遺傳學實習 果蠅實驗 ( 二 ): 果蠅飼養 雜交試驗 實驗課流程 果蠅雜交實驗介紹 - Drosophila melanogaster: 各變異株 - D. albomicans 果蠅培養基配置 - 各組配置 6 管培養基
Fly Core Taiwan 各種不同果蠅變異株 突變品系 Stock number Genotype Chromosome 突變位置解釋 備註 w 1118 w 1118 1( 性 ) 性染色體 (1st) 單性狀突變 丁照棣老師提供 DGRC 106346 w[1] m[1] f[1] 1( 性 ) 性染色體 (1st ) 多性 w 白眼 m 迷你翅 f 分岔剛毛狀突變 fu[1] / ClB Male lethal due to l(1)c1. Suppresses crossing over in the X DGRC 106372 chromosome. Originally used in Crossing over-lethal 1( 性 ) recovery of sex-linked recessive Bar eye lethals; replaced by Basc for this purpose. Bloomington 432 vg[1] 2( 體 ) 體染色體 (2nd) 單性 vg 殘翅狀突變 Bloomington 433 vg[1] bw[1] 2( 體 ) 同一體染色體 (2nd) vg 殘翅 bw 褐色眼雙性狀突變 DGRC 103252 cn[1] bw[1] 2( 體 ) DGRC 101750 se[1] 3( 體 ) Bloomington 1669 se[1] e[1] 3( 體 ) Bloomington 3132 w[1]; vg[1] 1( 性 );2( 體 ) DGRC 106424 w[*]; se[1] e[1] 1( 性 );3( 體 ) Bloomington 1870 w[*] sn[1]; e[1] 1( 性 );3( 體 ) dp(2);se[dk](3) dp(2);se[dk](3) 2( 體 );3( 體 ) 同一體染色體 (2nd) cn 朱紅色棒狀眼 bw 褐色眼雙性狀突變 ( 兩基因 recombination : 50%) 體染色體 (3rd) 單性 se 墨黑眼狀突變同一體染色體 (3rd) se 墨黑眼 e 黑身雙性狀突變性染色體 (1st) 及體染色體 (2nd) 各一 w 白眼 ; vg 殘翅性狀突變 性染色體 (1st ) 單性狀突變及體染色體 w 白眼 ; se 墨黑眼 e 黑身 (3rd) 雙性狀突變 性染色體 (1st ) 雙性 w 白眼 sn 剛毛粗糙波浪狀 ; e 狀突變及體染色體黑身 (3rd) 單性狀突變 體染色體 (2nd & 3rd) 各一性狀突變 dp 迷你翅 ; se 墨黑眼 性狀 : 白眼 ; 黑身 陳凱儀老師提供
果蠅性徵觀察 (4/28) Stock number Genotype Chromosome 突變位置解釋 註釋 w 1118 w 1118 1( 性 ) 性染色體 (1st) 單性狀突變 白眼 Bloomington 432 vg[1] 2( 體 ) 體染色體 (2nd) 單性狀突變 殘翅 DGRC 103252 cn[1] bw[1] 2( 體 ) 同一體染色體 (2nd) 雙性狀突變 白眼 為何 cn bw 仍為白眼突變果蠅??? cn= The cinnabar mutation produces bright red eyes ( 朱紅色眼 ) 突變 白眼 bw= 褐色眼 突變 白眼
遺傳學實習 果蠅實驗 ( 二 ): 雜交試驗 D. melanogaster 單性徵 單性 ( 性聯 ) 雙性徵 ( 連鎖 ) WT 殘翅 白眼 WT WT cn bw 第 組 第 組 第 組 第 組 第 組 第 組 抽籤!!
雙性徵 ( 連鎖 ) A Cross Involving a Two-Gene Interaction Inheritance of the Cream-Eye allele in Drosophila Discovered by Calvin Bridges He identified a rare fly with cream-colored eyes, in a true-breeding culture of flies with eosin eyes (cn) This could be explained in one of two ways 1. A new mutation changed the eosin allele into a cream allele 2. A mutation occurred in another gene that modified the expression of the eosin allele
The Hypothesis Cream-colored eyes in fruit flies are due to the effect of an allele that is in the same gene as the eosin allele or in a second gene that modifies the expression of the eosin allele Testing the Hypothesis
C. B. Bridges A Cross Involving a Two-Gene Interaction 測試假設 Cream-colored eyes in fruit flies are due to the effect of an allele that is in the same gene as the eosin allele or in a second gene that modifies the expression of the eosin allele? 1. Cross males with cream-colored eyes to wild-type 2. Observe the F 1 offspring and then allow the offspring to mate with each other. 3. Observe and record the eye color and sex of the F 2 generation. Experimental level x P generation x F 1 generation F 2 generation (Data?) Conceptual level C w C w B w B w ccbb Predicted outcome: C w cb w b Red-eyed females and males Allow F 1 offspring to mate. Predicted outcome: See Punnett square and The Data.
資料紀錄 --- 計算兩基因重組率 Cross Outcome P cross: Cream-eyed X F 1 : all red eyes wild-type F 1 cross: F 1 brother X F 1 sister F 2 : 紅眼?? 朱紅眼?? 褐眼?? 白眼???
遺傳學實習 果蠅實驗 ( 二 ): 雜交試驗計畫 5/12 5/14-15 5/19 5/21-22 5/26 6/2 6/16 1. 每組 mating 兩種果蠅 下午換新 管 巨大染色體 下午 F1 自交 期中考各組報告結果 計算 F1 性徵比 D. albomicans D. melanogaster 使用自己配的 D.albomica ns F1 幼蟲 換新管 計算 F2 性徵比
遺傳學實習 果蠅實驗 ( 二 ): 雜交試驗 第一次雜交 (Fly core Taiwan 取處女蠅 ) 5/12: 每組取 4 管 第一管配 3 對 D. albomicans 觀察幼蟲唾液腺巨大染色體 第二管配 3 對 D. melanogaster 雜交實驗觀察 用吸蟲管迅速將果蠅吸出放入新的培養基中
遺傳學實習 果蠅實驗 ( 二 ): 果蠅飼養 - 標準配方 Sucrose 蔗糖 Sucrose 蔗糖 Bacto-agar 瓊脂 20g 10g Bacto-agar 瓊脂 300 ml H 2 O Corn meal 玉米粒粉 Corn meal 玉米粒粉 Bacto-Yeast extract 酵母萃取物 Bacto-Yeast extract 酵母萃取物 50g 15g 300 ml H 2 O 600 ml medium 攪拌均勻, 加入 3.75 ml 醋酸
遺傳學實習 果蠅實驗 ( 二 ): 果蠅飼養 - 修改配方 研磨機自製玉米粒粉 : 將玉米粒以研磨機磨碎過篩, 將玉米粉與玉米粒粉以 1:1 混合均勻後使用
特選黑糖 Bacto-agar 瓊脂 20g 10g 遺傳學實習 果蠅實驗 ( 二 ): 果蠅飼養 - 修改配方 300 ml H 2 O 自製玉米粒粉 酵母發粉 50g 15g 600 ml medium 攪拌均勻, 加入 3.75 ml 醋酸 300 ml H 2 O 分裝, 每管分裝至 2cm 高的培養基 放置陰涼處風乾 ( 瓶口先以擦手紙蓋住 ) 待培養基凝固後, 取適量棉花塞住瓶口, 倒放
遺傳學實習 果蠅實驗 ( 二 ): 果蠅飼養 將凝固後的培養基倒放, 防止水分流至培養基表面
參考資料 1. Qi Zhou, Hong-mei Zhu, Quan-fei Huang, Li Zhao, Guo-jie Zhang, Scott W Roy, Beatriz Vicoso, Zhao-lin Xuan, Jue Ruan, Yue Zhang, Ruo-ping Zhao, Chen Ye, Xiu-qing Zhang, Jun Wang, Wen Wang and Doris Bachtrog, 2012. Deciphering neo-sex and B chromosome evolution by the draft genome of Drosophila albomicans.bmc Genomics 2012, 13:109 2. Gullan, P. J. and Cranston, P. S., 2010. The Insects - An Outline of Entomology 4 th ed (Wiley-Blackwell, 2010) WW. 3. Charles, A. T. and Norman, F. J., 2005. BorrorDelong's-introduction-to the-study-of - insects-7 th ed. 4. http://www.exploratorium.edu/exhibits/mutant_flies/mutant_flies.html 5. http://www.itvstudios.com/us/home 6. http://www.labmasteradvance.com/website/index.php/onlineshop.html?category_id=20&page=shop.browse&limit=15&limitstart=15 7. http://www.cobioshop.dk/items.php?item=477&categori=54&tc=1