使用 Alt-R CRISPR-Cas9 系统可以增强基因组编辑的效率 Alt-RCRISPR-Cas9 系统包括所有基因组编辑所需的试剂 基于天然的 S. pyogenescrispr-cas9 系统,Alt-R CRISPR-Cas9 系统相比其他方法提供了拥有更多的优势 : 比其他 CRISPR 系统有更高的标靶编辑效率 直接运送 Cas9 核糖核蛋白 (RNP) 到细胞内提高了精度控制 RNP 可以通过使用脂质体转染或电转的方法有效的运送 体外实验转录 Cas9mRNA 和 sgrna 时, 没有观察到毒性反应或激活的先天免疫反应新的 Alt-R CRISPR-Cas9 系统, 添加了通过专有的化学修饰后的 Alt-R CRISPR crrna, 这些修饰使 crrna 免于被细胞的核酸酶降解, 进一步提高了标靶编辑的效率 修饰会被自动加入到最终的 Alt-R CRISPR crrna 序列中, 不需要在订购流程中做任何修改 IDT Alt-RCRISPR-Cas9 系统相关产品 IDT 推荐先将 Alt-R S.p. Cas9 Nuclease 3NLS 与 Alt-R CRISPR crrna 和 Alt-R CRISPR tracrrna 结合, 形成一个核糖核蛋白 (Ribonucleoprotein,RNP) 编辑复合物, 这样可以在大多数标靶位点获得特别高的标记效率 请查看 Cas9 Ribonucleoprotein Use Guide 中关于运送 RNP 进入细胞系的转染试剂和材料的指导 我们也高度推荐使用相关对照 Alt-R CRISPR crrna: 客户定制的 crrna 将结合到与 PAM 序列 NGG 位点相对的 DNA 链上 规格为 2nmle 和 10nmol 两种 包装在平板 (96 孔或 384 孔 ) 上的 crrna 需 24 个起订 Alt-R CRISPR crrna, 2 nmol Alt-R CRISPR crrna, 10 nmol Alt-R CRISPR crrna, 2 nmol, Plate( 最少订购 24 条 ) Alt-R CRISPRtracrRNA: 通用的 67mertracrRNA 包含专有的化学修饰, 可以提高核酸酶抗性 与 crrna 杂交激活 Cas9 酶 规 格为 5nmle 20nmol 和 100nmol 三种 5 nmol Alt-R CRISPR tracrrna 1072532 20 nmol Alt-R CRISPR tracrrna 1072533 100 nmol Alt-R CRISPR tracrrna 1072534 S.p. Cas9 Nuclease 3NLS: 重组 S.pyogenes Cas9 核酸酶, 是从进行过密码子优化的表达 Cas9 的 E.coli 菌株中提取的 包括 1 个 N- 末端核定位序列 (NLS),2 个 C- 末端 NLS, 和 C- 末端 6-His tag 规格为 100μg 和 500μg 两种 CRISPR 相关产品介绍页, 未经许可不得擅自使用 1 / 6
100 µg Alt-R S.p. Cas9 Nuclease 3NLS 1074181 500 µg Alt-R S.p. Cas9 Nuclease 3NLS 1074182 CRISPR-Cas9 control kit: 分别针对人类 小鼠或大鼠的试剂盒 包括 tracrrna HPRT 阳性对照 crrna 阴性对照 crrna#1 HPRT primer Mix 和 Nuclease-Free Duplex Buffer 需要分别购买 Cas9 酶 ( 或表达质粒 ), 和 PCR 试剂 规格均为 2nmol 2 nmol Alt-R CRISPR Control Kit Human 1072554 2 nmol Alt-R CRISPR Control Kit Mouse 1072555 2 nmol Alt-R CRISPR Control Kit Rat 1072556 CRISPR positive and negative controls: 分别针对人类 小鼠和大鼠的阳性和阴性对照 规格均为 2nmol 2 nmol Alt-R CRISPR Negative Control crrna #1 1072544 2 nmol Alt-R CRISPR Negative Control crrna #2 1072545 2 nmol Alt-R CRISPR Negative Control crrna #3 1072546 2 nmol Alt-R CRISPR Human HPRT Positive Control crrna 1072541 2 nmol Alt-R CRISPR Mouse HPRT Positive Control crrna 1072542 2 nmol Alt-R CRISPR Rat HPRT Positive Control crrna 1072571 Control PCR primer mixes:hprt 基因的正向 反向引物包装在一个管子中 Product Catalog # 2 nmol (ea.) Alt-R Human HPRT PCR Primer Mix 1072551 2 nmol (ea.) Alt-R Mouse HPRT PCR Primer Mix 1072552 2 nmol (ea.) Alt-R Rat HPRT PCR Primer Mix 1072553 Cas9 expression plasmid: 提供 CMV 启动子控制下持续表达 Cas9 的表达质粒, 每个包装含有 1μg 质粒 Alt-R S.p. Cas9 Expression Plasmid 1072566 CRISPR 相关产品介绍页, 未经许可不得擅自使用 2 / 6
Nuclease-Free Duplex Buffer: 形成 crrna:tracrrna 复合体 10 x 2 ml Nuclease Free Duplex Buffer 11-01-03-01 300 ml Nuclease Free Duplex Buffer 11-05-01-12 IDT Alt-RCRISPR-Cas9 系统产品的优点 Alt-R CRISPR-Cas9 RNA 比单链向导 RNA(singleguide RNA,sgRNA) 更有效的触发基因编辑 IDT 优化的 Alt-R CRISPR RNA 一贯的比其他形式的 CRISPR RNA 更有效的触发 CRISPR-Cas9 基因组编辑, 可以得到更好的标靶基因组编辑效果 Figure 1 显示了 T7EI 检测的 5 种不同形式的 Cas9 触发 RNA 的标靶基因组编辑效率的比较结果 请注意,T7EI 不能检测单碱基缺失以及低估的非同源末端连接 (non-homologous end-joining,nhej) 约 50% 的编辑事件, 显示了 Alt-R CRISP RNA 的高效切割能力 CRISPR 相关产品介绍页, 未经许可不得擅自使用 3 / 6
Figure 1. Optimized Alt-R CRISPR RNAs improve Cas9 editing efficiency compared to other guide RNAmolecules.Alt-R CRISPR RNAs, S. pyogenesnative CRISPR RNAs, in vitro transcribed (IVT) single-guide RNAs (sgrna), andsgrnas expressed from a 2.7 kb expression plasmid or gblocks Gene Fragments weredesigned to recognize 4 sites within the human HPRT gene (38087AS, 38509 S, 38285 AS, and 38636 AS). The RNA duplexes or sgrnas were reversetransfected using Lipofectamine RNAiMAX Transfection Reagent (Thermo Fisher)into a HEK293-Cas9 cell line that stably expresses S. pyogenescas9. Optimal doses that give maximal editing were transfected: Alt-R RNAs, S.pyogenes RNAs, and IVT sgrna (30 nm), gblocks Gene Fragment sgrna(3 nm), sgrna expression plasmid (100 ng). Genomic DNA was isolated, andediting was measured by PCR amplification of target sites, followed by cleavagewith T7EI mismatch endonuclease (New England Biolabs) and analysis using thefragment Analyzer (Advanced Analytical). Alt-R CRISPR RNAs performed well atall sites tested, while other guide RNA formats performed well at some sitesand not others. Results from IVT sgrnas were affected by cellular toxicity. Alt-R S.p. Cas9 Nuclease 3NLS 强大的编辑能力 Alt-RCRISPR-Cas9 系统包括强大的 Alt-R S.p.Cas9 Nuclease 3NLS 当 Alt-R S.p.Cas9Nuclease 3NLS 与 Alt-R CRISPR crrna 和 tracrrna 结合后形成 RNP, 这个系统体现出优于其他方法的编辑能力 (Figure 2) 转染 RNP 可以更好的控制编辑复合物的 使用量 另一方面, 不可再生的 Cas9 RNP 可以在短时间内通过内源性机制被清除, 有效的限制了脱靶编辑 CRISPR 相关产品介绍页, 未经许可不得擅自使用 4 / 6
Figure 2. Lipofection of Alt-R CRISPR-Cas9 System Components as a ribonucleoprotein outperforms othertransient CRISPR-Cas9 approaches. Alt-RCRISPR HPRT Control crrna complexes for human, mouse, or rat were complexedwith Alt-R CRISPR tracrrna. Resulting complexes were transfected with Cas9expression plasmid, Cas9 mrna, or as part of a Cas9 RNP (containing Alt-R S.p.Cas9 Nuclease 3NLS, pre-complexed with the crrna and tracrrna) into human(hek293), mouse (Hepa1-6), or rat (RG2) cell lines. The Cas9 RNP outperformedthe other transient Cas9 expression approaches, and performed similar to referencehek293-cas9 cells that stably expresss.pyogenes Cas9. 优化 crrna:tracrrna 长度, 改进基因编辑的效果 系统性改变 crrna 和 tracrrna 的长度, 可以改进 crrna:tracrrna 复合物, 与 S. pyogenes Cas9 一起在哺乳 动物细胞中表现出更好的基因编辑效果 (Figure 3) 67nt 的 tracrrna 与 36nt 的 crrna 配合使用, 可以提供 最高编辑效率 除了增强活性, 与天然的更长的 crrna 和 tracrrna 相比, 人工合成的缩短长度的 Alt-R CRISPR 相关产品介绍页, 未经许可不得擅自使用 5 / 6
CRISPR RNAs 使它们更适合高通量合成 此外, 化学合成为增强性能如增加核酸酶抗性和减少免疫反应, 提供了 导入化学修饰的机会 Figure 3. Shorter crrna:tracrrna lengthsimprove on-target genome editing. Varyinglengths of crrnas targeting HPRT 38285-ASwere hybridized with tracrrnas of different lengths. crrna:tracrrna complexeswere reverse transfected using Lipofectamine RNAiMAX Transfection Reagent (Thermo Fisher), into ahek293-cas9 cell line that stably expresses S.pyogenes Cas9. Genomic DNA was isolated and editing measured by PCRamplification of target sites, followed by cleavage with T7EI mismatchendonuclease (New England Biolabs), and analysis using the Fragment Analyzer (Advanced Analytical). 北京 : 北京市海淀区马连洼北路亿城国际中心 407 室 (100094) 电话 :010-8289 9503, 8289 9283 传真 :010-8289 0976 邮箱 :info@bio-med.com.cn 上海办事处 : 上海市徐汇区漕溪北路 18 号上实大厦 13E1(200032) 电话 :021-6441 0562 传真 :021-6469 3820 CRISPR 相关产品介绍页, 未经许可不得擅自使用 6 / 6