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論 : 類 90028 老 寧

: 量 力 狀 力 降 了 力 便 料 不 不 立 不 利 療 了 不 度 狀 不 度 類 狀 up regulate TLR 類 : 葉 Discorea yam 來 神 1

益 益 精 列 料 料 兩 類 1. 來 殺 2. 淋 識 力 B APC macrophage monocyte immature dendritic cell idc 淋 2

Dendritic cell 裡 不 令 年 來 說 立 都 來 3

留 Toll-Like Receptor Toll Receptor 1997 年 Medzhitov Janeways 類 類 Toll-Like Receptor TLR IL-1 路 類 macrophage monocyte immature dendritic cell idc 淋 APC T 行 Jurkat cell T : 1. 冷 離 SORVALL RT-7 2. 離 MICRO 22R HETTICH 3. Capsulefuge TOMY PMC-060 4. Scientific Industries Vortex Genie2 5. 量 Thermoblock comfuyt 5355 6. FIRSTEK B101 4

7. NUAIRE nu-4500 8. 9. 數 10. 11. 96-well plate 12. flask (T-25 & T-75) 13. microarray kit 1. RPMI1640 10%FBS 2. 3. penicillin 4. Hepes 5. MTT 6. PBS 1X (NaCl 8g KCl 0.2g Na 2 HPO 4 1.44g KH 2 PO 4 0.24g) 7. acid-isopropanal 8. CONA 9. IL-2 10. (Discorea Cold water extraction ethanol) 11. 75% ethanol 12. Trizol Reagent 5

13. chloroform 14. DEPC water 15. TE buffer(ph=8.0) 料 : BALB/C AnA Jurkat cell 老 1. 利 BALB/C AnA 3ml medium 六 2. 15ml tube medium 5ml 3. 離 1200rpm 5 4. 5ml ACK buffer 5. 30~60sec 4 5 6. 5ml medium 數 7. 1c.c.MTT 10c.c.medium MTT 1.5tube 50ul MTT&500ul medium 12 8. 96-well plate 1 well 100ul medium 9. 2*10 5 /100ul 100ul well 6

10. Day0 3 well 見 96well plate 2 11. plate 12. 100ul medium 離 13. medium MTT100ul/well plate2 Day0 3 well MTT 14. 4hr isopropanal 100ul/well 15. 2hr 利 ELISA reader 狀 16. Day1 Day1 2 plate 17. 11~16 18. Day2 Day1 ELISA reader 讀 數 都 Day0 Day1 Day2 Day3 Day4 Day5 Day6 Day7 Day0 Day4 Day1 Day2 Day3 Day5 Day6 Day7 96-well plate 7

不 度 狀 1. 理 都 利 不 度 2. 不 見 A:50ug +IL2 B:50ug C:100ug +IL2 D:100ug E:250ug +IL2 F:250ug G:500ug +IL2 H:500ug I: medium J: A B C D E F G H I J A B C D E F G H I J A B C D E F G H I J Day0 A B C D E F G H I J A B C D E F G H I J A B C D E F G H I J Day2 96-well plate 3. 兩 量 ELISA reader 讀 數 不 度 類 狀 1. 利 MTT 數 度 降 了 度 了 度 0.1ug/ml 1ug/ml 10ug/ml 100ug/ml 250ug/ml 理 48 8

up regulate 1. Jurkat cell line T-75 flask 2. 數 4 1*10 7 cells,10ml medium 3. LPS l-2880 1ug/ml LPS idc 刺 idc LPS TLR 4. DSCE1 25ug/ml 5. 6 6. 15ml tube 離 7. 1c.c Trizol Reagent 利 數 RNA 1.5ml tube 3min 8. 0.2ml chloroform 力 1min 9. 4 o c 離 14000 r.p.m. 15min 10. 4 tube 0.5ml isopropanol 11. 離 兩 DNA IPA tube 12. 4 o c 離 14000 r.p.m. 15min 9

13. RNA 14. 2ml 75% EtOH 4 o c 離 14000 r.p.m. 15min 15. RNA 10ul DEPC water 60 o c 10min 16. 1ul TE buffer O.D 1.9~2.1 良 17. RNA 18. RNA -80 o c 19. RNA oligo(dt) primer 70 o c 5min 20. 冷 10min 21. amino allyl dutp reverse transcriptase 42 o c 90min 22. 利 kit cdna 23. Cy3 medium only 兩 Cy5 LPS DSCE1 理 60min 24. pre-hybridization 25. Hydroxylamine CyDye labelling 10

26. medium only 兩 LPS DSCE1 理 利 kit 27. Hybridization overnight 28. wash 行 29. 利 數 30. 類 六 day 數 量 便 數 數 數 11

不 度 數 1. 老 數 2. 數 12

3. 數 4. 數 13

不 度 類 狀 1. 理 數 列 度 2. 理 度 數 列 3. 理 數 列 度 14

up regulate LPS medium DSCE1+medium 15

論 1. 利 老 老 力 了 老 行 了 了 料 略 來 度 省 兩 96-well plate 量 行 Jurkat cell T cell 利 Microarray 2. 數 異 更 精 來 都 了 料 3. 數 不 plate 16

六 4. 不 浪 流 省 論 1. 老 2. 1 50ug/ml IL2 50ug/ml 數 狀 medium 降 IL2 老 六 數 降 理 來 數 六 量 3. 2 100ug/ml IL2 數 100ug/ml medium 數 降 IL2 刺 100ug/ml 降 不 medium 數 降 老 度 50~100ug/ml 17

4. 3 2 250ug/ml IL2 數 250ug/ml medium 數 降 250ug/ml 降 不 medium 數 降 老 100ug/ml 250ug/ml 不 5. 4 數 都 降 500ug/ml 老 了 了 IL2 都 刺 6. 老 度 50~100ug/ml 數 Jurkat cell 度 老 度 度 量 7. 數 不 亮 不 更 來 1. 了 來 數 力 2. 練 Microarray 利 精 18

來 理 論 3. 練 RNA 利 RNA 行 利 RNA 易 離 量 4. 行 Jurkat cell 來 5. 了 不 行 不 兩 參 料 Campbell(1999): P.877~907 祥 林 金 (2002) P.40~48 (2002) P133~164 Marion D. Kendall 2002 19

2003 年 3 六 Andrew J. Holloway, Ryan K. van Laar, Richard W. Tothill & David D.L. Bowtell(2002)Options available-from start to finish-for obtaining data from DNA microarrays.nature genetics. December2002:481~489. Garry A. Churchill(2002)Fundamentals of experimental design for cdna microarrays. nature genetics. December2002:490~495. 20