122 海洋学报 33 卷 [14] 传多样性的研究还比较少 Perez 等在开发和筛选了 112 个对虾属通用 EST 微卫星引物, 并衡量了它们在比利时南美白对虾南美蓝对虾 ( 犔犻狋狅狆犲狀犪犲狌狊狊狋狔犾犻狉狅狊狋狉犻狊 ) 和鹰爪虾 ( 犜狉犪犮犺狔狆犲狀犪犲狌狊犫犻狉犱狔 ) 野生种

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顼季
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1 第 33 卷第 1 期海洋学报 Vol.33,No 年 1 月 ACTA OCEANOLOGICASINICA January2011 凡纳滨对虾犈犛犜犛犛犚标记的筛选及遗传多态性检测张琼 1, 李喜莲 1, 薛淑雯 1, 刘小林 1, 黄皓 2, 相建海 3 (1. 西北农林科技大学动物科技学院农业分子生物学陕西省重点实验室, 陕西杨凌 ;2. 海南南疆生物技术有限公司, 海南三亚 ;3. 中国科学院海洋研究所实验海洋生物学开放实验室, 山东青岛 ) 摘要 : 为了研究我国海南地区某凡纳滨对虾 ( 犔犻狋狅狆犲狀犪犲狌狊狏犪狀狀犪犿犲犻 ) 繁育群体的种质资源多样性, 选取 14 个比利时野生对虾的 EST 微卫星标记, 以 240 个中国人工选育的凡纳滨对虾个体为研究对象, 检测这些标记在该养殖群体遗传多样性评估中的可行性, 结果表明, 有 7 个引物可扩增出清晰条带, 其中 5 个引物 (345,390,437,444, 487) 具有多态性, 共获得 12 个等位基因, 平均等位基因数为 ±0.5477, 平均有效等位基因数为 ±0.3278, 平均观察杂合度为 ±0.2331, 平均期望杂合度为 ±0.0826, 平均多态信息含量为 ±0.0862, 表明筛选出来的 5 个 EST 微卫星标记可以用于海南地区凡纳滨对虾人工繁育品种的遗传多样性分析, 研究群体的多态性差异比较显著, 遗传多样性处于中度水平对我国凡纳滨对虾养殖群体和比利时凡纳滨对虾野生群体的遗传差异性进行了探究两个群体的遗传变异可能受到地理隔离及多代定向选育的影响研究结果为凡纳滨对虾 EST 微卫星遗传多样性研究对虾人工选育及种质利用提供了可靠的科学依据关键词 : 凡纳滨对虾 ;EST SSR; 遗传多样性中图分类号 :Q 文献标志码 :A 文章编号 : (2011) 引言凡纳滨对虾 ( 犔犻狋狅狆犲狀犪犲狌狊狏犪狀狀犪犿犲犻 ), 又称南美白对虾, 原产于南太平洋沿岸海域, 在厄瓜多尔海区分布尤为集中由于具有个头大食性广适应能力强生长快抗病能力强成活率高等优点, 凡纳滨对虾已成为世界公认的三大经济对虾之一近年来在广东浙江海南等地区掀起了凡纳滨对虾养殖的热潮, 凡纳滨对虾产量也成为我国水产养殖的支柱产业目前关于凡纳滨对虾遗传多样性及其相关分析的成果多来自于以 AFLP [1] SNP [2] Genome 微卫星标记等为主的研究 Cruz [3] 等利用 Genome SSR 评估凡纳滨对虾养殖群体的遗传多样性, 也有研究者用 SSR 标记进行对虾不同地理种群的群落 [4-7] 结构研究相对于上述遗传标记, 尤其是传统的基因组微卫星标记,EST SSR 不但具有微卫星标 [8] 记多态性高呈共显性遗传数量丰富等特点, 同时由于部分 EST 来源于基因的编码区, 所以能在一定程度上直接准确地标记功能基因, 更真实地反映 [9-12] 该物种的遗传多样性我国拥有丰富的水产动物遗传资源, 但目前研究主要见于 Genome 微卫星标记在遗传特性中的开 [13] 发与利用, 而且多集中于鱼贝等水产动物上, 在凡纳滨对虾等甲壳动物中利用 EST 微卫星进行遗收稿日期 : ; 修订日期 : 基金项目 : 国家十一五八六三重点项目 (2006AA10A406); 中国科学院实验海洋生物学开放课题作者简介 : 张琼 (1985 ), 女, 甘肃省武威市人, 硕士研究生, 专业方向为水生生物遗传资源学 E mail:zasj_14@nwsuaf.edu.cn 通信作者 : 刘小林 (1961 ), 男, 陕西省城固县人, 教授, 博士生导师, 主要从事海洋动物遗传育种研究 E mail:liuxiaolin@nwsuaf.edu.cn

2 122 海洋学报 33 卷 [14] 传多样性的研究还比较少 Perez 等在开发和筛选了 112 个对虾属通用 EST 微卫星引物, 并衡量了它们在比利时南美白对虾南美蓝对虾 ( 犔犻狋狅狆犲狀犪犲狌狊狊狋狔犾犻狉狅狊狋狉犻狊 ) 和鹰爪虾 ( 犜狉犪犮犺狔狆犲狀犪犲狌狊犫犻狉犱狔 ) 野生种群间的通用性本研究正是以此为基础, 以 240 个凡纳滨对虾为研究对象, 利用筛选的 14 个对虾属通用 EST 微卫星标记检测其在该凡纳滨对虾养殖群体多态性研究中的可行性, 以期为该凡纳滨对虾多代选育群体的遗传多样性种质评估和遗传选育提供科学依据 2 材料与方法 2 1 试验样本及模板犇犖犃的提取本研究样本采自海南南疆生物技术有限公司的 SPF 南美白对虾良种场, 从引自美国夏威夷 SPF 亲虾 (2002 年 ), 从人工选育 6 代得到的高产抗病群体中随机采集 240 个凡纳滨对虾个体, 冷冻运回实验室保存备用剪取约 0.5g 对虾尾节肌肉, 采用常规的高盐法提取基因组 DNA 使用前用紫外分光光度计 (752 型, 南京麒麟分析仪器有限公司 ) 检测纯度,-20 备用 2 2 犈犛犜微卫星标记的选择和引物合成本研究选用 2005 年报道的有多态性的 14 个比利时对虾属通用 EST 微卫星标记 345 ( 犉 : 犌犃犃犌犜犌犃犌犆犜犜犌犌犆犃犜犆犆犃, 犚 : 犌犜犃犌犃犌犆犃犌犆犌犃犌犆犆犃犌犆 ), 347( 犉 : 犜犌犃犜犆犌犆犃犃犆犃犃犜犃犃犃犌, 犚 : 犌犜犆犌犃犃犌犆犜犌犌犃犃犃犆犜 ),CN M MG 372 ( 犉 : 犜犌犌犃犜犜犜犌犆犆犌犃犜犜犌犃, 犚 : 犜犆犆犆犃犌犆犃犆犜犜犌犜犆犃犜犆 ), 390 ( 犉 : 犆犌犜犃犃犌犃犜犌犜犌犆犆犃犌犜, 犚 : 犆犃犌犜犜犃犜犃犃犃犌犜犆犃犃犃犃犌犜犃 ),418 ( 犉 : 犜犃犌犆犆犃犃犆犌犃犃犆犃犃犌犆, 犚 : 犌犃犜犜犃犌犜犜犌犃犜犜犃犌犆犃犌犌犃 ), 421( 犉 : 犜犜犜犆犜犌犆犆犃犆犌犌犃犌犜犜, 犚 : 犆犜犌犜犜犌犆犆犆犃犃犃犜犃犌犆 ), 437( 犉 : 犆犃犃犆犆犃犌犌犃犃犃犜犃犌犃犃犆犃犌, 犚 : 犌犆犃犌犆犆犜犜犃犆犆犃犆犌犃犆 ), 444( 犉 : 犆犌犜犃犆犃犃犌犌犆犃犜犜犌犌犌, 犚 : 犌犆犃犜犆犜犃犆犜犜犜犌犃犆犌犆犃犆犜 ), 451 ( 犉 : 犜犆犆犃犆犆犃犜犃犌犆犆犜犆犆犃, 犚 : 犆犆犌犆犜犌犆犃犃犜犌犃犃犆犆犃 ),463( 犉 : 犃犃犆犌犆犃犌犆犌犆犃犌犃犃犌犃, 犚 : 犜犌犌犃犃犜犜犌犜犌犃犌犆犌犌犃犜犃 ), 487( 犉 : 犌犃犆犃犌犃犆犃犌犜犌犌犜犌犌犆犌, 犚 : 犆犌犜犜犆犜犆犆犜犜犌犆犌犜犌犃犜犌 ), 498( 犉 : 犜犜犌犆犜犌犆犜犜犃犆犜犌犜犆犜犜犌犆, 犚 : 犆犃犜犆犃犜犆犆犌犃犆犜犆犜犜犆犆犜 ),529( 犉 : 犜犜犌犆犜犌犆犜犜犃犆犜犌犜犆犜犜犌犆, 犚 : 犃犜犆犃犜犆犆犌犃犆犜犆犜犜犆犆犜犆犜 ), 531 ( 犉 : 犌犜犜犆犜犌犜犜犜犃犆犃犃犜犜犌犌犜犜犆, 犚 : 犌犃犌犌犃犌犌犃犆犜犌犃犌犌犌犜犌 ) [14], 所有引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成 2 3 犘犆犚扩增条件及聚丙烯酰胺凝胶检测以提取的凡纳滨对虾基因组 DNA 为模板, 对 14 对微卫星引物进行筛选为了提高扩增过程的特异性, 本文在采用标记原使用的降落 PCR 体系的基础上, 改进使用梯度 PCR 筛选确定每个标记的最佳退火温度 ( 犜 m) 值筛选过程至少重复两次, 选择出有清晰稳定扩增产物的 7 对微卫星引物, 345, 390, 437, 444, 487, 498, 529, 犜 m 值依次为 59.0,50.3,54.4, 50.7,55.4,44,52.1, 其中 345,CNM MG390 和 437 均标记获得 2 个等位基因,444 和 487 均获得 3 个等位基因, 而 498 和 529 均获得 4 个等位基因, 所有扩增片段从 136bp 到 743bp 不等采用常规 PCR 程序扩增, 体系总体积均为 10μL/ 个 95 预变性 3min,35 个循环 (94 变性 30s, 犜 m 退火 60s,72 延伸 1 min),72 充分延伸 10min,4 保存 PCR 扩增产物通过 10% 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离带型 : 将 30% 丙烯酰胺 25 ml,10 TBE7.5mL, 纯水 42.5 ml,10% 过硫酸铵 (APS) 500μL 和 TEMED50μL 混匀进行灌胶, 温室下聚合 1h 后固定在电泳槽上, 点样后 120V 恒压预电泳 10min, 再改为 80V 恒压电泳 12~14h,1% 硝酸银 500 ml 染色,2% 氢氧化钠 250 ml( 加入 1mL 甲醛 ) 显色, 采用 PBR322DNA/MspIMakers 作为分子量标准 2 4 犈犛犜微卫星标记扩增产物的测序检测 [15] 采用改进的煮沸法进行聚丙烯酰胺凝胶产物的回收 : 从 PAGE 胶上切下目的条带, 放入 1.5mL 的灭菌离心管中, 加入 50μL 灭菌双蒸水洗胶 2~3 次, 后加入 30μL 灭菌双蒸水并用枪头碾碎, 于沸水中煮沸 10 min, 离心收集上清液将 5μL 上清液作为 DNA 模板, 采用相同的反应体系和反应条件进行 PCR 的重扩增,1.0% 琼脂糖电泳检测

1 期张琼等 : 凡纳滨对虾 EST SSR 标记的筛选及遗传多态性检测 123 2 5 图像分析用 Discovery Series Quantity One Software Version4.3.1 (Bio RadLaboratoriesInc) 软件进行片段大小统计和基因型分析 2 6 数据统计与分析有效等位基因数 (efectivenumberofaleles, 犖 e) 是基因纯合度的倒数, 反映了等位基因间的相互影响, 是衡量基因纯合度的另一指标狀犖 =1/ 2 e 犘犻.

3 1 期张琼等 : 凡纳滨对虾 EST SSR 标记的筛选及遗传多态性检测图像分析用 Discovery Series Quantity One Software Version4.3.1 (Bio RadLaboratoriesInc) 软件进行片段大小统计和基因型分析 2 6 数据统计与分析有效等位基因数 (efectivenumberofaleles, 犖 e) 是基因纯合度的倒数, 反映了等位基因间的相互影响, 是衡量基因纯合度的另一指标狀犖 =1/ 2 e 犘犻. (1) 观察纯合度 ( 犎 o) 与期望杂合度 ( 犎 e) 都是用来度量某一群体中特定基因座上等位基因纯合程度的指标狀 2 犎 o = 犘犻, (2) 狀 2 犎 e =1- 犘犻. (3) [17] 用 PopGene(verion3.2) 软件统计对虾群体 12 个微卫星基因座的等位基因数有效等位基因数观察杂合度期望杂合度多态信息含量 (polymorphisminformationcon tent,pic, 犮 pi) [18] 用于对标记基因多态的估计,PIC 大于 0.5 为高度多态, 大于 0.25 且小于 0.5 为中度多态,PIC 小于 0.25 为低度多态用 Cervusver sion2.0 软件计算标准差 (α) 用 Excel 函数进行计算狀 ( 狓犻 - 狓 ) 2 α= 槡狀 -1, ( 4) 犿犿 -1 犿 2 犮 pi =1- 犘犻犘犻犘犼. (5) 犼 = 犻 +1 式中, 狀为等位基因数 ; 犘犻为第犻个等位基因的基因频率 ; 犘犼为第犼个等位基因的基因频率 3 结果与分析 3 1 凡纳滨对虾犈犛犜微卫星标记的等位基因类型本研究检测了 240 个凡纳滨对虾个体中 14 个 EST 微卫星标记上的遗传多态性, 其中 6 个标记 ( 347, 372, 418, 421,463,531) 没有扩增产物 ;1 个标记 (451) 呈现无规律梯状条带 ;2 个标记 ( 498 和 529) 均有 4 个等位基因, 但表现为单态, 均不能用于凡纳滨对虾对虾遗传多态性研究, 在后续分析中剔除所有标记中 5 个标记 ( 345,CNM MG390,437,444 和 CNM MG487) 具有多态性 ( 图 1), 其中 345, 390 和 437 各有 2 个等位基因,444 和 487 各有 3 个等位基因, 多态标记占总标记的 35.7% 图 1 具有多态性的 5 个基因座部分个体基因型检测图 1~5 分别为 345,390,CNM MG437,444 和 487 基因座 3 2 凡纳滨对虾犈犛犜微卫星标记的遗传多样性具有多态性的 5 个 EST 微卫星标记的等位基因频率及遗传多样性指标见表 1 5 个 EST SSR 标记在 240 个凡纳滨对虾个体中共获得 12 个等位基因, 平均等位基因数平均有效等位基因数平均观察杂合度和平均期望杂合度分别为 ± ,2.0600± ,0.5333± 和 ± , 多态信息含量从到不等, 均值为 ±0.0862, 遗传多样性处于中度水平

4 124 海洋学报 33 卷表 1 凡纳滨对虾 5 个多态性基因座的等位基因频率及遗传多样性指标标记等位基因频率 A B C 犖 a 犖 e Shannon 指标犎 o 犎 e 犮 pi / / / 平均 / / / ± ± ± ± ± ± 注 :A,B,C 分别为不同大小的等位基因 4 讨论近 3a 随着分子生物技术和生物信息学理论的不断发展和深入,EST 标记由于自身的优点及其与功能基因紧密联系的特性很快成为最有发展潜力和应用价值的分子标记之一凡纳滨对虾 EST 序列 [19-20] 数据库的迅速扩充也使得大量基于 EST 的遗传标记的发现成为可能, 并被广泛应用于生物群体遗传特性的研究, 但是将 EST SSR 标记应用于经多代遗传选育的我国凡纳滨对虾种质资源多样性评估的研究还比较少见 4 1 犈犛犜犛犛犚标记的筛选筛选的 14 个凡纳滨对虾 EST 微卫星标记在比 [14] 利时对虾群体中均具有不同程度的遗传多态性, 本文研究了这 14 个 EST 微卫星标记在我国海南某凡纳滨对虾繁育群体遗传特性中的可行性, 结果表明, 对 6 个标记 ( 347, 372, 418, 421, 463, 531) 未得到稳定的扩增产物 ;1 个标记 (451) 呈现无规律梯状条带, 这可能是因为 EST 微卫星片段在对虾中存在着大量多重拷贝 [21] 的缘故 ;2 个标记 (498 和 529) 虽然在比利时凡纳滨对虾中表现出丰富的多态性, 但在本文却发现其无多态性, 这可能与该对虾群体经过多年来的定向遗传选育导致其遗传多样性降低有关, 因此上述 9 个标记不能应用于该凡纳滨对虾群体遗传多态性的研究其余 5 个标记 (CNM MG 345, 390, 437,CNM MG444,487) 在该凡纳滨对虾养殖群体中具有较高的多态性, 可应用于该凡纳滨对虾群体遗传多态性研究 4 2 群体遗传多样性有效等位基因数反映了等位基因的相互影响, 是群体遗传变异的一个重要指标本研究的 5 个 EST SSR 座位在共获得 12 个等位基因, 平均等位基因为 ± 个, 平均有效等位基因为 ± 个平均期望杂合度又称群体基因多样性, 其大小可反映群体的遗传一致性程度犎 e 越高, 反映群体的遗传一致性就越低, 其遗传多样性就越丰富本研究中, 犎 e 为 ± , 为较高的平均期望杂合度, 解释了该群体具有较丰富的遗传多样性 PIC 是衡量微卫星 DNA 座位变异程度高低的重要指标当某微卫星座位 PIC 大于 0.5 时, 表明该座位为高度多态座位 ; 大于 0.25 且小于 0.5 时, 为中度多态座位 ; 小于 0.25 时, 该座位为低度多态座位本研究的 5 个 EST SSR 座位中 444 标记的 PIC 值大于 0.5, 表明该标记为高度多态标记, 其他 4 个标记 (345,390,437 和 487) 的 PIC 值介于 0.3 到 0.5 之间, 属于中度多态标记, 群体平均多态信息含量为 ±0.0862, 这与杂合度分析结果相一致, 表

5 1 期张琼等 : 凡纳滨对虾 EST SSR 标记的筛选及遗传多态性检测 125 明该群体遗传变异比较显著, 遗传多样性处于中度水平这与该凡纳滨对虾养殖场多年以来的定向选育有很大的关系, 随着种内选育的繁殖代数增加, 遗传距离逐渐缩短, 造成种群整体遗传多样性慢慢呈现下降趋势在研究的座位中 345 曾被报道呈现无 [14] 规律梯状条带, 而本研究发现, 其在 136~144bp 处具有 2 个等位基因的多态性, 这表明比利时凡纳滨对虾野生种与我国凡纳滨对虾养殖种之间还是存在明显的遗传差异性 ; 在 444,487 标记的扩增条带附近出现的影子带可能是由于微卫星基因座犜犪狇酶在扩增过程中发生滑动而引起 [22] PCR 产物出现同源异型的现象, 这在王鸿霞等应用微卫星标记研究对虾家系鉴别时也有报道为了辨别这种可能的干扰因素, 本研究又采用聚丙烯酰胺凝胶产物片段回收测序的方法进行验证, 以去除影子条带干扰, 结果证明了差异较小扩增不甚稳定的微卫星扩增片段进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测时有可能出现一定的误差, 可与回收测序的方法结合, 以提高检验结果的准确性综上所述, 本研究的结果首次为凡纳滨对虾养殖种和比利时凡纳滨对虾野生种的遗传差异性研究提供了可靠的科学依据, 对我国凡纳滨对虾人工选育工作的开展具有重要的指导意义参考文献 : [1] ZHANGL,YANGC,ZHANGY,etal.AgeneticlinkagemapofPacificwhiteshrimp( 犔犻狋狅狆犲狀犪犲狌狊狏犪狀狀犪犿犲犻 ):sex linkedmicrosatel litemarkersandhighrecombinationrates[j].genetica,2007,131(1): [2] GORBACH D M,HUZL,DUZQ,etal.SNPdiscoveryin 犔犻狋狅狆犲狀犪犲狌狊狏犪狀狀犪犿犲犻 withanewcomputationalpipeline[j].animalgenet ics,2009,40(1): [3] CRUZP,IBARRA A,MEJIA RUIZ H.Geneticvariabilityassessedby microsatelitesinabreedingprogram ofpacificwhiteshrimp ( 犔犻狋狅狆犲狀犪犲狌狊狏犪狀狀犪犿犲犻 )[J].MarineBiotechnology,2004,6(2): [4] VAN WORMHOUDT A,SELLOSD.Highlyvariablepolymorphismofthealpha amylasegenefamilyin 犔犻狋狅狆犲狀犪犲狌狊狏犪狀狀犪犿犲犻 (Crusta ceadecapoda)[j].jmolecularevolution,2003,57(6): [5] VALLES JIMENEZR,CRUZP,PEREZ ENRUQYEZR.PopulationgeneticstructureofPacificwhiteshrimp( 犔犻狋狅狆犲狀犪犲狌狊狏犪狀狀犪犿犲犻 ) from MexicotoPanama:microsateliteDNAvariation[J].MarineBiotechnology,2004,6(5): [6] MAGGIONIR,ROGERS A,MACLEAN N.Populationstructureof 犔犻狋狅狆犲狀犪犲狌狊狊犮犺犿犻狋犻 (Decapoda :Penaeidae)fromtheBrazilian coastidentifiedusingsixpolymorphicmicrosateliteloci[j].molecularecology,2003,12(12): [7] BLLA,CHAPMAN R.Populationgeneticanalysisofwhiteshrimp, 犔犻狋狅狆犲狀犪犲狌狊狊犲狋犻犳犲狉狌狊,using microsatelitegeneticmarkers[j]. MolecularEcology,2003,12(9): [8] POWELL W,MACHRAY GC,PROVANJ.Polymorphismrevealedbysimplesequencerepeats[J].TrendsinPlantScience,1996, 1(7): [9] HUJ,WANGX,HUX,etal.Existenceofmicrosatelitesinexpressedsequencetagsofcommoncarp( 犆狔狆狉犻狀狌狊犮犪狉狆犻狅 L.)availablein GenBankdbESTDatabase[J].JournalofOceanUniversityofChina.2006,5(1): [10] WANG M Q,HUJJ,ZHUANG Y YZL,etal.Insilicoscreeningformicrosatelitemarkersfromexpressedsequencetagsof 犘狅狉狆犺狔狉犪狔犲狕狅犲狀狊犻狊 (Bangiales,Rhodophyta)[J].JournalofOceanUniversityofChina,2007,6(2): [11] JIXS,CHENSL,MA H Y,etal.Isolationandcharacterizationof19EST linkedploymorphicmicrosatelitelociforoliveflounder ( 犘犪狉犪犾犻犮犺狋犺狔狊狅犾犻狏犪犮犲狌狊 )[J].AquacultureResearch,2009,40(8): [12] YU H,LIQ.ExploitingESTdatabasesforthedevelopmentandcharacterizationofEST SSRsinthePacificoyster( 犆狉犪狊狅狊狋狉犲犪犵犻犵犪狊 ) [J].JournalofHeredity.2008,99(2): [13] 佟广香, 闫学春, 匡友谊, 等. 马氏珠母贝微卫星快速分离及遗传多样性分析 [J]. 海洋学报,2007,29(4): [14] PEREZF,ORTIZJ,ZHINAULA M,etal.DevelopmentofEST SSR markersbydatamininginthreespeciesofshrimp: 犔犻狋狅狆犲狀犪犲狌狊狏犪狀狀犪犿犲犻, 犔犻狋狅狆犲狀犪犲狌狊狊狋狔犾犻狉狅狊狋狉犻狊,and 犜狉犪犮犺狔狆犲狀犪犲狌狊犫犻狉犱狔 [J].MarineBiotechnoloy,2005,7(5): [15] 陈亮明, 张冬林, 李志辉, 等.PAGE 银染和条带回收方法的改进 [J]. 中南林业科技大学学报 : 自然科学版,2007,27(6): FRANKHAM R,BALLOU J,BRISCOE D.IntroductiontoConservation Genetics[M].Cambridge:Cambridge UniversityPress, 2002: [17] RAYMAND M,ROUSSETF.GENEPOP (Version1.2):Population geneticssoftwareforexacttestsandecumenicism[j].jhered 1995,86(3), [18] BOTSTEIN D,WHITER,SKOLNICK M,etal.Constructionofageneticlinkagemapinmanusingrestrictionfragmentlengthpoly

6 126 海洋学报 33 卷 morphisms[j].amjhum Genet,1980(32): [19] CESARJR,ZHAOB,YANGJ.AnalysisofexpressedsequencetagsfromabdominalmusclecDNAlibraryofthePacificwhiteshrimp 犔犻狋狅狆犲狀犪犲狌狊狏犪狀狀犪犿犲犻 [J].Animal,2008,2(9): [20] GARCIA D K,ALCIVR WARREN A.Characterizationof35new microsatelitegenetic markersforthepacific whitelegshrimp, 犔犻狋狅狆犲狀犪犲狌狊狏犪狀狀犪犿犲犻 :theirusefulnessforstudyinggeneticdiversityofwildandculturedstocks,tracingpedigreeinbreedingprograms, andlinkagemapping[j].journalofshelfishresearch,2007,26(4): [21] WANGX,GUOX,ZHANG Y,etal.DevelopmentofpolymorphicEST derivedssr markersfortheshrimp, 犉犲狀狀犲狉狅狆犲狀犪犲狌狊犮犺犻狀犲狀狊犻狊 [J].ConservationGenetics,2009,10: [22] 王鸿霞, 吴长功, 张留所, 等. 微卫星标记应用于凡纳滨对虾家系鉴别的研究 [J]. 遗传,2006,28(2):179. 犛犮狉犲犲狀犻狀犵犪狀犱狆狅犾狔犿狅狉狆犺犻狊犿狅犳犈犛犜犿犻犮狉狅狊犪狋犲犾犻狋犲犿犪狉犽犲狉狊犻狀犔犻狋狅狆犲狀犪犲狌狊狏犪狀狀犪犿犲犻 ZHANG Qiong 1,LIXi lian 1,XUEShu wen 1,LIU Xiao lin 1,HUANG Hao 2,XIANGJian hai 3 (1. 犓犲狔犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔狅犳犛犺犪犪狀狓犻犘狉狅狏犻狀犮犲犳狅狉犕狅犾犲犮狌犾犪狉犅犻狅犾狅犵狔犳狅狉犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犲, 犆狅犾犲犵犲狅犳犃狀犻犿犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊犪狀犱犜犲犮犺狀狅犾狅犵狔, 犖狅狉狋犺狑犲狊狋犃犵狉犻犮犪犾狋狌狉犲牔犉狅狉犲狊狋犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔, 犢犪狀犵犾犻狀犵 , 犆犺犻狀犪 ;2. 犖犪狀犼犻犪狀犵犕犪狉犻狀犲犅犻狅狋犲犮犺狀狅犾狅犵狔犆狅犿狆犪狀狔犔犻犿犻狋犲犱, 犛犪狀狔犪 , 犆犺犻狀犪 ;3. 犗狆犲狀狅犳犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔犈狓狆犲狉犻犿犲狀狋犪犾犕犪狉犻狀犲犅犻狅犾狅犵狔, 犐狀狊狋犻狋狌狋犲狅犳犗犮犲犪狀狅犾狅犵狔, 犆犺犻狀犲狊犲犃犮犪犱犲犿狔狅犳犛犮犻犲狀犮犲狊, 犙犻狀犵犱犪狅 , 犆犺犻狀犪 ) 犃犫狊狋狉犪犮狋 :FourteenmicrosateliteDNAuniversalmarkersderivedfromBelgianwildshrimpsexpressedse quencestags(ests)wereselectedandevaluated.stablebandingpaternwasshownby7est SSRs,and fiveof(345,390,437,444,487)them wereidenti fiedasthepolymorphism EST SSR,andsubsequentlyusedforgenotypingof240culturedadultwhite shrimpssampledfrom HainanProvince. Thecharacterizationresults,whichrevealed2.4000±0.5477al lelesperlocus,observedandexpectedheterozygositylevelsrangedfrom to0.8208andfrom to0.6011respectively,showedthemoderatepolymorphismsattheseloci.Inaddition,genetic diferencebetweenthebelgian wildpopulationand Hainanculturedpopulation wasfirstlyfound,which mightcausedbygeographicisolationandselectivebreedingovertheyears. ThisstudysetThefoundation forpopulationgeneticsstudies,functiongeneanalysisandselectivebreeding wassetin Hainancultured 犔犻狋狅狆犲狀犪犲狌狊狏犪狀狀犪犿犲犻. 犓犲狔狑狅狉犱狊 : 犔犻狋狅狆犲狀犪犲狌狊狏犪狀狀犪犿犲犻 ;EST SSR;geneticdiversity

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$BuletinofSoiland WaterConservation Vol.38,No.3 Jun.,2018 & X R( + 1, 1, < 1,=> 3 (1. E^ IFTU ^,NO ; 2.NO\ ^,NO ;3.NO B`a -$ 383 0186 BuletinofSoiland WaterConservation Vol.38,No.3 Jun.,018 & X R( + 1, 1, < 1,=>,?@A 3 (1. E^ IFTU ^,NO 730070;.NO\ ^,NO 730070;3.NO B`a -[/H,NO 730000) -.:[# ] _D5 & % I /, + -. I P+- [ ] ( 犜狉犻狋犻犮狌犿犪犲狊狋犻狏狌犿