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1 第 卷第 期 年 月 西安交通大学学报 医学版!"#$## %&'&! 中医药研究 藏红花素抑制谷氨酸盐诱导的视网膜神经节细胞凋亡 吕伯昌 党晓洁 许治国 霍福权 张 婷 杨新光 陕西省眼科诊疗中心 西安市第四医院眼科 西安交通大学医学部附属广仁医院眼科 陕西西安 $ 西安交通大学医学部生理学与病理生理学系 陕西西安 % 第四军医大学人体解剖与组织胚胎学教研室暨梁軪琚脑研究中心 陕西西安 摘要 目的 研究藏红花素通过影响 &' 内流对谷氨酸盐诱导的视网膜神经节细胞 & 凋亡的影响及可能机制 方法 分离大鼠 & 以 ( 的谷氨酸盐刺激 &$$ 建立 & 凋亡模型 并用 ( 浓度梯度藏红花素分别处理 *!!#+!,-./0&1/ 双标检测细胞凋亡率.("-* 荧光标记 &' 检测胞内钙离子浓度 ##!( 检测藏红花素对胞内钙离子介导的凋亡信号分子 '('+! 和 &' 表达的影响 &- 荧光染色和 ##!( 分别检测藏红花素对线粒体膜电位和线粒体凋亡相关信号分子 &''#-&''#- 2(-2' 表达的影响 结果 ( 谷氨酸盐刺激 $& 细胞凋亡率与对照组差异无统计学意义 而当刺激 $ 时 & 的凋亡率达到 $3%%4 差异有统计学意义 高剂量谷氨酸盐 ( 刺激 $$ 的 & 凋亡率为 $%$3%4 和 $34 较对照组均显著增加 差异有统计学意义 用 ( 谷氨酸盐刺激 & 后加入 ( 藏红花素再处理 不同浓度藏红花素均可显著抑制细胞凋亡 且抑制效率具有剂量依赖性 另外 ( 藏红花素组的谷氨酸盐诱导的胞外 &' 内流减少及钙依赖蛋白 &'('+! 和 &' 的表达减弱 线粒体膜电位增高 &''#- 和 &''#- 的表达减少 2(-2' 表达上调 结论 藏红花素抑制谷氨酸盐诱导的 & 凋亡 其机制可能与阻止胞外 &' 内流 抑制钙依赖的凋亡信号通路和线粒体凋亡信号通路有关 关键词 藏红花素 谷氨酸盐 钙离子内流 视网膜神经节细胞 线粒体依赖性凋亡 &''#-&''#-2(-2' 中图分类号 文献标志码 * %!"#!#$$%!! 2-'!6 7*8 +'-+# :;+-6" :."-"'! ;*8 0+!6 *8 +!-6"'!6 ''!+'(+ #+'(&#!#+'!8$+'(*<+(+'#"'!6#!+'( +'!+'!6:!+#+#'(+#!#&#!#+'!$7#'#!< 1+(6'!1'+(6+'!+'!6:!+#+#'(+#!#&#!# +'!%7#'#!<*!'+(6'!>(6#"!6 2'+!##'&#!#." +(+' #+'(:!+#++'!&+!' &'&#"" ###"#" #(* #+###+&, #-"""-##&.".$ $# *"(&/-"##""&&"&.-""#"(#-"#"* /+ % 01,1&### ## -"" * 0/! #*& *-"+### ""###"!11&#"*-"#"* "#"" #"#+-"* *# &1 收稿日期 % 修回日期 基金项目 国家自然科学基金资助项目 '& $"* ''$##0"'& 通讯作者 杨新光 &++%&# 优先出版 &#&#"%&&&&&&!"#"!

2 $$% 西安交通大学学报 医学版 第 卷 #-"##(+"&.$"" # #&&-##" $&3&%%2 - "$"-"##&&-".# #"($ $%&$3&%2 "$ $&3&2 #"-#&&(-"#"*.-"* -####&&"&.# &#"###" # *#""" &&1""##&. *#""#" +### +*" + ##"" "! &!## "&. #" #" * "+" "" #+& #*"#"#+###+ * *###"""#"""-& ( ## ## + ##""" #+ 青光眼是一种退行性的神经紊乱类疾病 有研究统计 年全球青光眼患者约 % 万 预测至 $ 年可能增加至 亿 青光眼的病理生理学主要特点是视神经节细胞 #+!'(6'!6(+! #( & 逐渐凋亡和视野缺损 最终导致不可逆的失明 因此 降低 & 凋亡有助于青光眼的治疗 在包括视网膜的多数中枢神经系统区域内 谷氨酸盐是主要的兴奋性氨基酸 视觉信号从光感受器传向双极细胞 再传至 & 最终到达特定的脑区 在这一过程中 谷氨酸盐的调节作用有重要作用 但是 目前大量研究已经表明 在青光眼的实验模型中 胞外过量的谷氨酸可以结合膜上 87* 受体 引发 & 快速死亡 而 87* 受体或者下游信号的抑制剂可以保护谷氨酸诱导的 & 死亡 - 因此 过量的谷氨酸盐有兴奋性毒性 可以引发 & 死亡 对视神经造成损伤 在传统中医药中 藏红花常用作止痉挛 消炎 神经镇静剂或者兴奋剂 现代药理学研究表明 藏红花提取物或者其活性成分可以有效阻止胃部疾病发展 抑制肿瘤细胞增殖 预防心血管疾病的发生 降低胰 $ 岛素抵抗 治疗抑郁症以及保护神经损伤等作用 藏红花素是藏红花中具有强力生物活性的成分之一 研究表明 藏红花素对 & 有神经保护作用 其可以提高视网膜和脉络膜的血流 促进视网膜功能的恢复 在体内和体外实验中 藏红花素阻碍光诱导视网 膜的感光细胞死亡 但是 鲜有报道也还不清楚其在谷氨酸盐诱导的 & 中的作用及机制 本研究观察藏红花素对谷氨酸盐诱导的 & 凋亡的影响 探讨藏红花素视网膜保护作用的机制 材料与方法 主要试剂及材料 实验 7 雄性大鼠 6 购自西安交通大学医学部实验动物中心 动物饲养及实验操作获西安交通大学医学部动物实验管理委员会的批准 并符合其动物实验管理条例 藏红花素 +6'-*(+ 谷氨酸盐 /!+6#! 线粒体膜电位检测试剂盒 &- 碧云天 *!!#+!,-./0&1/ 细胞凋亡检测试剂盒 >*>8.("- * 钙离子荧光探针 >*>8 抗体 '!+-&''#- '!+-&''#-'!+-2(-'!+-2''!+-'('+! 和 '!+-&'*' 公司 *+, 的分离纯化 大鼠 & 的分离和纯化按照 2*> 和 1* %- 的方法用双免疫筛选技术进行分离纯化 7 雄性大鼠麻醉处死 分离视网膜并溶解于 : 木瓜蛋白酶 6 左旋 右旋半胱氨酸和 $78'#/ 的混合液中 +! 离心后将细胞悬液孵育在兔抗巨噬细胞抗体? 中 并放置于经山羊抗兔 /6 抗体?$ 包被的培养皿中进行小神经胶质细胞的排除 再将没有贴壁的细胞转移至另一个经山羊抗鼠 /6 抗体? 和 '!+-0 抗体? 共同包被的培养皿中孵育 +! 弃去未贴壁细胞 将贴壁的 & 用 : 的胰蛋白酶在 消化 +! 离心后接种于多聚左旋赖氨酸和层黏连蛋白包被的 % 孔板中 在 & 条件下培养于 7> 培养基 ( 谷氨酰胺 6 庆大霉素?2 补充液 大鼠血清 中 每 更换 次培养液 用双免疫筛选技术分离纯化的原代 & 培养 $ 后 用标签细胞定量检测 获得的纯度至少为 4 *- 谷氨酸盐诱导, 凋亡和藏红花素治疗 依 照 ***/ 的研究 将上述纯化的原代 & 培养 $ 后培养于分别添加 ( 谷氨酸盐 低浓度和高浓度 7> 培养基中 各培养 $!"#"!

3 期 吕伯昌 党晓洁 许治国 等 藏红花素抑制谷氨酸盐诱导的视网膜神经节细胞凋亡 $$ $ 进行细胞凋亡检测 确定谷氨酸盐诱导 & 凋亡的最适时间和剂量 用不同剂量 ( 藏红花素治疗谷氨酸盐诱导的 & 用流式细胞术检测细胞凋亡率 确定藏红花素治疗谷氨酸盐诱导的 & 凋亡的最适剂量 用于后续实验 *., 凋亡的检测 按照 *!!#+!,-./0&1/ 细胞凋亡检测试剂盒的说明书进行检测 将约 A 个细胞重悬于 的结合缓冲液中 在室温下 加入 *!!#+!,-./0& 和 1/ 避光染色 +! 随后 加入 $A 结合缓冲液 在 $! 处 用流式细胞仪检测荧光信号 所有实验重复 次 结果用 &>B"# 软件获取和分析数据 */(!! 检测 用 /1* 裂解液从 & 中提取总蛋白 2&* 蛋白定量试剂盒进行总蛋白的定量后 用 67-1*> 分离 8& 膜进行转膜 2* 封闭 $+! 一抗孵育 分别为 '!- +-'+#-&''#-?'!+-&''#-? '!+-2(-?'!+-2'?'!+-'('+!? 和 '!+-&'?$ 过夜或者 $020 洗 +! 次 A 孵育山羊抗兔辣根过氧化物酶标记的二抗?020 洗 +! 次 A>& 发光 -'+! 作为内参 采用 2+-' 凝胶成像系统及 B"'!+!#$% 进行条带的记录及定量 实验重复 次后取平均值 *0 线粒体膜电位 的检测 采用 &- 荧光染料 检测细胞线粒体膜电位 在 & 培养箱中 将 &- 染色液加入细胞悬浮液 孵育 +! 随后将细胞重悬于预热的 孵育液中 在波长 >>$! 处通过荧光通道. 检测绿色荧光 &- 单体 在波长 >> 处通过荧光通道. 检测红色荧光 &- 聚合体 活细胞线粒体膜电位高 线粒体内 &- 聚集体的浓度高 红色荧光很强 在流式细胞仪检测图上表现为. 和. 双阳性 如 : 右上象限中的散点 而凋亡细胞则大多为. 单阳性 如 右下象限中的散点 因此 采用 右下象限中细胞的比例表示因凋亡引起线粒体膜电位去极化细胞的比例 所有实验重复 次取平均值 结果用 &>B"# 软件获取和分析数据 *1 胞内 + 的检测 取收获 & 的 离心管 +! 离心 +! 弃去培养液 12 洗涤 次 使用无血清培养基重悬细胞 加入.("-*-7 储存液使其终浓度为 ( 置 水浴箱内 $+! 后 用 12 洗涤 次 离心 +! 然后 12 重悬细胞 并调整细胞密度至 A 用流式细胞仪在激发波长 $! 发射波长! 处采集荧光信号强度 以荧光强度代表细胞内 &' 浓度 最后通过.*& 软件分析得出反映 &' 变化的图谱 * 统计学分析 数据均采用均值 标准差 3 表示 各组数据用 1 进行单因素方差分析!#-'*8,*7 多重比较进行各组间两两比较 以 为差异具有统计学意义 + 结 果 +*, 的分离和纯化 采用流式细胞仪检测 & 特异性标记物 为 & 细胞的特异性标记物 +' 为小神经胶质细胞的特异性标记物.*1 为活化的星形胶质细胞的特异性标记物 流式细胞仪检测结果表明 纯化的 & 培养液中发现较多 阳性细胞 $3%$4 几乎没有发现 +'34 和.*13 4 阳性细胞 图 * 而在混合的视网膜细胞培养液中发现较少 阳性细胞 %3 4 较多 +'$3$$4 和.*1 $3$4 阳性细胞 图 2 这表明 & 的纯化率较高 4 倒置显微镜下观察显示 分离纯化后的 & 胞体表面光滑 轴突明显 细胞状态良好 图 &> +*+ 谷氨酸盐诱导, 细胞的凋亡情况 与对照组 3%4 相比 ( 谷氨酸盐刺激 &$ 时的低剂量组细胞凋亡率 $%3 4 差异无统计学意义 当刺激时间增至 $ 时 & 的凋亡率 $3 %%4 升高 差异有统计学意义 图 而高剂量 ( 谷氨酸盐刺激 & 时 $$%$3%4 和 $$ 34 时 & 的凋亡率相较于对照组均显著增加 $ 图 这表明 低剂量 ( 谷氨酸盐作用 $ 以及高剂量 ( 谷氨酸盐作用 $ 和 $ 都可以引起 & 显著凋亡 两变量析因实验分析表明 谷氨酸盐作用时间和浓度均可显著影响 & 的凋亡率 同时二者的交互作用也可引起 & 凋亡率的显著升高 表 本研究后续实验以作用剂量 ( 和作用时间 $ 为最佳造模组合!"#"!

4 $$ 西安交通大学学报 医学版 第 卷 图 分离纯化后, 的免疫标志分子及其形态学鉴定.+6/"!(6+'('!(6+'(+#!+<+'+!<#+('##+!'(6'!6(+! #( * 流式细胞术测定原代 & 分离 $ 后 & 细胞标记物 小神经胶质细胞标志物 +' 及星形胶质细胞标记物.*1 的阳性细胞比例 2 混合视网膜细胞培养液中各种细胞阳性分布比例 &7 原代 & 分离 $ 后 倒置显微镜下的细胞形态 &A7A>A$ 表 析因实验分析谷氨酸盐处理浓度和时间对, 凋亡率的影响 0'.'+'(##+#!'!'(+<##<#<6("''##'!#"#"'+!!#'+<& 变量 型平方和 自由度 均方 浓度 % % $ 时间 % 浓度 A 时间 % % $$ 误差 $% 总计 $%%$ +*- 藏红花素抑制谷氨酸盐诱导的, 凋亡 ( 谷氨酸盐诱导的 &("' 组 再分别采用 ( 的藏红花素处理 流式细胞仪的检测结果表明 与 ("' 组 $34 相比 随着藏红花素作用浓度的递增 谷氨酸盐诱导 的 & 的凋亡率呈剂量 ( 依赖式递减 3$$4$34 3%4%% 图 本研究后续采用 ( 的藏红花素处理谷氨酸盐诱导的 & 作为最有效治疗方案!"#"!

5 !期 吕伯昌&党晓洁&许治国&等,藏红花素抑制谷氨酸盐诱导的视网膜神经节细胞凋亡 66O 图 " 谷氨酸盐不同剂量和作用时间对 <D$-凋亡的影响 F #b` ` 2? `. ` ` 3.? 3. >3.4?3? `T 4 T, >?3*?*?? `;<8 $A B$b#流式细胞术检测凋亡结果'B#对照组% P( 8#分别为$, %( $>>? 谷氨酸盐处理 #6(% $A 谷 氨 酸 盐 处 理 6"(% U( b#分别 为 $, %( $>>? F# 不同处理组细 胞 凋 亡 率 定 量 比 较' 与 对 照 组 比 较&& &! $$, $%%与 $, % $A 谷氨酸盐组比较&' '!$$, >>? $%' 图 " 不同治疗剂量藏红花素对谷氨酸盐诱导的 <D$ -凋亡的影响 F!b` ` 2? `a?4 >3 2?32 3?3? `2? 2 3?3T 4 T, > 3.42.*?*?? `;<8 $A B$b#细胞凋亡率 检 测 结 果' B#未 处 理 ;<8!对 照 组 "% P# $>>? 谷氨酸盐处理#6(% $A 谷氨酸盐处理%#( 后再加入不同浓 8$b# $>>? 度藏红花素处理 %#(% F#不同处理组细胞凋亡率定量比较'与谷 氨 酸 盐 处 理组相比&& &!$$, $%%不同浓度藏红花素处理组间比较&' '!$$, $%' B F" 藏红花 素 抑 制 谷 氨 酸 盐 诱 导 的 $1J 内 流 和 钙 线粒体膜电位的降低是细胞凋亡早期的一个标志&本 离子介导的信号通路 " 与 对 照 组! &, 7"$Q$, O!!"相 研究采用 N8 % 荧光染料检测细胞线粒 体膜电 位的 变 比&谷 氨 酸 盐 引 起 胞 外 8 大 量 内 流! 6!%$Q 化'与正常组! %&, %'$Q #"&"R 对比&谷氨酸盐显著 "g%6, %'!& $$%"&而 藏 红 花 素 可 以 降 6, $#O"! 降低 ;<8 线 粒 体 膜 电 位! 6, O"$Q$, &O#"R % "g 低胞 内 过 高 的 8 浓度! %', &%$Q!, $"#"! "g 6, &&7& $$#"*&而经过藏红花素治疗%#( 后&谷氨 $$!"!图 6B( 68"'与对照 组 相比&谷氨 O, &7'& 酸盐 增 加 钙 依 赖 蛋 白 8 3% 和 8JM" 的 表 达 * 酸盐诱导而降低的线粒体膜电位显著提高! %#, &6$Q #: #:!分别 为# " g% 7!O&! g$, $!6% " g%', %%$&!g "g6, 'O'& $$7&图 '"*' %%$"R % $, $!#"&而藏红花素可以下调这种由谷氨酸盐引发的 B H" 藏红花素抑制谷氨酸盐诱导的线粒体凋亡信号 通路 " 与正常组相比&谷氨酸盐促进 ;<8中促凋亡 钙依赖蛋白 的 表 达!分 别 为# "g%$, '#&& $#$% 信号分子 8 *! 和 8 * O 的 表 达!分 别 为 " "g%#, "%'& $$6"!图 6P( 6U"'可 见 藏 红 花 素 可以抑制 ;<8中谷氨酸盐诱导的 8#: 内流' g&, %&!&! g$, $6%% "g!, #"7&! g$, $!!"&而 经 过 藏红花 素 治 疗 %#( 后&其 表 达 下 降!分 别 为 " g B G" 藏红花素抑制谷氨酸盐诱导的线粒体膜电位 " &, %'"& $#7% "g6, %O#&! g$, $6'"&差 异 有 统 $$+++, $$/001, (./01, 23%( 0 4,.4, 23 *# *# -

6 $ 西安交通大学学报 医学版 第 卷 计学意义 图 %*%& 与正常组相比 谷氨酸盐下调 & 中 2(-2' 的比值 %% 经过藏红花素 的治疗后 2(- 2' 比值显著上调 差异有统计学意义 $ 图 %2%7 图. 藏红花素抑制谷氨酸盐诱导的钙内流以及钙依赖蛋白的表达.+6$&+!+!++#6("''#-+!"# '(+"+!<("'!##+!< '(+"-##!'!#+! *.("-* 染色检测胞内 &' 浓度 2 钙依赖蛋白 &'('+! 和 &' 的表达 & 流式细胞仪检测荧光信号的定量图 7&'('+! 和 &' 蛋白表达的半定量比较 与对照组 &( 组 比较 与谷氨酸盐处理组 ("' 组 比较 +! 藏红花素 图 / 藏红花素促进谷氨酸盐诱导的线粒体膜电位检测结果 & 及比较.+6#"(*-&'! '+!7< +!+!<6("''#-+!"#+!+'#'!##!+'( * 正常对照组 &( 组 2 谷氨酸盐处理 ("' 组 $&( 藏红花素处理谷氨酸盐诱导 ("' +! 组 的 & 7 不同处理组细胞线粒体膜电位定量比较 与对照组比较 与谷氨酸盐处理组比较 +! 藏红花素 - 讨 论青光眼患者视功能损害是由于视神经纤维损伤并导致 & 凋亡的结果 因此 青光眼的治疗靶点是预防视神经的损害和 & 的凋亡 & 是传入神经的一种 主要负责将视网膜获取的视觉信号传入大脑 研究表明 导致 & 凋亡的因素主要包括 兴奋性毒性 眼压升高 角膜层变薄 氧化应激和 - 衰老 目前 治疗青光眼的方法主要是降低眼压 但是 相当一部分青光眼患者经过治疗后眼内压 下降 但是视力仍处于逐渐丧失的状态 这表明可能存在一些非依赖眼压的因素导致青光眼的发生 而阐明这些因素在青光眼发病机制中的作用并针对性找出合理有效的治疗药物 则有助于提高青光眼的临床治疗 谷氨酸是中枢神经系统的一种重要的兴奋性递质 研究表明 胞外过多的谷氨酸盐可以导致 & 和其他神经元凋亡 这一病理过程叫做兴奋性中 毒 从凋亡细胞中释放的谷氨酸盐可以进一步引起周围细胞坏死 从而开始一系列的自动破坏 导致!"#"!

7 期 吕伯昌 党晓洁 许治国 等 藏红花素抑制谷氨酸盐诱导的视网膜神经节细胞凋亡 $ 图 0 藏红花素抑制谷氨酸盐诱导的线粒体促凋亡相关蛋白的表达.+6%&+!+!++####+!<6("''#-+!"#+!+'-'+'#'+ #+! *2 蛋白表达条带 &7 蛋白表达的半定量比较 与对照组 &( 组 比较 与谷氨酸盐处理组 ("' 组 比较 +! 藏红花素 细胞损伤或者死亡 许多研究已经证明 胞外过 $ 量的谷氨酸盐对视网膜有神经毒害作用 同时 其他研究者也发现 在青光眼中过量的谷氨酸盐可以 调节 & 损伤和死亡 目前 兴奋性损伤的主要假设是 胞外过量的谷氨酸盐可以结合细胞表面离子型谷氨酸受体 87* 受体 导致大量 &' 内流 从而促使神经元促凋亡信号级联反应激活 最终引起神经元凋亡 本研究也得到一致的结果 ( 的谷氨酸盐刺激 $( 的谷氨酸盐刺激 $ 和 $ 都会引起 & 大量凋亡 并伴随大量 &' 内流 钙依赖蛋白 &'('+! 和 &' 也明显上调 活化的 &'('+! 可以诱发神经细胞坏 % 死 而多项研究已经表明 &' 依赖的细胞凋 - 亡途径存在于多种细胞 其中钱冰的研究指出 &' 对阿尔兹海默病大鼠海马神经细胞凋亡具有促进作用 因此 胞外过高浓度的谷氨酸盐可以引起 &' 内流 激活钙依赖凋亡信号通路 从而导致 & 的凋亡 藏红花素是藏红花的一种活性成分 在传统上经常用作抗氧化剂 其抗凋亡和抗氧化特性已被许多研究证实 有研究发现 藏红花素可以保护由氧化应激 诱导的大鼠视网膜缺血性损伤 同时 B/ 等也证明藏红花素可以通过 1/*D 信号通路阻止视网膜缺血性损伤导致的 & 凋亡 本研究应用 ( 藏红花素可以有效阻止谷氨酸盐诱导的 & 凋亡 同时阻碍 &' 内流 下调 &'('+! 和 &' 的表达 因此 藏红花素的神经保护作用主要为阻碍胞外 &' 内流 使钙依赖凋亡信号通路失活 从而抑制 & 凋亡 胞外大量 &' 内流 导致胞内 &' 骤升 过剩的 &' 被摄取进入线粒体 导致 线粒体膜去极化 而由于线粒体膜电位的改变 引起线粒体中的细胞色素释放至胞质并激活 &''#- &''#- 依次激活 &''#- 和 &''#- 从而导致细胞损伤 本研究结果显示 胞外过多的谷氨酸盐导致的 &' 内流 可以降低线粒体膜电位 进而释放细胞色素至胞质 激活 &''#- 和 &''#- 导致细胞凋亡的发生 而藏红花素可以阻止这一过程 抑制谷氨酸盐诱导的 &' 内流 提高线粒体膜电位 下调 &''#- 和 &''#- 的水平 进而阻止 & 凋亡 另一方面 2(- 也可以通过阻止细胞色素的释放和 &''# 的活性而抑制细胞凋亡 而 2' 则通 过诱导细胞色素的释放来促进细胞凋亡 本研究结果显示 谷氨酸盐抑制抗凋亡分子 2(- 的表达 促进促凋亡分子 2' 的表达 使 2(-2' 下降而诱导 & 凋亡的发生 藏红花素的治疗逆转了这一过程 因此 藏红花素可通过阻碍胞外 &' 内流 使线粒体依赖凋亡信号通路失活 从而阻止 & 凋亡 藏红花素有神经保护作用 可以防止 & 凋亡 为青光眼等神经退行性疾病潜在的治疗药物可提供一定方向!"#"!

8 $ 西安交通大学学报 医学版 第 卷 参考文献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陈子微 吴翔 & 红景天苷通过激活钙离子 钙调蛋白 钙调蛋白激酶 内皮型一氧化氮合酶通路抑制高糖对人脐静脉内皮细胞的损伤 & 中华心血管病杂志 $$$& 钱冰 吕春娥 田小康 等 & 钙调蛋白依赖性蛋白激酶 在 /6 样大鼠海马的表达及其与细胞凋亡的关系 & 山东大学学报 医学版 $& '.7133/'( &'#### +""#"* # &4#$%& 713'./'(.&# #"#" #,1/- &+ $$& '14..$6(4'$4'/6...%$$& ##"#"" +#+# &'# %& /6/!$!43$&# /* #&$##%& 编辑 国 荣!"#"!

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