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1 第 卷第 期 年 月 西安交通大学学报 医学版!"### %&'&!& 中医药研究 三硝基苯磺酸 乙醇灌肠液诱导大鼠溃疡性结肠炎 和 信号通路的表达及电针的干预作用 张超贤 郭李柯 郭晓凤 新乡医学院第一附属医院消化内科 河南卫辉 # 新乡医学院第一附属医院口腔内科 河南卫辉 # 杭州市第六人民医院肝病科 浙江杭州 # 摘要 目的 探讨三硝基苯磺酸 %&' 乙醇灌肠液诱导大鼠溃疡性结肠炎 #%& 和 )%& 信号通路的表达及电针的干预作用 方法 雄性 *+,-. 大鼠 # 只 随机分为正常对照组 模型组 电针组 # 单克隆抗体 #/) 组 01# 组和 #/)01# 联合治疗 组 以 %&' 乙醇溶液灌肠诱导大鼠溃疡性结肠炎模型 电针组造模同时给予电针足三里穴治疗 #/) 组给予 #/) 腹腔注射 01# 组则予 01# 注射液腹腔注射 组则同时给与上述 #/) 和 01# 腹腔注射 共 # 周 每日行疾病活动指数 ) 评分 造模 # 周后处死大鼠取结肠组织标本 评价结肠黏膜损伤指数 和组织学损伤指数 免疫印迹法测定结肠黏膜磷酸化 )) 和活化 %& 含量 法检测结肠组织中 # / %) /%)) /%)%&/%)%/%) 及 /%) 表达 结果 与正常对照组比较 模型组结肠组织 #/%) /%)) 活化 %& %/%)/%) 表达和 ) 及 均显著升高 与模型组比较 #/) 组 #/%) 表达显著下降 01# 组 /%)) 表达显著下降 而在电针组和 组 #/%) /%) 及 ) 表达均明显降低 与上述变化相对应 与模型组相比 各治疗组活化 %&%/%)/%) 表达和 ) 及 均明显降低 或 电针组和 组上述 指标优于 #/) 组和 01# 组 活化 %& 与 %/%) 及 /%) 表达呈正相关 1 结论 电针足三里穴能显著降低实验性溃疡性结肠炎大鼠的 %& 活性及 %/%)/%) 表达 从而减轻结肠组织损害程度 这与其阻断 #%& 和 )%& 信号通路有密切关系 关键词 电针 溃疡性结肠炎 23 样受体 ##%& 信号通路 )%& 信号通路 活化核转录因子 & 肿瘤坏死因子 /%)/%) 中图分类号 # 文献标志码 )!"##%&#%'%"!%"& #&&!)*#&"+",%#&+-*%.-& &.%'"&"%-&/&#+!%&&&%& &",&%&''%'"%+!+&+"%&. 45)% " :"; "-./"2:6-,.2"".232;"+.,):+3+-"52,+-32:9++-; "+-37 +".,+*"+!+#"-./"2:'2/-232;"+.,):+3+-" 52,+-32:9++-; "+-37 +".,+*"+!+#"-./"2:5"-232; "'+"23",52,+-32:5-;2!5-;2!#+- 01##')"*+,-,').##/"#"0 #10"10##"" 收稿日期 # 修回日期 ## 通讯作者 张超贤 &1&#1 优先出版...&#&#1"&11&&&&#&1

2 # 西安交通大学学报 医学版 第 卷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溃疡性结肠炎!3".-+"23++,7 的病因和发病机制与免疫功能紊乱有密切的联系 促炎细胞因子上调 可诱导和促进炎症发生 在 7 的形成中起重要作用 而且这些细胞因子的表达和分泌量均与 7 疾病的炎症程度呈正相关 % 和 是两种重要的促炎细胞因子 通过免疫组化染色已证实 % 蛋白在 7 肠黏膜细胞中呈高表达状 态 核转录因子 &%& 广泛存在于各种细胞中 可调控多种基因 细胞因子及生长因子的转录表达 参与调控机体免疫应答 炎症反应 细胞凋亡及肿瘤形成等多种生理和病理过程 与 7 关系密切 国内外研究表明 %& 在 7 患者机体内呈现过度激活状态 导致并调控 7 患者 % 等细胞因子过度和持续表达 从而参与了 7 的发生和发展 23 样受体 ##%& 和 )% # & 信号通路是活化 %& 的两条重要途径 电 针对 7 有良好的治疗效果 但这种作用是否与其阻断 #%& 和 )%& 信号通路 抑制 %& 活性及下游促炎细胞因子的表达有关尚不清楚 本研究以三硝基苯磺酸 %&' 诱导 大鼠 7 以 # 单克隆抗体 #/) 和 ) 特异性抑制剂 01# 作为治疗对照组 观察电针对 7 大鼠结肠黏膜病理组织学 #%& 和 )%& 通路和下游促炎细胞因子表达的影响 进一步探讨电针治疗 7 的作用机制 材料与方法 材料 成年雄性健康清洁级 *+,-. 大鼠 # 只 体质量 ; 由新乡医学院实验动物中心提供 # 三硝基苯磺酸 %&''+;/- 公司 01# 美国.2/";- 公司 #/)23"; " 公司 "32 凝胶扫描仪 &8- 公司 美国.+23 试剂 美国 +.2;" 公司 #)%&% 及 -+ 基因引物 上海生工生物工程公司 一步法 试剂盒 宝生物工程有限公司 % 核蛋白 胞浆蛋白抽提试剂盒购自美国 "./2'+"+:+ 公司 抗磷酸化 ),".# 抗体购自 "3'+;- 3+;" 232;%& 兔抗鼠多克隆一抗和 5

3 期 张超贤 郭李柯 郭晓凤 三硝基苯磺酸 乙醇灌肠液诱导大鼠溃疡性结肠炎 #%& 和 )%& 信号通路的表达及电针的干预作用 羊抗兔二抗购自美国 '--.! 公司 动物分组与模型制作 ' 大鼠术前禁食 # 自由饮水 随机分为 组 正常对照组 模型组 电针组 # 单克隆抗体 #/) 组 01# 组 #/)<01# 联合治疗组 每组各 # 只 正常对照组不造模 模型组和治疗组参考文献 的方法造模 腹腔注射 ; 的水合氯醛使大鼠轻微麻醉 而后将一直径 // 长约 / 的硅胶管用石蜡油润滑 由肛门轻缓插入大鼠体内深约 / 缓慢注入含 /;;%&' 的等容积无水乙醇溶液 然后提起大鼠尾部 持续倒置 /+ 使造模剂充分渗入大鼠肠腔内 造模后 自然清醒 自由饮食 造模后第 天 各组开始给药 连续 # 周 电针组取双侧足三里穴 采用华佗牌 号半寸毫针 针尖圆滑 针刺时大鼠固定为仰卧位 对足三里穴做常规消毒 术者右手持针 针体与皮肤呈 1 刺入皮下 进针深度为 / 连接 6 电针治疗仪 将电针仪调整如下 调整输出调节旋钮置于 档 即输出电压为 > 保持不变 频率 5 每次留针 /+ 每日 次 周为一疗程 疗程间休息 共 # 周 #/) 组 01# 组分别按 ;; 和 ; ; 腹腔注射 正常组和模型组以等体积 ; 氯化钠灌肠 在造模过程中模型组和 01# 组各死亡 只 实验 # 周后 末次给药 # 后 脱颈椎法处死大鼠 取距肛门 / 结肠 沿纵轴剪开 刮取肠黏膜组织 即置于液氮中速冻 转入?@ 冰箱保存 21 疾病活动指数 ##,*& 在造模过程中 每天称重 记录大便情况 检测便潜血 计算 )) 结合大鼠的体质量下降百分率 体质量不变为 为 分 为 分 为 分 大于 为 # 分 大便黏稠度 正常为 松散的大便为 分 腹泻为 # 分 和大便出血 正常 分 隐血阳性为 分 显性出血为 # 分 种情况进行综合评分 将 项结果的总分除以 即得到 ) 值 即 ) 体重指数 < 大便形状 < 出血情况 结肠黏膜损伤指数 %%&.+%#.& 13 肉眼观察结肠病变组织肠黏膜形态 以正常 糜烂 溃疡分级描述 进行结肠黏膜大体形态损伤指数评分 分 无损伤 分 轻度充血 水肿 表面光滑 无糜烂或溃疡 分 轻 中度充血 水肿 糜烂 无溃疡 分 高度充血水肿 黏膜表面有坏死及溃疡形成 溃疡最大纵径 / 肠壁增厚或表面有坏死及炎症 # 分 在 分基础上溃疡最大纵径 / 或全肠壁坏死 4 组织学损伤指数 #+.& 5 取病变最明显处组织置于 / 甲醛溶液固定 常规石蜡包埋 5 染色 用于结肠组织形态观察 光镜观察 评分标准如下 炎细胞浸润 无 分 轻度 分 重度 分 浸润深度 黏膜层 分 黏膜和黏膜下层 分 结肠全层 分 溃疡深度 无 分 上皮 分 黏膜固有层 分 黏膜肌层 分 6 核蛋白 胞质蛋白的提取 剪取结肠组织 /;#@ 组织匀浆 A; 离心 /+ 弃上清 加入 高速涡旋, 冰浴 /+ 加入 涡旋, 冰上孵育 /+ 涡旋,#@ A; 离心 /+ 取上清即为胞质蛋白 将沉淀用预冷的 % 重悬 涡旋, 冰浴 /+ 并重复 # 次 最后 #@ A; 离心 /+ 取上清即为胞核蛋白 7#"&-% 法检测结肠组织 的表达 取 ; 胞质蛋白样品于 ;'' 聚丙烯酰胺凝胶电泳 然后转印至 > 膜 用封闭液 ; 脱脂奶粉 B ""&' 封闭后 加抗磷酸化 ) 抗体 抗 ) 抗体 孵育 #@ 过夜 次日 再与辣根过氧化物酶标记的相应二抗于室温孵育 最后 加 9 光曝片显影 凝胶成像系统分析吸光度 ) 比值 8#"&-% 法检测结肠组织活化 的表达 用 &) 蛋白浓度测定盒进行蛋白定量后 每孔上样 ; 蛋白样品与上样缓冲液共同煮沸 /+ 采用 ; 浓缩胶和 分离胶 >/+ 转至 > 膜 ; 脱脂牛奶室温封闭 一抗 #@ 过夜 二抗 室温 # 采用 6)5 作内参 化学发光现象于 9 光片 5. 的检测 用 ;" 公司 抽提 %) 后 采用 法检测 #/%) #/%) 引物序列 上游 D66))6 )))6 D 下游 D6)))66)66) D 扩增产物长度 内参 肌动蛋白序列 上游 D))66)6))))D 下游 D)66))6)D 扩增产物长度 反应 /+ 灭活转录酶 11@ /+ #/%) 扩增条件为 1#@ 预变性 /+ 1#@ 变性 退火 延伸 /+ 循环 延伸 /+ 产物在 ; 的琼脂糖凝胶中电泳 加样量为 分析 产物 测定扩增带 目的条带和 -+ 的吸收度值 计算 6 /%) 与 肌动蛋白的吸光度比值 9. 的检测.+23 试剂提取组织总

4 西安交通大学学报 医学版 第 卷 %) 采用 法检测 /%) /%) 引物序列 上游 D)) 6)D 下游 D)6666)) D 扩增产物长度 -+ 引物序列 上游 D)6)6))6)6)66)D 下游 D666666))66D 扩增产物长度 扩增条件为 1@ 预变性 /+ 后进入 个循环 1#@ /+ 延伸 /+ 扩增产物在 ; 琼脂糖凝胶上电泳分离 并在图像分析软件中计算每个样本扩增产物与 -+ 的灰度比值. 的检测 取结肠组织用.+23 试剂提取大鼠结肠总 %) 并测定纯度后 在逆转录酶 > 催化下合成 %) 以适量 %) 为模板在 %) 聚合酶催化下进行 扩增 ) / %) 引物序列 上游 D)))6666)6 )D 下游 D66)666)) D 扩增产物长度 6)5 为内参照 其上引物 D666)D 下游 D))666)6))D 扩增片段为 1 扩增条件为 预变性 1@ /+ 后 @,# 延长 /+ 将 产物在 ; 琼脂糖凝胶中进行电泳 置于 7>& 凝胶图像分析系统进行吸光度扫描 以 6)5 为内参照 用目的基因的吸光度与 6)5 吸光度的比值代表目的基因的相对表达含量. 的检测.+23 试剂盒提取大鼠结肠组织总 %)%& /%) 引物序列为上游引物 D))6)66)6))) D 下游引物 D66)))))66) D 扩增产物全长 以 6)5 作为内参照 其引物序列为上游引物 D)6))666))6 )66E 下游引物 D))6 666)D 扩增产物全长 反应条件 1#@ 预变性 /+ 1#@ 变性,@ 延伸 /+ 补充延伸 /+ 上述反应结束后将 扩增产物 冰箱保存备用 取 产物 ; 琼脂糖凝胶电泳 紫外灯下照相 在图像分析系统上进行密度扫描 用 %& 基因扩增产物的密度与 6)5 基因扩增产物的密度比值表示 %& /%) 的表达水平. 的检测.+23 试剂盒提取大鼠结肠组织总 %)% 的上 下游引物分别为 上游 D6)66)))66)6D 下游 为 D66)6)))6)66D 扩增产物全长 -+ 的上游引物 D6)6) ))))6D 下游引物为 D66666 )66))6)D 扩增产物全长 # 扩增条件为 1#@ 预变性 /+ 1#@ 变性, 退火 % 为 #@ 延伸, 个循环 延伸 /+ 扩增产物进行 ; 琼脂糖电泳 7> 凝胶显像仪扫描并进行图像分析 用目的基因与 -+ 吸光度的比值代表目的基因的相对表达含量. 的检测.+23 试剂盒提取大鼠结肠组织总 %) 引物序列如下 上游 D 66)6)6666)6)D 下游 D6))6)6666))6D 扩增产物全长 1 -+ 序列如下 上游 D)6 ))6))6)))D 下游 D)6)6 )))6)D 扩增产物全长 扩增条件为 预变性 #/+ 循环 #, 共 延伸 /+ 取 扩增产物 以 作为分子质量标准 进行 ; 的琼脂糖凝胶电泳 含 /; & 电泳后进行凝胶电泳图像扫描分析 电泳结果以 /%) 的表达相对量来表示 即 / %) -+ 的比值来表示 4 统计学处理 应用 ''' 统计学软件进行分析 数据以均数 标准差 表示 多组两两比较采用单因素方差分析 8 "-)%8>) 组间析因分析用 ' 检验 相关分析采用直线相关的积差相关分析 以 为差异有统计学意义 结 果 电针对 21 大鼠 13 及 的影响 正常对照组大鼠大便正常 体质量增加 毛发有光泽 活动均正常 结肠膜黏上皮完整 连续 黏膜下无充血水肿 腺体排列整齐 未见显著炎性细胞浸润 模型组大鼠精神萎靡 毛发无光泽 懒动 常卷缩而卧 饮食量减少 体质量下降 出现黏液稀粪 且逐渐加重 大体形态观察可见肠道粘连 局部结肠黏膜不同程度充血 水肿 糜烂和溃疡形成 5 染色观察见结肠黏膜结构遭严重破坏 部分区域黏膜坏死 脱落 有些病变深达黏膜下层 肌层或浆膜层 黏膜内腺体排列紊乱或缺如 细胞高度水肿 充血明显 并呈局灶性出血 细胞间质可见大量炎性细胞浸润 各治疗组大鼠毛色 精神及活动度较模型组健康 其腹泻 便血症状都有不同程度的减轻 治疗组在溃疡数 糜烂

5 #期 张超贤&郭李柯&郭晓凤 +三硝基苯磺酸乙醇灌肠液诱导大鼠溃疡性结肠炎 6:;57<!8 和 信号通路的表达及电针的干预作用 点个数均较模型组明显减少&同时炎症细胞浸润和杯 状细胞 减 少 程 度 也 减 轻!!#+ & 或!#+ %"' 其 #"O :H# I 5 #组!!#+ &"&电 针 组 与 6J: 组 在 各 项 检 测指标的比较中大体相当!!+ &&表 %图 %"' 中电针组和 6J: 组 治 疗效 果 优于单 用 6:;5GA0 或 表 M" 各组大鼠.-*' IQ.*及!.*的比较 6E0+ %"LPG)E F D P2P XKA?&LMK?E2-6K?EGP2Y '4"Y F P3)D! # %j" 组别 例数 正常组 5 模型组!I I+ ]"j#+ 5I& O+ "&j#++ #!& %%+!&ji+ 5& 6:;5GA0 组 5 O+ &5j%+ #O' Oj%+]&' ]+ #Ij%+ "!' :H#I5# 组!I O+ &Ij5+ "' "Oj!+ "#' ]+ #"j 5O' KA? LMK? 6K? 6J: 组 5 "!j#+ &O!+ #"j+ 5O 5%j!+ &#' ' - 电针组 5 &Ij%+!"' ' -!+ #]j+ "%' ' -!]j#+ I%' ' - ''- ''- 与正常组比较&&!#+ %%与模型组比较&'!#+ &&' '!#+ %%与 6:;5GA0 组比较&!#+ &%与 :H#I5# 组比较&-!#+ &' 图 M" 各组结肠组织的 XJ 染色 < % S^D E 2 2YP XF E 1 P Q P2 D D34 D 2 '4"Y F P3)D!e%" Y+ A#正常组% 8#模型组% L# 6:;5GA0 组% K# :H#I5# 组% ^# 6J: 组% <#电针组' NO N" 电针对大鼠 结 肠 组 织!"# F#%-' )* +, F#' %-') '-,!'活 化 %& '!'!%& '" F#%- 及 *" ' M# 于 6:;5GA0 组和 :H#I5# 组&电针组与 6J: 组 F#%- 表 达 的 影 响 " 模 型 组 结 肠 组 织 6:;5 G; 7A >?!@ G;7AA@6 G;7A > A@6活 化 7< 7< %# G;7A 表 达 呈 正!8 与 67< " G;7A 及?: 相关! "% N+ &OI&! #+ &% "# N+ &"%&! #+ && 67< %# G;7A 较 正 常 对 照 组 显!8 "G;7A 及?: 著增 高!! #+& 或! #+%""%6:;5GA0 组 图 #表 #"' 6:;5G;7A 表 达 较 模 型 组 明 显 下 降!! #+ %"& :H#I5# 组 >?!@G;7AA@6 G;7A > A@6 低 在各项检测指标的比较中大体相 当!!+ &"&活 化 +" 讨 "" 论 67< " 是由 单 核 巨 噬 细 胞 产 生 的 一 种 细 胞 因 于模型 组!! #+ & 或! #+ %"&而 在 电 针 组 和 6J: 组 6:;5 G;7A >?!@ G;7AA@6 G;7A 子&具有广泛 的 生 物 学 活 性&除 抗 肿 瘤 外&对 免 疫 反 及> A@6 表达均 明 显低于 模型组!!#+ & 或!# 用 )%*'67< " 参于 UL 致病作用主要 是使中 性粒 细 + %"%与 上 述 变 化 相 对 应&各 治 疗 组 活 化 7<!8 67<?: %# G;7A 表 达 均 明 显 降 低!!# "G;7A 胞聚集内皮细胞黏附分子表达上调及引起凝血酶原 + & 或!#+ %"&电 针 组 和 6J: 组 这! 项 指 标 优 炎 症 细 胞 分 泌 其 他 细 胞 因 子 '如 诱 导 产 生 血 小 板 激 应机 体 代 谢炎 症 反 应 均 有 重 要 的 调 节 介 导 作 效应等'在肠道中介导黏膜损伤的作用&同时可刺激 ***+.//0+ ' -./0+ 12%' / )#, )#,

6 西安交通大学学报 医学版 第 卷 图 各组结肠组织..... 和. 的表达 +;.",,+2,2:)%&# /%) /%)) /%)%& /%)%/%) -/%) ,,!",+ ";.2!, -.". 正常组 模型组 #/) 组 #01# 组 组 电针组 活因子 白三稀等 使结肠固有膜内小血管在炎症基础上形成微血栓 导致黏膜微循环障碍 使肠黏膜组织损伤进一步加重 % 可通过上述过程参与 7 发病 为 7 发病机制中的启动因子 是一种能激活多种免疫和炎症细胞的炎性细胞因子 其中 & 能促进血管内皮 白细胞黏附分子的表达 趋化中性粒细胞等炎性细胞进入肠道病变部位 从而引起一系列肠道炎症反应和组织破坏 % & 活化是众多炎症介质作用机制的共同通道 % & 广泛存在于静止期细胞的细胞质中其蛋白二聚体与特异性抑制蛋白 & 结合成三聚体 以非活化形式存在于细胞质中 当细胞受到如病毒或细菌感染 紫外线照射和感染前期细胞因子等作用刺激后 & 发生磷酸化而失活 %& 进而活化 进入细胞核内

7 期 张超贤 郭李柯 郭晓凤 三硝基苯磺酸 乙醇灌肠液诱导大鼠溃疡性结肠炎 #%& 和 )%& 信号通路的表达及电针的干预作用 1 表 各组大鼠结肠组织.... 活化. 及. 表达的比较 -2/-.+,2 2:#/%) /%)) /%))%& /%)-+"%&%/%)- /%)".",,+2, ,,!",-/2;";.2!, 组别 #/%) /%) ) /%) ) %&/%) 活化 %& %/%) /%) 正常组 # 1# #1 # 1 模型组 1 # 1# # 1 #/) 组 # # # # 组 1 1# # # # 联合组 # # # # # # 电针组 # # 1 # # ## 与正常组比较 与模型组比较 与 #/) 比较 与 01# 组比较 启动或调节早期反应基因的转录 如细胞因子 生长因子和急性期蛋白等 产生大量的包括 % 等炎症因子 另外 % 等细胞因子也可以通过激活 %& 诱导激酶 % 和丝裂原蛋白激酶的激酶 从而使 磷酸化而激活 激活后的 再使 & 磷酸化 后者最后被蛋白酶降解 从而 使 %& 游离出来而活化 使信号进一步放大 大量研究表明 %& 在 7 中高度表达并诱导 % 大量表达在 7 中发挥重要的作 # 用 研究显示 %& 抑制剂能显著减少结肠黏膜炎症细胞浸润 降低 % 等细胞因子基因表达 有效改善结肠组织炎症反应 说明 %& 在 7 发生与发展中发挥重要枢纽作用 本研究发现 模型组 %&/%) 表达高于正常对照组 提示 %& 表达增高与 7 发生有关 另本研究免疫印迹法测定法显示 在模型组大鼠结肠组织细胞核活化 %& 表达增高的程度较正常组更为显著 提示 7 中不仅有 %& 表达增强 更重要的是存在 %& 激活 因此 本研究进一步证实 %& 的异常表达与激活在 7 发生中起重要作用 # 是第一个被发现的 23 样受体 # 识别和摄取 ' 后通过其下游 依赖性及非依赖性信号转导通路来激活各种炎症因子 活化的 23 样受体的胞内结构域与 羟基端相互作用使其活化 活化的 可诱导 ), 激酶磷酸化 进而激活胞质内的 ) 活化后的 ) 通过 ) 与 信号级联 使 & 磷酸化而降解 最终激活 %& 活化后的 %& 由胞质转移到细胞核内 引起促炎细胞因子基因的转录和表达 启动天然免疫和炎症反应有关基因的转录 诱发各种炎症反应 ) 信号通路主要由磷脂酰肌醇 激酶 2,2+2,++"+-," 和蛋白激酶 &.2"+ +-,"& 简称 & 或 ) 组成 是肌醇与磷脂酰肌醇的重要激酶 活化后可使肌醇环上的 位羟基磷酸化 使磷脂酰肌醇二磷酸 2,-+3+2,+23#+,2,-" 转变为第二信使磷脂酰肌醇三磷酸 2,-+3+2,+23#.+,2,-") 是一种丝氨酸 苏氨酸蛋白激酶 与 )% 端的 5 结构域 3",.+ 2/23 2;2/-+ 结合 使 ) 从细胞质转移到细胞膜上 并改变 ) 的构象使之能被 磷脂酰肌醇依赖型激酶 2,2+2,++"""".2"+ +-," 所磷酸化和激活 %& 是 ) 重要的下游效应子之一 ) 磷酸化使 活化 促使 & 降解 从而使 %& 从复合物中解离并定位到细胞核中 恢复 %& 的转录活性 启动靶基因转录 # %& 和 )%& 信号通路是活化 %& 的两条重要途径 联合测定 #%& 和 ) %& 能了解上述信号通路与疾病的关系 可作为疾病的诊断 预后和信号通路阻断治疗的一个有用指标 本研究结果显示 %& 活性 % 与结肠组织 #%& 和 )%& 含量呈同方向变化 这验证了 #%& 和 )%& 信号通路可能是 %& 重要活化途径 所以可以说 # %& 和 )%& 信号通路可通过直接或间接方式在 7 发生 发展中发挥着重要作用 提示通过阻断 #%& 和 )%& 通路 抑制 %& 活化进而下调 % 表达是有效改善结肠黏膜炎症损伤的一个重要途径 中医理论认为疾病状态下 经络会出现血气阴阳偏盛的虚实征候 针刺穴位可激发经络本身协调阴阳的功能 泄其有余 补其不足 阴阳平复 达到调整虚实防治疾病的作用 现代研究表明 神经内分泌系统与免疫系统之间有密切的双向调节联系 免疫细胞上有多种神经内分泌激素受体 多种激素会影响免疫功能 免疫细胞也可合成神经递质和激素影响内分泌系统 神经 内分泌 免疫系统紊乱参与 7 发病 针刺可影响神经内分泌激素和细胞因子的生成和表达 双向调节神经一内分泌一免疫网络 使异常机能向有

8 西安交通大学学报 医学版 第 卷 利于机体的方向转化 有研究表明 针灸对提高免疫系统机能的调整功能是扶正的物质基础 又是除邪的物质条件 表明针灸 补虚泻实扶正祛邪 的理论是科学的 其调整功能是可靠的 足三里穴是足阳明经合穴 为土中之土穴 回阳针穴之一 是强壮要穴和肚腹疾患之常用穴 针刺足三里穴所产生的信号是通过腓深神经和胫前动脉壁上的神经丛上传的 其传入冲动在脊神经节 脊髓背角 延髓等不同中枢水平与胃肠等内脏器官的感觉传入汇聚 使足三里穴 胃肠经穴 脏腑之间建立特异的相互联系 现代研究证实 足三里可调节机体免疫功能 调整胃肠功能 调整肠道内环境而达到治疗目的 本研究结果显示 模型组结肠组织中 #/%)/%)) 活化 %&%/%)/%) 表达及大鼠 ) 及 显著增加 这提示 7 发生时机体 #%& 和 )% & 信号通路表达增强 能激活 %& 活化的 %& 可通过上调 % 的表达参与参与 7 的发生 发展 与模型组比较 各治疗组大鼠结肠组织活化 %&%/%)/%) 表达及大鼠 ) 及 显著降低 或 以 联合组和电针组更为显著 同时在 #/) 组大鼠结肠组织 #/%) 明显下降 在 01# 组大鼠结肠组织 /%)) 明显下降 联合组 #/%) 和 /%)) 均明显下降 这说明 #/) 和 01# 可分别以阻断 #%& 和 )%& 信号通路来抑制 %& 的活化 下调 %/%) /%) 促炎细胞因子的表达 调节免疫反应 减少炎症递质的释放 从而有效阻断免疫反应性对机体造成的损伤 达到预防 7 的目的 两者联用时有协同作用 另本研究结果显示 电针对 7 大鼠上述各指标的抑制程度与 联合组相当 这提示阻断 #%& 和 )%& 两通路 抑制 %& 活化 下调炎症因子是电针治疗 7 的重要机制 为临床电针治疗 7 提供了理论和实验依据 参考文献 673!+ 667,-+,+6-- /&"## "1#.1# ###1#.# #/#5#1& -/383!9' 57!7'7 5*57 #11"'"+1# #10/""# #&/*1#1##& 6 6-'8!57'8 :&8")"# #1#0 0 1 # ## # ). &1###& #6+!,-'8)67' 6&/"#1 11,"*+,- '). 1#1#&#) 1#1& 贾一波 冯先霞 刘雪锋 & 电针配合穴位贴敷治疗慢性溃疡性结肠炎 & 中国针灸 11& -)5--6 5!+!- '&0" 1#"#')"#"## &/**1#1 & 9'/ /95'7-9'/ !&5 11"5"#"### 1#& ')#1###&!-76!-'8 6&*#1 0-1### &"8#1& 1 昝慧 钟英强 & 骨髓间充质干细胞 瘤坏死因子受体 抗体融合蛋白 美沙拉嗪对 ') 诱导的结肠炎大鼠的疾病活动指数与组织损伤指数的影响 & 中国病理生理杂志 1 #1& -/7 '!;73!+'8-7 5&#1# #"#""0 0#" #"11 &!" "##& 7/3-, 5/+)7 587-/,+!,&' "01'#"1./""##&*-#!".& -!-!7767,-'+-876'9'53 *36' 9'53 '+)" +#+' 11 #".##0 """"#. ##& / 8 #& 6+!&10 "#" #"1 # " 1 ###')""1# 1!!"& #89%37!*-!/+7!/8-/+-57! '/6 &##. ". #1"###0 0')&!5#11& +! )567'8&## "+-1" 1##&!"#& 5!+//787,86-5+!+!* 1*+,-. 1 ""## 1&!"*& +-,-3-5 '-)7&-"#+* 0""#" ') # "-""111 & 编辑 卓选鹏

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