熊果, 等曲美他嗪预处理对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的抑制及机制研究 7 相关基因 ( 如, 等 ) 的表达, 调控细胞凋亡本研究通过构建大鼠缺血再灌注心肌模型, 旨在探讨曲美他嗪 (!"#,$%&) 抑制缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的效果及其与 ' ' 及的相关性成年雄性大鼠 (

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翔徐
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1 第卷期年, 月天津医科大学学报 32:$ ( 3 # $@#$ 5+ # ( %$#=+:*#; 5 : 曲美他嗪预处理对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的抑制及机制研究 ( 四川省宜宾市第一人民医院心血管内科, 宜宾 ) /0 1!"#$%&' () * % ' +, -./) ! " #$7 #$ :;7 %&' 6!" %<=>? ( ) * < - ' 2 ( * *+, BC7 F6 GHI './ " %JK7! " %LMN O7 3 01" <. BC ' JO JP2 QR3 0 "<., ' OS BC2 TU2 MVTU3 1" <. ( ) WBC2 XBC2Y QR3 1" <." * *+, BCMV 2 MV 2 JX3 01" ' 45(MV'!" %7 ) ( Z? ' 7 ' ( ) &BC7 * *+, &BC[\ 2!< ]^<" %<<_`abc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本文涉及的环磷酸腺苷反应蛋白结合元件 ( 65- :+* 3$*+ +(+ +$; <#$ #$8 :3;+#$4 ' ) 是真核细胞内核转录调节因子, 受多因素激活, 蛋白环化单磷酸腺苷蛋白激酶 6 系统 ( 蛋白!" #$%&' ()*'+,-!""# "# $ ) 途径是 ' 的经典调节通路, 活化的 -76 转入细胞核, 磷酸化激活 ' ; *+:,, ' 是 ' 的活性形式, ' 形成同源二聚体 ( 有活性 ) 或与其他蛋白形成异源二聚体 ( 无活性 ), 再与真核生物启动子中的 ' 结合, 并在其辅因子 ( ' 结合蛋白协同作用下, 通过调控凋亡

2 熊果, 等曲美他嗪预处理对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的抑制及机制研究 7 相关基因 ( 如, 等 ) 的表达, 调控细胞凋亡本研究通过构建大鼠缺血再灌注心肌模型, 旨在探讨曲美他嗪 (!"#,$%&) 抑制缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的效果及其与 ' ' 及的相关性成年雄性大鼠 ( 只, 体质量 ( (( ) * 重庆医科大学实验动物中心提供 +, 随机分成假手术组 (, 组 ) 缺血再灌注组 (- ' 组 ), $%& 预处理缺血再灌注组 ($.- ' 组 /, 组各 ( 只将大鼠固定在手术台上, 用 01 水合氯醛腹腔注射麻醉 ( ( ) ), 气管插管后用小动物专用呼吸机辅助通气 ( 频率 ( 次 # ; 吸呼比 ; 潮气量 0 ) ); 然后在其胸骨左缘肋间打开胸腔暴露心脏, 在肺动脉圆锥与左心耳之间距主动脉根部约处用 ( 带针丝线结扎左前降支 ( 2 )( 垫以长橡皮筋 ), 待缺血 0 # 后松开结扎线, 再灌注 ( # 建模成功的标准 : 结扎 2 后缺血区立即变苍白, 心电图导联 $ 段出现弓背样向上抬高, 表示心肌缺血 ; 松解 2 后缺血区由苍白渐变为红润, 抬高的 $ 段下降以上, 表示再灌注成功,, 组只穿线不结扎 $.- ' 组大鼠的曲美他嗪预处理方法 : 本组在实验模型构建前给予曲美他嗪 ( ) ) " 喂养大鼠 ", 然后按上述办法造模另外, 所有大鼠喂养相同专用饲料, 除 $.- ' 组灌胃曲美他嗪 ( ) ) " 外,, 组及 - ' 组灌胃等体积的生理盐水, 每天灌胃时间 0 ( (( 各组大鼠均在无菌条件下被分离出建模成功的心脏, 然后以冰焦碳酸二乙酯 *",3 3454#, 6/ 水灌洗, 并剪去大血管左右心房及右心室, 在结扎线以下将左心室分离成两部分 : 一份用 1 多聚甲醛固定,, 最后在 7(1 乙醇中保存以备石蜡包埋切片 ; 在另一份中取 (( ) 左右心肌组织, 用无菌锡箔纸包裹, 经液氮冷冻, 后在 ( 冰箱保存以备检测逆转录聚合酶链反应 ('$6')!"#$! "#! $ # % & ''! " # $ % & ' ($89 ) 试剂购于武汉博士德公司把石蜡包埋的心肌组织切片 ( ), 脱蜡至水, 然后用 1 双氧水及甲醇处理, 再经 6 漂洗 0 #, 加入蛋白酶 : 工作液常温 ( #, 再次 6 漂洗 0 # 后, 加入 $89 反应液 7 湿盒避光孵育,, 又以 6 漂洗 0 # 后, 在 ;'6 抗体 7 湿盒中避光孵育 ( # 后循环进行 6 漂洗 0 # 2 显色 # 6 漂洗 0 # 苏木素复染 0 (, 最后以流水冲洗后脱水, 用透明中性树胶封片其中, 上述实验阴性对照用 6 代替 ;'6 抗体心肌细胞凋亡计数方法 : 在缺血再灌注损伤区随机选取 0 个非重叠高倍视野 ( ((), 计数凋亡细胞数和心肌细胞总数, 心肌细胞凋亡指数 (2-) 心肌细胞凋亡数心肌细胞总数 ((1 0 ' *+,-&./0 1 按照 6 试剂盒说明书操作 ( 美国 22% 公司 ) 抗 ' 抗体稀释度为 0(, 以 6 代替一抗作为阴性对照其中, 棕黄色颗粒即为阳性表达 ( ' 主要在胞核中表达 ) 在重庆医科大学医学病理图像分析系统中进行图像分析, 用标准灰度校正后, 每个标本随机取 0 个视野, 测量平均积分光密度值 (- 6), 其均值为该标本所得值 *+,-&./ 1 操作步骤严格按照试剂 ( #! 公司 ) 说明书抗及抗体稀释浓度均为 ((, 同时以 6 代替一抗作阴性对照标本中加入绿色荧光二抗 ( ((), 经 7 孵育后, 加胞核染色剂, 在激光共聚焦显微镜下成像在北航计算机医学病理图像分析系统中进行图象分析, 标准灰度校正后, 每个标本随机取 0 个视野, 测量平均积分光密度值 *- 6/, 其均值为该标本所得值 7 ' & '92,-& '$ 6' 1 以异硫氰酸胍苯酚氯仿一步法提取心肌组织总 '92, 并且进行逆转录, 以 92 作为 6' 反应模板, # 为内参引物目的片段长度及核酸解链温度 ($ ) 见表 '92 ' # 引物序列 *0 + 上 :2 22 2$$ 22$$ 下 :$$ $$$ $22$ 上 :$ 2$$$$$$ 下 :2$2 $ $$2$ 上 : 2 222$22$2$ 下 : $22 $ $22$$$ 上 : 2$ 2$ $ 2$ $ $ 下 : $222 2 $ $2$ 222 基因库代码 ( 2 ( 2 ( (7 2 ( (7 产物大小 5 0 最佳退火温度 0 0 0( 0 0

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3 //< 第 -% 卷天津医科大学学报!"# 反应条件 $%! & '() 预变性 $%! &* + 计学意义变性退火 &* +,-! - '() 延伸,-! & '() 再 > +, 延伸总共.& 个循环取反应产物 /*!0 于 12&" 琼脂糖凝胶电泳 3(45#67 凝胶成像分析系统处 -2/ &'()*+,-./ =?6' 组偶见心肌细胞凋亡凋亡指数 -2->@ -2->$>21& AB# 组可见大理目的片段与内参 "5689() 吸光度比值为目的片段 '#:; 的相对表达量量细胞凋亡凋亡指数高达.C2&@.C2&$-2%& 与 =?6' 组比较差异有显著统计学意义 " D>2>/ EFAB /2< 采用 =!==/$2> 统计软件包处 # 组细胞凋亡指数 /C2&@ /C2&$/2-& 高于=?6' 组理数据以!"# 表达两组间比较采用! 检验多组 " D>2>/ 低于 AB# 组 " D>2>& 差异均有统计学!"#$% 间比较采用单因素方差分析以 "#>2>& 为差异有统 =?6' 箭头所指系心肌细胞凋亡意义图 / AB# EGAB#!! "#$%& "#$%&'()*'!()*+,-.! / :5 "#$%;'!<**= -2- & ' ( ) "#H3038I 5-0"6+J6+K 与基因水平均高表达在 AB# 组呈低表达在 EGAB# '#:; 456 "#H3 蛋白及 '#:; 在 =?6' 组蛋白有一定量表达在 AB# 组表达最少 EGAB# 组表达最高差异有统计学意义 J5"#H3 蛋白及 '#:; 组表达水平较 AB# 组显著增加 "#>2>& 仍明显少于 =?6' 组 "#>2>& =?6' 组的 "6+J6+K5. 在基因及蛋白水平少量表达在 AB# 组呈高表达在 EGAB# 在 =?6' 组少量表达在 AB# 组表达适当增加在 EG AB# 组表达最多 "#>2>& =?6' 组的 38I5- 在蛋白组表达水平较 AB# 组低但仍高于 =?6' 组 "D>2>& 图 -%& 表 -. =?6' AB#! > -. 8?@A%B / C!<**= D-. 3G 6H7 7I F 0E3F..13J89 C-EEJF3H-9634H7E-96315K!<** = EGAB# =?6'! L 7. B4M?> /089:3456C!<**= EGAB# AB#,-. 3G 6H7 7I F 3G B4M?> 0E3F..13J89 C -EEJF3GMJ317947F47K!<** =

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4 !2" CC4 熊果等>曲美他嗪预处理对缺血A再灌注大鼠心肌细胞凋亡的抑制及机制研究 -3 5 A 6% #05*054+! 789:/0;12,!ABB. C6> A %2* #05*054+! 0'78> >37@*5, 6''@879D@7345<48<4E!ABB PT'2 P1U:1UL'!!'1PQRS J -3!'1PQRS!'1PQRS J -3 J -3 J 为 81KLF 条带长度MD:N自上而下分别为 (BBO?BBO &BBO!BBO2BBO CBBO!'1PQRS 为内参 5 F 6% #$%&<&<D+",#05*054+! ; '$() /0=> C6> F #7'* ;?4 '$() 42* #$%&E &<D+" 08: #05*054+! 0'78> >37@*5,$/+G#$. # " $%&'()*+ #$%&'$(),*+#$%& -./012,!"#3-. /01 " %2* #$%&'$() 08: *+#$%& *37; ;5 <03:67<=;4 0'78> ;?344 >37@*5,!"$4-. 组别!! :'0567 蛋白 2*>?!2>=1 >/!2>&1 2B 2&>?!C>( &>C!2>! 3-2B!B>?!2>?1D 2/>(!2>B1D "# EFGH: 1$I=>=? D$I=>=? /! $%&'()*+ &<D+"? '$() ;12,!%$4-. /01! #7'* ;?4 *37;468 08: '$() 42* &<D+" 08: #05*054+! 68 30;5 <03:67<=;4 0'78> ;?344 >37@*5 组别! 7PT'2 (C>4!2> U:1UL! 7PT'2V859+W 01U:1UL'!M859+W!/>C!&>?1!*>B!2>B1 2C>&!!>2 *2>/!?>* CC>B!2>B 2?>?!&>/ &4>*!!>C1D &*>2!?>C1D 2?>B!!>B1D C&>&!!>(1D 1 D "% EFGH: $IB>B? $IB>B? (>2!B>41!!"!"#!"#$%&'()*+,()$-./& 曲美他嗪是临床上用于缺血性心肌病的一种改善心肌能量代谢的药物主要机制是通过抑制脂肪酸! 氧化促进葡萄糖氧化代谢提高心肌细胞产能效率从而缓解心肌缺血减少心肌细胞凋亡%&'() 在心肌缺血再灌注损伤时细胞发生凋亡的机制 %*)主要包括氧化损伤影响线粒体功能和能量代谢钙稳态失衡等而曲美他嗪抗心肌缺血具体环节是选择性的作用于线粒体酶'长链!' 酮酰辅酶 +'硫解酶!',+- 增进葡萄糖氧化低耗氧产能途径提高心肌细胞氧的利用率从而增加 +-. 的合成%/) 与此同时还能显著减轻细胞内酸中毒减轻 0123超载减少自由基损害减少细胞凋亡以及抑制白介素的抗炎效应从而起到保护心肌细胞的作用%4) 本实验的短期曲美他嗪预处理对照发现

5 天津医科大学学报第卷法检测组有少量心肌细胞凋亡, 缺血再灌注组心肌细胞凋亡明显, 而曲美他嗪预处理组心肌细胞凋亡明显减少, 但仍显著高于组, 证实曲美他嗪预处理能明显抑制缺血再灌注损伤所 " 致的心肌细胞凋亡, 与等! 等 #$ 等的动物实验和 %& ' 等等报道的患者临床研究结果一致国内仅见个别曲美他嗪预处 " ( 理对大鼠家兔心肌酶学保护及提高体内自由基清除能力减轻脂质过氧化等机制从而减轻缺血再灌注损伤的作用报道, 但是还罕见涉及曲美他嗪抗凋亡的问题 ) *! "#$% 尽管已经有不少研究明确了曲美他嗪预处理具有抑制缺血再灌注损伤所致的心肌细胞凋亡作用, 但曲美他嗪抗凋亡的确切机制目前仍未完全释清,&+, 和 - &+, 是否参与曲美他嗪对心肌细胞的保护作用, 目前少见报道本实验发现, 组 &+, 及 - &+, 均有一定量表达,.*+ 组 &+, 表达减少,- &+, 表达明显减少, 而曲美他嗪组 &+, 及 - &+, 表达则明显增加, 提示曲美他嗪预处理上调了 &+, 和 - &+, 表达水平, 这可能是其减少心肌细胞凋亡的主要作用机制之一因为基础研究已经发现 - &+, 与真核生物启动子中的 &+ 结合后在其辅因子 (&+, 结合蛋白 / 协同作用下, 能够调控凋亡相关基因 ( 如,%01,& - 等 ) 的表达, 发挥调控细胞凋亡的作用 ; 而本实验同时研究看到了曲美他嗪预处理组下游环节发生了,%0 上调 ( 产生抗凋亡作用 ) & -( 具有致凋亡作用 ) 下调的相应效应改变, 再加上上述曲美他嗪预处理组心肌凋亡明显减少的直接结果, 初步说明了曲美他嗪对 &+, 和 - &+, 表达水平的影响就是其抗凋亡机制或者环节的假设 ; 而.*+ 组心肌细胞 &+, 表达减少可能与该区域心肌细胞坏死或凋亡增加有关, 这一组缺乏曲美他嗪预处理保护的结果就是上述结论的强有力的阴性对照说明上述机制可用基础研究结果解释 : 组织缺血再灌注后氧化应激增加主要归因于线粒体功能的损害, 导致细胞损伤和死亡, 而死亡的主要形式有肿胀坏死坏死性凋亡细胞凋亡和自噬 ; 关于凋亡, 线粒体功能受损时, 线粒体膜肿胀, 膜通透性增高, 使线粒体内促凋亡分子如抑制细胞色素 & 凋亡诱导因子 (. ) 凋亡蛋白酶激活因子 ( - ) 等释放, 启动细胞凋亡机制细胞凋亡过程受多种基因的调控, 其中最重要的是,%0 与 & -,%0 也可通过干扰细胞色素 & 的释放而阻断上游 & - 2 蛋白酶的激活, 抑制细胞凋亡,,%0 基因家族是 3 目前公认与凋亡密切相关的基因,,%0 基因产物主要位于线粒体膜核膜及内质网膜上,,%0 基因可抑制许多因素引起的细胞凋亡, 成为抗凋亡主要 3 蛋白这与本实验组细胞凋亡最少, 但是,%0 表达最高 ; 缺血再灌注组细胞凋亡最多, 但是,%0 呈低水平表达 ; 而曲美他嗪预处理组,%0 表达虽低于组, 但明显高于缺血再灌注组的结果完全契合, 这是曲美他嗪预处理减少凋亡的机制环节之二, 也与 &44! 等报道相似另外, & - 是细胞凋亡的最终执行者, 一旦被激活便激发下游的级联反应, 启动细胞凋亡本研究异曲同工地发现曲美他嗪预处理能显著下调 & - 的蛋白及基因表达水平, 从而使心肌细胞凋亡显著减少, 强烈提示曲美他嗪抑制缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡机制之三是抑制 & - 活化, 下调 & - 表达 ) &' " ()*+ 本研究仅仅是一个横断面的初步短期预处理的实验研究, 其价值具有初步阐明曲美他嗪预处理对心肌缺血再灌注损伤之心肌凋亡有抑制作用及其具有分子水平的可能机制的意义, 但是因为本实验样本量偏小, 尚需大样本的动物实验及基础临床研究, 进一步研究他们之间是否确切存在上下游调控关系, 以及相关的具体信号通路之间是如何更加细致地实现调控的 ; 今后还需要中长期的研究随访进一步证明该作用是否具有持久性临床上可以观察冠心病患者分成常规治疗组及加用曲美他嗪治疗组发生急性心肌梗死后相同处理方法的不同心肌存活临床转归差异来加以诠释 45 6 ## # 8 0: ;- #4-4 %# 4 '- 4 % -4 # 0 45$04 # #%$0 % ,0%! $00: #4 404 '8 82 2/ < 8 8 < 8 0 #% 4+ $ '4% 5#0 # % # - $ #4 #9$ ' # # # 04 ' %# # : ;- 58 (8 "/3 # =8 $>> 0 &8 $ 9 : &$ %$# - - $ #4 #9$ ' 4004># # % #% 4! # # ## ##4 4,8. &8 3 5 % - ;- #4 : ( / <?8 < 78 # <: - 4 % # '-4;# - $ #4 #5$% 5 % 5#4'4%' -4-4 # ' #% # # % 4+ ;- #4 :. &0# ;- 408 "82 /" "! 8 $ 8 %,8 0: %# ## ##4 4 % 5#4' 4%' -4-4 # 4$ %4 ##4 4 5

6 ( 熊果, 等曲美他嗪预处理对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的抑制及机制研究 E(E %&$ %$& & # & 5 $% # %2& #&"&#5 #$' 2&#% &# ( E-(0+;( /+? '? 郭丽蓉, 孙常青盐酸曲美他嗪对心肌缺血再灌注大鼠基因表达的影响 ' 中国生化药物杂志,( E-,0-(9):(+ '+ B& 8 3 2& C & 8#&5 $% # %2& "# %& % # % #" #& & & 5% $%$& "" 2& & %& 5 " 2 3% 5 #% A &' 8 % # % ( E+(;( /E 1 ': 5 # " < > #&& % # "#&% / 5 % "&#"&%4&' 3 3$ ( E1??;0 /( - '9 = &A%! 8 & 55&% 5 #& & &# & 6( &# & 6: % %& # " & A2 %# #$ #&#$ & & ' 2$ 2 # % ( E+ 91;? /+19 'E > B & #&& "#&% 3 % # % %2& #&"&#5 #$ 4 &55&% % # % (E &7 "#& 2& 8% ( 8 7 " 2A $' > >& &" ( E? E-;1./-(E? 'EE 2& >! 3! & 2& "#&%4& &55&% 5 #& & $% # %2& #&"&#5 #$ 2# 32 %4 3 > 33 " 2A $' >& ( E??1;0./E(( 'E( >% #2$ > &# = > 2& # & 5 #&& % # 4 % # & &/ &$ 6 3 3& ' #!& # # 4 % 2 # %2&# ( E? (;-./(?? 'E0 2 3 & & 2& &55&%4& & 5 "#&"&# 4& #&& $% # "#&&#4 %# #$ #&#$ $" 3# 5 " & / $& % #&4&A & 6$' # 3$ ( E1E0E;(./:? 'E- 赵艳芳, 秦永文, 王学敏等曲美他嗪对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用 ' 第二军医大学学报,( 0,(-(0):0(- 'E1 颜永进, 张跃明, 陆洋等曲美他嗪对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用 ' 江苏医药,( EE,0+(E)/( 'E? 王健, 黄元伟, 魏经汉等曲美他嗪对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用 ' 浙江大学学报医学版,( 0,0((0)/(E9 'E+ > 7 8 >%2 # %2&% 2& # & &' 4 7" >& 8 ( E+ 9:(/E(+ 'E: < C & 2& &#5&#& %& 5 "%# & 2& &7 "#& 5 % " & 60 5 A 3 %&#&# %2& #&"&#5 #$ # ' 2 2 # % 8 ( E (?;0./0-( 'E9 #,, # 8 & 8% 6( "#&% & 2& %& 3 3 6# 4 56> 6 # " 2A $ 2 &"& & 5 %$%2#& % #& & &' %&# & ( +?+;0./EE90 '( 3 &! &# &3 5 8% 6( 5 $ "#& # 3 &4& "& #&" & 7 4& #& % # % $%$&: % A2 %2 3& %2 # &# & " & ' #% &,E999:1/9- '(E! &% 4 %& 5 " 56E " &69 "" % &%2 ' 2 <& &# # %%& ( E0EE;+./EE ( (( E+6 :6E? 收稿 ) EE1! "# #$ "#% & " & %$&' & ()*( +,-./ &010+1 '+ & &!&& " & &2 &&# & 3# &4& 5-62$ #7$"# & 3% &' 8%2& *9:* **(;* / + ': 2& 8 2& & 2& # & 5 #5( 7 4& #&6 %& & 2& #&' %# ( *1 ((1;0 / :0 '9 & < < %%2 & 7 & 7 4& #& &% # &%2 5 "#&%4& 7% &55&% 5 # %& ' ## 2 # =& ( 9 *1;(1 / (9 : '* # > 4 = = %2 8 & >& 7 4& #& & # &3& &# / 5% # 3& && &#% #$ ' & #%2& ( *0?(;1 / 1+1 '** # 5 & " #% & 6 %& 7 4& #&/ 2& # & 5 2&& 7$3& & 6* % # 7 & 6 5 #$ " 2A $' 2 ( *( -9;* / : '*( B 3! C > B& 3 & & &%2 5 % % 4 & 5 & 2&" ' B# < #& &# D E( E:;( / EE9 'E0 邢伟, 孔维涵, 方步武蒿鳖养阴软坚方对免疫性肝纤维化大鼠的治疗作用 ' 中草药,( E,E (-E):E??+ 'E- 寇咏梅, 刘洁莹, 方步武蒿鳖养阴软坚方抗小鼠血吸虫病肝纤维化及其机制的研究 ' 现代药物与临床,( E0,0((:):(:: 'E1 赵敏, 郭娟, 方步武, 等蒿鳖养阴软坚方对大鼠酒精性肝损伤的预防作用 ' 时珍国医国药,( E,EE((E):(::+ 'E? 杨凤蕊, 娄建石, 方步武蒿鳖养阴软坚方抗 - 复合因素所致大鼠肝纤维化的作用 ' 中草药,( EE,0(-():10 (( E+6 +6EE 收稿 )

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!#!!# 仪器设备!!& 卢娜等蒿鳖养阴软坚方对刀豆球蛋白 9 诱导的肝纤维化 GHI#P5*'! 信号通路影响 $%&!'!#$() 型光学显微镜日形成的情况本 *+,-./0 公司 123'4##( 紫外可见分光光度计!&& 肝组织羟脯氨酸浓度测定采用 X=-=++ 氏 < 第 < 卷 < 期年月天津医科大学学报? /!#$ 23#!43! 5 63&#$ +!37 83 < < 5# 蒿鳖养阴软坚方对刀豆球蛋白诱导的肝纤维化信号通路影响 ( 天津医科大学药理学系, 天津 ) )* +,!!"#$%& '" #-%"#$% & ()*+,-./01 0 234050678' 0 0 9 :./9; 9 ? ( ()! @A B CD A E()#