对于另一种注射器, 在 Syringe ID (mm) 框内输入注射器的内径 注射泵启动 或者, 使用 On/Off ( 开 / 关 ) 注射泵按钮 在开始下一步骤之前, 确保按照第 59 页的 若要将校正溶液注入离子源 的说明已经设置注射泵注入 ESI 校正混合溶液 On Standby 1. 在 Tune Plus 窗口中, 点击 On/Standby ( 开机 / 待机 ) 按钮 On ( 开机 ) 模式 打开质谱仪之后, 它开始扫描, 氮气流进入 ESI 离子源, 高压被应用到 ESI 离子源, 一个实时质谱图显示出现在 Tune ( 调谐 ) 窗口的 Spectrum ( 质谱 ) 视图内 有关质谱图信息, 参阅数据系统 Help ( 帮助 ) 内的 Spectrum View ( 质谱视图 ) 2. 单击 Display Spectrum View ( 显示质谱视图 ) 按钮 3. 观察校正溶液中单电荷离子的质谱图 ( 第 61 页到第 63 页的图 41 图 42 和图 43) 离子如下 : 咖啡因 :m/z 195 用于 LXQ 和 LTQ XL;m/z 和 195 用于 Velos Pro MRFA:m/z 524 Ultramark 1621:m/z 和 LTQ Thermo Scientific

85 3 ESI ESI 41. LTQ XL Ultramark IT=0.093 NL=1.48E9 MRFA Thermo Scientific LTQ 61

86 3 ESI ESI 42. Velos Pro N- 62 LTQ Thermo Scientific

87 3 ESI ESI 43. Velos Pro Ultramark MRFA 4. 在 Spectrum 视图的顶端, 检查电离时间 (IT) 和归一化水平 (NL) 的值 ( 第 61 页的图 41) 5. 选择 Setup > ESI Source 6. 检查 Spray Current ( 喷雾电流 ) 读回 7. 观察 Spectrum 视图中 NL 和 IT 的值 当校正溶液注入, 且读回值有波动时, 可考虑下列有关离子流信号的问题 : 信号出现了吗? 信号是否稳定, 每次扫描之间的误差是否小于 15%? 为了帮助信号稳定, 可以使用诊断工具 在 Tune Plus 中, 选择 Diagnostics ( 诊断 ) > Diagnostics ( 诊断 ) 在 Tools ( 工具 ) 列表中, 选择 System Evaluation ( 系统评估 ), 然后单击 API Stability Evaluation (API 稳定性评估 ) 复选框 如果在步骤 7 的问题中回答是 是, 那么质谱仪正在正确地运行 Thermo Scientific LTQ 63

88 3 ESI ESI 如果任何一个问题的答案是 否, 那么尝试下面的解决措施 : 确保 ESI 探针上的熔融石英样品管没有超出 ESI 探针尖端 有关插入熔融石英样品管的说明, 参阅 LTQ Series Hardware Manual (LTQ 系列硬件手册 ) 确保离子传输管的入口干净无阻塞 确保进入探针的溶液没有气泡, 管线和接头部分没有泄漏 确保鞘气流速为 5-8 units 如果已经证实质谱仪在 ESI 模式下正确运行, 现在可以开始调谐和校正质谱仪 保持质谱仪现有状态, 转到下一个主题, 在 ESI 模式下自动调谐质谱仪 ESI 为了优化重要参数, 在 ESI 模式下自动调谐 LTQ 系列质谱仪 ESI 1. 在 Tune Plus 窗口中, 单击 Tune 按钮打开 Tune 对话框 ( 图 44) 44. Tune Automatic 2. 在 What to Optimize On ( 优化基础 ) 下面选择 Mass (m/z)( 质量数, m/z) 选项 3. 若要优化 ESI 校正溶液质谱图中某个特定峰的离子传输, 例如, 输入 到 Mass (m/z) 框内 质谱仪优化位于 m/z 的峰的调谐 但是, 可以对 ESI 校正溶液质谱图中的任何峰进行调谐优化 4. 单击 Start ( 开始 ) 64 LTQ Thermo Scientific

89 3 ESI ESI 一个信息出现 : Please ensure that the 500 microliter syringe is full. ( 确保 500 微升注射器充满 ) 5. 确保注射器至少包含 450 μl 校正溶液 若要制备 ESI 的校正溶液, 遵守下列步骤 : 对于 LXQ 和 LTQ XL, 参阅第 122 页的 为 ESI 模式制备普通质量数范围校正溶液 对于 Velos Pro, 参阅第 128 页的 为 ESI 模式制备普通质量数范围校正溶液 6. 单击 OK 7. 在 Tune Plus 窗口中单击 Graph View ( 图形视图 ) 按钮 8. 观察 Tune Plus 窗口和 Tune 对话框 45. 当自动调谐进行时, 质谱仪在 Tune Plus 窗口的 Spectrum 和 Graph ( 图形 ) 视图中显示各种调整的结果, 在 Tune 对话框的 Status ( 状态 ) 下面显示不同信息 图 45 显示 Velos Pro 质谱 Tune Plus Tune Velos Pro m/z Thermo Scientific LTQ 65

90 3 ESI ESI Tune 对话框的 Status 框内的 Optimization Complete ( 优化完成 ) 信息应该显示信号的正增长 9. 在自动调谐结束之后, 选择 Setup > ESI Source 10. 观察 ESI 离子源的调谐后设置 11. 选择 Setup ( 设置 ) > Ion Optics ( 离子光学 ) 12. 观察离子光学的调谐后设置 这样就完成了采用校正溶液在 ESI 模式下的调谐过程 ESI 可以保存针对某个分析物和溶剂流速的特定调谐方法中刚设置的参数 恢复调谐方法并将其用作对另一个待测物或不同流速下优化质谱仪的起点 必须在质谱仪打开时保存调谐方法 ESI 1. 在 Tune Plus 窗口中单击 Save ( 保存 ) 按钮 2. 浏览至 drive:\thermo\instruments\ltq\methods 文件夹 3. 在 File Name ( 文件名 ) 框内输入名称, 例如 ESImyTune 以识别调谐方法 4. 单击 Save 66 LTQ Thermo Scientific

91 3 ESI 若要在高质量数范围内校正质谱仪, 参阅附录 C, 高质量数范围校正. 1. 在 Tune Plus 窗口中, 单击 Calibrate ( 校正 ) 按钮打开 Calibrate 对话框 ( 图 46) 46. Calibrate Automatic 2. 当校正完成时指定仪器状态 : 在校正之后若要使质谱仪切换到 Standby 模式, 单击 Set Instrument to Standby when Finished ( 完成时将仪器设置为待机 ) 复选框 在校正之后若要使质谱仪保持 On 模式, 清除 Set Instrument to Standby when Finished 复选框 3. 单击 Start 一个信息出现 : Please ensure that the 500 microliter syringe is full. ( 确保 500 微升注射器充满 ) 4. 确保注射器至少包含 450 μl 校正溶液 若要制备 ESI 的校正溶液, 遵守下列步骤 : 对于 LXQ 和 LTQ XL, 参阅第 122 页的 为 ESI 模式制备普通质量数范围校正溶液 对于 Velos Pro, 参阅第 128 页的 为 ESI 模式制备普通质量数范围校正溶液 5. 单击 OK Thermo Scientific LTQ 67

92 3 ESI 6. 观察 Tune Plus 窗口和 Calibrate 对话框 47. 当自动校正进行时, 测试结果出现在 Spectrum 和 Graph 视图中, 信息出现在 Calibrate 对话框的 Status 框内 ( 图 47) LTQ XL Tune Plus Calibrate 自动校正程序一般需要 分钟 在校正程序结束后, 全扫描 ESI 质谱出现在 Spectrum 视图中 ( 第 68 页的图 47) 如果校正条目成功, 质谱仪自动将新校正值自动保存到硬盘驱动上的主校正文件 如果某个校正条目失败, 在确认喷雾稳定, 溶液流速足够之后尝试再次校正, 而且校正溶液中的所有离子都出现, 并且具有足够的信噪比 使用半自动校正页面校正失败的特定条目 在执行自动校正之后, 绿色打勾 红色 X 记号, 或者两者出现在 Calibration ( 校正 ) 对话框的 Semi-Automatic ( 半自动 ) 页面的结果列中 绿色打勾表示一个成功的校正, 红色 X 记号表示对应条目的失败校正 其他信息可参阅 Calibration 对话框底部的 Status 框 如果重复失败发生, 考虑清除 ZoomScan Mode (ZoomScan 模式 ) 选项 68 LTQ Thermo Scientific

93 3 ESI 在所有校正条目成功后, 质谱仪就得到了正确调谐和校正, 可以进行低流速实验 一次成功的校正显示下列正确质量数的校正离子的合适的强度 : 对于 LXQ 和 LTQ XL:m/z 和 1822 对于 Velos Pro:m/z 和 1822 在许多情况下, 如果这些离子的强度足够, 则特定分析物的精细调谐没有必要 若要在高质量数范围内校正质谱仪, 参阅附录 C, 高质量数范围校正. 在利用被分析物调谐之前, 必须根据第 8 章, 在调谐和校正之后清洁质谱仪 的说明清洁质谱仪 如果计划在高流速 ESI 模式下运行分析样品 ( 使用流速 μl/min), 利用第 71 页的第 4 章, 在 ESI 模式下使用被分析物调谐 内的步骤进一步优化调谐 Thermo Scientific LTQ 69

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95 4 ESI 本章说明如何在 ESI 模式下使用被分析物调谐 LTQ 系列质谱仪 自动程序优化质谱仪对于特定被分析物的灵敏度 可以经常使用每个仪器类型的自定义调谐方法, 无需进一步调谐质谱仪, 因为这些方法已经为一系列应用进行了优化 在 ESI 模式下设置高流速进样的入口 在 ESI 模式下设置质谱仪以利用被分析物进行调谐 自动调谐质谱仪 保存 ESI 调谐方法 下列质谱仪参数对于 ESI 模式下的信号质量具有最大影响 : 离子传输管电压 ( 只适用于 LXQ 和 LTQ XL) 电喷雾电压 Tube lens 电压 ( 只适用于 LXQ 和 LTQ XL) 加热离子传输管温度 ( 电压 ) API 气体流速 S-lens rf 水平 ( 只适用于 Velos Pro) 这些参数设置取决于溶剂流速和目标物的组成 通常, 无论何时因为某些特定的应用而更改了溶剂流速条件, 就需要对质谱仪进行精细调谐 在这个程序中, 使用低流速调谐方法 ( 或者使用直接进样为被分析物创建的调谐文件 ) 作为地点, 然后使用自动程序进一步优化参数 自动程序调整应用到离子光学的电压, 直到被分析物的离子传输最大化 基于实验的 LC 流速, 指定下列调谐参数值 : 质谱仪的鞘气压力 辅助气压力和吹扫气压力 ;ESI 喷针 ( 或者 喷雾 ) 电压 ; 离子传输管温度 ; 探针位置 第 11 页的表 3 列出推荐的调谐参数, 除了 ESI 喷针电压和探针位置 自动调谐设置那些未提及的参数值 离子传输管被加热以使传输到质谱仪的离子达到最多 仅对于 ESI, 设置离子传输管温度时要与溶液流速成正比 参阅第 11 页的表 3 了解设置 ESI 模式下操作参数的说明 Thermo Scientific LTQ 71

96 4 ESI ESI 如果在小于 10 μl/min 的流速下进行实验, 则可以获得结果而无需采用特殊被分析物优化质谱仪, 参阅第 5 章, 采用 Tune Plus 采集 ESI 样品数据 了解采集样品数据的说明 在被分析物的优化调谐之前, 确保在最近三个月以内已经校正质谱仪 如果系统需要校正, 遵守第 3 章, 在 ESI 模式下自动调谐和校正 内的步骤 如果修改调谐参数, 而切换到另一个离子源探针之前没有保存这些参数, 则这些修改都会丢失 另外, 当从一个离子源探针切换到另一个时, Tune Plus 应用程序自动为新安装的离子源探针载入最近保存的调谐值, 并覆盖之前安装的探针的调谐值 ESI 本部分说明如何设置 LTQ 系列质谱仪, 以利用注射泵将样品溶液注入来自 LC 泵的溶剂流路 图 48 显示采用高流速进样的管线连接 48. LC/ESI/MS LC 3 LC T LC 2 1 LC T LC T 若要连接入口管线进行高流速进样分析, 使用表 8 列出的部件, 这些部件都在仪器附件套件中 72 LTQ Thermo Scientific

97 4 ESI ESI 8. 若要配置从注射泵向 LC 泵溶剂液流引入样品的 ESI 模式管线连接, 遵守这些程序 : 设置注射泵 高流速进样的管线连接 接地两通 (ESI 模式 ) LC 三通 LC 两通 PEEK 手拧接头和套圈或者不锈钢接头和套圈, 用于圆锥形 接收端口和 1/16 in. OD 管 : PEEK 套圈 PEEK 接头 不锈钢螺母 不锈钢套圈 红色 PEEK 管 (0.005 in. ID, 1/16 in. OD) Teflon 管或进样口填充物 注射器针会刺破皮肤 处理时请小心 1. 在干净的 500 μl Unimetrics 注射器内加入 100 pg/μl 利血平溶液或者被分析物 若要制备利血平调谐溶液, 遵守下列步骤 : 对于 LXQ 和 LTQ XL, 参阅第 125 页的 制备 ESI 和 APCI 模式下的利血平调谐和样品溶液 对于 Velos Pro, 参阅第 131 页的 制备 ESI 和 APCI 模式下的利血平调谐和样品溶液 2. 固定注射器活塞, 将注射器针尖小心插入带有手拧接头和连接 ( 黑色 ) LC 两通的套圈的 4 cm (1.5 in.) Teflon 管的末端 ( 图 49) Thermo Scientific LTQ 73

98 4 ESI ESI 49. LC Teflon 3. 将注射器装入注射泵的注射器架中 4. 使用一个手拧接头和套圈连接红色 PEEK 管的进样管线, 这个 PEEK 管位于 LC 两通和由离子源的接地杆支撑的接地两通之间 ( 第 57 页的图 38) 5. 在按压注射泵手柄上的蓝色释放按钮时, 压下手柄, 直到它刚好接触到注射器活塞 若要高流速进样, 遵守下列程序, 将注射泵和 LC 泵的溶剂流路连接到离子源 : 1. 若要将注射器连接至 LC 的 T 形三通 2. 若要将 LC 三通连接到转向 / 进样阀 3. 第 76 页的若要将 LC 泵连接到转向 / 进样阀 4. 第 76 页的若要将转向 / 进样阀连接到废液容器 5. 第 77 页的若要将 LC 三通连接到接地两通 6. 第 78 页的若要将接地两通连接到 ESI 探针样品入口 LC T 1. 设置注射泵 ( 参阅第 73 页 ) 2. 使用一个手拧接头和一个套圈, 将红色 PEEK 进样管连接到 LC 两通 ( 已连接至注射器 ) 的另一端 3. 使用一个手拧接头和一个套圈, 将红色 PEEK 进样管的另一端连接到 LC 的 T 形三通 图 50 显示将 LC 两通连接到 T 形三通所需的接头 74 LTQ Thermo Scientific

99 4 ESI ESI 50. LC LC PEEK LC LC / 1. 使用一个手拧接头和一个套圈, 将长度适中的红色 PEEK 管连接到转向 / 进样阀的 3 号端口 或者, 利用不锈钢螺母和套圈连接此管 2. 使用一个手拧接头和一个套圈, 将红色 PEEK 管的另一端连接到 LC 三通的自由端 ( 图 51 和图 52) 51. / LC T 3 LC LC T 3 LC Thermo Scientific LTQ 75

100 4 ESI ESI 52. LC / PEEK LC LC LC / 1. 使用一个手拧接头和一个套圈, 将长度适中的红色 PEEK 管连接到转向 / 进样阀的 2 号端口 ( 第 75 页的图 51) 2. 使用适当的接头和套圈, 将管另一端连接到 LC 系统的出口 / 1. 使用一个手拧接头和一个套圈, 将长度适中的红色 PEEK 管连接到转向 / 进样阀的 1 号端口 ( 第 75 页的图 51) 2. 将此管的另一端插入适当的废液容器 76 LTQ Thermo Scientific

101 4 ESI ESI LC 1. 使用一个手拧接头和一个套圈, 将长度适中的红色 PEEK 管一端连接到 LC 的 T 形三通 ( 图 54) 接地两通滑入离子源的接地杆, 参阅图 53 有关将接地两通连接到 ESI 探针样品入口的说明, 参阅 LTQ Series Hardware Manual (LTQ 系列硬件手册 ) 图 55 显示完整连接 53. LC ESI PEEK 2. 使用一个手拧接头和套圈将此管的另一端连接到接地两通上, 由 API 离子源的接地杆支撑这个接地两通 ( 第 77 页的图 53) 54. ESI/MS 3 LC T LC 2 1 LC T LC T Thermo Scientific LTQ 77

102 4 ESI ESI ESI 有关将 PEEK 安全套管和石英样品管从接地两通连接到 ESI 探针样品入口 ( 图 55) 的说明, 参阅 LTQ Series Hardware Manual 55. ESI ESI 可以使用高溶剂流速在 ESI 模式下调谐 LTQ 系列质谱仪 :100 pg/μl 利血平或被分析物溶液 若要制备 100 pg/μl 利血平调谐溶液, 遵守下列步骤 : 对于 LXQ 和 LTQ XL, 参阅第 125 页的 制备 ESI 和 APCI 模式下的利血平调谐和样品溶液 对于 Velos Pro, 参阅第 131 页的 制备 ESI 和 APCI 模式下的利血平调谐和样品溶液 若要设置质谱仪以在实验的溶剂流速下进行调谐, 遵守这些步骤 : 1. 若要打开已保存的调谐方法 2. 若要定义被分析物的扫描参数 扫描类型和扫描极性 3. 第 80 页的若要设置数据类型和离子极性模式 1. 打开 Tune Plus 窗口 ( 参阅第 28 页 ) On Standby 2. 单击 On/Standby ( 开机 / 待机 ) 按钮选择 On ( 开机 ) 模式 质谱仪将高压应用到 ESI 探针上, 开始扫描 实时显示出现在 Spectrum ( 质谱 ) 视图中 3. 打开 ESImyTune, 或者从第 3 章已经保存的方法的文件名, 如下 : a. 单击 Open ( 打开 ) 按钮 b. 浏览至 drive:\thermo\instruments\ltq\methods 文件夹, 然后选择已保存的调谐方法 78 LTQ Thermo Scientific

103 4 ESI ESI c. 点击 Open Tune Plus 将调谐方法参数下载到质谱仪, Tune Plus 窗口中的标题栏列出当前调谐方法的名称, 例如 C:\Thermo\Instruments\LTQ\ESImyTune 1. 在 Tune Plus 窗口中, 单击 Define Scan ( 定义扫描 ) 按钮显示 Define Scan 对话框 56. 图 56 显示利用选择离子监测 (SIM) 扫描类型采集利血平数据的典型设置 ESI SIM Define Scan 2. 在 Scan Description ( 扫描说明 ) 下面执行下列步骤 : 在 Mass Range ( 质量数范围 ) 列表中选择 Normal ( 普通 ) 在 Scan Rate ( 扫描速率 ) 列表中选择 Normal 在 Scan Type ( 扫描类型 ) 列表中选择 SIM 3. 在 Scan Time ( 扫描时间 ) 下面执行下列步骤 : 在 Microscans ( 微扫描 ) 框中输入 2 在 Max. Inject Time (ms) ( 最大进样时间, ms) 框内输入 在 Source Fragmentation ( 离子源裂解 ) 下面, 清除 On ( 开 ) 复选框 选择 Source Fragmentation 复选框允许离子源内发生碰撞诱导解离 由于离子源内的碰撞诱导解离特异性一般, 因此很少使用 Thermo Scientific LTQ 79

104 4 ESI 5. 在 Scan Ranges ( 扫描范围 ) 下面执行下列步骤 : a. 在 Input ( 输入 ) 列表中选择 From/To ( 从 / 到 ) b. 在 Center Mass (m/z) ( 中心质量数, m/z) 列中, 输入被分析物的质量数, 以设置扫描范围的中心质量数 如果采用利血平调谐, 输入 作为中心质量数 c. 在 Width (m/z) ( 宽度, m/z) 列中输入 确认扫描设置 : 如果采用利血平调谐, 确认 Define Scan 对话框内的设置匹配第 79 页的图 56 内的显示值 如果采用另一个被分析物调谐, 确认 Define Scan 对话框内的设置适用于被分析物 7. 单击 OK ( 确定 ) Centroid Profile 1. 在 Tune Plus 窗口中, 点击 Centroid/Profile ( 棒状图 / 轮廓图 ) 按钮以选择 Profile ( 轮廓图 ) 数据类型 Positive Negative 2. 单击 Positive/Negative ( 正 / 负 ) 按钮以选择 positive ( 正 ) 离子极性模式 在正离子极性模式下, 质谱仪扫描正离子 对于基本化合物, 例如胺类, 低 ph 溶液有利于正离子的形成 在低 ph 溶液中, 利血平可以形成正离子 [(M + H) + m/z = 609] 这样就在 ESI 模式下利用被分析物完成了质谱仪设置 若要在指定溶剂流速下最大化被分析物的离子传输, 运行自动调谐程序并利用目标质荷比优化 在利用特定质荷比优化 LTQ 系列质谱仪的调谐, 以及为被分析物创建调谐方法之前, 最好先校正质谱仪的质量精度 自动校正程序一般需要 20 分钟 或者, 最好在一定时间内, 注入 ESI 校正混合物 ( 或者具有质谱数据的被分析物 ), 并检查质谱图的质量精度 有关校正质量精度的更多信息, 参阅第 67 页的 在普通质量数范围内自动校正 80 LTQ Thermo Scientific

105 4 ESI 以下为影响 ESI 模式操作下信号品质的最重要参数 : ( 对于 LXQ 和 LTQ XL) 电喷雾电压 离子传输管温度和电压 tube lens 电压 气体和溶液流速 ( 对于 Velos Pro) 电喷雾电压 离子传输管温度和电压 S-lens rf 水平 气体和溶液流速 影响长期性能的最重要参数是 MP00 MP0 和前方透镜电压之间的电压梯度 自动调谐确保足够的电压梯度, 这样仪器可长期保持良好的运行 如果任意参数改变, 必须重新优化质谱仪参数 使用 Semi-Automatic ( 半自动 ) 调谐程序调谐质谱仪的单个参数 下列程序采用 100 pg/ml 利血平溶液, 在 0.4 μm/min 流速下使用 m/z 的利血平峰自动优化 LTQ 系列 可以使用任何适合 ESI 模式分析的样品溶液代替利血平溶液 有关设置合适的流速和温度的说明, 参阅第 11 页的表 3 1. 在 Tune Plus 窗口中, 单击 Tune ( 调谐 ) 按钮打开 Tune 对话框 ( 图 57) 57. Tune Automatic 2. 在 What to Optimize On ( 优化基础 ) 下面选择 Mass (m/z) ( 质量数, m/z) 选项 3. 在 Mass (m/z) 框内输入 ( 或者被分析物的质量数 ) Thermo Scientific LTQ 81

106 4 ESI 4. 单击 Divert/Inject Valve ( 转向 / 进样阀 ) 按钮显示 Divert/Inject Valve 对话框 ( 图 58) 58. Divert/Inject Valve 5. 选择 Load Detector ( 上样检测器 ) 选项, 然后单击 Close ( 关闭 ) 当转向 / 进样阀处于 Detector ( 检测器 ) 位置, LC 泵的溶剂流路分别通过端口 2 和 3 进入和流出转向 / 进样阀 ( 第 75 页的图 51) 端口 3 连接到离子源 6. 在 Tune 对话框中启动自动调谐程序, 如下 : a. 单击 Start ( 开始 ) 一个信息出现 : Please ensure that the 500 microliter syringe is full. ( 确保 500 微升注射器充满 ) b. 确保注射器至少包含了 450 μl 的 100 pg/μl 利血平调谐溶液或者被分析物 c. 单击 OK ( 确定 ) 7. 在 Tune Plus 窗口中单击 Graph View ( 图形视图 ) 按钮 8. 观察 Tune Plus 窗口和 Tune 对话框 当自动调谐进行时, 质谱仪在 Tune Plus 窗口的 Spectrum 和 Graph ( 图形 ) 视图中显示各种调整的结果, 在 Tune 对话框的 Status ( 状态 ) 下面显示不同信息 检查确认 Tune Plus 窗口与图 59 中显示的窗口类似 82 LTQ Thermo Scientific

107 4 ESI 59. ESI Velos Pro Tune Plus Tune 这样完成了 ESI 模式下采用利血平 ( 或者被分析物 ) 的质谱仪的调谐 Thermo Scientific LTQ 83

108 4 ESI ESI ESI 必须在质谱仪打开时保存调谐方法 ESI 1. 在 Tune Plus 窗口中单击 Save ( 保存 ) 按钮 2. 浏览至 drive:\thermo\instruments\ltq\methods 文件夹 3. 在 File Name ( 文件名 ) 框中输入 reserpine ( 利血平 )( 或被分析物的名称 ) 4. 单击 Save 如果使用利血平调谐质谱仪, 则按照第 8 章, 在调谐和校正之后清洁质谱仪 的说明清洁质谱仪 如果按照第 5 章, 采用 Tune Plus 采集 ESI 样品数据 的说明使用被分析物调谐, 则可以准备采集数据 84 LTQ Thermo Scientific

109 5 Tune Plus ESI 本章说明如何优化 MS/MS 实验的分离宽度和碰撞能量, 以及如何在选择离子监测 (SIM) 模式下采集样品数据 另外, 本章还说明如何设置定量环进样到 LC 泵溶剂流路的入口 出于演示目的, 本章内的程序采用 1 μg/μl 的利血平溶液 可以使用任何适合 ESI 模式分析的被分析物 在开始样品溶液分析之前, 确认已经在 ESI 模式下调谐和校正质谱仪, 并且已经通过使用合适的流速为某个特定待测物创建和保存调谐方法 设置以采集全扫描 MS/MS 数据 在 ESI 模式下设置流动注射分析的入口 在 SIM 扫描模式下采集 ESI 数据 MS/MS 在执行全扫描 MS/MS 实验之前, 优化分离宽度确保离子的有效分离, 然后优化相对碰撞能量参数以确保母离子的有效裂解 一次特殊分析的相对碰撞能量取决于被分析的样品类型 手动优化碰撞能量或者使用软件提供的自动过程 本部分的信息应用到 ESI 和 APCI 模式 以下步骤为 ESI 模式使用利血平 对于 APCI 模式, 使用合适的被分析物 优化 MS/MS 实验的分离宽度 手动优化 MS/MS 实验的碰撞能量 自动优化 MS/MS 实验的碰撞能量 Thermo Scientific LTQ 85

110 5 Tune Plus ESI MS/MS MS/MS 为了在相同或相似的高流速实验条件下优化被分析物的分离宽度, 设置高流速进样的入口 然后当微调碰撞能量时, 观察被分析物的质谱图 对于该实验以及大多数应用, 使 Activation Q ( 激活 Q) 和 activation time ( 激活时间 ) 参数保留默认值 有关这些参数的详细信息, 参阅数据系统的 Help ( 帮助 ) 1. 设置用于高流速进样的入口 对于 ESI 模式, 参阅第 72 页 对于 APCI 模式, 参阅第 98 页 On Centroid Standby Profile 2. 打开 Tune Plus 窗口 ( 参阅第 28 页 ) 3. 单击 On/Standby ( 开机 / 待机 ) 按钮选择 On ( 开机 ) 模式 4. 单击 Centroid/Profile ( 棒状图 / 轮廓图 ) 按钮选择 centroid ( 棒状图 ) 数据类型 5. 确保定义了扫描参数以采集利血平 ( 或被分析物 ) 的全扫描 MS/MS 数据, 如下 : a. 单击 Define Scan ( 定义扫描 ) 按钮显示 Define Scan 对话框 ( 图 60) 60. 初始设置优化利血平 MS/MS 实验的分离宽度 Define Scan b. 如果注射利血平, 确认对话框内的值匹配图 60 内的显示值 如果注射其他物质, 确保 Parent Mass (m/z) ( 母离子质量数, m/z) 包含合适的值, 并且扫描范围也合适 c. 在 MS n 设置下, 在 Isolation Width (m/z) ( 分离宽度, m/z) 列中, 从相对比较大的宽度 2.0 Da 开始 d. 在输入值以后, 单击 Apply ( 应用 ) 并保持 Define Scan 对话框打开 6. 打开 LC 泵并指定 0.4 ml/min 的流速 7. 确认入口管线连接没有泄漏 86 LTQ Thermo Scientific

111 5 Tune Plus ESI MS/MS 8. 选择 Setup ( 设置 ) > Syringe Pump ( 注射泵 ) 打开 Syringe Pump 对话框 ( 图 61) 61. Syringe Pump 9. 打开注射泵并设置注射流速 5 μl/min 如下 : a. 在 Flow Control ( 流路控制 ) 下, 选择 On ( 开 ) 选项 b. 在 Flow Rate (μl/min)( 流速, μl/min) 框内输入 5.00 c. 在 Type ( 类型 ) 下面, 选择注射器类型, 执行下列其中一项操作 : 对于 Hamilton 或 Unimetrics 注射器, 在 Volume (μl)( 体积, μl) 列表中选择注射器的体积 对于另一种注射器, 在 Syringe ID (mm)( 注射器内径, mm) 框内输入注射器的内径 d. 单击 Apply 应用注射器参数并启动注射泵 10. 保持 Syringe Pump 对话框打开并将其移动到屏幕顶部 11. 按照如下步骤优化分离宽度 : a. 在 Tune Plus 窗口中, 观察利血平母离子的质谱图, m/z 609.2, 或者被分析物的母离子 确保 NL 和 IT 的读回值相对稳定 b. 在 Define Scan 对话框中, 在 MS n Settings (MS n 设置 ) 下, 在 Isolation Width (m/z) 列内输入 2.0 c. 点击 Apply Isolation Width 的优化值是最小 m/z 宽度 ( 仪器最小宽度 = m/z 0.1), 只为目标离子提供最大强度的质谱图 当获得最佳 Isolation Width 时, NL 和 IT 值很稳定, 母离子的质量峰处于最大强度, 而且很对称 低于最佳值的 Isolation Width 值导致 NL 读数的显著下降 灵敏度的显著下降表示离子没有得到有效分离 d. 重复步骤 11a 和步骤 11b, 输入更小的分离宽度值 持续观察母离子质谱图的强度, 确保每次改变 Isolation Width 设置时, NL 和 IT 值保持稳定 Isolation Width 设置一般为 m/z 1 3 在优化分离宽度之后, 通过略微增加分离宽度值补偿调谐稳定性的细微变化 调整不应该超过 m/z = 1 Thermo Scientific LTQ 87

112 5 Tune Plus ESI MS/MS MS/MS 1. 在 Tune Plus 窗口中, 单击 Define Scan 按钮显示 Define Scan 对话框 ( 图 62) 2. 在 MS n 设置下, 在 Normalized Collision Energy ( 归一化碰撞能量 ) 列内输入 点击 Apply 4. 在 Tune Plus 窗口中观察利血平 ( 或者被分析物 ) 子离子的质谱图 5. 如有必要, 以 5% 的增幅增加 Normalized Collision Energy 的值, 直到母离子强度小于子离子强度的 5% 图 62 显示采集全扫描 MS/MS 数据的典型设置 62. 每次修改 Normalized Collision Energy 列内值之后, 必须单击 Apply 执行修改 Define Scan MS/MS 1. 识别被分析物子离子的 m/z 2. 在 Tune Plus 窗口中, 单击 Tune ( 调谐 ) 按钮打开 Tune 对话框 3. 单击 Collision Energy ( 碰撞能量 ) 选项卡 ( 图 63) 88 LTQ Thermo Scientific

113 5 Tune Plus ESI MS/MS 63. Tune Collision Energy 4. 在 What to Optimize On ( 优化基础 ) 下面选择 Product Ion Mass (m/z)( 子离子质量数, m/z) 选项和类型 或者被分析物的子离子之一 质谱仪可以自动优化被分析物的分析所需的碰撞能量, 优化时采用其中某个子离子的 m/z 值 5. 单击 Start ( 开始 ) 一个信息出现 : Please ensure that the 500 microliter syringe is full. ( 确保 500 微升注射器充满 ) 6. 确保注射器至少包含了 450 μl 的 100 pg/μl 利血平调谐溶液或者被分析物 7. 单击 OK ( 确定 ) 8. 检查确认 Tune Plus 窗口与图 64 中显示的窗口类似 Thermo Scientific LTQ 89

114 5 Tune Plus ESI MS/MS 64. Tune Plus Tune Collision Energy 9. 在 Tune Plus 的 Spectrum ( 质谱 ) 视图中, 观察利血平或被分析物的全扫描 MS/MS 质谱 在优化碰撞能量之后, Accept Optimized Value ( 接受优化值 ) 对话框打开 ( 图 65) 65. Accept Optimized Value 10. 单击 Accept ( 接受 ) 新值出现在 Define Scan 对话框内 11. 在 Syringe Pump 对话框内, 选择 Off ( 关 ) 选项, 并单击 Apply 关闭注射泵 单击 OK 关闭对话框 90 LTQ Thermo Scientific

115 5 Tune Plus ESI ESI 12. 单击 Cancel ( 取消 ) 在优化相对碰撞能量之后, 质谱仪即可采集被分析物的 MS/MS 数据 ESI 这个部分提供如何通过定量环进样 ( 流动注射分析 ) 将样品引入 LC 泵的溶剂流路 1. 将环进样口连接到转向 / 进样阀的端口 5 ( 图 66) 66. / 3 3 LC 将预定体积的样品定量环连接至端口 1 和 4 3. 将 LC 泵连接到转向 / 进样阀的端口 2, 如下 : 使用适当的接头和套圈, 将长度适中的红色 PEEK 管连接到 LC 泵的出口 若要产生稳定的溶剂液流, Accela 1250 泵需要至少 40 bar (580 psi) 的背压 若要连接 LC 泵, 使用长度适中 内径为 in. 的 PEEK 软管以施加 40 bar (580 psi) 的背压, 或在 LC 泵出口和转向 / 进样阀之间连接在线的背压调节器 使用一个手拧接头和一个套圈, 将此管的另一端连接到端口 2 4. 对于 ESI 探针, 使用两个手拧接头和两个套圈在转向 / 进样阀的端口 3 和接地两通之间连接一个适当长度的红色 PEEK 管 ( 图 67) Thermo Scientific LTQ 91

116 5 Tune Plus ESI ESI 5. 若要将接地两通的另一端连接到 ESI 探针样品入口 ( 参阅第 35 页的 安装 ESI 或 HESI-II 探针 ) 67. LC ESI LC Load Inject Detector Waste 6. 将转向 / 进样阀连接到废液容器, 如下 : 使用一个手拧接头和一个套圈, 将长度适中的红色 PEEK 管的一端连接到端口 6 将此管的另一端连接到适当的废液容器 92 LTQ Thermo Scientific

117 5 Tune Plus ESI SIM ESI SIM ESI 数据系统计算机自动将采集数据保存到硬盘 SIM On Centroid Standby Profile 1. 在 Tune Plus 窗口中, 点击 On/Standby ( 开机 / 待机 ) 按钮以选择 On ( 开机 ) 模式 质谱仪开始扫描, 并将高压应用到 ESI 探针 实时显示出现在 Spectrum 视图中 2. 单击 Centroid/Profile ( 棒状图 / 轮廓图 ) 按钮选择 centroid ( 棒状图 ) 数据类型 3. 确保定义了扫描参数以采集利血平 ( 或被分析物 ) 的 SIM 数据, 如下 : a. 单击 Define Scan 按钮 68. 图 68 显示 Define Scan 对话框的典型设置, 以采集利血平的 SIM 数据 Define Scan SIM b. 确认对话框内的值与图 68 的值匹配, 然后单击 OK 4. 打开 LC 泵并指定 0.4 ml/min 的流速 确保系统无泄漏 Thermo Scientific LTQ 93

118 5 Tune Plus ESI SIM ESI 5. 在 Tune Plus 窗口中单击 Acquire Data ( 采集数据 ) 按钮 图 69 在 Acquire Data 对话框内显示原始数据文件的采集状态 69. Acquire Data 6. 指定采集参数如下 : a. 在 File Name ( 文件名 ) 框中输入 reserpine ( 利血平 )( 或被分析物的名称 ) b. 在 Sample Name ( 样品名 ) 框中输入 reserpine ( 或被分析物的名称 ) c. 在 Comment ( 注释 ) 框中输入对实验的注释 例如, 说明扫描模式 扫描类型 电离模式 样品量或者进样方法 Xcalibur 数据系统包括.raw 数据文件的标题信息注释 还可以将此信息添加到利用 XReport 报告软件创建的报告中 若要打开 XReport 应用程序, 选择 Start ( 开始 ) > Programs ( 程序 ) > Thermo Xcalibur > XReport d. 在 Acquire Time ( 采集时间 ) 下面选择 Continuously ( 连续 ) 选项 ( 采集数据直到停止采集 ) 7. 单击 Start 8. 在数据采集时使 Acquire Data 对话框打开, 然后将对话框移开 9. 在 Tune Plus 窗口中, 单击 Divert/Inject Valve ( 转向 / 进样阀 ) 按钮打开 Divert/Inject Valve 对话框 10. 将样品注入 ESI 源, 一共四次, 如下 : a. 选择 Load Detector ( 上样检测器 ) 选项 当阀门处于 Load ( 上样 ) 位置, LC 泵的溶剂流路绕过样品定量环 b. 利用样品溶液或者 1 pg/μl 的利血平溶液过充满进样口定量环 若要制备利血平调谐溶液, 遵守下列步骤 : 对于 LXQ 和 LTQ XL, 参阅第 125 页的 制备 ESI 和 APCI 模式下的利血平调谐和样品溶液 对于 Velos Pro, 参阅第 131 页的 制备 ESI 和 APCI 模式下的利血平调谐和样品溶液 94 LTQ Thermo Scientific

119 5 Tune Plus ESI SIM ESI c. 选择 Inject Waste ( 进样废液 ) 选项 当阀门处于 Inject ( 进样 ) 位置, LC 泵的溶剂流路将样品定量环内的溶液反冲进入离子源 d. 在 Spectrum 视图中, 观察利血平峰 (m/z 609.2) 或者被分析物的峰 e. 重复步骤 a 到步骤 d 三次 11. 在 Divert/Inject Valve 对话框中单击 Close ( 关闭 ) 12. 在 Acquire Data 对话框中单击 Stop ( 停止 ), 然后单击 Cancel 通过使用 Xcalibur Qual Browser (Xcalibur 定性浏览器 ) 查看.raw 文件内的质谱图和色谱图 图 70 显示包含利血平四次环进样结果的色谱图 ( 左侧 ) 和利血平质谱图 ( 右侧 ) 更多查看采集数据的信息, 参阅 Thermo Xcalibur Qualitative Analysis User Guide (Thermo Xcalibur 定性分析用户手册 ) 或者 Qual Browser Help ( 定性浏览器帮助 ) 若要采集全扫描 MS/MS 数据, 参阅第 85 页的 设置以采集全扫描 MS/MS 数据 70. Qual Browser ESI SIM Thermo Scientific LTQ 95

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121 6 APCI 本章说明如何在 APCI 高流速模式下创建被分析物的调谐方法 在 APCI 模式下设置高流速进样的入口 在 APCI 模式下设置质谱仪以利用被分析物进行调谐 自动调谐质谱仪 保存 APCI 调谐方法 当切换到 APCI 运行时, 无需校正 LTQ 系列质谱仪 可以使用在 ESI 模式下执行成功的自动校正程序获得的校正设置 如果修改调谐参数, 而切换到另一个离子源探针之前没有保存这些参数, 则这些修改都会丢失 另外, 当从一个离子源探针切换到另一个时, Tune Plus 应用程序自动为新安装的离子源探针载入最近保存的调谐值, 并覆盖之前安装的探针的调谐值 下列质谱仪参数对于 APCI 模式下的信号品质具有最大影响 : 电喷雾电压 Tube lens 电压 ( 只适用于 LXQ 和 LTQ XL) 加热离子传输管温度 ( 电压 ) 离子传输管电压 ( 只适用于 LXQ 和 LTQ XL) API 气体流速 S-lens rf 水平 ( 只适用于 Velos Pro) 溶液流速 气化器温度 Thermo Scientific LTQ 97

122 6 APCI APCI 这些程序假定用户非常熟悉 LTQ 系列质谱仪和 Tune Plus 窗口 更多信息参阅数据系统帮助, LTQ Series Getting Connected Guide (LTQ 系列连接手册 ) 以及 LTQ Series Hardware Manual (LTQ 系列硬件手册 ) 在设置入口管线之前, 确保离子源设置为 APCI 模式, 而且已经在 ESI 模式下进行了质谱仪的调谐和校正 本章采用 100 pg/ml 的利血平溶液作为被分析样品 可以使用任何适合 APCI 模式分析的被分析物 APCI 本部分说明如何设置 LTQ 系列质谱仪, 以利用注射泵将样品溶液注入来自 LC 泵的溶剂流路 图 71 显示采用高流速进样的管线连接 第 73 页的表 8 列出高流速进样分析的入口管线部件 71. APCI/MS LC LC T LC T APCI LC T 98 LTQ Thermo Scientific

123 6 APCI APCI 注射器针会刺破皮肤 处理时请小心 1. 在干净的 500 μl Unimetrics 注射器内加入 450 μl 的 100 pg/μl 利血平溶液或者被分析物 若要制备利血平调谐溶液, 遵守下列步骤 : 对于 LXQ 和 LTQ XL, 参阅第 125 页的 制备 ESI 和 APCI 模式下的利血平调谐和样品溶液 对于 Velos Pro, 参阅第 131 页的 制备 ESI 和 APCI 模式下的利血平调谐和样品溶液 为了将交叉污染的可能性降至最低, 重新将注射器插入注射器接头组件中之前, 一定要用干净的无尘纸擦拭针尖 2. 固定注射器活塞, 将注射器针尖小心插入带有手拧接头和连接 ( 黑色 ) LC 两通的套圈的 4 cm (1.5 in.)teflon 管的末端 ( 图 72) 72. LC Teflon 3. 将注射器装入注射泵的注射器架中 4. 从 LC 两通连接一个红色 PEEK 进样线到 LC 三通, 如下 : a. 使用一个手拧接头和一个套圈, 将进样线连接到 LC 两通的自由端 b. 使用一个手拧接头和一个套圈, 将进样线的另一端连接到 LC 三通的一个柱上 图 73 显示 LC 三通的连接 Thermo Scientific LTQ 99

124 6 APCI APCI 73. LC APCI/MS LC / APCI PEEK LC 使用 PEEK 管切割器切割 PEEK 管 使用 PEEK 切割器确保切割处垂直 为了防止增加入口管线的死体积, 确保正确安装 LC 接头 套圈和 PEEK 管 管线连接中的死体积会扩展色谱峰, 并增加残留 5. 使用一个手拧接头和一个套圈, 将长度适中的红色 PEEK 管一端连接到 LC 的 T 形三通 ( 图 73) 6. 使用一个手拧接头和一个套圈, 将 Teflon 管的另一端直接连接到 APCI 探针的样品入口 图 71 显示 LC 三通和 APCI 探针的样品入口之间的连接 切勿将 API 离子源室的接地杆用于 APCI 探针 使用凸边螺钉将接地杆固定在离子源上 在 APCI 模式下运行系统时, 无需取下接地杆 7. 将 LC 泵连接到转向 / 进样阀的端口 2, 如下 : 使用适当的接头和套圈, 将长度适中的管连接到 LC 泵的出口 使用一个手拧接头和一个套圈, 将此管的另一端连接到转向 / 进样阀的端口 2 8. 将转向 / 进样阀连接到废液容器, 如下 : 使用一个手拧接头和一个套圈, 将长度适中的管的一端连接到端口 1 将此管的另一端连接到适当的废液容器 100 LTQ Thermo Scientific

125 6 APCI APCI APCI 可以使用高溶剂流速在 APCI 模式下调谐 LTQ 系列质谱仪 : 利血平或被分析物溶液 若要制备利血平调谐溶液, 遵守下列步骤 : 对于 LXQ 和 LTQ XL, 参阅第 125 页的 制备 ESI 和 APCI 模式下的利血平调谐和样品溶液 对于 Velos Pro, 参阅第 131 页的 制备 ESI 和 APCI 模式下的利血平调谐和样品溶液 若要设置质谱仪以在实验的溶剂流速下进行调谐, 遵守这些程序 : 若要打开具有为 APCI 模式预设条件的已保存调谐方法 若要查看预调谐的 APCI 离子源设置 第 102 页的若要在 APCI 模式下为某个被分析物定义扫描参数 第 103 页的若要设置数据类型和离子极性模式 APCI 1. 打开 Tune Plus 窗口 ( 参阅第 28 页 ) On Standby 2. 单击 On/Standby ( 开机 / 待机 ) 按钮选择 On ( 开机 ) 模式 质谱仪开始扫描, 并将高压应用到 corona 针 实时显示出现在 Spectrum ( 质谱 ) 视图中 3. 打开保存有用于 APCI 模式的工厂默认调谐设置的调谐方法文件, 如下 : a. 在 Tune Plus 窗口中单击 Open ( 打开 ) 按钮 b. 浏览至 drive:\thermo\instruments\ltq\methods 文件夹, 然后选择 Default_APCI.LTQTune 这个文件包括用于 APCI 模式的预设条件 c. 点击 Open Tune Plus 会将调谐方法参数下载到质谱仪 APCI 1. 在 Tune Plus 窗口中, 选择 Setup ( 设置 ) > APCI Source (APCI 离子源 ) 2. 观察设置 3. 单击 OK ( 确定 ) Thermo Scientific LTQ 101

126 6 APCI APCI APCI 1. 在 Tune Plus 窗口中, 单击 Define Scan ( 定义扫描 ) 按钮显示 Define Scan 对话框 ( 图 74) 74. 如果对话框与图 74 中的显示不同, 则显示可能缺少高级设置 如果高级设置不出现, 在 Tune Plus 中选择 ScanMode ( 扫描模式 ) > Advanced Scan Features ( 高级扫描特性 ) Define Scan APCI SIM 2. 在 Scan Description ( 扫描说明 ) 下面执行下列步骤 : 在 Mass Range ( 质量数范围 ) 列表中选择 Normal ( 普通 ) 在 Scan Rate ( 扫描速率 ) 列表中选择 Normal 在 Scan Type ( 扫描类型 ) 列表中选择 SIM 3. 在 Scan Time ( 扫描时间 ) 下面执行下列步骤 : 在 Microscans ( 微扫描 ) 框中输入 2 在 Max. Inject Time (ms)( 最大进样时间, ms) 框内输入 在 Source Fragmentation ( 离子源裂解 ) 下面, 清除 On ( 开 ) 复选框 选择 Source Fragmentation 复选框允许离子源内发生碰撞诱导解离 由于离子源内的碰撞诱导解离特异性一般, 因此很少使用 5. 在 Scan Ranges ( 扫描范围 ) 下面执行下列步骤 : a. 在 Input ( 输入 ) 列表中选择 From/To ( 从 / 到 ) b. 在 Center Mass (m/z)( 中心质量数, m/z) 列中输入被分析物母离子的 m/z, 或者为利血平输入 c. 在 Width (m/z)( 宽度, m/z) 列中输入 确认 Define Scan 对话框中的设置与第 102 页的图 74 中的设置匹配 102 LTQ Thermo Scientific

127 6 APCI 7. 单击 OK ( 确定 ) Centroid Profile Positive Negative 1. 在 Tune Plus 窗口中, 点击 Centroid/Profile ( 棒状图 / 轮廓图 ) 按钮选择 Profile ( 轮廓图 ) 数据类型 2. 单击 Positive/Negative ( 正 / 负 ) 按钮选择 positive ( 正 ) 离子极性模式 这样就在 APCI 模式下设置好了质谱仪, 然后可以利用被分析物进行调谐 在 APCI 模式下自动调谐 LTQ 系列质谱仪以优化第 97 页上列举的参数 以下为影响 APCI 模式操作下信号品质的最重要参数 : ( 对于 LXQ 和 LTQ XL) 放电电流 离子传输管温度和电压 气化室温度 tube lens 电压 气体和溶液流速 ( 对于 Velos Pro) 放电电流 离子传输管温度和电压 气化室温度 S-lens rf 水平 气体和溶液流速 影响长期性能的最重要参数是 MP00 MP0 和前方透镜电压之间的电压梯度 自动调谐确保足够的电压梯度, 这样仪器可长期保持良好的运行 如果任意参数改变, 必须重新优化质谱仪参数 使用 Semi-Automatic ( 半自动 ) 调谐程序调谐质谱仪的单个参数 下列程序采用 100 pg/ml 利血平调谐溶液, 在 0.4 μm/min 流速下使用 m/z 的利血平峰自动优化质谱仪 可以使用任何适合 APCI 模式分析的样品溶液代替利血平溶液 有关设置合适的流速 管温度和气化室温度的指南, 参阅第 11 页的表 4 Thermo Scientific LTQ 103

128 6 APCI 1. 在 Tune Plus 窗口中, 单击 Tune ( 调谐 ) 按钮打开 Tune 对话框 ( 图 75) 75. Tune Automatic 2. 在 What to Optimize On ( 优化基础 ) 下面选择 Mass (m/z)( 质量数, m/z) 选项 3. 在 Mass (m/z) 框内输入 ( 或者被分析物的质量数 ) 4. 单击 Divert/Inject Valve ( 转向 / 进样阀 ) 按钮显示 Divert/Inject 对话框 ( 图 76) 76. Divert/Inject Valve 5. Select the Load Detector ( 上样检测器 ) 选项, 然后单击 Close ( 关闭 ) 当转向 / 进样阀处于 Detector ( 检测器 ) 位置, LC 泵的溶剂流路分别通过端口 2 和 3 进入和流出转向 / 进样阀 ( 第 75 页的图 51) 端口 3 连接到离子源 6. 在 Tune 对话框中启动自动调谐程序, 如下 : a. 单击 Start ( 开始 ) 一个信息出现 : Please ensure that the 500 microliter syringe is full. ( 确保 500 微升注射器充满 ) b. 确保注射器至少包含了 450 μl 的 100 pg/μl 利血平调谐溶液或者被分析物 104 LTQ Thermo Scientific

129 6 APCI 若要制备利血平调谐溶液, 遵守下列步骤 : 对于 LXQ 和 LTQ XL, 参阅第 125 页的 制备 ESI 和 APCI 模式下的利血平调谐和样品溶液 对于 Velos Pro, 参阅第 131 页的 制备 ESI 和 APCI 模式下的利血平调谐和样品溶液 c. 单击 OK ( 确定 ) 7. 在 Tune Plus 窗口中单击 Graph View ( 图形视图 ) 按钮 8. 观察 Tune Plus 窗口和 Tune 对话框 当自动调谐进行时, 质谱仪在 Tune Plus 窗口的 Spectrum ( 质谱 ) 和 Graph ( 图形 ) 视图中显示各种调整的结果, 在 Tune 对话框的 Status ( 状态 ) 下面显示不同信息 77. 检查确认 Tune Plus 窗口与图 77 中显示的窗口类似 APCI Velos Pro Tune Plus Tune 9. 在自动调谐过程结束后, 选择 Setup > APCI Source 观察 APCI 离子源的调谐后设置 Thermo Scientific LTQ 105

130 6 APCI APCI 10. 选择 Setup ( 设置 ) > Ion Optics ( 离子光学 ) 观察离子光学的调谐后设置 这样完成了 APCI 模式下采用利血平 ( 或者被分析物 ) 的质谱仪的调谐 APCI 可以保存针对某个分析物和溶剂流速的特定调谐方法中刚设置的参数 恢复调谐方法并将其用作对另一个待测物或不同流速下优化质谱仪的起点 必须在质谱仪打开时保存调谐方法 APCI 1. 在 Tune Plus 窗口中单击 Save ( 保存 ) 按钮 2. 浏览至 drive:\thermo\instruments\ltq\methods 文件夹 3. 在 File Name ( 文件名 ) 框内输入名称, 例如 APCImyTune 以识别调谐方法 4. 单击 Save 如果使用利血平调谐质谱仪, 则按照第 8 章, 在调谐和校正之后清洁质谱仪 的说明清洁质谱仪 如果按照第 7 章, 采用 Tune Plus 采集 APCI 样品数据 的说明使用被分析物调谐, 则可以准备采集数据 106 LTQ Thermo Scientific

131 7 Tune Plus APCI 本章说明如何在 APCI 模式下设置入口进行定量环进样, 如何在选择离子监测 (SIM) 模式下采集样品数据 出于演示目的, 本章内的程序采用 1 pg/ml 的利血平溶液 可以使用任何适合 APCI 模式分析的被分析物 如果没有适合 APCI 模式的样品, 使用仪器化学品包中提供的利血平制备 1 pg/ml 的利血平溶液, 说明如下 : 对于 LXQ 和 LTQ XL, 参阅第 125 页的 制备 ESI 和 APCI 模式下的利血平调谐和样品溶液 对于 Velos Pro, 参阅第 131 页的 制备 ESI 和 APCI 模式下的利血平调谐和样品溶液 在开始样品溶液分析之前, 确认已经在 ESI 模式下调谐和校正质谱仪, 并且已经通过使用合适的流速为某个特定待测物创建和保存调谐方法 在执行全扫描 MS/MS 实验之前, 遵守第 85 页的 设置以采集全扫描 MS/MS 数据 中的步骤 在 APCI 模式下设置流动注射分析的入口 在 SIM 扫描模式下采集 APCI 数据 Thermo Scientific LTQ 107

132 7 Tune Plus APCI APCI APCI 这个部分提供如何通过定量环进样 ( 流动注射分析 ) 将样品引入 LC 泵的溶剂流路 1. 将 2 μl 样品定量环连接到转向 / 进样阀的 1 和 4 号端口 2. 将 LC 泵连接到转向 / 进样阀的 2 号端口, 如下 : 使用适当的手拧接头和套圈, 将长度适中的红色 PEEK 管连接到 LC 泵的出口 若要产生稳定的溶剂液流, Accela 1250 泵需要至少 40 bar (580 psi) 的背压 若要连接 LC 泵, 使用长度适中 内径为 in. 的 PEEK 软管以施加 40 bar (580 psi) 的背压, 或在 LC 泵出口和转向 / 进样阀之间连接在线的背压调节器 使用一个接头和一个套圈, 将此管的另一端连接到转向 / 进样阀的端口 2 3. 对于 APCI 探针, 使用手拧接头在转向 / 进样阀的端口 3 和 APCI 探针的样品入口接头之间连接一个适当长度的红色 PEEK 管 ( 图 78 和图 79) 78. / API API 3 LC 3 LC Load ( ) Inject ( ) 108 LTQ Thermo Scientific

133 7 Tune Plus APCI SIM APCI 79. APCI S A 4. 将转向 / 进样阀连接到废液容器, 如下 : 使用一个手拧接头和一个套圈, 将长度适中的红色 PEEK 管的一端连接到端口 6 将此管的另一端连接到适当的废液容器 现在已经设置好质谱仪, 可以使用定量环进样将样品引入 LC 泵的溶剂流路 SIM APCI 数据系统自动将采集数据保存到硬盘 SIM 1. 打开 Tune Plus 窗口 ( 参阅第 28 页 ) On Centroid Standby Profile 2. 单击 On/Standby ( 开机 / 待机 ) 按钮选择 On ( 开机 ) 模式 质谱仪开始扫描, 并将高压应用到 APCI corona 针 实时显示出现在 Spectrum ( 质谱 ) 视图中 3. 单击 Centroid/Profile ( 棒状图 / 轮廓图 ) 按钮选择 centroid ( 棒状图 ) 数据类型 Thermo Scientific LTQ 109

134 7 Tune Plus APCI SIM APCI 4. 确保定义了扫描参数以采集利血平 ( 或被分析物 ) 的 SIM 数据, 如下 : a. 单击 Define Scan ( 定义扫描 ) 按钮 80. 图 80 显示 Define Scan 对话框的典型设置, 以采集利血平的 SIM 数据 Define Scan SIM b. 确认对话框内的值与图 80 的值相同, 然后单击 OK ( 确定 ) 5. 打开 LC 泵并指定 0.4 ml/min 的流速 确保系统无泄漏 6. 在 Tune Plus 窗口中单击 Acquire Data ( 采集数据 ) 按钮 图 81 在 Acquire Data 对话框内显示原始数据文件的采集状态 81. Acquire Data 7. 指定采集参数如下 : 在 File Name ( 文件名 ) 框中输入 reserpine ( 利血平 )( 或被分析物的名称 ) 在 Sample Name ( 样品名 ) 框中输入 reserpine ( 或被分析物的名称 ) 在 Comment ( 注释 ) 框中输入对实验的注释 110 LTQ Thermo Scientific

135 7 Tune Plus APCI SIM APCI 例如, 说明扫描模式 扫描类型 电离模式 样品量或者进样方法 Xcalibur 数据系统包括原始数据文件的标题信息注释 还可以将此信息添加到利用 XReport 报告软件创建的报告中 若要打开 XReport 应用程序, 选择 Start ( 开始 ) > All Programs ( 所有程序 ) > Thermo Xcalibur > Xcalibur 在 Acquire Time ( 采集时间 ) 下面选择 Continuously ( 连续 ) 选项 ( 采集数据直到停止采集 ) 8. 单击 Start 9. 在数据采集时使 Acquire Data 对话框打开, 然后将对话框移开 10. 单击 Divert/Inject Valve ( 转向 / 进样阀 ) 按钮 11. 将样品注入 APCI 源, 一共四次, 如下 : a. 选择 Load Detector ( 上样检测器 ) 选项 当阀门处于 Load ( 上样 ) 位置, LC 泵的溶剂流路绕过样品定量环 b. 利用样品溶液或者 1 pg/μl 的利血平溶液过充满 2 μl 的进样口定量环 若要制备利血平调谐溶液, 遵守下列步骤 : 对于 LXQ 和 LTQ XL, 参阅第 125 页的 制备 ESI 和 APCI 模式下的利血平调谐和样品溶液 对于 Velos Pro, 参阅第 131 页的 制备 ESI 和 APCI 模式下的利血平调谐和样品溶液 c. 选中 Inject Waste ( 进样废液 ) 选项 当阀门处于 Inject ( 进样 ) 位置, LC 泵的溶剂流路将样品定量环内的溶液反冲进入离子源 d. 在 Spectrum 视图中, 观察利血平峰 (m/z 609.2) 或者被分析物的峰 e. 大约等待 1 分钟后再进行下一次进样 f. 重复步骤 11a 到步骤 11e 三次 12. 在 Divert/Inject Valve 对话框中单击 Close ( 关闭 ) 13. 在 Acquire Data 对话框中单击 Stop ( 停止 ), 然后单击 Cancel ( 取消 ) 通过使用 Xcalibur Qual Browser (Xcalibur 定性浏览器 ) 查看.raw 文件内的质谱图和色谱图 图 82 显示包含利血平四次环进样结果的色谱图 ( 左侧 ) 和利血平质谱图 ( 右侧 ) 更多查看采集数据的信息, 参阅 Thermo Xcalibur Qualitative Analysis User Guide (Thermo Xcalibur 定性分析用户手册 ) 或者 Qual Browser Help ( 定性浏览器帮助 ) 若要采集全扫描 MS/MS 数据, 参阅第 85 页的 设置以采集全扫描 MS/MS 数据 Thermo Scientific LTQ 111

136 7 Tune Plus APCI SIM APCI 82. Qual Browser APCI SIM 112 LTQ Thermo Scientific

137 8 在注入校正溶液之后, 必须在使用被分析物调谐之前清洁系统 在继续之前完成所有数据采集 清洁日用品和化学品 冲洗样品传输线 样品管和 API 探针 移除和清洁注射器 清洁离子吹扫挡锥 喷雾锥和离子传输管 Thermo Scientific LTQ 113

138 8 需要以下日用品和化学品 无尘无粉手套量筒或者量杯 ( 与甲醇一起使用 ) Kimwipe 或者无尘工业纸巾超声波粉碎仪 丙酮甲酸 LC/MS 级甲醇 LC/MS 级水 法律规定化学品生产商和供应商必须以化学品安全说明书 (MSDS) 的形式为客户提供最新的健康和安全信息 MSDS 必须对实验室人员开放, 可供他们随时检查 MSDS 描述了化学品并总结了特定化合物的有毒有害信息 MSDS 也提供了正确处理化合物的方法 发生意外时的救护方法和溅出或泄漏时的补救措施 阅读所使用的每一种化学品的 MSDS 根据标准安全程序存储和处理所有化学品 当使用溶液或腐蚀性物质时, 务必戴上保护手套和防护眼镜 还要根据 MSDS 的指导容纳废液 使用正确的通风以及处理所有实验室试剂 API 在每天工作结束后, 利用 LC 系统的 50:50 甲醇 / 水溶液, 以 μl/min 流速, 通过 API 离子源冲洗样品传输线 样品管和 API 探针 15 分钟以去除污染 ( 或者如果怀疑有污染则需要冲洗更加频繁 ) API 1. 打开 Tune Plus 窗口 ( 参阅第 28 页 ) On Standby 2. 在 Tune Plus 窗口中确保 On/Standby ( 开机 / 待机 ) 按钮指示为 On ( 开机 ) 模式, 然后执行下列操作 : 如果在 APCI 或 APPI 模式下操作, 转到步骤 3 如果在 ESI 模式下操作, 转到步骤 LTQ Thermo Scientific

139 8 API 3. 若要冲洗 APCI 离子源 : a. 选择 Setup ( 设置 ) > APCI Source (APCI 离子源 ) 打开 APCI Source 对话框 ( 图 83) 83. APCI Source b. 在 Vaporizer Temp ( C)( 气化器温度, C) 框中输入 c. 在 Sheath Gas Flow Rate (arb)( 鞘气流速, arb) 框内输入 30 d. 在 Aux Gas Flow Rate (arb)( 辅助气流速, arb) 框内输入 5 e. 在 Sweep Gas Flow Rate (arb) ( 吹扫气流速, arb) 框内输入 0 f. 在 Discharge Current ( 放电电流 ) 框中输入 0 g. 单击 OK ( 确定 ) h. 转至步骤 5 4. 若要冲洗 ESI 离子源 : a. 选择 Setup ( 设置 ) > ESI Source (ESI 离子源 ) 打开 ESI Source 对话框 ( 图 84) 84. ESI Source b. 在 Sheath Gas Flow Rate (arb) 框内输入 30 c. 在 Aux Gas Flow Rate (arb) 框内输入 5 Thermo Scientific LTQ 115

140 8 d. 在 Sweep Gas Flow Rate (arb) 框内输入 0 e. 在 Spray Voltage (kv)( 喷雾电压, kv) 框中输入 0 f. 单击 OK 5. 执行以下步骤, 设置 LC 系统到 API 源用 50:50 甲醇 / 水溶液流动冲洗 : a. 选择 Setup( 设置 )> Inlet Direct Control( 入口直接控制 ) 打开 Inlet Direct Control 对话框 Xcalibur 数据系统可控制来自 Thermo Fisher Scientific Inc. Agilent Technologies 和 Waters Corporation 等制造商的 LC 泵 有关与 LTQ 系列质谱仪质谱仪兼容的液相色谱仪系统的信息, 联系 Thermo Fisher Scientific 销售代表 b. 单击 LC Pump (LC 泵 ) 选项卡 c. 将溶剂比例设为 50% 甲醇和 50% 水 d. 启动溶剂流路 6. 让溶液在样品传输线 样品管和 API 探针内流通 15 分钟 分钟后, 执行以下步骤关闭从 LC 到 API 源的液体流路 : a. 让 API 离子源 ( 包括 APCI 气化室 鞘气和辅助气 ) 继续工作 5 分钟 b. 单击 Pump Off ( 泵关闭 ) 或者 Stop Pump ( 停止泵 ) 按钮 8. 再过 5 分钟, 将质谱仪置于 Standby ( 待机 ) 模式 ( 参阅第 29 页 ) 1. 挤压蓝色的推动器块, 然后往回拉注射泵手柄释放注射器 2. 拆卸支架上的注射器 3. 断开注射器针尖和 Teflon 管的连接 4. 采用 5% 的甲酸水溶液清洁注射器 5. 用 50:50 的甲醇 / 水溶液彻底清洗注射器 6. 采用丙酮清洗注射器多次 116 LTQ Thermo Scientific

141 8 在一块干净的工作表面上覆盖上无尘纸或者铝箔 在开始每个清洁和组件安装程序之前带上一副无尘无粉的手套 意外接触离子源室内的 API 探针可能导致烫伤, 因为探针的这个区域温度可能达到 350 C (662 F) 另外, 尽管离子源室的外表面以及探针的暴露部分降低到可接触金属表面的限制温度 70 C (158 F), 它们仍有烫伤的危险 因此, 要特别小心处理探针和离子源室的所有部件 在拆卸 API 探针或离子源室之前, 一定要让其冷却到室温 ( 约 20 分钟 ) 才可碰触 若将质谱仪连接到 LC 系统, 在探针冷却到室温时, 保持 LC 泵上的溶剂液流打开 1. 移除 API 离子源室 ( 参阅第 31 页 ) 2. 抓住离子吹扫挡锥的外缘并从 API 锥体密封圈中拉出即可将其拆卸 可能需要松开离子吹扫挡锥上的定位球塞 这有两个版本的离子吹扫挡锥 图 85 显示带有喷嘴的版本 第 119 页的图 87 显示带有偏置孔的版本 为了避免污染离子传输管, 不要接触其暴露的入口 85. LXQ LTQ XL 3. 利用质谱附件套件中提供的定制拆卸工具 ( 图 86), 逆时针转动暴露的喷雾锥, 拆卸离子传输管 当此管脱离喷雾锥时, 使其直接离开离子源接口 Thermo Scientific LTQ 117

142 使用浸泡了甲醇的 Kimwipe 无尘纸清洁离子吹扫挡锥和可选的喷雾锥的内部与外部 5. 清洁离子传输管步骤如下 : a. 将其放入包含 50:50 甲醇 / 水的量筒 b. 超声处理 15 分钟 当重新安装离子传输管时要注意预防措施 : 确定所有部件均正确对齐以防止离子传输管上的螺纹被破坏 注意不要折弯离子传输管 在插入时请旋转该管 6. 重新安装离子传输管步骤如下 : a. 将离子传输管旋转插入加热器模块中 b. 使用自定义工具顺时针旋紧传输管 7. 重新安装离子吹扫挡锥的步骤如下 : a. 戴上一副无尘无粉的新手套 b. 将离子吹扫挡锥上的进气口与吹扫气供应端口 ( 图 87) 对齐 稳固按压离子吹扫挡锥使其就位 c. 若要正确安装离子吹扫挡锥, 调整离子吹扫挡锥周围的定位球塞 ( 图 87) 118 LTQ Thermo Scientific

143 8 87. API 现在离子吹扫挡锥已经正确地安装到质谱仪上 Thermo Scientific LTQ 119

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145 A LXQ LTQ XL 本附录说明如何为 LXQ 和 LTQ XL 质谱仪制备调谐和校正溶液 不要使用本附录中说明的溶液校正 Velos Pro 质谱仪 而是使用附录 B, Velos Pro 质谱仪的样品配方. 中说明的溶液 为 ESI 模式制备普通质量数范围校正溶液 制备 ESI 和 APCI 模式下的利血平调谐和样品溶液 制备高质量范围校正溶液 化学品附件套件提供用于制备溶液的咖啡因 Met-Arg-Phe-Ala 乙酸盐 (MRFA) Ultramark 1621 和利血平 可以从 Thermo Fisher Scientific 订购化学品附件套件 (P/N ) 还可以从 Thermo Fisher Scientific 订购特定化学品, 这些化学品均以 Fisher Chemical 品牌进行销售 正如表 9 中指出, 仅使用 LC/MS 级别的化学品校正质谱仪 对于建议的耗材部件号, 参阅 LTQ Series Preinstallation Requirements Guide (LTQ 系列预安装要求手册 ) 第 5 章 Gases and Solvents ( 气体和溶剂 ) 9. / 醋酸 ( 修改液 ) LC/MS 级 乙腈 LC/MS 级 甲酸 ( 修改液 ) % 异丙醇 LC/MS 级 甲醇 LC/MS 级 水 LC/MS 级 对于来自 Thermo Fisher Scientific 的 LC/MS 级耗材的完整选项, 访问 切勿过滤溶剂 过滤溶剂会引入污染物 Thermo Scientific LTQ 121

146 A LXQ LTQ XL ESI 本附录程序中使用的潜在的危险化学品包括 : 乙腈 甲酸 冰醋酸 甲醇 利血平 勿使用塑料吸液管制备调谐和校正标样 塑料产品会释放干扰分析的邻苯二甲酸盐 法律规定化学品生产商和供应商必须以化学品安全说明书 (MSDS) 的形式为客户提供最新的健康和安全信息 MSDS 必须对实验室人员开放, 可供他们随时检查 MSDS 描述了化学品并总结了特定化合物的有毒有害信息 MSDS 也提供了正确处理化合物的方法 发生意外时的救护方法和溅出或泄漏时的补救措施 阅读所使用的每一种化学品的 MSDS 根据标准安全程序存储和处理所有化学品 当使用溶液或腐蚀性物质时, 务必戴上保护手套和防护眼镜 还要根据 MSDS 的指导容纳废液 使用正确的通风以及处理所有实验室试剂 ESI 对于在 ESI 模式下调谐和校正 LXQ 和 LTQ XL, 使用校正溶液包括含 1% 醋酸的乙腈 / 甲醇 / 水溶液中的咖啡因 MRFA Ultramark 1621 若要制备 ESI 的校正溶液, 遵守下列步骤 : 第 123 页的 咖啡因储备溶液 第 123 页的 制备 MRFA 储备溶液 第 124 页的 制备 Ultramark 1621 储备溶液 第 124 页的 为 ESI 模式制备普通质量数范围校正溶液 化学品附件套件包括咖啡因和 MRFA 的样品瓶 下列化合物部件号可从 Sigma Chemical Co. 获取 : P/N C6035 用于甲醇中浓度为 1 mg/ml 的咖啡因 P/N M1170 用于 MRFA 若要从 Sigma 订购这些化合物, 联系 : Sigma Chemical Company P. O. Box St. Louis, Missouri U.S (800) ( 美国 ) (905) ( 加拿大 ) (314) ( 美国或加拿大之外 ) LTQ Thermo Scientific

147 A LXQ LTQ XL ESI 化学品附件套件包含 Ultramark 1621 的样品瓶 ( 干净的液体 ) 该化合物可以从 Lancaster Synthesis 获得 Ultramark 1621 的结构如下 (x 是 1 2 或者 3): H(CF 2 CF 2 ) x H 2 C H(CF 2 CF 2 ) x H 2 C O O P N N P P N O O CH 2 (CF 2 CF 2 ) x H CH 2 (CF 2 CF 2 ) x H H(CF 2 CF 2 ) x H 2 C O O CH 2 (CF 2 CF 2 ) x H Ultramark 1621 的 Lancaster 产品号为 L16698 (Ultramark 1621, Mass Spec Std.) 若要从 Lancaster Synthesis 订购这些化合物, 联系 : Lancaster Synthesis, Inc. P.O.Box 1000 Windham, NH U.S (603) , (800) ( 美国和加拿大 ) +44 (0) ( 英国和国际 ) 当使用溶液或腐蚀性物质时, 务必戴上保护手套和防护眼镜 MRFA LXQ 和 LTQ XL 质谱仪随运提供 1 mg/ml 咖啡因的储备溶液, 溶剂为 100% 甲醇 也可以通过 Sigma Chemical 订购该溶液 (P/N C6035) MRFA 1. 称量 6 mg 附件套件中提供的 MRFA 化合物, 然后将样品转移到干净的最小的 20 ml 玻璃样品瓶中 附件套件中提供的 MRFA 的平均分子量为 Da 2. 在瓶内加入 2.0 ml 的 50:50 甲醇 / 水溶液 3. 彻底混合溶液 4. 为样品瓶贴上标签 MRFA 储备溶液 3 mg/ml Thermo Scientific LTQ 123

148 A LXQ LTQ XL ESI MRFA 1. 将 100 μl 的 3 mg/ml MRFA 储备溶液转移到干净的最小 20 ml 玻璃样品瓶内 2. 在瓶内加入 2.9 ml 的 50:50 甲醇 / 水溶液 3. 彻底混合溶液 Ultramark 在瓶上贴上标签稀释的 MRFA 储备溶液 0.1 mg/ml Ultramark 利用注射器将 25 μl 的 Ultramark 1621 转移到干净的 25 ml 玻璃容量瓶中 2. 将 100% 的乙腈加入容量瓶直到刻度线 3. 彻底混合溶液 4. 将该溶液转移至样品瓶中并贴上标签 Ultramark 1621 储备溶液 (1/1000 稀释 ) ESI 下列即用的普通质量范围校正溶液可从 Thermo Fisher Scientific 获取 : Pierce LTQ ESI 正离子校正溶液, 10 ml (Pierce P/N 88322) 若要订购这个溶液, 转到 若要订购 LXQ 和 LTQ XL 预安装套件 (P/N OPTON-20041), 包括这个溶液, 可联系本地 Thermo Fisher Scientific 现场服务工程师 当称量冰醋酸时只能使用玻璃移液器或不锈钢注射器 使用塑料移液器枪头导致酸储备溶液的污染, 会在校正溶液中引入污染物 1. 将 200 μl 的咖啡因储备溶液移取至洁净的 10 ml 玻璃容量瓶内 2. 将 100 μl 的稀释 MRFA 储备溶液 (0.1 mg/ml) 移取至容量瓶内 3. 将 100 μl 的 Ultramark 1621 储备溶液移取至容量瓶内 4. 将 100 μl 的 LC/MS 级冰醋酸移取至容量瓶内 5. 将 5 ml 的 LC/MS 级乙腈移取至容量瓶内 6. 利用 50:50 的甲醇 / 水溶液使容量瓶内的液面到达刻度线 7. 彻底混合溶液 8. 将该溶液转移至洁净及干燥的样品瓶中 9. 将样品瓶贴上标签 LXQ/LTQ XL ESI 校正溶液并将其保存在冰箱内 2 8 C (36 46 F) 以便取用 124 LTQ Thermo Scientific

149 A LXQ LTQ XL ESI APCI ESI APCI 最理想的是, 在使用之前再制备利血平溶液 如果必须保存溶液, 将其保存在冰箱内耐光容器中, 以便取用 1. 称取 10 mg 利血平然后将样品转移至 10 ml 玻璃容量瓶内 利血平的平均分子量为 Da 2. 采用 1% 醋酸的甲醇溶液使容量瓶的液面达到刻度线 3. 彻底混合溶液 4. 将该溶液转移至洁净 干燥以及避光的样品瓶中 5. 为样品瓶贴上标签利血平储备溶液 (1 μg/μl) 1. 将 100 μl 的利血平储备溶液 (1 μg/μl) 移取至洁净的 1.5 ml 聚丙烯微型离心机管内 2. 在管内加入 900 μl 的 1% 醋酸的 50:50 甲醇 / 水溶液 3. 彻底混匀溶液 (100 ng/μl) 4. 将 10 μl 的 100 ng/μl 的溶液转移到一个干净的聚丙烯管内 5. 在管内加入 990 μl 的 1% 醋酸的 50:50 甲醇 / 水溶液 6. 彻底混匀溶液 (1ng/μL) 7. 将 100 μl 的 1 ng/μl 的溶液转移到一个干净的 1.5 ml 聚丙烯管内 8. 在管内加入 900 μl 的 1% 醋酸的 50:50 甲醇 / 水溶液 9. 彻底混合溶液 10. 为管贴上标签利血平调谐溶液 (100 pg/μl) 1. 将 100 μl 的 100 pg/μl 的利血平调谐溶液转移到一个干净的 1.5 ml 聚丙烯管内 2. 在管内加入 900 μl 的 1% 醋酸的 50:50 甲醇 / 水溶液 3. 彻底混匀溶液 (10 pg/μl) 4. 将 100 μl 的 10 pg/μl 的溶液转移到一个干净的 1.5 ml 聚丙烯管内 5. 在管内加入 900 μl 的 1% 醋酸的 50:50 甲醇 / 水溶液 6. 彻底混匀溶液 (1pg/μL) 7. 将 100 μl 的 1pg/μL 的溶液转移到一个干净的 1.5 ml 聚丙烯管内 8. 在管内加入 700 μl 的 1% 醋酸的 50:50 甲醇 / 水溶液 9. 彻底混合溶液 10. 为管贴上标签利血平样品溶液 (125 fg/μl) Thermo Scientific LTQ 125

150 A LXQ LTQ XL 高质量范围校正液是 3.5 mg/μl 聚乙二醇 (PPG) 在 70:30 的甲醇 /23 mm 乙酸钠中形成的溶液 高质量范围校正程序设计为利用平均分子量为 2700 (M n ~2700) 的 PPG, 这是来自 Aldrich 的产品号 PPG 2700 是一种粘性液体 若要从 Sigma-Aldrich 订购这些化合物, 联系 : Sigma Chemical Company P. O. Box St. Louis, Missouri U.S (800) ( 美国 ) (905) ( 加拿大 ) (314) ( 美国或加拿大之外 ) 在干净的 20 ml 玻璃样品瓶内将 g 乙酸钠溶解在 10 ml 水中, 为容器贴上标签乙酸钠储备溶液 PPG 1. 在干净的 20 ml 玻璃样品瓶内将 0.7 g 的 PPG 2700 溶解在 7 ml 甲醇中 由于 PPG 2700 是一种粘性液体, 使用玻璃移液器将 0.7 g 液体转移到称量皿, 或者直接在最小 20 ml 的玻璃样品瓶内直接称量液体 2. 在样品瓶内加入 2.3 ml 水 3. 添加 0.7 ml 的乙酸钠储备溶液并为容器贴上标签 PPG 2700 储备溶液 (70 mg/ml) 1. 将 7 ml 甲醇转移到干净的 20 ml 玻璃样品瓶内 2. 在样品瓶内加入 2.3 ml 水 3. 在样品瓶中添加 700 μl 的乙酸钠储备溶液 4. 添加 10 μl 的 PPG 2700 储备溶液并为容器贴上标签 LXQ/LTQ XL PPG 2700 校正溶液 (70 ng/μl) 126 LTQ Thermo Scientific

151 B Velos Pro 本附录说明如何制备 Velos Pro 质谱仪的调谐校正溶液 勿使用本附录中说明的溶液校正 LXQ 和 LTQ XL 质谱仪, 而要使用附录 A, LXQ 和 LTQ XL 质谱仪的样品配方. 中说明的溶液 为 ESI 模式制备普通质量数范围校正溶液 制备 ESI 和 APCI 模式下的利血平调谐和样品溶液 制备高质量范围校正溶液 化学品附件套件提供用于制备溶液的咖啡因 MRFA Ultramark 1621 和利血平 可以从 Thermo Fisher Scientific 订购化学品附件套件 (P/N ) 还可以从 Thermo Fisher Scientific 订购特定化学品, 这些化学品均以 Fisher Chemical 品牌进行销售 正如表 10 中指出, 仅使用 LC/MS 级别的化学品校正质谱仪 对于建议的耗材部件号, 参阅 LTQ Series Preinstallation Requirements Guide (LTQ 系列预安装要求手册 ) 第 5 章 Gases and Solvents ( 气体和溶剂 ) 10. 对于来自 Thermo Fisher Scientific 的 LC/MS 级耗材的完整选项, 访问 / 本附录步骤中使用的潜在的危险化学品包括 : 乙腈 甲酸 冰醋酸 醋酸 ( 改性剂 ) LC/MS 级 乙腈 LC/MS 级 甲酸 ( 改性剂 ) % 异丙醇 LC/MS 级 甲醇 LC/MS 级 水 LC/MS 级 切勿过滤溶剂 过滤溶剂会引入污染物 Thermo Scientific LTQ 127

152 B Velos Pro ESI 甲醇 利血平 勿使用塑料吸液管制备调谐和校正标样 塑料产品会释放干扰分析的邻苯二甲酸盐 法律规定化学品生产商和供应商必须以化学品安全说明书 (MSDS) 的形式为客户提供最新的健康和安全信息 MSDS 必须对实验室人员开放, 可供他们随时检查 MSDS 描述了化学品并总结了特定化合物的有毒有害信息 MSDS 也提供了正确处理化合物的方法 发生意外时的救护方法和溅出或泄漏时的补救措施 阅读所使用的每一种化学品的 MSDS 根据标准安全程序存储和处理所有化学品 当使用溶液或腐蚀性物质时, 务必戴上保护手套和防护眼镜 还要根据 MSDS 的指导容纳废液 使用正确的通风以及处理所有实验室试剂 ESI 对于在 ESI 模式下调谐和校正 Velos Pro, 使用校正溶液包括含 1% 醋酸的乙腈 / 甲醇 / 水溶液中的咖啡因 MRFA Ultramark1621 和 N- 丁胺 若要制备 ESI 的校正溶液, 遵守下列步骤 : 第 129 页的 咖啡因储备溶液 第 129 页的 制备 MRFA 储备溶液 第 130 页的 制备 Ultramark 1621 储备溶液 第 130 页的 制备 N- 丁胺储备溶液 第 130 页的 为 ESI 模式制备普通质量数范围校正溶液 化学品附件套件包括咖啡因和 MRFA 的样品瓶 下列化合物部件号可从 Sigma Chemical Co. 获取 : P/N C6035 用于甲醇中浓度为 1 mg/ml 的咖啡因 P/N M1170 用于 MRFA 若要从 Sigma 订购这些化合物, 联系 : Sigma Chemical Company P. O. Box St. Louis, Missouri U.S (800) ( 美国 ) (905) ( 加拿大 ) (314) ( 美国或加拿大之外 ) LTQ Thermo Scientific

153 B Velos Pro ESI 化学品附件套件包含 Ultramark 1621 的样品瓶 ( 干净的液体 ) 这个化合物可以从 Lancaster Synthesis 获得 Ultramark 1621 的结构如下 (x 是 1 2 或者 3): H(CF 2 CF 2 ) x H 2 C H(CF 2 CF 2 ) x H 2 C O O P N N P P N O O CH 2 (CF 2 CF 2 ) x H CH 2 (CF 2 CF 2 ) x H H(CF 2 CF 2 ) x H 2 C O O CH 2 (CF 2 CF 2 ) x H Ultramark 1621 的 Lancaster 产品号为 L16698 (Ultramark 1621, Mass Spec Std.) 若要从 Lancaster Synthesis 订购这些化合物, 联系 : Lancaster Synthesis, Inc. P.O.Box 1000 Windham, NH U.S (603) , (800) ( 美国和加拿大 ) +44 (0) ( 英国和国际 ) 当使用溶液或腐蚀性物质时, 务必戴上保护手套和防护眼镜 MRFA Velos Pro 质谱仪随运提供 1 mg/ml 咖啡因的储备溶液, 溶剂为 100% 甲醇 也可以通过 Sigma Chemical 订购该溶液 (P/N C6035) MRFA 1. 称量 6 mg 附件套件中提供的 MRFA 化合物, 然后将样品转移到干净的最小的 20 ml 玻璃样品瓶中 附件套件中提供的 MRFA 的平均分子量为 Da 2. 在瓶内加入 2.0 ml 的 50:50 甲醇 / 水溶液 3. 彻底混合溶液 4. 为样品瓶贴上标签 MRFA 储备溶液 3 mg/ml Thermo Scientific LTQ 129

154 B Velos Pro ESI MRFA 1. 将 100 μl 的 3 mg/ml MRFA 储备溶液转移到干净的最小 20 ml 玻璃样品瓶内 2. 在瓶内加入 2.9 ml 的 50:50 甲醇 / 水溶液 3. 彻底混合溶液 Ultramark 1621 N- 4. 在瓶上贴上标签稀释的 MRFA 储备溶液 0.1 mg/ml Ultramark 利用注射器将 25 μl 的 Ultramark 1621 转移到干净的 25 ml 玻璃容量瓶中 2. 将 100% 的乙腈加入容量瓶直到刻度线 3. 彻底混合溶液 4. 将该溶液转移至样品瓶中并贴上标签 Ultramark 1621 储备溶液 (1/1000 稀释 ) N- 1. 利用注射器将 5 μl 的 N- 丁胺转移到干净的 25 ml 玻璃容量瓶中 2. 在瓶内加入 ml 的 50:50 甲醇 / 水溶液 3. 彻底混合溶液 4. 将该溶液转移至样品瓶中并贴上标签 N- 丁胺 (5/10000 稀释 ) 储备溶液 ESI 下列即用的普通质量数范围校正溶液可从 Thermo Fisher Scientific 获取 : Pierce LTQ Velos 正离子校正溶液, 10 ml (Pierce P/N 88323) 若要订购这个溶液, 转到 若要订购 Velos Pro 预安装套件 (P/N OPTON-20042), 包括这个溶液, 可联系本地 Thermo Fisher Scientific 现场服务工程师 当称量冰醋酸时只能使用玻璃移液器或不锈钢注射器 使用塑料移液器枪头导致酸储备溶液的污染, 会在校正溶液中引入污染物 1. 将 20 μl 的咖啡因储备溶液移取至洁净的 10 ml 玻璃容量瓶内 2. 将 100 μl 的稀释 MRFA 储备溶液 (0.1 mg/ml) 移取至容量瓶内 3. 将 100 μl 的 Ultramark 1621 储备溶液移取至容量瓶内 130 LTQ Thermo Scientific

155 B Velos Pro ESI APCI 4. 将 100 μl 的 N- 丁胺储备溶液移取至容量瓶内 5. 将 100 μl 的 LC/MS 级冰醋酸移取至容量瓶内 6. 将 5 ml 的 LC/MS 级乙腈移取至容量瓶内 7. 利用 50:50 的甲醇 / 水溶液使容量瓶内的液面到达刻度线 8. 彻底混合溶液 9. 将该溶液转移至洁净及干燥的样品瓶中 10. 将样品瓶贴上标签 Velos Pro ESI 校正溶液并将其保存在冰箱内 2 8 C (36 46 F) 以便取用 ESI APCI 最理想的是, 在使用之前再制备利血平溶液 如果必须保存溶液, 将其保存在冰箱内耐光容器中, 以便取用 1. 称取 10 mg 利血平然后将样品转移至 10 ml 玻璃容量瓶内 利血平的平均分子量为 Da 2. 采用 1% 醋酸的甲醇溶液使容量瓶的液面达到刻度线 3. 彻底混合溶液 4. 将该溶液转移至洁净 干燥以及避光的样品瓶中 5. 为样品瓶贴上标签利血平储备溶液 (1 μg/μl) 1. 将 100 μl 的利血平储备溶液 (1 μg/μl) 移取至洁净的 1.5 ml 聚丙烯微型离心机管内 2. 在管内加入 900 μl 的 1% 醋酸的 50:50 甲醇 / 水溶液 3. 彻底混匀溶液 (100 ng/μl) 4. 将 10 μl 的 100 ng/μl 的溶液转移到一个干净的聚丙烯管内 5. 在管内加入 990 μl 的 1% 醋酸的 50:50 甲醇 / 水溶液 6. 彻底混匀溶液 (1 ng/μl) 7. 将 100 μl 的 1 ng/μl 的溶液转移到一个干净的 1.5 ml 聚丙烯管内 8. 在管内加入 900 μl 的 1% 醋酸的 50:50 甲醇 / 水溶液 9. 彻底混合溶液 10. 为管贴上标签利血平调谐溶液 (100 pg/μl) Thermo Scientific LTQ 131

156 B Velos Pro 1. 将 100 μl 的 100 pg/μl 的利血平调谐溶液转移到一个干净的 1.5 ml 聚丙烯管内 2. 在管内加入 900 μl 的 1% 醋酸的 50:50 甲醇 / 水溶液 3. 彻底混匀溶液 (10 pg/μl) 4. 将 100 μl 的 10 pg/μl 的溶液转移到一个干净的 1.5 ml 聚丙烯管内 5. 在管内加入 900 μl 的 1% 醋酸的 50:50 甲醇 / 水溶液 6. 彻底混匀溶液 (1 pg/μl) 7. 将 50 μl 的 1pg/μL 的溶液转移到一个干净的 1.5 ml 聚丙烯管内 8. 在管内加入 950 μl 的 1% 醋酸的 50:50 甲醇 / 水溶液 9. 彻底混合溶液 10. 为管贴上标签利血平样品溶液 (50 fg/μl) 高质量范围校正液是 3.5 mg/μl 聚乙二醇 (PPG) 在 65:35 的甲醇 /10 mm 乙酸钠中形成的溶液 高质量范围校正程序设计为利用平均分子量为 2700 (M n ~2700) 的 PPG, 这是来自 Aldrich 的产品号 PPG 2700 是一种粘性液体 若要从 Sigma-Aldrich 订购这些化合物, 联系 : Sigma Chemical Company P. O. Box St. Louis, Missouri U.S (800) ( 美国 ) (905) ( 加拿大 ) (314) ( 美国或加拿大之外 ) 在干净的 20 ml 玻璃样品瓶内将 g 乙酸钠溶解在 10 ml 水中, 为容器贴上标签乙酸钠储备溶液 PPG 1. 在干净的 20 ml 玻璃样品瓶内将 0.7 g 的 PPG 2700 溶解在 7 ml 甲醇中 由于 PPG 2700 是一种粘性液体, 使用玻璃移液器将 0.7 g 液体转移到称量皿, 或者直接在最小 20 ml 的玻璃样品瓶内直接称量液体 2. 在样品瓶内加入 2.3 ml 水 3. 添加 0.7 ml 的乙酸钠储备溶液并为容器贴上标签 PPG 2700 储备溶液 (70 μg/μl) 132 LTQ Thermo Scientific

157 B Velos Pro 1. 将 6.65 ml 甲醇转移到干净的 20 ml 玻璃样品瓶内 2. 在样品瓶内加入 2.15 ml 水 3. 在样品瓶中添加 700 μl 的乙酸钠储备溶液 4. 添加 500 μl 的 PPG 2700 储备溶液并为容器贴上标签 Velos Pro PPG 2700 校正溶液 (3.5 μg/μl) Thermo Scientific LTQ 133

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159 C 本附录应用到所有 LTQ 系列质谱仪, 除非有其他注释 在高质量数范围校正 LTQ 系列质谱仪之前, 必须根据第 3 章, 在 ESI 模式下自动调谐和校正 的说明在普通质量数范围内对其进行校正 根据下列内容制备合适的普通质量数范围校正溶液 : 对于 LXQ 和 LTQ XL, 参阅附录 A 的第 122 页的 为 ESI 模式制备普通质量数范围校正溶液 对于 Velos Pro, 参阅附录 B 的第 128 页的 为 ESI 模式制备普通质量数范围校正溶液 根据下列内容制备合适的高质量数范围校正溶液 : 对于 LXQ 和 LTQ XL, 参阅附录 A 的第 126 页的 制备高质量范围校正溶液 对于 Velos Pro, 参阅附录 B 的第 132 页的 制备高质量范围校正溶液 按照如下步骤进行操作 : 1. 第 135 页的 利用普通质量数范围校正溶液确认高质量数范围的初步校正情况 2. 第 139 页的 利用普通质量数范围校正溶液校正高质量数范围 3. 第 142 页的 执行两点手动初步校正 使用普通质量数范围校正溶液的高质量数范围模式 4. 第 145 页的 利用高质量数范围校正溶液校正高质量数范围 5. 第 147 页的 在校正之后清洁系统 若要确认高质量数范围得以初步校正, 使用普通质量数范围的校正溶液查看普通和高质量数范围的峰 当确认采用普通质量数范围校正溶液的系统, 在普通和高质量数范围内正确的运行, 继续转到第 139 页的 利用普通质量数范围校正溶液校正高质量数范围 若要确认初步校正, 遵照以下步骤进行操作 : 1. 检查普通质量数范围的质量数校正 2. 第 138 页的检查高质量数范围的质量数校正 Thermo Scientific LTQ 135

160 C 查看普通质量数范围中的质谱图峰, 确定是否在这个质量数范围内正确地校正系统 1. 使注射器载入适合质谱仪的普通质量数范围校正溶液, 打开注射泵 2. 打开 Tune Plus 窗口 ( 参阅第 28 页 ) On Standby 3. 单击 On/Standby ( 开机 / 待机 ) 按钮选择 On ( 开机 ) 模式 质谱仪开始扫描, 氮气气流进入 ESI 探针, 高电压被施加到 ESI 喷嘴上 4. 单击 Display Spectrum View ( 显示质谱视图 ) 按钮 实时质谱视图出现在 Tune ( 调谐 ) 窗口的 Spectrum ( 质谱 ) 视图中 5. 单击 Define Scan ( 定义扫描 ) 按钮显示 Define Scan 对话框 ( 图 88) 88. Define Scan 6. 在 Scan Description ( 扫描说明 ) 下面执行下列步骤 : 在 Mass Range ( 质量数范围 ) 列表中选择 Normal ( 普通 ) 在 Scan Rate ( 扫描速率 ) 列表中选择 Normal 在 Scan Type ( 扫描类型 ) 列表中选择 Full ( 全扫描 ) 7. 在 Scan Time ( 扫描时间 ) 下面执行下列步骤 : 在 Microscans ( 微扫描 ) 框中输入 1 在 Max. Inject Time (ms)( 最大进样时间, ms) 框内输入 在 Source Fragmentation ( 离子源裂解 ) 下面, 清除 On ( 开 ) 复选框 选择 Source Fragmentation 复选框允许离子源内发生碰撞诱导解离 由于离子源内的碰撞诱导解离特异性一般, 因此很少使用 136 LTQ Thermo Scientific

161 C 9. 在 Scan Ranges ( 扫描范围 ) 下面执行下列步骤 : a. 在 Input ( 输入 ) 列表中选择 From/To ( 从 / 到 ) b. 在 First Mass (m/z) ( 开始质量数, m/z) 列中输入 c. 在 Last Mass (m/z) ( 最终质量数, m/z) 列中输入 点击 Apply ( 应用 ) 11. 观察校正溶液中单电荷离子的质谱图 ( 用于 LXQ 和 LTQ XL 的图 89, 或者用于 Velos Pro 的图 90) 校正离子的整数 m/z 值如下 : 咖啡因 :m/z 195 ( 只适用于 LXQ 和 LTQ XL) MRFA:m/z Ultramark 1621:m/z 和 1822 LTQ XL Ultramark MRFA Thermo Scientific LTQ 137

162 C 90. Velos Pro LTQ XL 12. 执行下列操作之一 : 如果观察离子的 m/z 为步骤 11 中陈述的整数质荷比的 ±1 Da( 对于 LXQ 和 LTQ XL), 或者 ±3 Da ( 对于 Velos Pro)( 参阅图 89 中的例子 ), 继续转到 检查高质量数范围的质量数校正. 如果这些离子的质荷比不为步骤 11 陈述的整数质荷比的 ±1 Da( 对于 LXQ 和 LTQ XL), 或者 ±3 Da ( 对于 Velos Pro), 则在继续之前执行普通质量数范围校正 ( 参阅第 67 页的 在普通质量数范围内自动校正 ) 下一步就是查看当扫描被置于高质量数范围时, 普通质量数范围校正溶液的峰 1. 在 Tune Plus 窗口中, 单击 Define Scan 按钮显示 Define Scan 对话框 2. 在 Scan Description 下面执行下列步骤 : 在 Mass Range 列表中选择 Normal 在 Scan Rate 列表中选择 Normal 在 Scan Type 列表中选择 Full 3. 在 Scan Time 下面执行下列步骤 : 在 Microscans 框中输入 1 在 Max. Inject Time (ms) 框内输入 LTQ Thermo Scientific

163 C 4. 在 Source Fragmentation 下面, 清除 On 复选框 5. 在 Scan Ranges 下面执行下列步骤 : a. 在 Input 列表中选择 From/To b. 在 First Mass (m/z) 列中执行下列操作之一 : 对于 LXQ 和 LTQ XL, 输入 对于 Velos Pro, 输入 c. 在 Last Mass (m/z) 列中输入 点击 Apply 7. 观察校正溶液中单电荷离子的质谱图 ( 用于 LXQ 和 LTQ XL 的第 137 页的图 89, 或者用于 Velos Pro 的第 138 页的图 90) 离子如下 : 咖啡因 :m/z 195 ( 只适用于 LXQ 和 LTQ XL) MRFA:m/z 524 Ultramark 1621:m/z 和 执行下列操作之一 : 如果高质量数范围质谱显示, m/z 1822 的观察离子对于 LXQ 和 LTQ XL 不多于 ±10 Da, 或者对于 Velos Pro 不多于 ±5 Da, 采用普通质量数范围校正溶液在高质量数范围下校正 ( 参阅第 139 页的 利用普通质量数范围校正溶液校正高质量数范围 ) 如果 m/z 1822 的观察离子对于 LXQ 和 LTQ XL 多于 ±10 Da, 或者对于 Velos Pro 多于 ±5 Da, 则注意观察的低质量数 (195) 和观察的高质量数 (1822), 然后执行两点校正 ( 参阅第 142 页的 执行两点手动初步校正 使用普通质量数范围校正溶液的高质量数范围模式 ) 选择 Source Fragmentation 复选框允许离子源内发生碰撞诱导解离 由于离子源内的碰撞诱导解离特异性一般, 因此很少使用 1. 使注射器泵载入适合质谱仪的普通质量数范围校正溶液, 打开注射泵 On Standby 2. 单击 On/Standby ( 开机 / 待机 ) 按钮选择 On ( 开机 ) 模式 3. 在 Tune Plus 窗口中, 单击 Calibrate ( 校正 ) 按钮打开 Calibrate 对话框 4. 对于 Mass Range, 选择 High ( 高 ) 选项 ( 图 91) Thermo Scientific LTQ 139

164 C 91. Calibrate High Mass Range Calibration LXQ LTQ XL Velos Pro 5. 在 What To Do ( 要执行的任务 ) 下面选择 Calibrate 选项 6. 在 What to Cal/Check ( 校正或检查的对象 ) 下面选择所有四个复选框 : Mass for Turbo ( 用于 Turbo 扫描速率的质量数 ) Mass for Normal ( 用于 Normal 扫描速率的质量数 ) Mass for Zoom ( 用于 Zoom 扫描速率的质量数 ) Isolation Waveforms ( 分离波形 ) 140 LTQ Thermo Scientific

165 C 7. ( 只适用于 LXQ 和 LTQ XL) 在 Calibration Mass List ( 校正质量数列表 ) 下面的 Name ( 名称 ) 列表中, 选择 Calmix (factory)( 图 92) 92. Calibrate Calmix LXQ LTQ XL 8. 在完成校正之后指定仪器状态 : 在校正之后若要使切换到 Standby 模式, 单击 Set Instrument to Standby when Finished ( 完成时将仪器设置为待机 ) 复选框 在校正之后若要使保持 On 模式, 清除 Set Instrument to Standby when Finished 复选框 9. 单击 Start ( 开始 ) 一个信息出现 : Please ensure that the 500 microliter syringe is full. ( 确保 500 微升注射器充满 ) 10. 确保注射器包括至少 450 μl 的普通质量数范围校正溶液, 而且注射泵被打开 11. 单击 OK ( 确定 ) 12. 观察 Tune Plus 窗口和 Calibrate 对话框 当自动校正进行时, 测试结果出现在 Spectrum 和 Graph ( 图形 ) 视图中, 信息出现在 Calibrate 对话框的 Status ( 状态 ) 框内 系统自动采用 Turbo Scan (Turbo 扫描 ) 校正的平均质量数 它自动使用 normal ZoomScan 和 isolation waveform 校正的单同位素质量数 当校正过程完成后, 结果出现 Thermo Scientific LTQ 141

166 C 13. 检查校正结果 14. 执行下列操作之一 : 如果校正通过, 质量数都正确, 则继续转到第 145 页的 利用高质量数范围校正溶液校正高质量数范围 如果校正不通过, 或者质量数偏差超过 ±10 Da, 在 执行两点手动初步校正 使用普通质量数范围校正溶液的高质量数范围模式. 之前注意观察低质量数 (195) 和观察高质量数 (1822) 1. 在 Tune Plus 窗口中, 单击 Define Scan 按钮显示 Define Scan 对话框 ( 图 93) 93. Define Scan ESI 2. 在 Scan Description 下面执行下列步骤 : 在 Mass Range 列表中选择 Normal 在 Scan Rate 列表中选择 Normal 在 Scan Type 列表中选择 Full 3. 在 Scan Time 下面执行下列步骤 : 在 Microscans 框中输入 1 在 Max. Inject Time (ms) 框内输入 在 Source Fragmentation 下面, 清除 On 复选框 选择 Source Fragmentation 复选框允许离子源内发生碰撞诱导解离 由于离子源内的碰撞诱导解离特异性一般, 因此很少使用 142 LTQ Thermo Scientific

167 C 5. 在 Scan Ranges 下面执行下列步骤 : a. 在 Input 列表中选择 From/To b. 在 First Mass (m/z) 列中执行下列操作之一 : 对于 LXQ 和 LTQ XL, 输入 对于 Velos Pro, 输入 c. 在 Last Mass (m/z) 列中输入 点击 Apply ( 应用 ) 7. 观察校正溶液中单电荷离子的质谱 预期离子的整数 m/z 值如下 : 咖啡因 :m/z 195 ( 只适用于 LXQ 和 LTQ XL) MRFA:m/z 524 Ultramark 1621:m/z 和 1822 参阅 LXQ 和 LTQ XL 的图 89, 或者 Velos Pro 的图 在 Tune Plus 窗口中, 选择 Diagnostics ( 诊断 ) > Diagnostics ( 诊断 ) 打开 Diagnostics 对话框 ( 图 94) 94. Diagnostics Thermo Scientific LTQ 143

168 C 9. 在 Tools ( 工具 ) 列表中, 单击 Mass Calibration ( 质量数校正 ) 打开 Manual Coarse Calibration ( 手动初步校正 ) 页面 ( 图 95) 95. Diagnostics Velos Pro 10. 在 Calibrate Current Scan Type ( 校正当前扫描类型 ) 下面执行下列步骤 : 在 Expected Low Mass ( 预期低质量数 ) 话框中, 执行下列操作之一 : 对于 LXQ 和 LTQ XL, 输入 对于 Velos Pro, 输入 在 Expected High Mass ( 预期高质量数 ) 框内, 输入 在 Observed Low Mass ( 观察低质量数 ) 话框中, 执行下列操作之一 : 对于 LXQ 和 LTQ XL, 输入与咖啡因 (195.10) 最接近的质量数 对于 Velos Pro, 输入与 MRFA (524.3) 最接近的观察质量数 在 Observed High Mass 框内, 输入与 1822 最接近的质量数, 1822 质量数是在第 138 页的 检查高质量数范围的质量数校正 中观察到的 11. 在 Calibrate Current Scan Type 下面单击 Execute ( 执行 ) 12. 单击 OK 13. 再一次观察质谱的质量数, 这些应该与第 137 页的图 89 内显示的质量数非常接近 144 LTQ Thermo Scientific

169 C 14. 执行下列操作之一 : 如果任何中段的 Ultramark 峰 ( 或 1622) 均超过 ±10 Da, 则为 1822 选择一个不同的峰 如果 Ultramark 峰分离小于 100 Da, 则选择下一个较低的质量数峰 (~1725), 或者如果峰分离大于 100 Da, 则选择下一个较高的峰 (~1925) 将这个峰输入作为观察质量数, 然后在继续之前重复步骤 11 到步骤 13 如果质量数与上述指定质量数偏差为 ±3 Da, 则单击 Estimate Other Calibration Modes Using Normal Scan Rate Calibration ( 采用普通扫描速率校正评估其他校正模式 ) 下方的 Execute, 然后单击 Save ( 保存 ) 15. 执行下列操作之一 : 如果校正通过, 则继续下一步骤, 利用高质量数范围校正溶液校正高质量数范围. 如果校正失败, 则重复整个程序 如果校正严重偏离, 或者如果在执行该步骤过程中报告错误信息, 可以恢复工厂默认值, 返回有效的校正默认值 最后一步是利用高质量数范围校正溶液 (PPG 2700) 校正高质量数范围 按照如下步骤进行操作 : 确保 Define Scan 对话框内的质量数范围设置为 High, 这样就不会影响普通质量数范围校正值 1. 若要使质谱仪准备就绪 2. 若要利用高质量数范围校正溶液校正高质量数范围 为了最小化交叉污染的可能, 为高质量数范围校正溶液使用干净的注射器和不同长度的 PEEK 管 1. 按照新的红色 PEEK 管 2. 在干净的 500 μl Unimetrics 注射器中加入 450 μl 的 PPG 2700 校正溶液 3. 打开质谱仪 4. 打开注射泵流速为 5 μl/min, 吹扫系统直到高质量数峰出现 Thermo Scientific LTQ 145

170 C 1. 在 Tune Plus 窗口中, 单击 Calibrate ( 校正 ) 按钮打开 Calibrate 对话框 2. 对于 Mass Range, 选择 High 选项 ( 图 96) 96. Calibrate High Mass Range Calibration LXQ LTQ XL Velos Pro 3. 在 What To Do 下面选择 Calibrate 选项 4. 在 What to Cal/Check 下面选择所有四个复选框 : Mass for Turbo Mass for Normal Mass for Zoom Isolation Waveforms 5. ( 只适用于 LXQ 和 LTQ XL) 在 Calibration Mass List 下面的 Name 列表中, 选择 PPG 2700 (factory) 6. 在完成校正之后指定仪器状态 : 在校正之后若要使切换到 Standby 模式, 单击 Set Instrument to Standby when Finished 复选框 在校正之后若要使保持 On 模式, 清除 Set Instrument to Standby when Finished 复选框 146 LTQ Thermo Scientific