Microsoft Word - R3103 Strepto k 链霉素和双氢链霉素 v2

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肝崩夷
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1 RIDASCREEN Streptomycin 酶联免疫法定量检测链霉素和双氢链霉素订货号 :R3103 体外检测试剂储存温度 2-8 C

2 RIDA 和 RIDASCREEN 均为 R-Biopharm 德国拜发公司的注册品牌标志制造商 :R-Biopharm AG, Darmstadt, 德国 R-Biopharm AG 拥有 ISO 9001 认证 RIDA and RIDASCREEN are registered trademarks of R-Biopharm AG Manufacturer: R-Biopharm AG, Darmstadt, Germany R-Biopharm AG is ISO 9001 certified. 2 RIDASCREEN Streptomycin

3 产品简介 RIDASCREEN Streptomycin( 订货号 :R3103) 链霉素检测试剂盒, 用于定量检测奶蜂蜜肉类和肝脏样品中的链霉素和双氢链霉素试剂盒中含有酶联免疫检测所需的所有试剂, 包括标准品试剂盒足够进行 96 次检测 ( 包括标准测定 ) 定量分析需要使用微孔板酶标仪样品处理 : 检测时间 : 检测限 : 奶类样品 : 稀释蜂蜜样品 : 提取使用 RIDA C18 固相萃取柱纯化, 蒸干, 复溶于缓冲液中肉类样品 : 均质离心沉淀和去油脂样品制备 40 个奶类样品... 约 1 小时 10 个蜂蜜样品... 约 1.5 小时 10 个肉类样品... 约 1.5 小时检测过程 ( 孵育时间 )... 1 小时 15 分钟蜂蜜样品... 约 5 ppb 奶类样品 ppb 肉类样品 ppb 肝脏样品 ppb 回收率 : 奶类样品 % 肉类样品 % 肝脏样品 % 特异性 : RIDASCREEN Streptomycin 链霉素检测试剂盒的特异性根据与相应物质的交叉反应确定链霉素 % 双氢链霉素 % RIDASCREEN Streptomycin

4 1. 用途 RIDASCREEN Streptomycin 链霉素检测试剂盒, 用于定量检测奶蜂蜜肉类和肝脏样品中的链霉素和双氢链霉素的残留 2. 概要除 ß- 内酰胺类抗生素以外, 链霉素是兽医领域中使用最为广泛的治疗乳腺炎的抗生素之一链霉素常因使用不当或药效未过而残留于动物源食品中高浓度的链霉素具有耳毒性和肾毒性食品中存在的少量链霉素亦可导致过敏, 削弱肠道菌群活动能力及使人产生抗药性等现象为此, 迫切需要一种灵敏又简单好用的方法来检测链霉素, 以保障消费者的健康, 解决食品技术问题欧盟对肉类和奶类中链霉素的最大残留限量作出了明确的规定, 其中, 肌肉和肝脏中不得超过 500 ppb, 肾脏中不得超过 1000 ppb, 奶类中不得超过 200 ppb 同时德国也规定蜂蜜中链霉素的最大残留量为 20 ppb 3. 检测原理检测的基础是抗原抗体反应微孔板包被有针对链霉素抗体的捕获抗体加入标准品样品溶液链霉素酶标记物 ( 酶连接物 ) 及链霉素抗体游离的链霉素与链霉素酶连接物竞争链霉素抗体结合位点 ( 竞争性酶免疫分析 ) 同时链霉素抗体也与微孔板上固定的捕获抗体结合没有结合的链霉素酶连接物在洗涤步骤中被除去将底物 / 发色剂加入到孔中结合的酶连接物将发色剂转化为蓝色的产物加入反应终止液后使颜色由蓝色转变为黄色在 450 nm 处测量吸光度值与样品中的链霉素浓度成反比 4. 试剂盒组份每一个盒中的试剂足够进行 96 个试验 ( 包括标准测定 ), 盒中的组份如下 : 1 x 96 孔微孔板 (12 条每条 8 孔 ) 包被有捕获抗体 6 x 标准品 ( 每瓶 1.3 ml) 0 ppb( 零标准品 ),0.5 ppb,1.5 ppb,4.5 ppb,13.5 ppb,40,5 ppb 链霉素水溶液 1 x 酶连接物 (0.7 ml)... 红色瓶盖过氧化物酶标记的链霉素, 浓缩液 1 x 链霉素抗体液 (0.7 ml)... 黑色瓶盖浓缩液 1 x 底物 / 发色剂 (10 ml)... 棕色瓶盖含有四甲基对二氨基联苯红色 4 RIDASCREEN Streptomycin

5 1 x 反应终止液 (14 ml)... 黄色瓶盖含 1 N 的硫酸 1 x 缓冲液 (100 ml) 酶连接物抗体和样品稀释缓冲液 1 x 洗涤缓冲液 ( 盐 ) 用于制备 10 mm 磷酸缓冲液,pH 7.4 含 0.05 % Tween 另需的试剂和设备 5.1. 设备 : 微孔板酶标仪 (450 nm) 离心机振荡器均质器 (Stomacher 均质器,Ultra-Turrax 匀浆机 ) 磁力搅拌器巴斯德移液管刻度移液管可调式 20 µl µl 和 µl 微量移液器 5.2. 试剂 : 正己烷 Carrez I:0.36 M 亚铁氰化钾 (II) 3 H 2 O(1.52 g 加入蒸馏水定容至 10 ml) Carrez II:1.04 M 硫酸锌 7 H 2 O(2.99 g 加入蒸馏水定容至 10 ml) 甲醇针对奶类和肉类的样品处理 : PBS-Tween 缓冲液 :0.55 g NaH 2 PO 4 x H 2 O g Na 2 HPO 4 x 2 H 2 O + 9 g NaCl % Tween 20, 加入蒸馏水定容至 1000 ml 针对蜂蜜的样品处理 : 1. 提取物缓冲液 :2.0 g ( = 50 mm ) 磺酸庚烷 ( 钠盐 ) g (= 25 mm) 磷酸三钠 Na 3 PO 4 x 12 H 2 O, 加入蒸馏水定容至 200 ml, 用磷酸 o-phosphoric acid 调节 ph 值至 2.0!!! PBS 缓冲液 :0.55 g NaH 2 PO 4 x H 2 O g Na 2 HPO 4 x 2 H 2 O + 9 g NaCl 加入蒸馏水定容至 1000 ml 6. 操作者应该注意之事项反应终止液含 1 N 硫酸 (R36/38, S2-26) RIDASCREEN Streptomycin

6 7. 储存条件保存试剂盒于 2-8 C, 不要冷冻将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封储存于 2-8 C 条件下底物 / 发色剂对光敏感, 因此要避免直接暴露在光线下对过了有效期 ( 见试剂盒标签 ) 的试剂盒不再提供任何质量保证不能交叉使用不同批号的盒中试剂 8. 试剂变质的迹象红色底物 / 发色剂在使用前颜色变蓝零标准品的吸光度值小于 0.6 (E 450 nm < 0.6) 9. 样品处理样品应冷藏保存 9.1. 奶类样品脱脂奶类样品按比例 1:20(1+19) 用样品稀释缓冲液 (PBS-Tween 缓冲液, 参见 5.2.) 稀释 ( 例如 50 µl 奶类样品 µl 缓冲液 ) 脂肪牛奶样品离心除去油脂 :10 min / 约 3000 g / 15 C ( 如果没有冷冻离心机, 样品应先降温 ) 去除上层油脂层脱脂奶类样品按比例 1:20(1+19) 用样品稀释缓冲液 (PBS-Tween 缓冲液, 参见 5.2.) 稀释 ( 例如 50 µl 奶类样品 µl 缓冲液 ) 9.2. 蜂蜜样品称取 1 g 蜂蜜样品加入提取物缓冲液 ( 参见 5.2.) 定容至 10 ml 搅拌 10 分钟直至蜂蜜样品完全溶解离心, 直至溶液清澈 : 约 10 min / 3000 g / 室温 (20-25 C) 6 RIDASCREEN Streptomycin

7 提取物用 RIDA C18 column 固相萃取柱 ( 订货号 :R2002) 层析纯化 ( 流速 :1 滴 / 秒 ) 用 2 ml 甲醇 (100 %) 和 2 ml 蒸馏水先后洗涤柱子添加 5 ml 样品并缓慢加压 ( 约 15 滴 / 分钟 ) 然后用蒸馏水洗涤柱子残留液体通过加压去除, 用抽真空方式通入空气或氮气, 干燥柱子 2 分钟用 1 ml 甲醇 (100 %) 缓慢洗脱样品 ( 约 15 滴 / 分钟 ) 洗脱液在 C 条件下蒸干 ( 尽量在弱空气或氮气流条件下 ) 干燥残留物溶于 5 ml PBS 缓冲液中 ( 参见 5.2.) 9.3. 肉类样品低脂肪含量的肉类样品 ( 不适用于兔类样品 ) 5 g 肉类样品粉碎 (Stomacher 均质器, 均质器或 Ultraturrax 匀浆机 ) 后和 20 ml PBS-Tween 缓冲液混合, 振荡 30 分钟离心 :10 min / 约 4000 g / 室温 (20-25 C) 取部分上清液按比例 1:10(1+9) 用样品稀释缓冲液 (PBS-Tween 缓冲液, 参见 5.2.) 稀释 ( 例如 :50 µl 样品 µl 缓冲液 ) 高脂肪含量的肉类样品 ( 不适用于兔类样品 ) 去除样品中可见脂肪 : 取 5 ml 上清液 ( 离心后, 参见 ) 和 3 ml 正己烷混合 5 分钟离心 :10 min / 约 4000 g / 室温 (20-25 C) 上层己烷层完全去除取部分下层水相液体按比例 1:10(1+9) 样品稀释缓冲液 (PBS-Tween 缓冲液, 参见 5.2.) 稀释 ( 例如 :50 µl 样品 µl 缓冲液 ) 肝脏和兔肉样品 optional kann mit schwierigen Proben (z. B. Leber) eine Carrez-Fällung durchgeführt werden: 对于难处理的样品 ( 例如肝脏 ) 使用 Carrez 沉淀处理离心后 ( 参见 ) 移取 4 ml 上清液于另一离心管中加入 Carrez I 和 Carrez II 各 0.1 ml, 加入蒸馏水至 5ml 振荡溶液数秒离心 :10 min / 约 4000 g / 室温 (20-25 C) RIDASCREEN Streptomycin

8 然后取 2 ml 上清液按照去除油脂取部分水相液体按比例 1:8(1+7) 用样品稀释缓冲液 (PBS-Tween 缓冲液, 参见 5.2.) 稀释 (100 µl 样品 µl 缓冲液 ) 10. 检测步骤检测前的准备使用之前将所有试剂回温至室温 (20-25 C) 链霉素酶连接物 ( 红色瓶盖瓶子 ) 为浓缩液由于稀释的酶标记物的弱稳定性, 所以只稀释实际需用量的酶连接物在吸取浓缩液之前, 要轻轻的振摇以便充分混均用缓冲液以 1:11(1+10) 的比例稀释酶连接物浓缩液 ( 参见 4) ( 比如 :200 µl 浓缩液 ml 缓冲液, 足够 4 个微孔板条用 ) 链霉素抗体 ( 黑色瓶盖瓶子 ) 为浓缩液, 由于稀释的抗体的弱稳定性, 所以只稀释实际需用量的抗体在吸取浓缩液之前, 要轻轻的振摇以便充分混均用缓冲液以 1:11(1+10) 的比例稀释抗体浓缩液 ( 参见 4)( 比如 :200 µl 浓缩液 ml 缓冲液, 足够 4 个微孔板条用 ) 洗涤缓冲液是 PBS-Tween 缓冲液, 为此试剂盒中提供了一袋洗涤缓冲液盐 ( 参见 4.) 使用 1 l 蒸馏水溶解一袋洗涤缓冲液盐制得缓冲液制备好的缓冲液可在 2-8 C 下保存大约 4-6 周时间或者 : 用 100 ml 蒸馏水溶解袋中的洗涤缓冲液盐, 得到 10 倍的洗涤缓冲液盐浓缩液, 此溶液能在室温 (20-25 C) 下储存 8-12 周使用时, 用 9 份蒸馏水溶解 1 份此浓缩液得到洗涤缓冲液检测操作仔细洗板非常重要避免在操作过程中微孔出现干燥 1. 将足够标准品和样品检测所需数量的孔条插入微孔板架, 均做两个平行实验记录下标准品和样品的位置 2. 将 50 µl 标准品或处理好的样品溶液和 50 µl 稀释后的酶连接物溶液加入到每个相应的微孔中, 均做两个平行实验 3. 向每一个微孔中加入 50 µl 稀释后的抗体溶液, 充分混合, 在室温条件下 (20-25 C) 孵育 1 小时 4. 倒出孔中的液体, 将微孔板架倒置在吸水纸上拍打 ( 每轮拍打 3 次 ) 以保证完全除去孔中的液体每孔加入 250 µl 洗涤缓冲液 ( 参见 10.1.) 洗涤微孔上述操作重复进行两遍 8 RIDASCREEN Streptomycin

9 5. 向每一个微孔中加入 100 µl 底物 / 发色剂 ( 棕色瓶盖 ), 充分混合后在室温 (20-25 C) 条件下暗处孵育 15 分钟 6. 向每一个微孔中加入 100 µl 反应终止液, 充分混合在加入反应终止液后 30 分钟内于 450 nm 处测量吸光度值 11. 结果评估请使用 R-Biopharm 德国拜发公司专门为 RIDASCREEN 系列产品设计的应用软件 RIDA SOFT Win( 订货号 :Z9999) 来进行结果分析关于标准曲线请参看试剂盒中附带的质保证书以下是没有使用软件的计算方法 : 标准品的吸光度值 ( 或样品 ) x 100 = % 吸光度比值零标准品的吸光度值吸光度值以百分比表示, 因此零标准品等同于 100 % 计算标准品相应的比值, 并绘成一个与链霉素 [µg/kg] 相关的半对数坐标系统的曲线图每个样品中的链霉素浓度 µg/kg(ppb) 可以通过校正曲线上的吸光度值直接读出为了真实反映链霉素的浓度 µg/kg, 从校正曲线上读出的浓度值必须乘以相对应样品的稀释倍数按照说明书中给出的方法进行操作, 可得到如下稀释倍数 : 奶类样品蜂蜜样品肉类和肝脏样品如果要检测双氢链霉素的浓度, 根据交叉反应的结果可以得到如下稀释倍数 : 奶类样品... 约 13 蜂蜜样品... 约 7 肉类和肝脏样品... 约 34 以上信息是基于我们现有知识的基础上对我们的产品及其相关应用的说明而并非对产品的任何特定性能或特定使用目的进行担保 R-Biopharm 德国拜发公司不承担除试剂基本品质之外的任何责任除因产品使用而造成的直接或间接损坏及损失外, 其它有缺陷的试剂盒可退换 RIDASCREEN Streptomycin

RIDASCREEN® Parvovirus IgG

RIDASCREEN® Parvovirus IgG RIDASCREEN Tetracyclin 酶联免疫法定量检测四环素族订货号 :R3505 体外检测试剂储存温度 2-8 C 产品简介 RIDASCREEN Tetracyclin( 订货号 :R3505) 四环素族检测试剂盒, 采用竞争性酶联免疫反应, 定量检测液奶奶粉奶酪蜂蜜肉类和虾类样品中的四环素金霉素罗利环素地美环素土霉素强力霉素和米诺环素试剂盒中含有酶联免疫检测所需的所有试剂,