基础研究 16, Vol.37, No.1 99 富硒发芽糙米蛋白的抗氧化活性 胡玲玲 1, 1,, 李春阳 *, 曾晓雄 3, 吴建苏 (1. 江苏省农业科学院农产品加工研究所, 江苏南京 114;. 南京农业大学食品科技学院, 江苏南京 195; 3. 南京远望富硒农产品有限责任公司, 江苏南京 115) 摘要 : 采用碱提酸沉法提取了糙米和富硒发芽糙米中的蛋白, 对其抗氧化活性进行分析测定, 并与对照品芦丁和 进行了比较 结果表明 : 富硒发芽糙米蛋白的总抗氧化能力 (total antioxidant capacity,t-aoc) 1,1- 二苯基 -- 三硝基苯肼 (1,1-diphenyl--picrylhydrazyl,DPPH) 自由基清除率 超氧阴离子自由基 (O - ) 清除率和还原力低于芦丁和, 氧化自由基吸收能力 (oxygen radical absorbance capacity,orac) 显著低于芦丁 (P<.5), 但是显著高于糙米蛋白 (P<.5); 富硒发芽糙米蛋白的羟自由基 ( OH) 清除能力与芦丁和 相当, 但显著高于糙米蛋白 (P<.5) 富硒发芽后的糙米蛋白抗氧化能力显著提高 关键词 : 富硒发芽糙米 ; 蛋白 ; 抗氧化 ; 清除自由基 Antioxidant Activity of Selenium-Enriched Germinated Brown Rice Protein HU Lingling 1,, LI Chunyang 1, *, ZENG Xiaoxiong, WU Jiansu 3 (1. Institute of Agro-Food Science and Technology, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences, Nanjing 114, China;. College of Food Science and Technology, Nanjing Agricultural University, Nanjing 195, China; 3. Jiangsu Yuanwang Selenium-rich Agricultural Produce Co. Ltd., Nanjing 115, China) Abstract: In this study, selenium-enriched germinated brown rice protein was extracted using alkali extraction and acid precipitation, and its antioxidant activity was compared with that of the reference substances of rutin and. The results demonstrated that total antioxidant capacity (T-AOC), DPPH free radical scavenging activity, superoxide anion free radical scavenging activity, and reducing power of the protein were lower than those of rutin and, and its oxygen radical absorbance capacity (ORAC) was significantly lower than that of rutin (P <.5), but significantly higher than that of the protein extracted from the ungerminated ordinary brown rice protein (P <.5). Hydroxyl radical scavenging activity of Se-enriched germinated brown rice protein was similar to that of rutin, but significantly higher than that of ordinary brown rice protein (P <.5). Therefore, antioxidant activity of the protein from se-enriched germinated brown rice was significantly improved. Key words: Se-enriched germinated brown rice; protein; antioxidant activity; free radical scavenging DOI:1.756/spkx1-663-16118 中图分类号 :TS1. 文献标志码 :A 文章编号 :1-663(16)1-99-5 引文格式 : 胡玲玲, 李春阳, 曾晓雄, 等. 富硒发芽糙米蛋白的抗氧化活性 [J]., 16, 37(1): 99-13. DOI:1.756/ spkx1-663-16118. http://www.spkx.net.cn HU Lingling, LI Chunyang, ZENG Xiaoxiong, et al. Antioxidant activity of selenium-enriched germinated brown rice protein[j]. Food Science, 16, 37(1): 99-13. (in Chinese with English abstract) DOI:1.756/spkx1-663-16118. http://www.spkx.net.cn 人体在利用氧的过程中会产生一些活性氧和自由硒是人体必需的微量元素 [4-5], 目前认为生物体内基, 这些活性氧和自由基一旦过剩, 就会损伤细胞, 进发挥生理功能的硒形态主要是以硒代半胱氨酸为活性中而使器官组织受损, 引发疾病 [1] 尽管所有生物体内都具心的硒蛋白, 其具有抗氧化 清除自由基等作用 [6-7] 如有内源性的抗氧化防御和修复系统, 能在一定程度上抵抗机体的氧化, 但是不足以彻底阻止机体氧化带来的损果机体缺硒, 则体内硒蛋白的生物活性下降, 产生自由害, 因此需要依靠摄入外源的抗氧化食品来抵御 [-3] 基, 引发链式反应, 导致细胞膜发生氧化, 细胞受损, 收稿日期 :15-7-11 基金项目 : 江苏省产学研前瞻性联合研究项目 (BY137); 江苏省农业自主创新基金项目 (CX(1)3986) 作者简介 : 胡玲玲 (199 ), 女, 硕士研究生, 研究方向为与工程 E-mail:11478667@qq.com * 通信作者 : 李春阳 (1966 ), 男, 研究员, 博士, 研究方向为营养与活性物质, 农产品精深加工 E-mail:lichunyang968@163.com
1 16, Vol.37, No.1 诱发疾病 Molan等 [8] 比较了富硒绿茶与普通绿茶的抗 氧化活性 结果显示富硒绿茶的还原力 1,1-二苯基-三硝基苯肼 1,1-diphenyl--picrylhydrazyl DPPH 自由 基的清除能力显著高于普通绿茶 此外有研究显示 用 富硒大蒜喂养小鼠增强了小鼠的抗疲劳性[9] 研究表明 通过膳食摄入硒 1 mg/d 能显著提高机体的免疫能力 因此硒对机体生理是重要的也是必需的[1-11] 糙米在生长 发芽过程中 通过自身代谢作用 可以吸收无机硒转化 为有机硒 从而显著提高自身的抗氧化能力 此外发芽 加入 ml.1 mol/l的naoh溶液在4 条件下恒温搅 拌3 h 提取结束后在4 r/min条件下离心15 min 收 集上清液 沉淀中再加 ml.1 mol/l的naoh溶液按 上述条件再提取 合并上清液 用.1 mol/l HCl溶液调 节pH值至5.4 在4 r/min条件下离心15 min 弃上清 液 沉淀水洗两次后冷冻干燥 得到蛋白[5,17] 使用时用 磷酸盐缓冲液 phosphate buffered saline PBS 配成不 同的质量浓度 1.3.1. 蛋白质含量的测定 也增加了糙米中的一些营养成分 特别是γ-氨基丁酸 谷 准确称取.1 mg考马斯亮蓝溶解于5 ml 9%的乙 胱甘肽 肌醇磷酸等活性物质 提高了富硒发芽糙米的 醇 与1 ml 85%的磷酸混合 加水定容至1 ml 取..4.6.8 1. ml的.1 mg/ml的标准蛋 营养活性[1-14] 本实验采用碱法提取糙米和富硒发芽糙米中的 蛋白 从总抗氧化能力 total antioxidant capacity T-AOC DPPH自由基清除率 羟自由基 OH 清 白加蒸馏水至1 ml 再加5 ml考马斯亮蓝溶液 静置 5 min 在595 nm波长处测定吸光度 以标准蛋白质质量 除率等方面比较了富硒发芽糙米蛋白和糙米蛋白的体外 浓度为横坐标 吸光度为纵坐标绘制标准曲线 得到回 归方程为y=.6x.8 R=.999 标准曲线在蛋白 抗氧化活性 以期为富硒发芽糙米产品的开发 生产以 质质量浓度 1 μg/ml范围时具有良好的线性 样品 及市场拓展提供可靠的理论依据 中蛋白质含量测定同上[15] 1.3. 硒含量的测定 1 参照GB 59.93 1 食品中硒的测定 氢化物 材料与方法 1.1 原子荧光光谱法 1.3.3 抗氧化性分析 材料与试剂 糙米 购于南京远望米业有限公司 富硒发芽糙 米 由江苏省农业科学院农产品加工研究所实验室制备 硒含量.87 mg/kg 硒标准储备液 1 μg/ml 核工业北京化工冶 1.3.3.1 总抗氧化能力的测定 按试剂盒说明书上的方法测定抗氧化能力 取两支 试管 分别标记为测试管和对照管 分别向两支试管中 加1 ml试剂1 在测试管中加入. ml的待测样本 分 国药集团化学试剂有限公 别向两支试管中加入 ml试剂和.5 ml试剂3 然后用 漩涡混匀器充分混匀 37 水浴3 min 分别向两支 司 荧光素钠, -偶氮二 -甲基丙基咪 二盐酸盐, -azobis(-methylpropionamidine) dihydrochloride 试管中加入. ml试剂4 在对照管中加入. ml的待 测样本 然后再向两支试管中加入. ml试剂5 最后 金研究院 DPPH 美国Sigma公司 铁氰化钾 三氯 乙酸 三氯化铁 无水乙醇 AAPH 标准品 检测试剂盒 标准品 1. 阿拉丁试剂有限公司 总抗氧化能力 南京建成生物工程研究所 牛血清白蛋白 仪器与设备 德国 Berthold Technologies公司 75S紫外-可见分光光度计 上海棱光技术有限公司 PHS-C数显pH计 仪表有限公司 Eyela FDU-1冷冻干燥机 上海仪器 器械株式会社 PF6-原子荧光分光光度计 北京普析 东京理化 通用仪器责任有限公司 1.3.1 1.3.1.1 方法 1.3.3. DPPH自由基清除率的测定 用95%的乙醇溶液配制. mg/l的dpph溶液 避光 4 保存 现配现用 取3 ml不同质量浓度的待测液 空白管加入3 ml 95%乙醇 最后加入 ml DPPH溶液 在室温避光静置3 min 在517 nm波长处测定吸光度的 变化 按下式计算DPPH自由基清除率[18] DPPH㞾 䰸 /% 糙米蛋白的制备 1.3.3.3 蛋白质的提取 将富硒发芽糙米和糙米粉碎 过1 目筛 按照 1 5 m/v 的比例加入正己烷 室温下搅拌脱脂4 h 通 风干燥1 h 称取1 g脱脂富硒发芽糙米粉 光密度值 ṧ OD5 nm ˉሩ OD5 nm h ᓄ ᙫփ /ml T-AOC/ U/mg pro 1.1h3hਆṧ䟿/mLhर 㳻ⲭ䍘䟿 ᓖ/ mg/l 上海源叶有限公司 TriStar LB 941微孔板式多功能分析仪 1.3 混匀 放置1 min 蒸馏水调零 在5 nm波长处测定 [16] 和糙米粉 A样品 1 OH清除率的测定 5 ml比色管中依次移取5 ml的1 mmol/l的硫酸亚铁 溶液 空白管和样品管中各加5 ml的3 mmol/l过氧化氢 溶液 本底管用蒸馏水 加入空白和样品 用3 mmol/l
的水杨酸溶液定容至刻度 在37 水浴锅中反应 15 min 在51 nm波长处测定吸光度[19] goh 䰸 /% AḋકˉAᴀᑩ 1 3 富硒发芽糙米蛋白提取物中含硒.18±.1 mg/kg. 总抗氧化能力 O 清除率测定 取4.5 ml的.5 mol/l Tris-HCl ph 8. 缓冲液 置于37 水浴中恒温3 min 空白管和样品管中加入.5 ml的5 mmol/l邻苯三酚 本底管用蒸馏水代替 在 样品管和本底管中加入不同体积的样品 混匀后在37 水浴锅中反应5 min 最后加入1 ml的. mol/l盐酸溶液 5 ᇼ 㣭 15 1 5 [19] 终止反应 在4 nm波长处测定吸光度 O g 䲔 /% 1.3.3.5 Aṧ ˉAᵜᓅ 1 图1 取 ml的待测液加入ph 6.6的PBS缓冲液.5 ml 和 1%铁氰化钾溶液.5 ml 混合后在5 条件下放 置 min 加入1%的三氯乙酸溶液1 ml 5 r/min 离心1 min 取上清液.5 ml 加入.5 ml蒸馏水和.5 ml.1%三氯化铁溶液 混匀 静置1 min 在7 nm 4 6 8 1 不同质量浓度 芦丁 富硒发芽糙米蛋白和糙米蛋白的 总抗氧化能力 4 还原力的测定 11 取率为 5.±.74 % 糙米蛋白提取物中不含硒 ᙫᣇ 㜭 / U/mg 1.3.3.4 16, Vol.37, No.1 Fig.1 T-AOC of Se-enriched germinated brown rice protein, ordinary brown rice protein, rutin and at various concentrations 由图1可知 随着质量浓度的升高 富硒发芽糙米蛋 白 糙米蛋白 芦丁的总抗氧化能力均逐渐增强 4 种物质总抗氧化能力的大小顺序为 芦丁 富硒 发芽糙米蛋白 糙米蛋白 P.5 富硒发芽糙米中 蛋白的总抗氧化能力显著高于糙米蛋白 P.5 是因 波长处测定吸光度 以8%的乙醇溶液作为空白对照 以 为在富硒发芽糙米蛋白中硒以硒代半胱氨酸形式存在 待测液与空白对照吸光度的差值为样品的还原力 能螯合起催化作用的金属离子 因此其总抗氧化能力显 1.3.3.6 著高于糙米蛋白.3 对DPPH自由基的清除能力 氧化自由基吸收能力 oxygen radical absorbance capacity ORAC 测定[-] 在96 孔微孔板上加入1 μl不同质量浓度的富硒 'PPH㠚 ส 䲔 /% 发芽糙米蛋白 糙米蛋白和芦丁待测液 同时加入不同 质量浓度Trolox作对照 再用1 道移液器在每孔中加入 5 μl.4 μmol/l荧光素钠混合 37 反应15 min后 向每孔中加入5 μl 6 mmol/l的aaph 选择激发波长 485 nm 吸收波长535 nm 立即微孔板式多功能分析仪 中测定荧光强度 连续测定1 min 实验所得的各微孔 反应的荧光强度数据采用积分法计算荧光衰退曲线下面 积 area under curve AUC ORAC值由样品梯度质量 浓度抗氧化保护面积 AUC样品net AUC 曲线与Trolox 标准品梯度质量浓度抗氧化保护面积 AUC Trolox net AUC 曲线的斜率比得出 ORAC值以Trolox当量表达 [3] 即μmol Trolox/g 1.4 数据处理 利用GraphPad prism6.软件和spss.处理数据[4-5] 1 ᇼ 㣭 8 6 4 1 3 4 5 6 图 不同质量浓度 芦丁 富硒发芽糙米蛋白和糙米蛋白的 Fig. DPPH radical scavenging activity of Se-enriched germinated DPPH自由基清除率 brown rice protein, ordinary brown rice protein, rutin and at various concentrations 由图可知 芦丁 富硒发芽糙米蛋白 糙米 蛋白都具有一定的DPPH自由基清除能力 和芦丁随 着质量浓度的增加 其DPPH自由基清除能力先快速增 结果与分析 强 之后基本不变 富硒发芽糙米蛋白 糙米蛋白随着 样品质量浓度的增加 DPPH自由基清除能力也随之增.1 富硒发芽糙米蛋白提取率及其硒含量 加 在相同质量浓度下富硒发芽糙米蛋白的DPPH自由基 采用碱法提取富硒发芽糙米和糙米中的蛋白 糙米 清除率明显高于糙米蛋白 这是因为硒以硒代半胱氨酸 蛋白提取率为 5.36±1.37 % 富硒发芽糙米蛋白提 存在于酶的活性中心 特别是谷胱甘肽过氧化物酶 具
1 16, Vol.37, No.1 有很强的抗氧化性 能清除DPPH自由基 芦丁 富硒发芽糙米蛋白和糙米蛋白清除DPPH自由基的IC5值 分别为15.3 18.1 445. 9.8 μg/ml 因此清除 DPPH自由基能力大小顺序为 芦丁 富硒发芽糙 白 糙米蛋白 这是由于以硒为活性中心的蛋白能有效 清除O 因此富硒发芽糙米蛋白O 清除率显著大于 糙米蛋白 P.5.6 还原力 米蛋白 糙米蛋白 P.5.4 对 OH的清除能力 4 3 ᇼ 㣭 䘈 goh 䲔 /% 8 4 图5 3 4 5 6 不同质量浓度 芦丁 富硒发芽糙米蛋白和糙米 图3 1 蛋白的 OH清除率 Fig.3 Hydroxyl radical scavenging activity of Se-enriched germinated brown rice protein, ordinary brown rice protein, rutin and at various concentrations 由图3可知 芦丁 富硒发芽糙米蛋白 糙米蛋 白都有一定的 OH清除能力 且随着质量浓度的增加 芦丁 富硒发芽糙米蛋白清除 OH能力明显增强 当质量浓度达到1 µg/ml时 清除能力基本保持不变 而糙米蛋白随着质量浓度的增加 其 OH清除能力逐渐 增强 在相同质量浓度下 芦丁和富硒发芽糙米蛋 白的 OH清除能力差异很小 但均高于糙米蛋白 芦丁 富硒发芽糙米蛋白 糙米蛋白清除 OH的IC5值分 别为75.38 16.9 97.61 69. μg/ml 富硒发芽糙米蛋 白 OH清除率显著大于糙米蛋白清除率 P.5 这是 因为硒蛋白以及含硒的酶类物质能够有效清除 OH.5 对O 的清除能力 O g 䲔 /% 1 8 ᇼ 㣭 6 4 图4 1 4 6 8 不同质量浓度 芦丁 富硒发芽糙米蛋白和 糙米蛋白的O 清除率 Fig.4 4 6 8 1 不同质量浓度 芦丁 富硒发芽糙米蛋白和糙米蛋白的还原力 Fig.5 Reducing power of Se-enriched germinated brown rice protein, ordinary brown rice protein, rutin and at various concentrations 由图5可知 随着质量浓度的升高 芦丁 富 硒发芽糙米蛋白 糙米蛋白还原力也明显升高 在相同 质量浓度下 的还原力显著高于芦丁 富硒发芽糙米 蛋白和糙米蛋白 根据量效方程 对 芦丁 富硒 发芽糙米蛋白 糙米蛋白还原力进行非线性拟合 拟合 曲线相关系数R 分别为.993.991.99.99 拟 合结果显著 IC5值分别为11.333 169.333 381.39 1.67 μg/ml 及还原力大小为 芦丁 富硒发芽 糙米蛋白 糙米蛋白 P.5 这是因为在富硒发芽 糙米蛋白中硒以硒代半胱氨酸形式存在 能有效除去起 催化作用的金属离子.7 氧化自由基吸收能力 图6a为不同梯度质量浓度Trolox 阳性对照 AAPH 以及阴性对照 AAPH 的荧光衰变曲 线 图6b c分别为3 种样品 芦丁 富硒发芽糙米蛋 白 糙米蛋白 不同质量浓度梯度的荧光衰变曲线 随质量浓度的增加 样品抗氧化保护面积 AUC 样品 net AUC 增加 根据方法1.3.3.6节计算Trolox与3 种待 测样品的抗氧化保护面积曲线斜率 计算得到芦丁的 ORAC值为758.91 μmol Trolox/g 富硒发芽糙米蛋白的 ORAC值为673.5 μmol Trolox/g 糙米蛋白的ORAC值为 5.5 μmol Trolox/g 富硒发芽糙米蛋白和糙米蛋白ORAC 值均低于芦丁 但富硒发芽糙米蛋白ORAC值显著高于 糙米蛋白 P.5 说明富硒发芽糙米蛋白氧自由基 吸收能力明显强于糙米蛋白 Superoxide anion radical scavenging activity of Se-enriched germinated brown rice protein, ordinary brown rice protein, rutin and 其O 清除能力大小顺序为 芦丁 富硒发芽糙米蛋 由图4可知 随着质量浓度的增加 芦丁 富 硒发芽糙米蛋白 糙米蛋白O 清除能力逐渐增强 芦丁 富硒发芽糙米蛋白 糙米蛋白清除O 的 IC 5 值分别为35.7 618.7 483.4 918.1 μg/ml a 15 at various concentrations 1 6 ᇼ 㣭 AAPH µmol/ml 1 µmol/ml 5 µmol/ml.5 µmol/ml 1.5 µmol/ml AAPH 1 5 4 6
15 b µg/ml 1 µg/ml 5 µg/ml.5 µg/ml 1 5 [7] [8] 4 6 c 15 8 mg/ml 4 mg/ml mg/ml 1 mg/ml 1 4 6 [1] SITTA A, VANZIN C S, BIANCINI G B, et al. Evidence that L-carnitine and selenium supplementation reduces oxidative stress in phenylketonuric patients[j]. Cellular and Molecular Neurobiology, 15, 16(3). DOI:1.17/s1571-1-9636-3. SITTA A, VANZIN C S, BIANCINI G B, et al. Evidence that L-carnitine and selenium supplementation reduces oxidative stress in phenylketonuric patients[j]. Cellular and Molecular Neurobiology, 11, 31(3): 49-436. DOI:1.17/s1571-1-9636-3. [11] Trolox 芦丁 富硒发芽糙米蛋白和糙米蛋白的荧光衰变曲线 Fig.6 Fluorescence decay curves of Trolox, rutin, Se-enriched germinated brown rice protein and ordinary brown rice protein at various concentrations 3 结 [1] [13] 论 本实验通过碱法提取糙米和富硒发芽糙米蛋白 采 [14] 用6 种抗氧化活性测定方法 对富硒发芽糙米蛋白和糙 米蛋白抗氧化清除自由基能力进行了分析和研究 结果 表明 富硒发芽糙米蛋白与和芦丁的 OH清除率无 显著差异 均显著高于糙米蛋白 富硒发芽糙米蛋白的 T-AOC DPPH自由基清除能力 O 清除率 还原力均 低于芦丁和 ORAC值低于芦丁 但是均显著高于糙 米蛋白 研究结果表明 由于富硒发芽糙米蛋白中结合 了硒 形成了以硒代半胱氨酸为中心得硒蛋白 抗氧化 [15] [16] [17] 性和清除自由基能力显著增强[6] 因此富硒发芽糙米蛋白 [18] 相对于糙米蛋白的抗氧化能力显著提高 [19] 参考文献 [] [1] 常虹, 张利燕, 周家华, 等. 理化因素对板栗雄花序黄酮清除羟自由 基活性的影响[J]. 食品工业, 15, 36(3): 111-114. [1] [] 岳晶念. 富硒大蒜含硒蛋白提取分离 初步纯化及抗氧化活性的 研究[D]. 武汉: 华中农业大学, 9. [] [3] 赵萍, 刘笑笑, 王雅, 等. 富硒小麦提取物中硒含量及其抗氧化特 性[J]., 14, 35(15): 94-98. DOI:1.756/spkx1-663- [3] [4] DENNERT G, ZWAHLEN M, BRINKMAN M, et al. Selenium for 141519. preventing cancer[j]. The Cochrane Database of Systematic Reviews, 11. DOI:1.1/14651858.CD5195.pub3. [5] [4] LIPPMAN S M, KLEIN E A, GOODMAN P J, et al. Effect of selenium and vitamin E on risk of prostate cancer and other cancers: the selenium and vitamin E cancer prevention trial (SELECT)[J]. Jama, 9, 31(1): 39-51. DOI:1.11/jama.8.864. [6] 刘昆仑. 发芽糙米富硒特性及其硒蛋白抗氧化与抗肿瘤活性研究[D]. 南京: 南京农业大学, 1. CAO J, GUO F C, ZHANG L Y, et al. Effects of dietary Selenomethionine supplementation on growth performance, antioxidant status, plasma selenium concentration, and immune function in weaning pigs[j]. Journal of Animal Science and Biotechnology, 15, 6(1): 46-53. DOI:1.1186/49-1891-5-46. MOLAN A L, FLANAGAN J, WEI W, et al. Selenium-containing green tea has higher antioxidant and prebiotic activities than regular green tea[j]. Food Chemistry, 9, 114(3): 89-835. DOI:1.116/ j.foodchem.8.1.8. 李慧, 李伟, 范轶欧. 富硒蒜对小鼠缓解体力疲劳作用的实验研 究[J]. 中国卫生检验杂志, 8, 17(11): 1941-194. DOI:1.3969/ j.issn.14-8685.7.11.8. 图6 13 [9] 5 16, Vol.37, No.1 [5] DWIVEDI Y. The neurobiological basis of suicide[m]. 4th ed. Boca Raton: CRC Press/Taylor & Francis, 1: 65. STREETER C C, GERBARG P L, SAPER R B, et al. Effects of yoga on the autonomic nervous system, gamma-aminobutyric-acid, and allostasis in epilepsy, depression, and post-traumatic stress disorder[j]. Medical Hypotheses, 1, 78(5): 571-579. DOI:1.116/ j.mehy.1.1.1. ENOMOTO T, TSE M T, FLORSCO S B. Reducing prefrontal gamma-aminobutyric acid activity induces cognitive, behavioral, and dopaminergic abnormalities that resemble schizophrenia[j]. Biological Psychiatry, 11, 69(5): 43-441. 张卓, 赵萍, 郭健, 等. 富硒花生中含硒蛋白的提取及其抗氧化性的 研究[J]. 食品工业科技, 1, 33(4): 33-36. 胡玲玲, 李春阳, 曾晓雄. 响应曲面法优化糙米富硒发芽工艺研究[J]. 食品工业科技, 15, 36(17): 34-38. 邱伟芬, 罗佩竹, 方勇, 等. 大米源硒代多肽的酶法制备及其抗氧 化活性的研究[J]. 中国粮油学报, 13, 8(4): 1-7. DOI:1.3969/ j.issn.13-174.13.4.1. 李春阳, 冯进. 蓝莓叶多酚与蓝莓果渣多酚提取物抗氧化活性研究[J]. 食品工业科技, 13, 34(7): 56-6. 樊秀花, 范志华, 何新益. 糙米发芽前后液化汁抗氧化性比较[J]. 中 国粮油学报, 13, 8(1): 1-4. 于丽伟, 王聪智, 何蓉蓉. 刺梨果汁对拘束负荷诱发小鼠肝损伤的 保护作用[J]. 食品与生物技术学报, 1, 9(5): 73-735. 杨涛, 吴辉辉, 徐青, 等. 抗氧化性能评价ORAC法及最新研究进展[J]. 食品工业科技, 9, 3(7): 35-355. 曹亚兰, 赵谋明, 郑赛晶, 等. 以ORAC法为评价指标优化制备大豆 抗氧化肽[J]. 食品与发酵工业, 11, 37(1): 73-77. KEVERS C, SIPEL A, PINCEMAIL J, et al. Antioxidant capacity of hydrophilic food matrices: optimization and validation of ORAC assay[j]. Food Analytical Methods, 14, 7(): 49-416. DOI:1.17/ s1161-13-964-6. KIS E, RAJNAI Z, IOJA E, et al. Mouse Bsep ATPase assay: a nonradioactive tool for assessment of the cholestatic potential of drugs[j]. Journal of Biomolecular Screening, 9, 14(1): 1-15. DOI:1.1177/187571836145. KHAN R A, KHAN M R, SAHREEN S, et al. Assessment of flavonoids contents and in vitro antioxidant activity of Launaea procumbens[j]. Chemistry Central Journal, 1, 6(1): 43-54. DOI:1.1186/175-153X-6-43.