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1 1098G1105 5/2018 DOI: /j.issn.1001G G0583 草业科学 PRATACULTURALSCIENCE 第 35 卷第 5 期 Vol.35,No.5 曹师, 史敏, 李彦忠. 微白黄链霉菌对红豆草壳二孢的拮抗效果评价. 草业科学,2018,35(5):1098G1105. CaoS,ShiM,LiYZ.EvaluationoftheantagonisticefectofStreptomycesalbidoflavusagainstAscochytaonobrychis.Pratacultural Science,2018,35(5):1098G1105. 微白黄链霉菌对红豆草壳二孢的拮抗效果评价 曹师 1, 史敏 1, 李彦忠 1,2 (1. 兰州大学草地农业生态系统国家重点实验室, 兰州大学农业农村部牧业创新重点实验室, 兰州大学草地农业科技学院, 甘肃兰州 ;2. 中国农业科学院草原研究所, 内蒙古呼和浩特 ) 摘要 : 红豆草壳二孢叶斑黑茎病 (Ascochytaonobrychidis) 是红豆草 (Onobrychisviciaefolia) 最重要的病害之一, 在分离此病菌的同时得到一种对此病菌具有较强抑制作用的微生物, 为评价此拮抗菌的开发利用前景, 本研究采用形态学 分子生物学和生物化学方法鉴定了其分类地位, 并测定了其对红豆草壳二孢的抑菌效果. 通过构建系统发育树并结合其形态特征和生理生化特性, 将该拮抗菌鉴定为微白黄链霉菌 (Streptomycesalbidoflavu), 在高氏一号培养基上菌落为黄白色, 可产生黄白色水溶性色素, 孢子丝钩状, 顶端螺旋形 ; 在平板对峙试验中该菌的菌落对红豆草壳二孢菌落的相对抑制率达 74.33%, 同时该菌发酵液对红豆草壳二孢菌丝生长和孢子萌发的抑制率分别为 80.95% 和 93.87%. 该菌具有生物防治红豆草壳二孢的开发和利用价值. 关键词 : 分类地位 ; 微白黄链霉菌 ; 菌丝生长 ; 孢子萌发 ; 抑菌效果 ; 生物防治中图分类号 :S ;Q 文献标志码 :A 文章编号 :1001G0629(2018)05G1098G08 EvaluationoftheantagonisticeffectofStreptomycesalbidoflavus againstascochytaonobrychis CaoShi 1,ShiMin 1,LiYanGzhong 1,2 (1.StateKeyLaboratoryofGrasslandAgroGecosystems,KeyLaboratoryofGrasslandLivestockIndustry Innovation,MinistryofAgricultureandRuralAfairs,ColegeofPastoralAgricultureScienceand Technology,LanzhouUniversity,Lanzhou730020,Gansu,China; 2.InstituteofGrasslandResearch,ChineseAcademyofAgriculturalSciences(CAAS), Huhhot010010,InnerMongolia,China) Abstract:Ascochytaonobrychisisthecausalpathogenic microorganism ofsainfoinleafspotandblackstem, whichisaseriousdisease.astrainofmicroorganismthathasstrongantagonisticactivityagainsta.onobrychis wasobtainedwhenthepathogenwasisolated.toevaluatetheexploitationandforegroundoftheantagonistic microorganism,thepresentstudyidentifiedthetaxonomicpositionofthestrainbymorphological,molecular, andbiochemicalmethods,aswelasdeterminedtheinhibitoryefectofthestrainagainsta.onobrychis.based onits morphologicalcharacteristics,bothphysiologicalandbiochemical,together with16srdna sequence analysis,thestrainwasidentifiedasstreptomycesalbidoflavus.thecolonieswareyelowishwhiteincoloron Gause sagarandproducedyelowish whitewatergsolublepigmentsanda mycelium hookgliketopspiral.the relativeinhibitionratetothepathogenwas74.33%thatwasmeasuredwiththeduralculturemethod.theactig 收稿日期 :2017G10G30 接受日期 :2017G12G29 基金项目 : 中央高校基本科研业务费 (lzujbkyg2017gk02); 公益性行业 ( 农业 ) 科研专项经费项目 ( ); 国家现代农业产业技术体系 (CARSG34); 云南高端科技人才引进项目 (2012HA012); 高等学校学科创新引智计划 (B12002) 第一作者 : 曹师 (1988G), 男, 甘肃兰州人, 在读博士生, 研究方向为牧草病理学.EGmail:caosh15@lzu.edu.cn 通信作者 : 李彦忠 (1969G), 男, 甘肃会宁人, 教授, 博士, 研究方向为牧草病理学.EGmail:liyzh@lzu.edu.cn

2 第 5 期曹师等 : 微白黄链霉菌对红豆草壳二孢的拮抗效果评价 1099 nomycetessterilefermentationbrothhadastrongefectonmycelialgrowthandsporegermination,withinhibig toryratesof80.95% and93.87%,respectively.theresultsshowedthattheactinomyceteshadpotentialvalue inthebiologicalcontrolofa.onobrychis. Keywords:taxonomicposition;Streptomycesalbidoflavus;myceliumgrowth;conidiagermination;inhibitory efect;biologicalcontrol Correspondingauthor:LiYanGzhong EGmail:liyzh@lzu.edu.cn 红豆草 (Onobrychisviciaefolia) 是豆科 (LeguG minosae) 红豆草属多年生牧草, 是一种高产优质的豆 科牧草, 饲草和种子都含有丰富的营养物质 [1]. 有 牧 [2] 草皇后 之称的红豆草其饲用价值可与 牧草之王 紫花苜蓿 (Medicagosativa) 相媲美. 然而病害是红 豆草生长和生产的重要限制因素, 植株染病后可严重 影响种子质量和植株的生物量 [3G4]. 在我国由红豆草 壳二孢 (Ascochytaonobrychidis) 引起的叶斑与黑茎 病是红豆草生最为常见的一种病害, 主要分布在内蒙 古 甘肃和新疆等地 [5] ; 同时该病在国外也分布广泛, 主要分布在欧洲, 不同的是在国外红豆草上的壳二孢 被报道为蚕豆壳二孢 (A.fabae) [6] 和歪头菜壳二孢 (A.orobi) [7]. 该病原寄主范围广, 侵染力强, 植株的 叶 茎和荚果均可被侵染 [8], 以茎叶部为主, 叶部病斑 多出现于叶片中间或侧缘, 病斑近圆形, 边缘深褐色 ; 在叶柄和茎秆上病斑梭形 椭圆形或不规则的大斑, 边 缘黑色, 发生严重的植株, 病变部相连使叶柄和茎秆大 部分表面变黑, 植株受害后, 严重影响红豆草的生产. 生产上防治红豆草壳二孢叶斑与黑茎病主要依赖 于抗病品种的选育和化学杀菌剂拌种等手段 [5,8]. 这 些措施均有各自的弊端, 抗病品种的选育周期长 成本 高 ; 长期使用化学试剂一方面容易产生耐药性菌株, 另 一方面对环境造成污染, 破坏生态系统, 威胁人畜安 全 [9]. 近年来生物防治的高效 无毒无害 无污染 不 产生耐药性等优点不仅保证了生态安全, 而且为农业 的可持续发展提供了保障, 因此生物防治也越来越受 [10] 到重视.Wakelin 等从土壤分离得到的细菌芽孢杆 菌 (Bacilus) 在室内和田间均对豌豆根腐丝囊霉 (Aphanomyceseuteiches) 有很强的抑菌效果 ;WharG [11] ton 等用分离得到的哈茨木霉 (TrichodermaharG zianum) 菌液处理马铃薯 (Solanumtuberosum ) 种子 后, 能够显著降低马铃薯晚疫病的发病率 ;GoG [12] palakrishnan 等分离得到的 5 株放线菌菌株在温室 和田间条件下均对镰刀菌起到良好的抑制效果. 为探 索红豆草壳二孢叶斑和黑茎病的生物防治途径, 本研 究以从红豆草茎部分离得到的拮抗放线菌株为材料, 以红豆草壳二孢为指示病原, 通过形态特征 培养性 状 生理生化特性以及 16SrDNA 基因序列分析对该 拮抗菌株进行分类地位的确定和拮抗作用的初探, 旨 在为红豆草壳二孢叶斑与黑茎病的生物防治研究和开 发提供依据. 1 材料与方法 1.1 材料 菌株 : 放线菌 LYZ0255 分离自红豆草茎部 ; 红豆 草壳二孢叶斑病致病菌 Ascochytaonobrychidis 分离 于甘肃地区栽培红豆草染病植株. 培养基 : 放线菌菌株的活化和培养采用高氏一号 [13] 培养基 ; 放线菌液体发酵培养基参照范丽霞筛选的 小米培养基 1000 ml: 小米 1%, 葡萄糖 1%, 蛋白胨 0.5%,NaCl0.25%,CaCO30.1%,(NH4) 2SO40.1%, 红豆草壳二孢叶斑病菌的分离和培养采用马铃薯葡萄 糖琼脂 (potatodexterousagar medium,pda) 培养 基. 1.2 菌种鉴定 [14] 形态学观察依照阎逊初的方法, 将拮抗放 线菌划线接种在高氏一号培养基, 采用插片培养法, 在 接种点斜 45 插入灭菌的盖玻片,28 培养 1 周后 取出盖玻片在光学显微镜下观察菌丝形态. 用革兰氏染色观察 : 挑取少许待测菌株置于滴有 蒸馏水的载玻片上涂片, 通过火焰 3 次固定. 加结晶 紫染色 1min, 水洗 ; 加碘液染色 1 min, 水洗 ; 加 95% 的酒精, 脱色 30~60s, 水洗, 吸干水分 ; 加番红复染 1 min, 水洗. 吸干或在空气中晾干后, 用油镜镜检, 观 察菌株形态特征 [15] 培养特征和生理生化特性研究将待鉴定菌 株分别接种在高氏一号 克氏一号 察氏琼脂 葡萄糖 天门冬素琼脂 葡萄糖酵母膏琼脂 淀粉琼脂等培养基 和马铃薯块上 [16], 置于 28 恒温培养箱中培养, 分别 在 7 14 和 28d 观察并记录气生菌丝 基内菌丝和可

3 1100 草业科学第 35 卷 溶性色素的颜色变化. 取稳定期的颜色特征为期培养 [17] 特征和定种依据. 生理生化特性研究 : 参照周德庆 和 «链霉菌鉴定手册» 中所描述的方法, 采用明胶液化 牛奶凝固与胨化 淀粉水解 纤维素水解 硫化氢的产 生和碳源利用试验进行待测菌株的生理生化特性测 定, 测定结果与文献中所描述标准菌株的生理生化特 性进行比对 [16,18] SrDNA 序列扩增与分析待测菌株基因组 的提取采用 OMEGABacterialDNA Kit 试剂盒, 按照 说明书的步骤进行操作.16SrDNA 序列扩增采用细 菌通用引物 1429R(5 GGAGAGTTTGATCCTGGCTG CAGG3 ) 和 27F(5 GCTACGGCTACCTTGTTACGAG 3 ) 由上海生工生物工程技术服务公司合成 [19].PCR 反应条件 :95 预变性 3min;95 变性 30s,50 退 火 30s,72 延伸 60s, 循环 30 次 ;72 再延伸 10 min.pcr 扩增采用 20μL 的反应体系, 包括 ddh2o 8.5μL,Taq 酶 10μL, 引物 1429R 和 27F 各 0.5μL, DNA 模板 0.5μL.PCR 产物经 1% 的琼脂糖凝胶电 泳检测后送交上海生工生物工程技术服务有限公司进 行测序. 将获得序列在 EzBioCloud 的 EzTaxon 数据 库中进行 Blast 比对, 下载与待测菌株序列同源性相 近的模式菌株序列, 利用 MEGA6.0 软件采用 NeighG borgjoining(ngj) 方法构建系统发育树 [20]. 1.3 抑菌效果测定 平板对峙试验用直径 5mm 的打孔器将红豆 草壳二孢病原菌块接种于 PDA 培养皿中心, 同时用 灭菌的接种针挑取单菌落放线菌接种于距病原菌 3 cm 处, 每皿点接 4 个供试菌株, 各点位置成十字 形 [21] ; 以只接种红豆草壳二孢菌块的处理为对照, 每 个处理 5 个重复,22 下培养, 待对照长满全皿时, 记 录菌落直径, 按照如下公式计算相对抑制率. 相对抑制率 =[( 对照菌落直径 - 处理菌落直径 )/ 对照菌落直径 ] 100% 放线菌 LYZ0255 无菌发酵液的制备在装有 100mL 液体发酵培养基的 250 ml 的锥形瓶中转接 两个放线菌菌饼 ( 直径 5mm, 活化 4d), 在 r min -1 条件下培养 4d. 将带菌发酵液在无菌环境 下取适量装入灭菌的 50 ml 离心管中, 在 r min -1 下离心 15 min, 去沉淀, 上清液用 0.22μm 细菌过滤器过滤, 即得含放线菌菌株的无菌发酵液 (Actinomycessterilefermentationbroth,AGSFB ); 同 样条件下未接种放线菌的液体培养基制成不含放线菌 的无菌发酵液 (sterilefermentationbroth,sfb), 得到两种无菌发酵滤液保存于 4 冰箱中备用 LYZ0255 无菌发酵液对病菌菌丝生长的抑制作用测定分别取 1 ml 备用的 AGSFB SFB 和无菌水与 9 ml 无菌 PDA 混匀, 制成含有 AGSFB SFB 和无菌水的平板培养基 ( 无菌水平板作为对照 ), 用直径 5mm 的打饼器取生长状况一致的红豆草壳二孢菌饼转移至各培养基中央, 在 22 恒温培养, 每个处理 5 个重复, 待对照长满全皿时, 记录菌落直径, 计算菌丝生长抑制率, 方法同 LYZ0255 无菌发酵液对病菌孢子萌发抑制作用测定采用凹片法, 分别吸取 100μL 的 AGSFB SFB 和无菌水加入到凹形载玻片中的凹槽中, 再吸取等量的浓度为 个 ml -1 红豆草壳二孢孢子悬浮液加入到上述凹玻片的凹槽中, 将混合的凹载玻片放入到有双层灭菌滤纸的培养皿中, 在恒温培养箱中 22 培养,12h 后检查孢子萌发情况, 每个处理 3 个重复, 每个重复显微镜下观察 5 个视野, 统计孢子萌发 [22] 率, 计算孢子萌发抑制率. 孢子萌发抑制率 =[( 对照萌发率 - 处理萌发率 )/ 对照萌发率 ] 100%. 2 结果 2.1 菌株鉴定 菌落和形态特征在高氏一号培养基上,28 恒温条件下该手拮抗菌生长良好, 菌落黄白色 ( 图 1A); 基内菌丝无色, 无隔不断裂 ; 气生菌丝蛛网, 呈树杈状分支 ( 图 1B); 孢子丝钩状, 顶端螺旋形 ( 图 1C), 孢子圆形或卵圆形. 拮抗菌株在大多数培养基上可产生可溶性色素, 颜色呈黄白色 琥珀色或微黄白色, 仅在察氏琼脂培养基上无可溶性色素产生 ; 气生菌丝多为灰白色和白色, 在淀粉琼脂培养基上呈黄色 ; 基内菌丝 褐色 灰褐色或橙黄色, 同时该菌株在不同培养基上生长速度存在差异 ( 表 1) 生理生化特征参照链霉菌鉴定手册中放线菌分类所记载的生理生化试验进行测定, 结果表明, 该菌株明胶液化反应呈阳性, 且明胶液化速度 ( 图 2A); 牛奶凝固与胨化反应呈阳性 ( 图 2B); 淀粉水解反应, 菌落周围遇碘不变色形成透明圈, 但透明圈直径小 ( 图 2C), 表明该菌株可产生淀粉酶但活性不强 ; 纤维素水解试验结果为弱阳性, 菌株在纤维素上有一些

4 第 5 期曹师等 : 微白黄链霉菌对红豆草壳二孢的拮抗效果评价 1101 Fig.1 图 1 放线菌 LYZ0255 菌株的菌落和形态特征 MorphologicalandculturalcharacteristicsofactinomycesLYZ0255 表 1 拮抗菌株在 7 种培养基上的培养特征 Table1 Culturalcharacteristicsoftheantagonisticstrainonsevendiferentmedia 培养基 气生菌丝 基内菌丝 可溶性色素 生长状况 Culturemedium Aerialhypha Substratehypha Solublepigment Growthstate 高氏一号合成培养基 灰白色 黄白色 慢 Gause ssyntheticagar white Yelow white Slowly 克氏一号合成培养基 白色 褐色 黄白色 慢 Krassilnikov ssyntheticagar White Brown Yelow white Slowly 察氏琼脂培养基 Czapek sagar - 葡萄糖天门冬素琼脂培养基 白色 褐色 微黄白色 Glucoseasparagineagar White Brown Yelowishwhite 葡萄糖酵母膏琼脂 灰褐色 琥珀色 Glucoseyeastextractagar Taupe Amber 淀粉琼脂培养基 黄色 琥珀色 Starchagar Yelow Amber 马铃薯块培养基 橙黄色 微黄色 Potatodextroseagar Orangeyelow Yelowish 生长 ( 图 2D); 该菌株在柴斯纳 (Tresner) 琼脂培养基 上没有黑色素产生, 不产生 H2S; 该菌株能够利用葡 萄糖 乳糖 阿拉伯糖 果糖 蔗糖 木糖和甘露醇作为 碳源, 不能利用鼠李糖和肌醇. 该结果与 «链霉菌鉴定 手册» [15] 和 «伯杰细菌鉴定手册»( 第 8 版 ) [17] 中有关微 白黄链霉菌 Streptomycesalbidoflavus 所描述的生理 生化特征基本相同, 因此, 初步认为菌株 LYZ0255 为 S.albidoflavus SrDNA 序列扩增和分析对拮抗菌株 16S rdna 序列进行 PCR 扩增, 得到约 1400bp 的扩增片 段 ( 图 3),PCR 产物测序结果显示 LYZ0255 的 16S rdna 的全序列由 1388bp 个碱基构成. 在 EzTaxon 数据库中比对结果显示, 与其同源性高的菌株均为链霉菌属 (Streptomyces), 相似率在 98.34~99.71%, 其中 S.albidoflavus(Z76676) 与之相似率最高, 为 99.71%. 基于与其同源性较高的菌株的 16SrDNA 的全序列构建的系统发育树结果显示, 该菌株与 S.albidoflavus (Z76676) 聚于同一个进化分支上 ( 图 4), 与同源性比对结果一致, 结合形态学特征和生理生化鉴定结果将拮抗菌鉴定为微白黄链霉菌 S.albidoflavus.

5 1102 草业科学第 35 卷 图 2 菌株 LYZ0255 生理生化特性 Fig.2 Physiologicalandbiochemical characteristicsofstrainlyz0255 图 3 菌株 LYZ0255PCR 扩增结果 Fig.3 Polymerasechainreactionamplification resultsofthestrainlyz0255 M:Marker;LG1/LG2:LYZ0255 扩增序列. LG1/LG2:TheamplificationsequenceofLYZ0255. 图 4 基于 16SrDNA 序列构建的拮抗菌株系统发育树 Fig.4 Phylogenetictreebasedon16SrDNAsequencesoftheantagonisticstrain 2.2 放线菌 LYZ0255 对红豆草壳二孢的抑菌作用拮抗作用, 在对照长满全皿, 对照平板上红豆草壳二孢 对菌丝生长的的抑制效果平板对峙试验结直径为 63.1 mm 时, 对峙平板中红豆草壳二孢直径为果表明, 该链霉菌菌株对红豆草壳二孢表现出很强的 16.2mm( 图 5), 相对抑菌率达 74.33%.

6 第 5 期曹师等 : 微白黄链霉菌对红豆草壳二孢的拮抗效果评价 1103 图 5 拮抗菌对红豆草壳二孢菌丝的平板对峙试验 Fig.5 DuralculturemethodoftheantagonisticstraininhibitAscochytaonobrychidis 拮抗菌株无菌发酵液对菌丝抑制结果显示, 待对照长满全皿时,AGSFB 平板病原菌菌落直径与 SFB 处理 对照均呈极显著差异 (P<0.01), 其中 AGSFB 平板对菌丝生长的抑菌率达 80.95%( 图 6), 对红豆草壳二孢病菌菌丝表现出很强的抑制作用 ; 而 SFB 平板菌落 生长状况与无菌水处理一致, 均对红豆草壳二孢菌丝生长没有抑制作用 对孢子萌发的抑制作用用 AGSFB 处理红豆草壳二孢病原菌孢子, 其抑制病原孢子萌发效果显著, 抑制率达 93.87%; 而 SFB 处理和对照处理一致, 红豆草壳二孢病原孢子多数已经萌发 ( 图 7), 说明 SFB 对红豆草病原菌孢子萌发没有影响. 3 讨论与结论目前, 对于红豆草壳二孢引起的叶斑和黑茎病防治研究甚少, 只通过室内接种筛选出埃斯基为抗病品 图 6 拮抗菌对红豆草壳二孢菌丝的抑菌效果和抑菌率 Fig.6 Inhibitoryefectofantagonisticstrainsterile fermentationbrothtomyceliumandtheinhibitoryrates 不同小写字母表示经 Duncan 新复极差法检验处理间差异显著 (P< 0.05), 不同大写字母表示处理间差异极显著 (P<0.01). DiferentlowercaseletersindicatesignificantdiferencesamongdifG ferenttreatmentsatthe0.05levelbydmrt;diferentcapitalleters showsignificantdiferencesatthe0.01levelbydmrt. 图 7 拮抗菌株无菌发酵液对红豆草壳二孢孢子萌发的影响 Fig.7 EfectofthestrainLYZ0255sterilefermentationbrothonsporegerminationofAscochytaonobrychis

7 1104 草业科学第 35 卷 种 [8], 和仅通过平板对峙发现沙打旺埃里砖隔孢对红 豆草壳二孢有一定的抑制作用 [23], 因此寻找经济高 效 能够保证生态安全和具有开发潜力的生物防治手 段是解决这一问题的有效途径. 本研究通过对分离得 到的一株明显抑制红豆草壳二孢生长的放线菌菌株进 行形态鉴定和 16SrDNA 序列分析, 将其鉴定为微白 黄链霉菌, 该菌株在形态特征 培养特征 生理生化特 征以及 16SrDNA 序列等方面参考模式菌株的相关信 [15,22] 息与微白黄链霉菌基本一致, 只在碳源利用方面 与模式菌株存在细微差异, 模式菌株不能利用蔗糖, 而 该菌株可以利用, 这可能是菌株之间存在变异的结果 ; 同时拮抗菌株无菌发酵液对病原菌菌丝和孢子萌发的 抑制试验结果均显示,SFB 处理和对照结果相同, 排 除了 SFB 对病原菌的影响, 起抑制作用的即为该拮抗 菌株. 链霉菌在植物病害生物防治方面被广泛应用于真 菌引起的病害, 并且利用链霉菌的代谢产物开发成微 生物源农药防治植物病害是其在生物防治中最主要的 应用形式, 第一个实用化的农用抗生素杀稻瘟菌素能 显著抑制水稻纹枯病菌. 有研究表明, 微白黄链霉菌 [24] 具有抗菌活性,Chao 等发现微白黄链霉菌可以有 效抑制叶霉病菌 (Pasalorafulva), 本研究通过该拮 抗放线菌平板对峙试验和无菌发酵液对病原菌菌丝生 长以及孢子萌发影响的测定, 证明了微白黄链霉菌对 红豆草壳二孢有良好的抑制作用, 说明其在红豆草壳 二孢叶斑和黑茎病生物防治和应用中潜力巨大, 但是 该菌株发酵液中哪些成分在起抑制作用 作用机理和 温室及大田防效等问题还需进一步探究. 参考文献 References: [1] 陈宝书, 聂朝相, 刘淑炽. 红豆草的产量和营养成分的研究. 甘肃农业大学学报,1983(4):77G83. ChenBS,NieCX,LiuSZ.Studyontheyieldandnutrientfosainfoin.JournalofGansuAgriculturalUniversity,1983(4):77G 83.(inChinese) [2] 乌兰, 张磊, 阿不利孜, 巴登其其格, 张鸿书. 新疆奇台红豆草主要病害的发生及其防治. 草业与畜牧,2008(7):15G31. WuL,ZhangL,Abulizi,Badengqiqige,Zhang H S.TheoccurrenceandpreventionandcontrolofsainfoindiseaseinXinjiang. Prataculture& AnimalHusbandry,2008(7):15G31.(inChinese) [3] 南志标, 李春杰. 中国草类作物病理学研究. 北京 : 海洋出版社,2003:25G35. NanZB,LiCJ.StudyonPathologyofHerbalPlantsinChina.Beijing:ChinaOceanPress,2003:25G35.(inChinese) [4] NanZB.FungicideseedtreatmentsofsainfoincontrolseedGborneandrootGinvadingfungi.NewZealandJournalofAgricultural Research,1995,38(3):413G420. [5] 刘若. 草原保护学第三分册牧草病理学. 北京 : 中国农业出版社,2005. LiuR.GrasslandProtection.Vol3.ForagePathology.Beijing:ChinaAgriculturalPress,2005.(inChinese) [6] EkenC.FirstreportofAscochytafabaeonsainfoininTurkey.PlantPathology,2003,52(3):421. [7] OudemansC AJA.EnumeratioSystematicaFungorum.HagaeComitum:Apud Martinum Nijhof,1921. [8] 冷小云. 红豆草品种对黑斑病和轮纹病的抗性评价. 兰州 : 兰州大学硕士学位论文,2009. LengX Y.EvaluationforresistancetodiseasecausedbyAlternariaalternataororAscochytaonobrychidisamongsainfoinvariG eties.masterthesis.lanzhou:lanzhouuniversity,2009.(inchinese) [9] 李凯, 袁鹤. 植物病害生物防治概述. 山西农业科学,2012(7):807G810. LiK,YuanH.Reviewonbiologicalcontrolofplantdiseases.JournalofShanxiAgriculturalSciences,2012(7):807G810.(inChiG nese) [10] WakelinSA,WalterM,Jaspers M.BiologicalcontrolofAphanomyceseuteichesrootGrotofpeawithsporeGformingbacteria. AustralasianPlantPathology,2002,31(4):401G407. [11] WhartonPS,Kirk W W,SchaferRL.Evaluationofbiologicalseedtreatmentsincombinationwithmanagementpracticesfor thecontrolofseedgbornelateblightinpotato.biologicalcontrol,2012,63(3):326g332. [12] GopalakrishnanS,PandeS,SharmaM.EvaluationofactinomyceteisolatesobtainedfromherbalvermicompostforthebiologiG calcontroloffusarium wiltofchickpea.cropprotection,2011,30(8):1070g1078. [13] 范丽霞. 几株放线菌发酵液抑菌活性成分的研究. 杨凌 : 西北农林科技大学博士学位论文,2013.

8 第 5 期曹师等 : 微白黄链霉菌对红豆草壳二孢的拮抗效果评价 1105 FanLX.Studiesonantimicrobialcomponentsfromfermentationbrothofsomeactinomycetesstrains.PhD Thesis.Yangling: NorthwestAgriculture& ForestryUniversity,2013.(inChinese) [14] 阎逊初. 放线菌的分类和鉴定. 北京 : 科学出版社出版,1992:37. YanXC.ClassificationandIdentificationofAactinomycetes.Beijing:SciencePress,1992:37.(inChinese) [15] 朱琳, 常卫华, 张勇, 叶得河, 赵兴绪. 甘肃地区绵羊支原体病毒的分离培养. 草业科学,2013,30(9):1428G1432. ZhuL,Chang W H,ZhangY,YeD H,ZhaoX Y.IsolationandcultureofsheepMycoplasmapneumoniaeinGansuProvince. PrataculturalScience,2013,30(9):1428G1432.(inChinese) [16] 中国科学院微生物研究所放线菌分类组. 链霉菌鉴定手册. 北京 : 科学出版社出版,1975:14. GroupClassificationofActinomycetesInstituteofMicrobiologyChineseAcademyofSciences.Streptomyces Handbook.BeiG jing:sciencepress,1975:14.(inchinese) [17] 周德庆. 微生物学实验手册. 上海 : 上海科学技术出版社,1986:191. ZhouD Q.MicrobiologyExperimentManual.Shanghai:ShanghaiScienceandTechnologyPress,1986:191.(inChinese) [18] BuchananRE,GibbonsN E. 伯杰细菌鉴定手册. 第八版. 北京 : 科学出版社,1984:1109. BuchananRE,GibbonsN E.Bergey smanualofdeterminativebacteriology.8thedition.beijing:sciencepress,1984:1109.(in Chinese) [19] 胡进玲, 汪治刚, 徐娜, 党淑钟, 李彦忠. 防治紫花苜蓿真菌病害的生防菌筛选. 草业学报,2017,26(6):145G152. HuJL,WangZG,XuN,DangSZ,LiYZ.Screeningofinhibitorybacteriaforpreventionandtreatmentoffungaldiseaseof Medicagosativa.ActaPrataculturaeSinica,2017,26(6):145G152. [20] 蒋会芳, 冉火苗, 孔望君, 辛志宏. 腐败杨梅中两株细菌的分离与鉴定. 食品工业科技,2016(10):260G278. JiangH F,RanH M,Kong W J,XinZ H.IsolationandidentificationoftwobacteriafromrotenMyricarubra.Scienceand TechnologyofFoodIndustry,2016(10):260G278. [21] 方中达. 植病研究方法. 北京 : 中国农业出版社,1998. FangZD.PlantPathologyAndEntomologyResearch Methods.Beijing:ChinaAgriculturePress,1988.(inChinese) [22] 曾翠云, 朱晓玉, 崔振, 李彦忠. 药用植物提取液对沙打旺黄矮根腐病菌的抑菌活性及对其种子萌发的影响. 草地学报,2015, 23(2):366G371. ZengCY,ZhuX Y,CuiZ,LiYZ.InfluenceofmedicinalplantextractsontheinhibitionactivityofEmbelisiaastragliand seedgerminationofastragalusadsurgens.actaagrestiasinica,2015,23(2):366g371.(inchinese) [23] 曾翠云. 沙打旺 9 个品种对沙打旺黄矮根腐病的抗性机理研究及种质特性综合评价. 兰州 : 兰州大学博士学位论文,2016. ZengCY.Studyontheresistancemechanismof9AstragalusadsurgensvarietiestoyelowstuntrootandrotandcomprehenG siveevaluationforgermplasmcharacteristics.phdthesis.lanzhou:lanzhouuniversity,2016.(inchinese) [24] ChenC,WangY,SuC.AntifungalactivityofStreptomycesalbidoflavusL131againsttheleafmoldpathogenPasalorafulva involvesmembraneleakageandoxidativedamage.journalofthe KoreanSocietyfor Applied BiologicalChemistry,2015, 58(1):111G119. ( 责任编辑张瑾 ) 本刊如有印装质量问题, 请将原杂志寄回编辑部, 由本部负责调换.

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