第 3 章 动 物 生 理 学 实 验 的 基 本 操 作 技 术 3 畅 1 动 物 生 理 学 实 验 常 用 手 术 器 械 3 畅 2 实 验 动 物 及 其 选 择 3 畅 3 实 验 动 物 的 编 号 捉 拿 固 定 方 法 3 畅 4 实 验 动 物 的 给 药 方 法 3 畅 5 动 物 的 麻 醉 3 畅 6 实 验 动 物 的 采 ( 取 ) 血 与 处 死 方 法 3 畅 7 组 织 分 离 和 插 管 术 3 畅 8 动 物 实 验 意 外 事 故 的 处 理 3 畅 1 动 物 生 理 学 实 验 常 用 手 术 器 械 3 畅 1 畅 1 常 用 手 术 器 械 在 生 理 实 验 室 中 为 了 使 用 和 叙 述 方 便, 将 手 术 器 械 分 别 归 类 为 哺 乳 动 物 手 术 器 械 ( 常 规 手 术 器 械, 与 外 科 手 术 器 械 大 致 相 同 ) 和 小 动 物 手 术 器 械 [ 包 括 : 普 通 ( 粗 ) 剪 刀 手 术 剪 眼 科 镊 尖 头 无 齿 镊 ( 或 普 镊 ) 金 属 解 剖 针 玻 璃 分 针 蛙 板 或 玻 璃 板 蛙 钉 锌 铜 弓 蛙 肌 板 或 蛙 肌 槽 支 架 双 凹 夹 ] 现 仅 介 绍 常 规 的 手 术 器 械 ( 见 MPG 1 1 常 规 手 术 器 械 ) (1) 手 术 刀 手 术 刀 主 要 用 来 切 开 皮 肤 和 脏 器 ( 图 3 畅 1 1) 手 术 刀 片 有 圆 刃 尖 刃 和 弯 刃 3 种 刀 柄 也 分 多 种, 最 常 用 的 是 4 号 刀 柄 和 7 号 刀 柄 可 根 据 手 术 部 位 性 质 的 需 要 自 由 拆 装 和 更 换 变 钝 或 损 坏 的 手 术 刀 片 ( 图 3 畅 1 2) 持 刀 的 方 式 有 4 种 ( 图 3 畅 1 3), 其 中 执 弓 式 是 一 种 常 用 的 持 刀 方 式 其 动 作 范 围 广 泛 而 灵 活, 用 于 腹 部 颈 部 或 股 部 的 皮 肤 切 口 (2) 手 术 剪 和 粗 剪 刀 手 术 剪 分 钝 头 剪 尖 头 剪 其 尖 端 有 直 弯 之 分 主 要 用 于 剪 皮 肤 肌 肉 等 软 组 织 也 可 用 来 分 离 组 织, 即 利 用 剪 刀 尖 插 入 组 织 间 隙, 分 离 无 大 血 管 的 结 缔 组 织 另 外, 还 有 一 种 小 型 的 眼 科 剪, 主 要 用 于 剪 血 管 和 神 经 等 软 组 织 一 般 说 来, 深 部 操 作 宜 用 弯 剪, 不 致 误 伤 剪 线 大 多 为 钝 头 直 剪, 剪 毛 用 钝 头 尖 端 上 翘 的 正 确 执 剪 姿 势 是 用 拇 指 与 环 指 持 剪, 示 指 置 于 手 术 剪 的 上 方 ( 图 3 畅 1 4) 粗 剪 刀, 为 普 通 的 剪 刀 在 蛙 类 的 实 验 中, 常 用 来 剪 蛙 的 脊 柱 骨 和 皮 肤 等 粗 硬 组 织 (3) 手 术 镊 手 术 镊 种 类 很 多, 名 称 也 不 统 一, 常 用 的 有 无 齿 镊 和 有 齿 镊 两 种, 用 于 夹 住 或 提 起 组 织, 以 便 剥 离 剪 断 或 缝 合 有 齿 镊 用 于 提 起 皮 肤 皮 下 组 织 筋 膜 肌 腱 等 较 坚 韧 的 组 织, 使 其 不 易 滑 脱 但 有 齿 镊 不 能 用 以 夹 持 重 要 器 官, 以 免 造 成 损 伤 无 齿 镊 用 于 夹
第 3 章 动 物 生 理 学 实 验 的 基 本 操 作 技 术 21 图 3 畅 1 1 常 用 生 理 手 术 器 械 图 3 畅 1 2 安 装 取 下 刀 片 法 图 3 畅 1 3 持 刀 方 式 夹 持 神 经 血 管 肠 壁 或 其 他 脏 器 较 脆 弱 组 织, 而 不 致 使 之 受 损 伤 正 确 执 镊 方 法 如 图 3 畅 1 示, 用 力 适 当 地 把 持 着 5 所
22 第 一 部 分 总 论 图 3 畅 1 4 手 术 剪 的 握 持 方 法 图 3 畅 1 5 镊 子 的 握 持 方 法 (4) 血 管 钳 血 管 钳 又 称 止 血 钳, 有 直 弯 带 齿 和 蚊 式 钳 等 数 种 主 要 用 于 夹 血 管 或 止 血 点, 以 达 到 止 血 的 目 的 也 用 于 分 离 组 织, 牵 引 缝 线, 把 持 或 拔 缝 针 等 正 确 持 钳 和 持 剪 方 法 相 同 ( 图 3 畅 1 6) 开 放 血 管 钳 的 方 法 是 利 用 右 手 已 套 入 血 管 钳 的 拇 指 与 环 指 相 对 挤 压, 继 而 两 指 向 相 反 的 方 向 旋 开, 放 开 血 管 钳 ( 图 3 畅 1 7) 图 3 畅 1 6 持 钳 法 图 3 畅 1 7 松 钳 法 (5) 骨 钳 有 骨 钳 咬 骨 钳 大 小 号 之 分, 在 打 开 颅 腔 和 骨 髓 腔 时, 用 于 咬 切 骨 质 (6) 颅 骨 钻 用 于 开 颅 时 钻 孔 (7) 气 管 插 管 急 性 动 物 实 验 时, 插 入 气 管, 以 保 证 呼 吸 通 畅, 或 做 人 工 呼 吸 将 一 端 接 气 鼓 或 换 能 器, 可 记 录 呼 吸 运 动 (8) 血 管 插 管 有 动 脉 插 管 和 静 脉 插 管 一 些 小 型 动 物 的 动 脉 插 管 可 用 16 号 输 血 针 头 磨 平 来 替 代 在 急 性 实 验 时 插 入 动 脉, 另 一 端 接 压 力 换 能 器 或 水 银 检 压 计, 以 记 录 血 压 静 脉 插 管 插 入 静 脉 后 固 定, 以 便 在 实 验 过 程 中 随 时 用 注 射 器 向 静 脉 血 管 中 注 入 药 物 和 溶 液 (9) 金 属 探 针 专 门 用 来 毁 坏 蛙 类 脑 和 脊 髓 (10) 玻 璃 分 针 专 用 于 分 离 神 经 与 血 管 等 组 织 (11) 蛙 心 夹 使 用 时 将 夹 的 前 端 在 蛙 心 室 舒 张 时 夹 住 心 室 尖, 尾 端 用 线 系 在 换 能 器 ( 或 杠 杆 ) 上 (12) 动 脉 夹 用 于 阻 断 动 脉 血 流 (13) 蛙 板 一 块 20 cm 15 cm 的 木 板, 用 于 固 定 蛙 类 各 种 手 术 器 械 使 用 后, 都 应 及 时 清 洗, 齿 间 轴 间 的 血 迹 也 应 用 小 刷 刷 洗 干 净 洗 净 后 用 干
第 3 章 动 物 生 理 学 实 验 的 基 本 操 作 技 术 23 布 擦 拭 干, 忌 用 火 烤 烘 干 或 重 击 久 置 不 用 的 金 属 器 械 应 擦 油 保 护 3 畅 1 畅 2 手 术 器 械 的 消 毒 方 法 在 慢 性 实 验 中, 手 术 器 械 必 须 进 行 事 前 消 毒 常 用 的 灭 菌 和 消 毒 方 法 有 煮 沸 消 毒 法 高 压 蒸 汽 灭 菌 法 和 化 学 药 品 消 毒 法 3 畅 1 畅 2 畅 1 煮 沸 消 毒 法 煮 沸 消 毒 法 是 比 较 简 单 方 便 的 消 毒 方 法, 除 要 求 速 干 的 物 品 外, 可 广 泛 地 应 用 于 多 种 物 品 的 消 毒 一 般 用 蒸 馏 水 加 热, 水 沸 3 ~5 min 后 将 器 械 放 到 消 毒 锅 内, 等 到 第 二 次 水 沸 时 计 算 时 间,15 min 可 以 将 一 般 的 细 菌 杀 灭, 但 不 能 杀 灭 具 有 顽 强 抵 抗 力 的 细 菌 芽 孢 对 怀 疑 有 芽 孢 污 染 的 器 械, 必 须 煮 沸 60 min 以 上 有 时 为 了 提 高 消 毒 效 果, 可 在 水 中 加 入 2% 碳 酸 氢 钠, 可 以 提 高 水 的 沸 点 至 102 ~105 这 样, 既 可 以 加 强 灭 菌 能 力, 还 能 防 止 金 属 器 械 生 锈 ( 但 对 橡 胶 制 品 有 害 ) 煮 沸 灭 菌 时, 器 械 或 物 品 应 放 在 水 面 以 下, 煮 沸 器 的 盖 子 应 关 闭 严 密, 以 保 持 沸 水 的 温 度 3 畅 1 畅 2 畅 2 高 压 蒸 汽 灭 菌 法 高 压 蒸 汽 灭 菌 法 需 要 特 制 的 灭 菌 器 通 常 用 蒸 汽 压 15 ~20 lb /in 2, 温 度 可 达 121 畅 6 ~126 畅 6, 维 持 30 min 左 右, 能 杀 灭 所 有 的 细 菌, 包 括 具 有 顽 强 抵 抗 力 的 细 菌 芽 孢, 因 此 是 比 较 可 靠 的 灭 菌 方 法 ( 表 3 畅 1 1) 更 高 的 压 力 或 更 长 的 时 间 并 无 必 要, 相 反 有 可 能 损 坏 物 品 的 质 量, 尤 其 不 宜 于 橡 胶 制 品 和 锐 利 器 械 的 灭 菌 表 3 畅 1 1 高 压 灭 菌 器 内 蒸 汽 压 力 与 温 度 的 比 例 蒸 汽 压 力 /(lb in -2 ) 温 度 / 0 100 畅 0 15 121 畅 6 20 126 畅 6 30 134 畅 4 注 :1 lb =0 畅 453 592 kg,1 in =25 畅 4 mm 3 畅 1 畅 2 畅 3 化 学 药 品 消 毒 法 作 为 灭 菌 的 手 段, 化 学 药 品 消 毒 法 并 不 理 想, 其 消 毒 的 能 力 受 药 物 的 浓 度 温 度 作 用 时 间 等 因 素 的 影 响 但 化 学 药 品 消 毒 法 不 需 特 殊 设 备, 使 用 方 便, 尤 其 对 于 某 些 不 宜 用 热 力 灭 菌 的 用 品 的 消 毒, 仍 不 失 为 一 种 有 用 的 补 充 手 段 器 械 在 浸 泡 入 化 学 消 毒 剂 之 前, 应 该 将 沾 染 的 污 物 洗 净, 尤 其 是 油 脂 覆 盖 的 器 械, 妨 碍 化 学 药 品 对 器 械 的 消 毒 作 用, 所 以 应 该 事 先 仔 细 将 油 脂 擦 净 为 了 避 免 化 学 消 毒 剂 对 组 织 的 有 害 作 用, 消 毒 后 的 器 械 在 使 用 前 应 该 用 开 水 冲 洗 干 净 常 用 的 化 学 消 毒 剂 有 :1LJ 强 化 戊 二 醛 ( 加 入 亚 硝 酸 钠 可 防 锈 ),270% 乙 醇 ( 不 适 宜 金 属 器 械 的 消 毒 ),30 畅 1% 新 洁 尔 灭 ( 加 入 亚 硝 酸 钠 可 防 锈 ),4 酶 皂 溶 液,5 甲 醛 溶 液 等 浸 泡 金 属 器 械 的 时 间 不 应 小 于 30 min, 除 乙 醇 新 洁 尔 灭 外, 其 他 消 毒 剂 消 毒 的 器 械 在 使 用 前 应 注 意 用 无 菌 盐 水 冲 洗 干 净 ( 柳 风 祥 郭 慧 君 王 春 阳 )
24 第 一 部 分 总 论 3 畅 2 实 验 动 物 及 其 选 择 实 验 动 物 是 一 个 专 门 术 语, 它 是 指 根 据 动 物 实 验 需 要, 有 目 的 有 计 划 地 进 行 标 准 化 人 工 饲 养 而 成 的 动 物 这 种 动 物 具 有 非 常 清 晰 的 遗 传 背 景 明 确 的 生 物 学 指 标 严 格 的 健 康 要 求 用 实 验 动 物 所 得 到 的 实 验 结 果 具 有 标 准 化 的 效 果 培 育 实 验 动 物 与 一 般 的 饲 养 动 物 是 完 全 不 同 的 两 件 事, 它 是 一 门 科 学 实 验 动 物 的 培 育 已 发 展 成 一 门 专 门 的 实 验 动 物 学 科 作 为 实 验 动 物, 它 的 品 系 品 种 及 微 生 物 背 景 等 要 清 晰 实 验 时, 应 根 据 实 验 要 求, 结 合 动 物 解 剖 生 理 特 性 挑 选 此 外, 在 饲 养 动 物 时 还 应 对 实 验 动 物 的 饲 料 加 以 控 制, 包 括 营 养 素 要 求 和 搭 配 合 理 加 工 质 量 保 证 等 饲 养 的 环 境 也 要 标 准 化, 如 温 度 湿 度 光 照 空 气 清 洁 度 噪 声 控 制 等 实 验 动 物 按 遗 传 学 可 分 为 :1 近 交 系 实 验 动 物, 即 纯 系 动 物 2 封 闭 群 体 实 验 动 物 3 杂 交 一 代 实 验 动 物 (F 1 ) 按 微 生 物 控 制 程 度 分 级 有 :1 一 级, 普 通 动 物 2 二 级, 清 洁 级 动 物 3 三 级, 无 特 定 病 原 体 实 验 动 物, 即 SPF 动 物 4 四 级, 无 菌 动 物, 即 GF 动 物 有 时 我 们 也 用 一 些 一 般 动 物 进 行 实 验, 但 由 于 它 们 的 遗 传 背 景 健 康 状 况 不 一 致, 所 得 到 结 果 重 复 性 差, 没 有 可 比 性, 所 以 一 般 不 为 国 际 会 议 认 可, 特 别 是 在 一 些 医 学 的 基 础 研 究 中 这 种 动 物 一 般 被 称 为 实 验 用 动 物 常 用 的 实 验 动 物 如 下 所 述 3 畅 2 畅 1 哺 乳 动 物 类 3 畅 2 畅 1 畅 1 家 兔 哺 乳 纲, 啮 齿 目, 兔 科, 是 生 理 实 验 中 最 常 用 的 动 物 家 兔 品 种 很 多, 常 用 的 有 :1 青 紫 蓝 兔, 体 质 强 壮, 适 应 性 强, 易 于 饲 养, 生 长 快 2 中 国 本 地 兔 ( 白 家 兔 ), 抵 抗 力 不 如 青 紫 蓝 兔 强 3 新 西 兰 白 兔 是 近 年 引 进 的 大 型 优 良 品 种, 成 熟 体 重 可 达 4 畅 0 ~4 畅 5 kg 4 大 耳 白 兔, 耳 朵 长 而 大, 血 管 清 晰, 皮 肤 白 色, 但 抵 抗 力 较 差 家 兔 性 情 温 顺, 灌 胃 取 血 方 便 ; 由 于 兔 耳 缘 静 脉 浅 表, 易 暴 露, 是 静 脉 给 药 的 最 佳 部 位, 兔 的 减 压 神 经 在 颈 部 与 迷 走 神 经 交 感 神 经 分 开 而 单 独 成 为 一 束, 常 用 于 心 血 管 反 射 活 动 呼 吸 运 动 泌 尿 机 能 调 节 的 研 究 兔 的 消 化 管 运 动 活 跃, 可 用 于 消 化 管 运 动 及 平 滑 肌 的 研 究 兔 的 大 脑 皮 质 运 动 区 机 能 定 位 已 具 有 一 定 的 雏 形, 因 此 兔 也 常 用 于 大 脑 皮 质 机 能 定 位 和 去 大 脑 僵 直 神 经 放 电 活 动 等 实 验 3 畅 2 畅 1 畅 2 小 白 鼠 哺 乳 纲, 啮 齿 目, 鼠 科, 是 医 学 研 究 中 最 为 常 用 的 实 验 动 物 其 特 点 是 体 型 较 小, 成 熟 早, 繁 殖 力 强, 生 长 快, 性 情 温 顺, 易 于 操 作, 并 能 被 制 作 出 多 种 疾 病 模 型 小 白 鼠 实 验 研 究 资 料 丰 富, 参 比 性 强 ; 适 用 于 需 大 量 动 物 的 实 验 ; 几 乎 可 用 于 药 理 学 免 疫 学 毒 理 学 生 殖 生 理 学 和 肿 瘤 学 等 各 个 学 科 3 畅 2 畅 1 畅 3 大 白 鼠 哺 乳 纲, 啮 齿 目, 鼠 科 大 白 鼠 性 情 不 如 小 白 鼠 温 顺, 它 在 受 惊 吓 或 被 捕 捉 的 方 法 粗 暴 时, 表 现 凶 暴, 易 咬 人, 但 具 有 小 白 鼠 的 其 他 优 点, 可 用 于 胃 酸 分 泌 胃 排 空 水 肿 炎 症 休 克 心 机 能 不 全 黄 疸 肾 机 能 不 全 等 的 研 究 特 别 是 大 白 鼠 脑 部 各 部 的 生 理 机 能 立 体 定 位 已 相 当 成 熟 和 标 准 化, 是 研 究 中 枢 神 经 系 统 的 极 好 材 料
第 3 章 动 物 生 理 学 实 验 的 基 本 操 作 技 术 25 3 畅 2 畅 1 畅 4 豚 鼠 哺 乳 纲, 啮 齿 目, 豚 鼠 科, 又 称 荷 兰 猪 豚 鼠 耳 蜗 管 发 达, 听 觉 灵 敏, 在 生 理 学 上 常 用 于 耳 蜗 微 音 器 的 实 验, 也 用 于 临 床 听 力 的 实 验 研 究 此 外, 还 用 于 离 体 心 脏 及 肠 子 宫 平 滑 肌 心 肌 细 胞 电 生 理 特 性 等 实 验 在 中 枢 神 经 药 理 学 实 验 中 也 常 用 到 该 动 物 3 畅 2 畅 1 畅 5 猫 哺 乳 纲, 食 肉 目, 猫 科 猫 的 大 脑 和 小 脑 很 发 达, 头 盖 骨 和 脑 的 形 状 固 定, 是 用 于 神 经 生 理 学 研 究 的 很 好 的 动 物 利 用 三 维 定 位 仪 对 猫 的 脑 部 定 位 已 基 本 标 准 化 了, 所 以 猫 是 神 经 递 质 机 能 外 周 与 中 枢 神 经 联 系 呼 吸 和 心 血 管 反 射 调 节 等 实 验 极 好 的 材 料 猫 眼 能 按 光 线 强 弱 变 化 而 灵 敏 地 调 节 瞳 孔 大 小, 常 用 作 视 觉 生 理 学 研 究 3 畅 2 畅 1 畅 6 狗 哺 乳 纲, 食 肉 目, 犬 科 狗 听 觉 嗅 觉 灵 敏, 反 应 敏 捷, 对 外 界 环 境 适 应 能 力 强, 易 饲 养, 可 调 教, 能 很 好 地 配 合 实 验 研 究 的 需 要 狗 具 有 发 达 的 血 液 循 环 与 神 经 系 统, 内 脏 构 造 及 其 比 例 与 人 相 似, 是 较 理 想 的 实 验 动 物 在 生 理 学 研 究 中 常 用 于 心 血 管 系 统 脊 髓 传 导 大 脑 皮 质 机 能 定 位 条 件 反 射 内 分 泌 腺 摘 除 和 各 种 消 化 系 统 机 能 的 实 验 研 究 狗 还 用 于 药 理 学 毒 理 学 行 为 学 肿 瘤 学 核 医 学 以 及 临 床 某 些 疾 病 的 研 究 狗 特 别 适 于 实 验 外 科 学 的 研 究 ( 魏 华 ) 3 畅 2 畅 1 畅 7 山 羊 哺 乳 纲, 偶 蹄 目, 牛 科, 羊 亚 科 喜 粗 食, 易 饲 养, 性 格 温 顺, 具 有 复 胃, 颈 静 脉 表 浅 多 用 于 采 血 心 电 图 复 胃 消 化 生 理 及 其 微 生 物 的 观 察 等 3 畅 2 畅 1 畅 8 猪 哺 乳 纲, 偶 蹄 目, 猪 科 猪 嗅 觉 灵 敏, 对 外 界 环 境 适 应 能 力 强 常 用 于 巴 氏 小 胃 血 液 循 环 系 统 及 病 理 药 理 实 验 猪 在 解 剖 学 生 理 学 疾 病 发 生 机 制 等 方 面 与 人 极 为 相 似, 因 此 在 生 理 科 学 领 域 中 的 应 用 率 越 来 越 高 作 为 实 验 用 的 小 型 猪 微 型 猪 是 发 展 方 向, 我 国 已 培 育 出 若 干 种 小 型 和 微 型 猪 品 系 由 于 长 期 小 群 体 内 近 亲 繁 育, 因 此 基 因 纯 合 度 相 对 较 高, 遗 传 稳 定 性 高, 实 验 重 复 性 好 3 畅 2 畅 2 鸟 禽 类 3 畅 2 畅 2 畅 1 鸡 鸟 纲, 鸟 形 目 鸡 飞 翔 力 虽 已 退 化, 但 习 惯 于 四 处 觅 食, 食 性 广 鸡 听 觉 敏 锐, 白 天 视 力 敏 锐, 易 受 惊 扰 鸡 食 管 中 部 有 扩 张 而 成 的 嗉 囊 ; 鸡 肺 呈 海 绵 状 紧 贴 于 肋 骨 上, 肺 上 有 9 个 气 囊 ; 无 肺 胸 膜 及 横 隔 膜 ; 鸡 无 膀 胱, 尿 少, 由 泄 殖 腔 随 粪 排 出 ; 尿 呈 白 色, 为 尿 酸 或 尿 酸 盐, 呈 半 固 体 状 附 在 粪 的 表 面 ; 鸡 的 凝 血 机 制 好, 红 细 胞 有 核 3 畅 2 畅 2 畅 2 鸽 鸟 纲, 鸽 形 目 在 形 态 解 剖 上 与 鸡 大 致 相 同 鸽 的 听 觉 和 视 觉 特 别 发 达, 姿 势 平 衡 反 应 灵 敏, 生 理 学 上 常 用 来 观 察 迷 路 与 姿 势 的 关 系 ; 鸽 具 有 良 好 的 记 忆 敏 锐 的 视 觉 和 稳 定 的 行 为, 是 行 为 学 研 究 的 常 用 模 型 ; 鸽 大 脑 皮 质 不 发 达, 纹 状 体 是 中 枢 神 经 系 统 的 高 级 部 位, 因 此 仅 切 除 大 脑 皮 质 影 响 不 大, 若 切 除 其 大 脑 半 球 则 不 能 正 常 生 活
26 第 一 部 分 总 论 3 畅 2 畅 3 两 栖 类 蟾 蜍 和 蛙 蟾 蜍 和 蛙 属 于 两 栖 纲, 无 尾 目 类, 变 温 动 物 ; 易 饲 养 和 捕 捉, 一 般 是 野 外 捕 捉 后 直 接 供 实 验 室 使 用 ; 也 可 短 期 饲 养 于 潮 湿 地 方, 几 天 可 以 不 食 或 喂 以 草 和 昆 虫 等 因 蟾 蜍 和 蛙 的 一 些 基 本 的 生 命 活 动 与 恒 温 动 物 相 似, 而 且 离 体 组 织 器 官 所 需 的 生 活 条 件 比 较 简 单, 容 易 控 制 和 掌 握, 因 此 是 教 学 中 常 用 的 实 验 动 物 其 坐 骨 神 经 腓 肠 肌 标 本 可 研 究 神 经 的 兴 奋 性 兴 奋 的 传 播 与 传 递 肌 肉 收 缩 和 药 物 对 神 经 兴 奋 传 递 作 用 离 体 心 脏 可 用 于 研 究 心 脏 的 生 理 机 能 蟾 蜍 和 蛙 还 可 用 于 生 殖 生 理 药 理 学 胚 胎 发 育 及 免 疫 的 研 究 ( 王 丙 云 陈 胜 锋 ) 3 畅 2 畅 4 鱼 类 鱼 类 是 低 等 脊 椎 动 物 的 代 表, 由 于 鱼 种 类 繁 多, 其 种 类 数 量 远 超 过 哺 乳 类 和 鸟 类, 有 记 载 的 鱼 类 就 多 达 22 000 种 以 上, 因 此 鱼 类 作 为 实 验 材 料 是 极 为 丰 富 的 资 源 某 些 鱼 类 生 活 史 简 单, 材 料 易 得, 性 成 熟 期 短, 体 外 受 精, 体 外 发 育, 是 生 理 学 发 育 生 物 学 毒 性 试 验 环 境 监 测 生 态 学 遗 传 学 等 研 究 常 用 的 实 验 材 料, 在 各 个 领 域 得 到 广 泛 应 用 虽 然 目 前 鱼 类 实 验 动 物 没 有 统 一 的 标 准, 相 对 陆 生 严 格 动 物 标 准 要 求 的 实 验 动 物, 鱼 类 可 以 说 还 没 确 立 但 一 些 鱼 类 由 于 其 本 身 的 优 势, 作 为 实 验 动 物 已 得 到 一 致 认 可, 并 已 在 这 些 鱼 类 上 开 展 了 大 量 工 作, 如 斑 马 鱼 ( Danio rerio ) 青 鳉 ( Oryzias latipes ) 虹 鳉 ( Poecilia reticulatus ) 新 月 鱼 ( Xiphophorus maculatus) 剑 尾 鱼 (Xiphophorus helleri) 等 由 于 鱼 离 不 开 水, 水 体 的 特 殊 环 境 对 微 生 物 的 控 制 不 易, 对 设 施 和 应 用 条 件 的 要 求 更 高 ; 试 验 用 鱼 类 一 般 体 型 小, 对 活 饵 料 的 依 赖 性 高, 特 别 在 鱼 苗 阶 段, 因 而 营 养 标 准 化 的 难 度 也 很 大 所 以, 鱼 类 的 实 验 动 物 化 研 究 还 有 很 多 技 术 问 题 亟 待 解 决 毕 竟 鱼 类 有 其 固 有 的 特 点, 完 全 照 搬 陆 生 动 物 的 标 准 肯 定 不 合 适, 在 参 照 陆 生 动 物 标 准 解 决 问 题 的 过 程 中 不 断 修 正 可 能 比 较 可 行 3 畅 2 畅 4 畅 1 黄 鳝 鱼 纲, 合 鳃 目, 黄 鳝 科 肉 食 性, 能 借 助 于 口 咽 腔 内 壁 表 皮 直 接 呼 吸 空 气, 耐 低 氧 体 长 圆 筒 形, 背 臀 鳍 退 化, 无 胸 腹 鳍, 实 验 时 易 固 定 黄 鳝 心 脏 由 一 心 房 一 心 室 组 成, 动 脉 球 和 腹 主 动 脉 结 构 简 单 突 出, 容 易 进 行 心 脏 插 管, 因 此 被 选 用 于 研 究 鱼 类 心 脏 活 动 的 实 验 用 动 物 3 畅 2 畅 4 畅 2 乌 鳢 鱼 纲, 鳢 形 目, 鳢 科 食 肉 性, 适 应 性 强, 能 依 靠 辅 助 器 官 直 接 呼 吸 空 气, 耐 低 氧 乌 鳢 有 发 达 的 胃, 胃 肠 肌 肉 壁 厚, 有 较 明 显 的 紧 张 性 收 缩 和 分 节 运 动, 在 水 温 较 高 和 摄 食 季 节 也 能 看 到 胃 的 蠕 动 乌 鳢 的 迷 走 神 经 发 达, 容 易 分 离, 但 左 右 迷 走 神 经 对 胃 肠 活 动 产 生 的 效 果 不 同 因 此, 乌 鳢 被 选 用 为 研 究 鱼 类 消 化 管 运 动 和 神 经 调 节 的 实 验 用 动 物 ( 魏 华 杨 秀 平 ) 3 畅 3 实 验 动 物 的 编 号 捉 拿 固 定 方 法 3 畅 3 畅 1 动 物 编 号 方 法 大 动 物 多 用 挂 牌 法 或 用 铝 环 固 定 在 耳 朵 上, 牌 或 环 上 有 编 号 ; 羊 或 猪 多 用 耳 缺 法 ( 图 3 畅 3 1),
第 3 章 动 物 生 理 学 实 验 的 基 本 操 作 技 术 27 原 则 是 左 个 右 十 上 3 下 1, 如 : 右 耳 下 边 有 两 个 缺 口, 左 耳 上 方 有 两 个 缺 口, 下 方 有 一 个 缺 口, 则 编 号 为 27 号 小 动 物 可 用 苦 味 酸 或 硝 酸 银 涂 于 体 表 不 同 部 位 ( 图 3 畅 3 2) 原 则 是 : 先 左 后 右, 从 前 到 后 用 单 一 颜 色 可 标 记 1 ~10 号, 若 用 两 种 颜 色 配 合 使 用, 其 中 一 种 颜 色 代 表 个 位 数, 另 一 种 代 表 十 位 数, 可 编 到 99 号 图 3 畅 3 1 耳 缺 法 ( 左 耳 ) 图 3 畅 3 2 小 动 物 编 号 鱼 类 的 编 号 目 前 尚 无 统 一 的 标 准, 一 般 通 过 剪 缺 鳍 条 表 示, 具 体 的 含 义 可 由 术 者 自 行 确 定 也 有 用 专 门 的 仪 器 将 带 有 数 字 的 钢 丝 打 入 鱼 的 顶 盖 骨, 捕 捞 后 在 显 微 镜 下 鉴 定 3 畅 3 畅 2 动 物 捉 拿 和 固 定 方 法 在 实 验 过 程 中, 为 了 手 术 操 作 方 便, 顺 利 进 行 试 验 项 目 的 观 察 记 录, 必 须 将 小 动 物 麻 醉 和 固 定 在 特 制 的 实 验 台 上 ( 图 3 畅 3 3) 固 定 动 物 的 方 法 一 般 多 采 用 仰 卧 位, 它 适 用 作 颈 胸 腹 股 等 部 位 的 实 验 ; 俯 卧 位 适 用 于 作 脑 和 脊 髓 等 部 位 的 实 验 图 3 畅 3 3 动 物 头 部 固 定 架 3 畅 3 畅 2 畅 1 狗 的 捆 绑 与 固 定 至 少 由 2 ~3 人 进 行 捆 绑 前 实 验 者 应 先 对 其 轻 柔 抚 摸, 避 免 使 其 惊 恐 或 激 怒 ; 用 一 条 粗 棉 绳 兜 住 上 下 颌, 在 上 颌 处 打 一 结 ( 勿 太 紧 ), 再 绕 回 下 颌 打 第 二 个 结, 然 后 将 绳 引 向 头 后 部, 在 颈 项 上 打 第 三 个 结 且 在 其 上 打 一 活 结 ( 图 3 畅 3 4) 切 记 在 兜 绳 时, 要 注 意 观 察 狗 的 动 向, 以 防 被 其 咬 伤 如 狗 不 能 合 作, 须 用 长 柄 狗 头 钳 夹 持 其 颈 部, 并 按 倒 在 地, 以 限 制 其 头 部 活 动, 再 按 上 述 方 法 捆 绑 其 嘴 捆 嘴 后 使 其 侧 卧, 一 人 固 定 其 肢 体, 另 一 人 注 射 麻 醉 药 此 时, 应 注 意 狗 可 能 出 现 挣 扎, 甚 至 大 小 便 俱 下, 以 及 由 于 这 种 捆 绑 动 作 往 往 致 使 狗 呼 吸 急 促, 甚 至 屏 气 等 问 题 待 动 物 进 入 到 麻 醉 状 态 后, 立 即 松 捆, 以 防 窒 息
28 第 一 部 分 总 论 图 3 畅 3 4 狗 的 固 定 将 麻 醉 好 的 狗 仰 卧 置 于 实 验 台 上, 用 特 制 的 狗 头 夹 固 定 狗 头 ( 图 3 畅 3 3) 固 定 前 将 狗 舌 拽 出 口 外, 避 免 堵 塞 气 道 将 狗 嘴 伸 入 铁 圈, 再 将 直 铁 杆 插 入 上 下 颌 之 间, 再 下 旋 铁 杆, 使 弯 型 铁 条 紧 压 犬 的 下 颌 ( 仰 卧 固 定 ) 或 压 在 鼻 梁 上 ( 俯 卧 固 定 ) 再 将 狗 头 夹 固 定 在 手 术 台 上 固 定 好 狗 头 后, 取 绳 索 用 其 一 端 分 别 绑 在 前 肢 的 腕 关 节 上 部 和 后 肢 的 踝 关 节 上 部, 绳 索 的 另 一 端 分 别 固 定 在 实 验 台 同 侧 的 固 定 钩 上 固 定 两 前 肢 时, 亦 可 将 两 根 绳 索 交 叉 从 犬 的 背 后 穿 过 并 将 对 侧 前 肢 压 在 绳 索 下, 分 别 绑 在 实 验 台 两 侧 的 固 定 钩 上 若 采 取 俯 卧 位 固 定 时, 绑 前 肢 的 绳 索 可 不 交 叉, 直 接 绑 在 同 侧 的 固 定 钩 上 3 畅 3 畅 2 畅 2 猫 捉 持 猫 时 应 戴 手 套, 防 止 被 其 抓 伤 ( 图 3 畅 3 5) 先 将 猫 关 入 特 制 的 玻 璃 容 器 中, 投 入 乙 醚 棉 团 对 其 进 行 快 速 麻 醉, 然 后 乘 其 未 醒 立 即 固 定 在 猫 袋 或 实 验 台 上 图 3 畅 3 5 猫 的 固 定 3 畅 3 畅 2 畅 3 兔 捉 持 家 兔 时 只 需 实 验 者 和 助 手 将 其 抓 牢 或 按 住 即 可 正 确 捉 持 方 法 为 : 一 手 抓 住 家 兔 颈 背 部 皮 肤, 轻 轻 提 起, 另 一 手 托 住 其 臀 部, 使 其 呈 坐 位 姿 势 ( 图 3 畅 3 6) 兔 可 固 定 在 兔 盒 或 兔 台 上 ( 图 3 畅 3 7) 在 手 术 台 上 用 兔 头 夹 固 定 头 部 ( 图 3 畅 3 3), 把 嘴 套 入 铁 圈 内, 调 整 铁 圈 至 最 适 位 置 然 后 将 兔 头 夹 的 铁 柄 固 定 在 手 术 台 上 或 用 一 根 较 粗 棉 线 绳 一 端 打 个 活 结 套 住 兔 的 两 只 上 门 齿, 另 一 端 拴 在 实 验 台 前 端 的 铁 柱 上 做 颈 部 手 术 时, 可 将 一 粗 注 射 器 筒 垫 于 动 物 的 颈 下, 以 抬 高 颈 部, 便 于 操 作 兔 的 四 肢 固 定 和 狗 相 同 ( 见 MPG 2 2 兔 的 固 定 )
第 3 章 动 物 生 理 学 实 验 的 基 本 操 作 技 术 29 图 3 畅 3 6 家 兔 的 抓 拿 方 法 A,B,C 均 是 错 误 的 抓 拿 方 法 ;D,E 中 以 D 为 多 图 3 畅 3 7 兔 的 固 定 和 耳 的 静 脉 注 射 法 3 畅 3 畅 2 畅 4 小 白 鼠 大 白 鼠 实 验 者 右 手 捉 住 小 白 鼠 尾, 鼠 会 本 能 地 向 前 爬 行 左 手 攥 紧 鼠 颈 背 部 皮 肤, 使 其 腹 部 向 上, 拉 直 躯 干, 并 以 左 手 小 指 和 掌 部 夹 住 其 尾 固 定 在 左 手 上 ( 图 3 畅 3 8) 可 作 腹 腔 麻 醉 亦 可 用 金 属 筒 有 机 玻 璃 筒 或 铁 丝 笼 式 固 定 器 固 定, 露 出 尾 部, 作 尾 静 脉 注 射 图 3 畅 3 8 鼠 的 固 定 捉 持 大 白 鼠 的 方 法 基 本 同 小 白 鼠 大 白 鼠 在 惊 恐 或 激 怒 时 会 咬 人, 捉 拿 时 可 戴 防 护 手 套, 或 用 厚 布 盖 住 鼠 身 作 防 护 握 住 大 白 鼠 整 个 身 体, 并 固 定 头 骨, 防 止 被 咬 伤 动 作 应 轻 柔, 切 忌 粗
30 第 一 部 分 总 论 暴 也 可 用 钳 子 夹 持 最 后 再 根 据 需 要, 将 大 白 鼠 置 于 固 定 笼 内 或 捆 绑 四 肢 3 畅 3 畅 2 畅 5 豚 鼠 右 手 横 握 豚 鼠 腹 前 部, 左 手 轻 托 后 肢 ( 图 3 畅 3 9) 3 畅 3 畅 2 畅 6 蛙 实 验 者 一 手 拇 指 示 指 和 中 指 控 制 蛙 两 前 肢, 环 指 和 小 指 压 住 两 后 肢 ( 图 3 畅 3 MPG 2 1 蛙 的 捉 拿 ) 10) ( 见 图 3 畅 3 9 豚 鼠 的 抓 拿 方 法 图 3 畅 3 10 蛙 和 蟾 蜍 的 抓 拿 方 法 3 畅 3 畅 2 畅 7 鱼 类 的 保 存 运 输 和 固 定 实 验 鱼 的 保 存 最 基 本 的 要 求 是 要 有 适 宜 的 水 源, 包 括 合 适 的 化 学 成 分 和 水 温 保 存 鱼 的 水 温 最 好 接 近 鱼 所 处 的 自 然 环 境, 避 免 温 度 剧 烈 变 动 从 外 地 运 输 来 的 鱼, 在 入 池 之 前, 应 使 其 有 一 段 水 温 适 应 过 程, 逐 渐 使 其 适 应 池 中 的 水 温 活 动 性 强 的 鱼 类 以 放 在 圆 形 容 器 或 池 中 为 宜, 让 它 们 能 持 续 游 动 而 不 被 碰 伤 实 验 水 槽 或 水 族 箱 应 有 循 环 流 水 和 过 滤 净 化 装 置, 小 水 族 箱 可 用 活 性 炭 或 玻 璃 纤 维 过 滤, 每 周 至 少 将 全 部 水 更 换 一 次 更 换 的 水 最 好 通 过 紫 外 线 以 减 少 微 生 物 感 染 的 可 能 性 输 送 的 水 管 最 好 是 玻 璃 或 塑 料 管, 不 应 用 铜 或 铁 管 实 验 鱼 在 养 育 期 间, 应 投 以 适 量 的 饵 料, 最 好 选 用 商 品 颗 粒 饵 料 为 了 防 病, 可 用 稀 释 的 高 锰 酸 钾 溶 液 孔 雀 石 绿 液 福 尔 马 林 或 高 浓 度 的 食 盐 水 浸 泡 实 验 鱼, 也 可 在 饵 料 中 加 入 少 量 的 抗 生 素 实 验 鱼 类 的 运 输 通 常 用 木 桶 塑 料 桶 或 塑 料 袋 进 行 运 输 时 用 低 温 水 ( 加 冰 ) 充 氧, 必 要 时 可 加 入 少 量 麻 醉 剂, 可 大 大 减 少 鱼 的 死 亡 率 运 输 鱼 操 作 时 戴 上 手 套 可 以 减 轻 鱼 的 损 伤 一 般 鱼 类 的 固 定 应 注 意 以 下 几 点 : 首 先 给 鱼 以 肌 松 剂, 然 后 固 定 在 特 制 的 手 术 台 上, 固 定 用 的 手 术 台 可 以 有 不 同 的 形 状, 根 据 实 验 要 求 自 制, 安 装 流 水 呼 吸 装 置 ( 图 3 畅 3 11) 而 对 于 黄 鳝 的 固 定, 在 固 定 前, 先 破 坏 其 脊 髓 用 粗 剪 刀 尖 于 枕 骨 后 缘 剪 断 脊 柱 和 肌 肉, 用 一 细 钢 丝 插 进 椎 管 若 已 插 图 3 畅 3 11 鱼 的 固 定 装 置 入 椎 管, 会 有 阻 力 感, 不 断 前 后 抽 动 钢 丝, 凡 钢 丝 通 过 之 处, 黄 鳝 腹 壁 肌 肉 松 弛 约 破 坏 到 躯 体 中 央 时, 抽 出 钢 丝 将 黄 鳝 腹 面 向 上, 用 钉 子 分 别 将 黄 鳝 吻 和 尾 部 固 定 于 手 术 板 ( 木 板 条 ) 上 ( 魏 华 )
第 3 章 动 物 生 理 学 实 验 的 基 本 操 作 技 术 31 3 畅 4 实 验 动 物 的 给 药 方 法 3 畅 4 畅 1 经 口 投 药 法 3 畅 4 畅 1 畅 1 口 服 法 口 服 法 是 将 溶 于 水 并 且 在 水 溶 液 中 较 稳 定 的 药 物 放 入 动 物 饮 水 中, 不 溶 于 水 的 药 物 混 于 动 物 饲 料 内, 由 动 物 自 行 摄 入 该 方 法 技 术 简 单, 给 药 时 动 物 接 近 自 然 状 态, 不 会 引 起 动 物 应 激 反 应, 适 用 于 多 数 动 物 慢 性 药 物 干 预 实 验, 如 抗 高 血 压 药 物 的 药 效 药 物 毒 性 测 试 等 其 缺 点 是 动 物 饮 水 和 进 食 过 程 中, 总 有 部 分 药 物 损 失, 药 物 摄 入 量 计 算 不 准 确, 而 且 由 于 动 物 本 身 状 态 饮 水 量 和 摄 食 不 同, 药 物 摄 入 量 不 易 保 证, 影 响 药 物 作 用 分 析 的 准 确 性 3 畅 4 畅 1 畅 2 灌 服 法 灌 服 法 是 将 动 物 适 当 固 定, 强 迫 动 物 摄 入 药 物 这 种 方 法 能 准 确 把 握 给 药 时 间 和 剂 量, 及 时 观 察 动 物 的 反 应, 适 合 于 急 性 和 慢 性 动 物 实 验, 但 经 常 强 制 性 操 作 易 引 起 动 物 不 良 生 理 反 应, 甚 至 操 作 不 当 引 起 动 物 死 亡 强 制 性 给 药 方 法 主 要 有 以 下 两 种 : (1) 固 体 药 物 口 服 一 人 操 作 时 用 左 手 从 背 部 抓 住 动 物 头 部, 同 时 以 拇 示 指 压 迫 动 物 口 角 部 位 使 其 张 口, 右 手 用 镊 子 夹 住 药 片 放 于 动 物 舌 根 部 位, 然 后 让 动 物 闭 口 吞 咽 药 物 (2) 液 体 药 物 灌 服 小 白 鼠 与 大 白 鼠 一 般 由 一 人 操 作, 左 手 固 定 动 物, 使 动 物 腹 部 朝 向 术 者, 右 手 将 连 接 注 射 器 的 硬 质 胃 管 由 口 角 处 插 入 口 腔, 用 胃 管 将 动 物 头 部 稍 向 背 侧 压 迫, 使 口 腔 与 食 管 成 一 直 线, 将 胃 管 沿 上 颚 壁 轻 轻 插 入 食 管, 小 白 鼠 一 般 用 3 cm, 大 白 鼠 一 般 用 5 cm 的 胃 管 ( 图 3 畅 4 1 ) 插 管 时 应 注 意 动 物 反 应, 如 插 入 顺 利, 动 物 安 静, 呼 吸 正 常, 可 注 入 药 物 ; 如 动 物 剧 烈 挣 扎 或 插 入 有 阻 力, 应 拔 出 胃 管 重 插, 如 将 药 物 灌 入 气 管, 可 致 动 物 立 即 死 亡 兔 狗 猫 等 动 物 灌 胃 时, 先 将 动 物 固 定, 再 将 特 制 的 开 口 器 放 入 动 物 上 下 门 牙 之 后, 并 用 绳 将 它 固 定 于 嘴 部, 将 带 有 弹 性 的 橡 皮 导 管 ( 如 导 尿 管 ), 经 开 口 器 上 的 小 圆 孔 插 入, 沿 咽 后 壁 进 入 食 管, 此 时 应 检 查 导 管 是 否 插 入 食 管, 可 将 导 管 外 口 置 于 一 盛 水 的 烧 杯 中, 如 无 气 泡, 表 示 插 入 食 管, 即 可 将 药 液 灌 入 ( 图 3 畅 4 2) 图 3 畅 4 1 小 白 鼠 灌 胃 法 图 3 畅 4 2 兔 灌 胃 法
32 第 一 部 分 总 论 3 畅 4 畅 2 注 射 给 药 3 畅 4 畅 2 畅 1 淋 巴 囊 注 射 青 蛙 与 蟾 蜍 皮 下 有 多 个 淋 巴 囊, 注 射 药 物 易 于 吸 收, 适 合 于 该 类 动 物 全 身 给 药 常 用 注 射 部 位 为 胸 腹 和 股 淋 巴 囊 为 防 止 注 入 药 物 自 针 眼 处 漏 出, 胸 淋 巴 囊 注 射 时 应 将 针 头 刺 入 口 腔, 由 口 腔 组 织 穿 刺 到 胸 部 皮 下, 注 入 药 物 股 淋 巴 囊 注 射 时 应 由 小 腿 刺 入, 经 膝 关 节 穿 刺 到 股 部 皮 下, 注 射 药 液 量 一 般 为 0 畅 25 ~0 畅 5 ml( 图 3 畅 4 3) 图 3 畅 4 3 蛙 淋 巴 囊 注 射 3 畅 4 畅 2 畅 2 皮 下 注 射 皮 下 注 射 是 将 药 物 注 射 于 皮 肤 与 肌 肉 之 间, 适 合 于 所 有 哺 乳 动 物 实 验 动 物 皮 下 注 射 一 般 应 由 两 人 操 作, 熟 练 者 也 可 一 人 完 成 由 助 手 将 动 物 固 定, 术 者 用 左 手 捏 起 皮 肤, 形 成 皮 肤 皱 褶, 右 手 持 注 射 器 刺 入 皱 褶 皮 下, 将 针 头 轻 轻 左 右 摆 动, 如 摆 动 容 易, 表 示 确 已 刺 入 皮 下, 再 轻 轻 抽 吸 注 射 器, 确 定 没 有 刺 入 血 管 后, 将 药 物 注 入 ( 图 3 畅 4 4) 拔 出 针 头 后 应 轻 轻 按 压 针 刺 部 位, 以 防 药 液 漏 出, 并 可 促 进 药 物 吸 收 鸽 禽 类 常 选 用 翼 下 注 射 3 畅 4 畅 2 畅 3 肌 内 注 射 肌 肉 血 管 丰 富, 药 物 吸 收 速 度 快, 故 肌 内 注 射 适 合 于 几 乎 所 有 水 溶 性 和 脂 溶 性 药 物, 特 别 适 合 于 狗 猫 兔 等 图 3 畅 4 4 小 白 鼠 的 皮 下 注 射 法 肌 肉 发 达 的 动 物, 而 小 白 鼠 大 白 鼠 豚 鼠 因 肌 肉 较 少, 肌 内 注 射 稍 有 困 难, 必 要 时 可 选 用 股 部 肌 肉 鸟 类 选 用 胸 肌 或 腓 肠 肌 肌 内 注 射 一 般 由 两 人 操 作, 小 动 物 也 可 由 一 人 完 成 助 手 固 定 动 物, 术 者 用 左 手 指 轻 压 注 射 部 位, 右 手 持 注 射 器 垂 直 刺 入 肌 肉, 回 抽 针 栓 如 无 回 血, 即 可 将 药 物 注 入, 然 后 拔 出 针 头, 轻 轻 按 摩 注 射 部 位, 以 助 药 物 吸 收 3 畅 4 畅 2 畅 4 腹 腔 注 射 腹 腔 吸 收 面 积 大, 药 物 吸 收 速 度 快, 故 腹 腔 注 射 适 合 于 多 种 刺 激 性 小 的 水 溶 性 药 物 的 用 药, 并 且 是 啮 齿 类 动 物 常 用 的 给 药 途 径 之 一 腹 腔 注 射 穿 刺 部 位 一 般 选 在 下 腹 部 正 中 线 两 侧, 该 部 位 无 重 要 器 官 腹 腔 注 射 可 由 两 人 完 成, 熟 练 者 也 可 一 人 完 成 助 手 固 定 动 物, 并 使 其 腹 部 向 上, 术 者 将 注 射 器 针 头 在 选 定 部 位 刺 入 皮 下, 然 后 使 针 头 与 皮 肤 成 45 角 缓 慢 刺 入 腹 腔, 如 针 头 与 腹 内 小 肠 接 触, 一 般 小 肠 会 自 动 移 开, 故 腹 腔 注 射 较 为 安 全 ( 图 3 畅 4 5) 刺 入 腹 腔 时, 术 者 可
第 3 章 动 物 生 理 学 实 验 的 基 本 操 作 技 术 33 有 阻 力 突 然 减 小 的 感 觉, 再 回 抽 针 栓, 确 定 针 头 未 刺 入 小 肠 膀 胱 或 血 管 后, 缓 慢 注 入 药 液 3 畅 4 畅 2 畅 5 静 脉 注 射 静 脉 注 射 将 药 物 直 接 注 入 血 液, 无 须 经 过 吸 收 阶 段, 药 物 作 用 最 快, 是 急 慢 性 动 物 实 验 最 常 用 的 给 药 方 法 静 脉 注 射 给 药 时, 不 同 种 类 的 动 物 由 于 其 解 剖 结 构 的 不 同, 应 选 择 不 同 的 静 脉 血 管 (1) 兔 耳 缘 静 脉 注 射 将 家 兔 固 定 于 兔 固 定 箱 内 或 实 验 台 上, 剪 除 兔 耳 外 侧 缘 被 毛, 用 乙 醇 棉 球 涂 擦 耳 部 边 缘 静 脉, 并 用 手 指 弹 动 或 轻 轻 揉 擦 兔 耳, 使 静 脉 充 盈 然 后 用 左 手 示 指 和 中 指 夹 住 静 脉 近 心 端, 拇 指 和 小 指 夹 住 耳 边 缘 部 分, 以 左 手 环 指 小 指 放 在 耳 下 作 垫, 右 手 持 注 射 器 尽 量 从 静 脉 的 远 端 刺 入, 移 动 拇 指 于 针 头 上 以 固 定 针 头, 放 开 示 指 和 中 指, 将 药 液 注 入 ( 图 3 畅 3 7, 图 3 畅 4 6) 如 感 觉 推 注 阻 力 很 大, 并 且 局 部 肿 胀, 表 示 针 头 已 滑 出 血 管, 应 重 新 穿 刺 注 意 兔 耳 缘 静 脉 穿 刺 时 应 尽 可 能 从 远 心 端 开 始, 以 便 重 复 注 射 图 3 畅 4 5 小 白 鼠 的 腹 腔 注 射 法 图 3 畅 4 6 兔 耳 缘 静 脉 注 射 示 意 图 (2) 小 白 鼠 与 大 白 鼠 尾 静 脉 注 射 小 白 鼠 尾 部 有 三 根 静 脉, 左 右 两 侧 和 背 部 各 一 根, 两 侧 的 尾 静 脉 更 适 合 于 静 脉 注 射 注 射 时 先 将 小 白 鼠 置 于 鼠 固 定 筒 内 或 扣 在 烧 杯 中, 让 尾 部 露 出, 用 45 ~50 的 温 水 浸 润 半 分 钟 或 用 乙 醇 擦 拭, 血 管 充 分 扩 张 术 者 用 左 手 拉 尾 尖 部, 右 手 持 注 射 器 ( 以 4 号 针 头 为 宜 ) 将 针 头 刺 入 尾 静 脉, 然 后 左 手 捏 住 鼠 尾 和 针 头, 右 手 注 入 药 物 ( 图 3 畅 4 7) 如 推 注 阻 力 很 大, 局 部 皮 肤 变 白, 表 示 针 头 未 刺 入 血 管 或 滑 脱, 应 重 新 穿 刺, 注 射 药 液 量 以 0 畅 15 ml / 只 为 宜 幼 年 大 白 鼠 也 可 做 尾 静 脉 注 射, 方 法 与 小 白 鼠 相 同, 但 成 年 大 白 鼠 尾 静 脉 穿 刺 困 难, 不 宜 采 用 尾 静 脉 注 射 图 3 畅 4 7 小 白 鼠 的 尾 静 脉 注 射 法 (3) 狗 肢 体 静 脉 注 射 狗 前 肢 小 腿 内 侧 有 较 粗 的 皮 下 头 静 脉 和 后 肢 外 侧 小 隐 静 脉, 是 狗 静 脉 注 射 较 方 便 的 部 位 注 射 前 先 剪 去 该 部 位 被 毛, 乙 醇 消 毒, 用 压 脉 带 扎 紧 ( 或 用 手 抓 紧 ) 静 脉 近 端, 使 血 管 充 盈, 从 静 脉 的 远 端 将 注 射 针 头 平 行 刺 入 血 管, 待 有 回 血 后, 松 开 绑 带 ( 或 两 手 ), 缓 缓 注 入 药 液 ( 图 3 畅 4 8) (4) 家 禽 静 脉 注 射 家 禽 可 选 择 翼 下 肱 静 脉 或 蹼 间 静 脉 ( 图 3 畅 4 9) 进 行 注 射 给 药, 方 法 与 其 他 动 物 相 同
34 第 一 部 分 总 论 图 3 畅 4 8 狗 静 脉 注 射 图 3 畅 4 9 家 禽 的 静 脉 注 射 (5) 鱼 类 可 采 取 血 管 插 管 法 给 药 ( 详 见 3 畅 7 畅 4) 或 于 胸 鳍 下 无 鳞 区 将 药 注 入 体 腔, 或 于 背 鳍 基 下 方 柔 软 处 进 行 肌 内 注 射 ( 王 丙 云 陈 胜 锋 ) 3 畅 5 动 物 的 麻 醉 在 急 慢 性 动 物 实 验 中, 手 术 前 均 应 将 动 物 麻 醉, 以 减 轻 或 消 除 动 物 的 痛 苦, 保 持 安 静 状 态, 从 而 保 证 实 验 顺 利 进 行 由 于 麻 醉 药 品 的 作 用 特 点 不 同, 动 物 的 药 物 耐 受 性 有 种 属 或 个 体 间 差 异, 实 验 内 容 及 要 求 不 同, 因 此 正 确 选 择 麻 醉 药 品 的 种 类 用 药 剂 量 及 给 药 途 径 十 分 重 要 理 想 的 麻 醉 药 品 应 当 是 对 动 物 麻 醉 完 善, 其 毒 性 和 对 生 理 机 能 干 扰 最 小, 使 用 方 便 3 畅 5 畅 1 麻 醉 前 的 准 备 工 作 (1) 熟 悉 麻 醉 药 品 的 特 点 根 据 实 验 内 容 合 理 选 用 麻 醉 药 例 如, 乌 拉 坦 对 兔 和 猫 的 麻 醉 效 果 好, 较 稳 定, 不 影 响 动 物 的 循 环 及 呼 吸 机 能 氯 醛 糖 很 少 抑 制 神 经 系 统 的 活 动, 适 用 于 保 留 生 理 反 射 的 实 验 乙 醚 对 心 肌 机 能 有 直 接 抑 制 作 用, 但 兴 奋 交 感 肾 上 腺 系 统, 全 身 浅 麻 醉 时, 可
第 3 章 动 物 生 理 学 实 验 的 基 本 操 作 技 术 35 增 加 心 输 出 量 20% 硫 喷 妥 钠 对 交 感 神 经 抑 制 作 用 明 显, 因 副 交 感 神 经 机 能 相 对 增 强 而 诱 发 喉 痉 挛 (2) 麻 醉 前 应 核 对 药 物 名 称, 检 查 药 品 有 无 变 质 或 过 期 失 效 (3) 狗 猫 等 手 术 前 应 禁 食 12 h, 以 减 轻 呕 吐 反 应 (4) 需 在 全 麻 下 进 行 手 术 的 慢 性 实 验 动 物, 可 适 当 给 予 麻 醉 辅 助 药 例 如, 皮 下 注 射 吗 啡 镇 静 止 痛, 注 射 阿 托 品 减 少 呼 吸 道 分 泌 物 的 产 生 等 3 畅 5 畅 2 全 身 麻 醉 3 畅 5 畅 2 畅 1 吸 入 麻 醉 挥 发 性 麻 醉 药 经 面 罩 或 气 管 插 管 进 行 开 放 式 吸 入 麻 醉 常 用 的 吸 入 麻 醉 剂 是 乙 醚 乙 醚 为 无 色 易 挥 发 的 液 体, 有 特 殊 的 刺 激 性 气 味, 易 燃 易 爆, 应 用 时 应 远 离 火 源 乙 醚 可 用 于 多 种 动 物 的 麻 醉, 麻 醉 时 对 动 物 的 呼 吸 血 压 无 明 显 影 响, 麻 醉 速 度 快, 维 持 时 间 短, 更 适 合 于 时 间 短 的 手 术 和 实 验, 如 去 大 脑 僵 直 小 脑 损 毁 实 验 等, 也 可 用 于 凶 猛 动 物 的 诱 导 麻 醉 给 狗 吸 入 乙 醚 麻 醉 时 可 用 特 制 的 铁 丝 狗 嘴 套 套 住 狗 嘴, 由 助 手 将 狗 固 定 于 手 术 台, 术 者 用 2 ~3 层 纱 布 覆 盖 狗 嘴 套, 然 后 将 乙 醚 不 断 滴 于 纱 布 上, 使 狗 吸 入 乙 醚 狗 吸 入 乙 醚 后, 往 往 由 于 中 枢 抑 制 解 除 而 首 先 有 一 个 兴 奋 期, 动 物 挣 扎, 呼 吸 快 而 不 规 则, 甚 至 出 现 呼 吸 暂 停, 如 呼 吸 暂 停 应 将 纱 布 取 下, 等 动 物 呼 吸 恢 复 后 再 继 续 吸 入 乙 醚, 继 后 动 物 逐 渐 进 入 外 科 麻 醉 期, 呼 吸 逐 渐 平 稳 均 匀, 角 膜 反 射 消 失 或 极 其 迟 钝, 对 疼 痛 反 应 消 失, 即 可 进 行 手 术 麻 醉 猫 大 白 鼠 小 白 鼠 时 可 将 动 物 置 于 适 当 大 小 的 玻 璃 罩 中, 再 将 浸 有 乙 醚 的 棉 球 或 纱 布 放 入 罩 内, 并 密 切 注 意 动 物 反 应, 特 别 是 呼 吸 变 化, 直 到 动 物 麻 醉 给 家 兔 麻 醉 时, 可 将 浸 有 乙 醚 的 棉 球 置 于 一 个 大 烧 杯 中, 术 者 左 手 持 烧 杯, 右 手 抓 兔 双 耳, 使 其 口 鼻 伸 入 烧 杯 内 吸 入 乙 醚, 直 到 动 物 麻 醉 乙 醚 麻 醉 注 意 事 项 :1 乙 醚 吸 入 麻 醉 中 常 刺 激 呼 吸 道 黏 膜 而 产 生 大 量 分 泌 物, 易 造 成 呼 吸 道 阻 塞, 可 在 麻 醉 前 半 小 时 皮 下 注 射 阿 托 品 (0 畅 1 ml /kg), 以 减 少 呼 吸 道 黏 膜 分 泌 物 2 乙 醚 吸 入 过 程 中 动 物 挣 扎, 呼 吸 变 化 较 大, 乙 醚 吸 入 量 及 速 度 不 易 掌 握, 应 密 切 注 意 动 物 反 应, 以 防 吸 入 过 多 麻 醉 过 度 而 使 动 物 死 亡 3 畅 5 畅 2 畅 2 注 射 麻 醉 常 用 乌 拉 坦 戊 巴 比 妥 钠 及 氯 醛 糖 等 主 要 给 药 途 径 有 以 下 几 种 :1 静 脉 注 射,2 腹 腔 注 射, 3 肌 内 注 射,4 皮 下 注 射, 即 皮 下 淋 巴 囊 注 射 ( 见 3 畅 4 畅 2) 3 畅 5 畅 3 局 部 麻 醉 局 部 麻 醉 药 物 可 逆 地 阻 断 神 经 纤 维 传 导 冲 动 产 生 局 部 麻 醉 作 用 进 行 局 部 麻 醉 时, 药 物 接 近 神 经 纤 维 的 方 式 主 要 有 两 种 :1 用 作 表 面 麻 醉 时, 药 物 通 过 点 眼 喷 雾 或 涂 布 作 用 于 黏 膜 表 面, 转 而 透 过 黏 膜 接 触 黏 膜 下 神 经 末 梢 而 发 挥 作 用 该 药 物 除 具 有 麻 醉 作 用 外, 还 有 较 强 的 穿 透 力, 如 可 卡 因 利 多 卡 因 2 作 浸 润 麻 醉 时, 用 注 射 的 方 法 将 药 物 送 到 神 经 纤 维 旁 此 类 药 物 只 需 有 局 部 麻 醉 作 用, 不 一 定 要 求 有 强 大 的 穿 透 力, 如 普 鲁 卡 因 ( 对 氨 基 苯 甲 酸 酯 ) 可 卡 因 利 多 卡 因 ( 其 效 力 是 普 鲁 卡 因 的 2 倍 ) 用 作 局 部 麻 醉 的 药 物 的 质 量 浓 度 一 般 为 1% ~2%, 通 常 用 0 畅 5% ~1% 另 外, 河 豚 毒 是 一 种 剧 毒 物 质, 一 般 仅 用 1 ng 即 可 阻 断 Na + 通 道, 起 到 阻 滞 神 经 传 导 作 用
36 第 一 部 分 总 论 箭 毒 三 碘 季 铵 酚 妥 开 利 静 松 灵 846 等 能 阻 断 神 经 肌 肉 接 头 的 传 递 作 用, 在 手 术 中 用 作 肌 松 剂 3 畅 5 畅 4 麻 醉 效 果 的 观 察 动 物 的 麻 醉 效 果 直 接 影 响 实 验 的 进 行 和 实 验 结 果 如 果 麻 醉 过 浅, 动 物 会 因 疼 痛 而 挣 扎, 甚 至 出 现 兴 奋 状 态, 呼 吸 心 跳 不 规 则, 影 响 观 察 麻 醉 过 深, 可 使 机 体 的 反 应 性 降 低, 甚 至 消 失, 更 为 严 重 的 是 抑 制 延 髓 的 心 血 管 活 动 中 枢 和 呼 吸 中 枢, 导 致 动 物 死 亡 因 此, 在 麻 醉 过 程 中 必 须 善 于 判 断 麻 醉 程 度, 观 察 麻 醉 效 果 判 断 麻 醉 程 度 的 指 标 有 以 下 4 种 : (1) 呼 吸 动 物 呼 吸 加 快 或 不 规 则, 说 明 麻 醉 过 浅, 若 呼 吸 由 不 规 则 转 变 为 规 则 且 平 稳, 说 明 已 达 到 麻 醉 深 度 ; 若 动 物 呼 吸 变 慢, 且 以 腹 式 呼 吸 为 主, 说 明 麻 醉 过 深, 动 物 有 生 命 危 险 (2) 反 射 活 动 主 要 观 察 角 膜 反 射 或 睫 毛 反 射, 若 动 物 的 角 膜 反 射 灵 敏, 说 明 麻 醉 过 浅 ; 若 角 膜 反 射 迟 钝, 麻 醉 程 度 适 宜 ; 角 膜 反 射 消 失, 伴 瞳 孔 散 大, 则 麻 醉 过 深 (3) 肌 张 力 动 物 肌 张 力 亢 进, 一 般 说 明 麻 醉 过 浅 ; 全 身 肌 肉 松 弛, 麻 醉 合 适 (4) 皮 肤 夹 捏 反 应 麻 醉 过 程 中 可 随 时 用 止 血 钳 或 有 齿 镊 夹 捏 动 物 皮 肤, 若 反 应 灵 敏, 则 麻 醉 过 浅 ; 若 反 应 消 失, 则 麻 醉 程 度 合 适 总 之, 观 察 麻 醉 效 果 要 仔 细, 上 述 4 项 指 标 要 综 合 考 虑, 最 佳 麻 醉 深 度 的 标 志 是 : 动 物 卧 倒, 四 肢 及 腹 部 肌 肉 松 弛, 呼 吸 深 慢 而 平 稳, 皮 肤 夹 捏 反 射 消 失, 角 膜 反 射 明 显 迟 钝 或 消 失, 瞳 孔 缩 小 在 静 脉 注 射 麻 醉 时 还 要 边 注 入 药 物 边 观 察, 以 获 得 理 想 的 麻 醉 效 果 3 畅 5 畅 5 麻 醉 注 意 事 项 (1) 麻 醉 前 应 正 确 选 用 麻 醉 药 品 用 药 剂 量 及 给 药 途 径 (2) 静 脉 注 射 麻 醉 必 须 缓 慢, 同 时 观 察 肌 肉 紧 张 性 角 膜 反 射 和 对 皮 肤 夹 捏 的 反 应, 当 这 些 活 动 明 显 减 弱 或 消 失 时, 立 即 停 止 注 射 (3) 如 麻 醉 较 浅, 动 物 出 现 挣 扎 或 呼 吸 急 促 等, 需 补 充 麻 醉 药 以 维 持 适 当 的 麻 醉 一 次 补 充 药 量 不 宜 超 过 原 总 用 药 量 的 1 /5 (4) 万 一 麻 醉 过 量, 应 根 据 不 同 情 况, 积 极 采 取 措 施, 如 施 行 人 工 呼 吸, 给 予 苏 醒 剂, 或 注 射 强 心 剂 咖 啡 因 肾 上 腺 素 可 拉 明 等, 也 可 静 脉 注 射 50% 温 热 的 葡 萄 糖 溶 液 (5) 麻 醉 时 需 注 意 保 温, 麻 醉 期 间, 动 物 的 体 温 调 节 机 能 往 往 受 到 抑 制, 出 现 体 温 下 降, 可 影 响 实 验 的 准 确 性, 需 要 采 取 保 温 措 施 ( 王 丙 云 陈 胜 锋 ) 3 畅 6 实 验 动 物 的 采 ( 取 ) 血 与 处 死 方 法 3 畅 6 畅 1 实 验 动 物 的 采 ( 取 ) 血 方 法 血 液 常 被 比 喻 为 观 察 内 环 境 的 窗 口, 在 需 要 检 测 内 环 境 变 化 的 生 理 实 验 中 常 需 要 采 取 血 液 样 本 因 实 验 动 物 解 剖 结 构 和 体 型 大 小 差 异, 及 采 ( 取 ) 血 量 的 不 同, 取 血 方 法 不 尽 相 同 3 畅 6 畅 1 畅 1 兔 (1) 耳 中 央 动 脉 取 血 在 兔 耳 的 中 央 有 一 条 较 粗 颜 色 较 鲜 红 的 中 央 动 脉 采 血 时, 用 左 手
第 3 章 动 物 生 理 学 实 验 的 基 本 操 作 技 术 37 固 定 兔 耳, 右 手 持 注 射 器, 在 中 央 动 脉 末 端, 沿 动 脉 朝 近 心 端 刺 入 动 脉 由 于 兔 耳 中 央 动 脉 在 受 刺 激 时 有 痉 挛 反 应, 因 此 刺 入 血 管 后 稍 等 片 刻 或 在 痉 挛 前 迅 速 抽 血 一 般 用 6 号 针 头 采 血 此 法 一 次 可 取 血 10 ~15 ml 取 血 完 毕 后 用 棉 球 压 迫 局 部, 予 以 止 血 兔 耳 中 央 动 脉 取 血 时 应 注 意 : 由 于 兔 在 其 进 化 过 程 中, 形 成 胆 小 易 惊 的 习 性, 其 外 周 血 液 循 环 对 外 界 环 境 刺 激 极 为 敏 感, 耳 中 央 动 脉 易 发 生 痉 挛 性 收 缩, 因 此, 抽 血 前 必 须 先 让 兔 耳 充 分 充 血, 当 动 脉 扩 张, 未 发 生 痉 挛 性 收 缩 前 立 即 抽 血 若 注 射 针 刺 入 后 尚 未 抽 血, 血 管 已 发 生 痉 挛 性 收 缩, 应 将 针 头 放 在 血 管 内 固 定 不 动, 待 痉 挛 消 失 血 管 舒 张 后, 再 抽 若 在 血 管 痉 挛 时 强 行 抽 吸, 会 导 致 管 壁 变 形, 针 头 很 易 刺 破 管 壁, 形 成 血 肿 (2) 股 动 脉 取 血 将 家 兔 仰 卧 位 固 定 术 者 左 手 以 动 脉 搏 动 为 标 志, 确 定 穿 刺 部 位, 右 手 将 注 射 器 针 头 刺 入 股 动 脉, 如 流 出 血 为 鲜 红 色, 表 示 穿 刺 成 功, 应 迅 速 抽 血, 拔 出 针 头, 压 迫 止 血 (3) 耳 缘 静 脉 取 血 耳 缘 静 脉 可 供 采 取 少 量 静 脉 血 样, 方 法 与 前 述 耳 缘 静 脉 注 射 给 药 相 似 (4) 心 脏 穿 刺 取 血 此 方 法 适 用 于 需 要 采 取 较 大 量 的 血 样 将 兔 仰 卧 固 定, 剪 去 心 前 区 被 毛, 碘 酒 消 毒 皮 肤, 用 装 有 7 号 针 头 的 注 射 器, 在 胸 骨 左 缘 第 3 肋 间 或 在 心 跳 搏 动 最 显 著 部 位 向 心 脏 穿 刺, 刺 入 心 脏 后 血 液 一 般 可 自 动 流 入 注 射 器, 或 者 边 刺 入 边 抽 吸, 直 至 抽 出 血 液 采 血 中 回 血 不 好 或 动 物 躁 动 时, 应 拔 出 注 射 器, 重 新 确 认 心 脏 搏 动 后 再 次 穿 刺 采 血 若 针 头 已 刺 入 心 腔 但 又 抽 不 出 血 时, 应 将 针 头 稍 微 轴 向 转 动 一 下 或 稍 后 退 一 点, 但 切 不 可 使 针 头 在 心 脏 内 横 向 摆 动 若 需 要 抗 凝 血 样 时, 应 事 先 在 注 射 器 或 毛 细 管 内 加 入 适 量 抗 凝 剂, 如 柠 檬 酸 钠 或 肝 素, 将 它 们 均 匀 浸 润 注 射 器 或 毛 细 管 内 壁, 然 后 烘 干 备 用 3 畅 6 畅 1 畅 2 大 白 鼠 和 小 白 鼠 (1) 断 尾 取 血 当 所 需 血 量 很 少 时 可 采 用 本 法 固 定 动 物, 露 出 尾 部, 用 二 甲 苯 擦 拭 尾 部 皮 肤 或 将 鼠 尾 浸 于 45 ~50 的 热 水 中 数 分 钟, 使 其 血 管 充 分 扩 张, 然 后 擦 干, 剪 去 尾 尖 数 毫 米, 让 血 自 行 流 出, 也 可 从 尾 根 向 尾 尖 轻 轻 挤 压, 促 进 血 液 流 出 如 需 多 次 采 取 鼠 尾 尖 部 血 液, 每 次 采 血 时, 将 鼠 尾 剪 去 很 小 一 段, 取 血 后, 先 用 棉 球 压 迫 止 血 并 立 即 用 6% 液 体 火 棉 胶 涂 于 尾 巴 伤 口 处, 使 伤 口 外 结 一 层 火 棉 胶 薄 膜, 保 护 伤 口 也 可 采 用 切 割 尾 静 脉 的 方 法 采 血, 三 根 尾 静 脉 可 交 替 切 割, 并 自 尾 尖 向 尾 根 方 向 切 割, 每 次 可 取 0 畅 2 ~0 畅 3 ml 血, 切 割 后 用 棉 球 压 迫 止 血 ( 图 3 畅 6 1) (2) 眼 眶 后 静 脉 丛 取 血 当 需 要 中 等 量 血 液, 而 又 避 免 动 物 死 亡 时 可 采 用 此 法 首 先 用 乙 醚 等 将 动 物 浅 麻 醉, 采 用 侧 眼 向 上 固 定 体 位, 用 左 手 的 拇 指 及 示 指 轻 轻 压 迫 动 物 的 颈 部 两 侧, 使 头 部 静 脉 血 液 回 流 困 难, 眼 球 充 分 外 突, 眶 后 静 脉 丛 充 血 右 手 持 带 7 号 针 头 的 1 ml 注 射 器 或 长 颈 (3 ~4 cm) 硬 质 玻 璃 滴 管 ( 毛 细 管 内 径 0 畅 5 ~1 mm), 将 采 血 器 与 鼠 面 成 45 角, 在 泪 腺 区 域 内, 用 采 血 器 由 眼 内 角 在 眼 睑 和 眼 球 之 间 向 喉 头 方 向 刺 入 血 液 即 自 行 流 出 体 重 20 ~30 g 小 鼠 每 次 可 采 血 0 畅 2 ~0 畅 3 ml, 体 重 200 ~300 g 大 鼠 每 次 可 采 血 0 畅 4 ~0 畅 6 ml( 图 3 畅 6 2) 图 3 畅 6 1 切 割 尾 静 脉 取 血 法 图 3 畅 6 2 眼 眶 后 静 脉 丛 取 血
38 第 一 部 分 总 论 (3) 心 脏 取 血 适 用 于 取 血 量 较 大 时, 方 法 与 家 兔 心 脏 取 血 相 同, 但 所 用 针 头 可 稍 短 3 畅 6 畅 1 畅 3 狗 一 般 采 用 前 肢 皮 下 头 静 脉 或 后 肢 小 隐 静 脉 取 血, 操 作 与 静 脉 注 射 相 似 3 畅 6 畅 1 畅 4 家 禽 常 用 翼 根 静 脉 或 蹼 间 静 脉 取 血, 也 可 采 用 切 断 颈 总 动 脉 和 颈 静 脉 一 次 性 取 血 ( 王 丙 云 陈 胜 锋 ) 3 畅 6 畅 1 畅 5 鱼 类 在 采 血 前, 除 特 殊 情 况 ( 部 分 药 理 学 研 究 ) 外, 鱼 类 一 般 都 需 要 进 行 麻 醉, 待 完 全 麻 醉 后 再 实 施 采 血 技 术 若 研 究 需 要, 不 能 对 鱼 类 进 行 麻 醉, 应 该 采 用 有 效 的 方 法 禁 止 鱼 类 在 采 血 时 的 活 动, 以 免 影 响 采 血 效 果 一 般, 较 大 型 鱼 类 ( 体 重 大 于 150 g) 的 采 血 推 荐 使 用 22 G 的 针 头, 较 小 型 的 鱼 类 应 该 使 用 更 细 小 的 针 头 ( 大 于 22 G) (1) 断 尾 采 血 将 鱼 麻 醉 后, 将 鱼 体 表 水 分 和 黏 液 擦 干, 用 干 毛 巾 包 裹 住 鱼 身, 将 鱼 头 朝 上, 露 出 尾 柄 ; 用 手 拉 住 尾 鳍, 将 臀 鳍 后 缘 垂 直 于 侧 线 方 向 的 一 圈 鳞 片 剔 出, 然 后 用 粗 剪 刀 从 鳞 片 剔 出 处 将 尾 柄 剪 断, 这 时 从 体 轴 中 心 处 即 可 流 出 血 液 ( 此 时 流 血 量 最 多 的 是 脊 柱 下 方 尾 动 脉 和 静 脉 ), 用 采 血 管 或 者 其 他 采 血 器 皿 盛 接 采 血 时 要 注 意 防 止 体 表 残 留 水 分 黏 液 或 者 鳞 片 等 混 入 所 采 集 的 血 液 中 以 免 污 染 血 液 样 品 ; 在 剪 断 尾 鳍 后, 血 液 涌 出 较 迅 速, 要 及 时 收 集, 以 免 拖 延 时 间 造 成 采 血 量 不 足 ; 若 流 血 不 畅, 则 可 轻 轻 按 摩 躯 体 加 速 血 液 流 动, 仍 可 取 到 数 滴 血 或 者, 也 可 以 利 用 毛 细 采 血 管 直 接 从 出 血 点 采 集 血 液 ( 图 3 畅 6 3) (2) 尾 部 血 管 采 血 首 先 按 照 鱼 的 大 小 选 取 针 头, 根 据 采 样 需 要 选 择 注 射 器 预 先 加 入 抗 凝 剂 或 不 加 抗 凝 剂 将 鱼 麻 醉 后, 把 鱼 侧 放 在 湿 毛 巾 上 ; 把 注 射 针 头 从 臀 鳍 后 尾 柄 腹 中 部 垂 直 或 者 倾 斜 插 入 鱼 体 ( 图 3 畅 6 4), 待 针 头 头 部 进 入 鱼 体 后 随 即 后 拉 注 射 器 活 塞, 造 成 注 射 器 腔 体 负 压 ; 继 续 将 针 头 深 入 抵 达 脊 椎 血 管, 然 后 稍 微 后 退 或 者 前 后 移 动 针 头, 以 便 使 针 头 进 入 到 脊 柱 下 方 的 动 脉 或 静 脉, 此 时 由 于 负 压 存 在, 当 针 头 正 确 进 入 血 管 后 即 有 血 液 流 入 注 射 管 内, 就 表 明 已 刺 破 尾 部 血 管 而 得 到 血 样 ; 当 血 液 达 到 合 适 量 时 即 可 拔 出 针 头 图 3 畅 6 3 断 尾 采 集 鲫 (Carassius auratus) 血 液 图 3 畅 6 4 鱼 类 臀 鳍 下 尾 部 血 管 采 集 血 液
第 3 章 动 物 生 理 学 实 验 的 基 本 操 作 技 术 39 还 有 另 外 一 种 尾 部 血 管 采 集 方 法, 就 是 将 鱼 麻 醉 后 侧 卧, 剔 除 臀 鳍 上 方 的 侧 线 下 1 片 鳞 片, 紧 贴 侧 线 下 将 针 头 插 入 裸 露 的 皮 肤 内, 将 针 刺 入 抵 达 脊 椎 血 管 棘 之 间, 稍 稍 后 退 或 左 右 移 动 针 头, 使 其 进 入 脊 椎 下 的 动 脉 或 静 脉 中 采 集 血 液 ( 图 3 畅 6 5) 待 采 集 到 合 适 血 量 后, 拔 出 针 头, 用 手 按 压 针 孔 处 30 s 左 右 进 行 止 血 图 3 畅 6 5 鱼 类 侧 线 下 尾 部 血 管 采 集 血 液 (3) 心 脏 采 血 1 小 型 鱼 类 ( 或 者 鱼 苗 ) 的 心 脏 采 血 法 : 首 先 准 备 一 根 长 约 20 cm 的 玻 璃 毛 细 采 血 管 ( 或 者 使 用 合 适 的 注 射 器 针 头 ), 用 肝 素 钠 等 抗 凝 剂 浸 润 内 壁 ; 将 鱼 类 麻 醉 或 直 接 用 干 毛 巾 包 裹 后, 使 其 腹 面 朝 上, 固 定 头 部, 从 靠 近 鱼 类 峡 部 ( 腹 部 鳃 裂 连 接 处 的 V 形 结 构 ) 的 两 胸 鳍 正 中 区 域 以 60 倾 角 插 入 采 血 管 尖 头, 迅 速 刺 穿 皮 肤 和 肌 肉 组 织 进 入 围 心 腔, 再 刺 入 心 脏 ( 或 者 动 脉 球 ), 此 时 即 有 血 液 进 入 毛 细 管, 保 持 姿 势 不 变, 直 到 血 液 充 盈 满 毛 细 采 血 管 ( 图 3 畅 6 6 ) ; 然 后 抽 出 采 血 管, 上 下 颠 倒 数 次 以 使 血 液 和 抗 凝 剂 混 匀 2 较 大 型 鱼 类 ( 一 般 体 重 大 于 200 g) 的 心 脏 采 血 法 : 基 本 操 作 方 法 同 上 述, 直 接 利 用 注 射 器 代 替 毛 细 管 采 血 ( 图 3 畅 6 7 ) 注 射 器 可 以 使 用 抗 凝 剂 处 理, 也 可 以 不 用 处 理, 主 要 根 据 所 采 需 要 血 样 的 种 类 而 定 (4) 背 主 动 脉 采 血 将 麻 醉 鱼 类 背 位 固 定 在 V 形 手 术 台 上, 扩 张 鱼 口 裂 至 最 大 位 置, 从 口 腔 内 背 面 第 3 和 第 4 鳃 弓 正 中 间 以 30 ~40 倾 角 刺 入 针 头 ; 待 针 头 头 部 进 入 后 随 即 后 拉 注 射 器 活 塞, 造 成 注 射 器 腔 体 负 压 ; 深 入 针 头 刺 入 背 主 动 脉, 当 有 血 液 持 续 流 入 注 射 筒 内 时 即 说 明 到 达 正 确 位 置, 此 时 保 持 姿 势 直 到 采 血 完 毕 ( 图 3 畅 6 7) (5) 腹 主 动 脉 采 血 将 麻 醉 好 的 鱼 类 腹 位 固 定, 扩 图 3 畅 6 6 用 毛 细 采 血 管 从 鱼 类 心 脏 采 血 张 口 裂 至 最 大 位 置, 将 针 头 沿 口 腔 内 腹 面 中 线 中 间 ( 第 2 和 第 3 鳃 弓 连 接 处 ) 以 30 左 右 倾 角 刺 入 组 织, 深 入 针 头 进 入 腹 主 动 脉 ; 观 察 到 具 有 血 液 回 流 时, 即 说 明 针 头 已 经 进 入 腹 主 动 脉, 此 时 保 持 姿 势 直 到 采 血 完 毕 ( 图 3 畅 6 8)
40 第 一 部 分 总 论 图 3 畅 6 7 鱼 类 几 种 采 血 法 图 3 畅 6 8 鱼 类 腹 主 动 脉 采 血 ( 箭 头 指 代 注 射 器 ) ( 李 大 鹏 ) 3 畅 6 畅 2 实 验 动 物 的 处 死 方 法 实 验 动 物 的 处 死 方 法 很 多, 应 根 据 动 物 实 验 目 的 实 验 动 物 的 种 类 以 及 需 要 采 集 标 本 的 部 位 等 因 素, 选 择 不 同 的 处 死 方 法 无 论 采 用 哪 一 种 方 法, 都 应 遵 循 动 物 安 乐 死 的 基 本 原 则, 即 在 不 影 响 动 物 实 验 结 果 的 前 提 下, 使 实 验 动 物 短 时 间 无 痛 苦 地 死 亡 处 死 实 验 动 物 时 应 注 意 :1 保 证 操 作 人 员 安 全 2 不 能 影 响 实 验 检 查 的 结 果 且 处 死 方 法 易 于 操 作, 不 在 同 种 动 物 群 中 杀 死 动 物 3 确 认 动 物 是 否 已 被 处 死 不 能 只 看 呼 吸 是 否 停 止, 还 要 看 神 经 反 射 肌 肉 松 弛 等 状 况 4 注 意 环 保, 避 免 污 染 环 境, 妥 善 处 理 好 尸 体 3 畅 6 畅 2 畅 1 打 击 法 适 用 于 小 白 鼠 大 白 鼠 豚 鼠 家 兔 等 动 物 用 手 提 起 鼠 尾, 用 力 摔 打, 使 头 碰 地 可 立 即 死 亡 豚 鼠 和 家 兔 可 用 手 或 棰 打 击 头 部, 使 大 脑 受 破 坏 致 使 动 物 死 亡 3 畅 6 畅 2 畅 2 颈 椎 脱 臼 法 所 谓 颈 椎 脱 臼 法, 就 是 使 动 物 的 颈 椎 脱 臼, 使 动 物 的 脊 髓 断 裂 导 致 死 亡, 常 用 于 大 小 鼠 的 处 死 大 小 鼠 脱 臼 时, 先 将 动 物 放 在 笼 盖 上, 待 动 物 安 静 后, 用 拇 指 和 示 指 用 力 往 下 按 住 鼠 头, 或 用 镊 子 快 速 压 住 动 物 的 颈 部, 另 一 只 手 抓 住 鼠 尾, 用 力 稍 向 后 上 方 一 拉, 使 之 颈 椎 脱 臼, 造 成 脊 髓 与 脑 髓 断 离, 动 物 立 即 死 亡 3 畅 6 畅 2 畅 3 断 头 毁 脑 法 此 法 常 用 于 蛙 类 可 用 剪 刀 剪 去 头 部, 或 用 金 属 探 针 经 枕 骨 大 孔 破 坏 脑 和 脊 髓 而 致 死 大 鼠 和 小 鼠 也 可 用 断 头 法 处 死, 剪 刀 要 求 较 大 而 锋 利 操 作 时, 用 左 手 拇 指 和 示 指 夹 住 小 鼠 的 肩 胛 部, 固 定, 将 直 剪 刀 垂 直 放 在 动 物 颈 部, 一 次 剪 断 3 畅 6 畅 2 畅 4 空 气 栓 塞 法 处 死 兔 猫 狗 常 用 此 法 向 实 验 动 物 静 脉 内 急 速 注 入 一 定 量 的 空 气, 形 成 肺 动 脉 或 冠 状 动
第 3 章 动 物 生 理 学 实 验 的 基 本 操 作 技 术 41 脉 空 气 栓 塞, 引 起 实 验 动 物 严 重 血 液 循 环 障 碍 而 死 亡 一 般 兔 猫 需 注 入 的 空 气 量 为 10 ~ 20 ml, 狗 为 70 ~150 ml 3 畅 6 畅 2 畅 5 急 性 大 失 血 法 此 法 适 用 于 各 种 实 验 动 物 具 体 做 法 是 将 实 验 动 物 的 股 动 脉 颈 动 脉 腹 主 动 脉 剪 断 或 剪 破 刺 穿 实 验 动 物 的 心 脏 放 血, 导 致 急 性 大 出 血 休 克 死 亡 3 畅 6 畅 2 畅 6 开 放 性 气 胸 法 在 动 物 的 胸 壁 剪 一 开 口, 造 成 气 胸, 肺 因 大 气 压 缩 发 生 萎 陷, 纵 膈 摆 动, 动 物 发 生 急 性 呼 吸 衰 竭 而 死 3 畅 6 畅 2 畅 7 二 氧 化 碳 吸 入 法 此 法 适 用 于 多 种 实 验 动 物 一 般 使 用 液 态 二 氧 化 碳 高 压 瓶 或 固 体 二 氧 化 碳 操 作 时, 准 备 5 倍 笼 盒 大 小 的 透 明 塑 料 袋 或 专 用 容 器, 把 装 动 物 的 笼 盒 放 入 透 明 塑 料 袋 内, 将 塑 料 袋 包 紧 封 好, 充 入 二 氧 化 碳 气 体, 动 物 很 快 就 会 被 麻 醉 而 倒 下, 继 续 充 气 15 s 左 右, 放 置 一 段 时 间 后 动 物 即 死 亡 3 畅 6 畅 2 畅 8 化 学 药 物 致 死 此 法 适 用 于 各 种 动 物, 静 脉 注 入 一 定 量 的 KCl 过 量 麻 醉 药 等 可 使 动 物 很 快 死 亡 KCl 使 心 肌 失 去 收 缩 力, 心 跳 停 止 而 死 亡 兔 注 入 10% KCl 5 ~10 ml 即 可 死 亡 ( 王 丙 云 陈 胜 锋 ) 3 畅 6 畅 3 动 物 的 福 利 ( 见 总 论 9 关 于 动 物 的 福 利 ) 3 畅 7 组 织 分 离 和 插 管 术 3 畅 7 畅 1 除 去 被 毛 在 动 物 手 术 前, 应 将 手 术 部 位 的 被 毛 去 除, 以 利 于 手 术 进 行 根 据 不 同 实 验 需 要 可 采 用 不 同 的 去 除 被 毛 方 法 3 畅 7 畅 1 畅 1 剪 毛 法 这 是 生 理 学 教 学 实 验 中 常 用 的 方 法, 适 合 于 急 性 实 验 用 弯 头 剪 或 粗 剪 刀, 剪 毛 范 围 需 大 于 切 口 的 长 度 剪 毛 时 需 用 一 手 将 皮 肤 绷 平, 另 一 手 持 剪 刀 贴 于 皮 肤, 逆 着 毛 的 朝 向 剪 毛 剪 下 的 毛 应 立 即 浸 泡 入 水 中, 以 免 到 处 飞 扬 3 畅 7 畅 1 畅 2 拔 毛 法 大 小 鼠 皮 下 注 射 或 家 兔 耳 缘 静 脉 注 射 取 血 时 常 用 此 法 操 作 时, 将 动 物 固 定 后, 用 拇 指 示 指 将 所 需 部 位 被 毛 拔 去, 涂 上 一 层 凡 士 林, 可 更 清 楚 地 显 示 出 血 管 3 畅 7 畅 1 畅 3 剃 毛 法 大 动 物 慢 性 手 术 时 采 用 先 用 刷 子 蘸 湿 肥 皂 水 将 需 去 毛 的 被 毛 充 分 浸 润 透, 然 后 用 剃 毛 刀 顺 被 毛 进 行 剃 毛 若 采 用 电 动 剃 刀, 则 逆 被 毛 方 向 剃 毛 3 畅 7 畅 1 畅 4 脱 毛 法 采 用 化 学 脱 毛 剂 将 动 物 的 被 毛 脱 去 此 方 法 常 用 于 大 动 物 作 无 菌 手 术, 观 察 动 物 局 部 血 液
42 第 一 部 分 总 论 循 环 及 其 他 各 种 病 理 变 化 将 动 物 需 脱 毛 部 位 的 被 毛 先 用 剪 刀 尽 量 剪 短, 用 棉 球 蘸 脱 毛 剂 在 脱 毛 部 位 涂 成 薄 层, 经 2 ~3 min 后, 用 温 水 洗 去 脱 毛 部 位 脱 下 的 毛, 再 用 干 纱 布 将 水 擦 干, 涂 上 一 层 油 脂 ( 脱 毛 剂 种 类 及 使 用 见 附 录 ) 3 畅 7 畅 2 切 口 和 止 血 3 畅 7 畅 2 畅 1 切 口 根 据 实 验 目 的 要 求 确 定 手 术 切 口 的 部 位 和 大 小, 如 肠 切 除 取 腹 正 中 切 口, 肾 切 除 取 左 背 部 切 口, 必 要 时 做 出 标 志 进 行 切 口 时, 用 一 手 拇 指 和 示 指 向 两 侧 绷 紧 皮 肤 使 其 固 定 另 一 手 持 刀, 使 刀 刃 与 欲 切 开 的 组 织 垂 直, 以 适 当 的 力 度 一 次 切 开 皮 肤 和 皮 下 组 织 为 佳 组 织 要 逐 层 切 开, 并 以 按 皮 肤 纹 理 或 各 组 织 的 纤 维 方 向 切 开 为 佳 组 织 的 切 开 处 应 选 择 无 重 要 血 管 及 神 经 横 贯 的 地 方, 以 免 将 其 损 伤 用 几 把 皮 钳 夹 住 皮 肤 切 口 边 缘 暴 露 手 术 野, 以 利 于 进 一 步 分 离 结 扎 插 管 等 操 作 3 畅 7 畅 2 畅 2 止 血 手 术 过 程 中 所 造 成 的 出 血 必 须 及 时 止 住 完 善 的 止 血 不 仅 可 以 防 止 继 续 失 血, 还 可 以 使 手 术 野 清 楚 地 显 露, 有 利 于 手 术 的 顺 利 进 行 止 血 的 方 法 有 : (1) 钳 夹 止 血 法 此 法 用 于 出 血 点 明 确 的 血 管 出 血, 使 用 时 只 需 将 止 血 钳 钳 住 出 血 点 即 可, 小 血 管 出 血 钳 住 一 会 儿 放 松 后 可 不 再 出 血, 大 的 血 管 出 血, 应 钳 住 后 再 用 结 扎 法 止 血 (2) 压 迫 止 血 法 此 法 用 于 小 血 管 的 大 面 积 渗 血 使 用 时 将 灭 菌 纱 布 或 棉 球 用 温 热 生 理 盐 水 打 湿 拧 干 后 按 压 在 出 血 部 位 片 刻 或 用 明 胶 海 绵 覆 盖 即 可 干 纱 布 只 用 来 吸 血 或 压 迫 止 血, 不 能 用 来 揩 擦 组 织, 以 免 损 伤 组 织 和 刚 形 成 的 凝 血 块 脱 落 (3) 烧 烙 止 血 法 用 专 用 电 刀 直 接 烧 灼 出 血 点 即 可 此 法 常 用 于 渗 血 和 小 血 管 出 血 此 法 止 血 快, 效 果 好, 但 对 组 织 有 一 定 损 害 (4) 结 扎 止 血 法 此 法 主 要 用 于 出 血 点 明 确 的 大 血 管 出 血, 是 一 种 较 为 可 靠 的 止 血 方 法 使 用 时 先 用 止 血 钳 将 出 血 点 钳 住, 确 认 出 血 点 后 用 丝 线 将 其 扎 住 肌 肉 的 血 管 丰 富, 肌 肉 组 织 出 血 时 要 与 肌 肉 一 同 结 扎 为 了 避 免 肌 肉 组 织 出 血, 在 分 离 肌 肉 时, 若 切 口 与 肌 纤 维 的 方 向 一 致, 应 钝 性 分 离 ; 若 方 向 不 一 致, 则 应 采 取 两 端 结 扎, 从 中 间 切 断 的 方 法 3 畅 7 畅 3 肌 肉 神 经 血 管 的 分 离 3 畅 7 畅 3 畅 1 一 般 原 则 神 经 肌 肉 和 血 管 都 是 比 较 娇 嫩 的 组 织, 在 分 离 过 程 中 要 仔 细 耐 心 轻 柔 分 离 时 应 掌 握 先 神 经, 后 血 管 ; 先 细 后 粗 的 原 则 分 离 的 方 向 一 般 要 求 与 神 经 血 管 的 走 向 平 行, 才 能 避 免 损 伤 组 织 在 分 离 较 大 神 经 血 管 时, 应 先 用 止 血 钳 ( 或 眼 科 镊 ) 将 神 经 或 血 管 周 围 的 结 缔 组 织 稍 加 分 离, 然 后 用 大 小 适 宜 的 止 血 钳 插 入 已 被 分 开 的 结 缔 组 织 破 口, 沿 着 神 经 或 血 管 走 向 逐 渐 开 大, 使 神 经 从 周 围 的 结 缔 组 织 中 游 离 出 来, 必 要 时 也 可 用 手 术 剪 将 附 着 在 神 经 或 血 管 上 的 结 缔 组 织 剪 去 分 离 细 小 的 神 经 和 血 管 时, 可 用 玻 璃 分 针 或 眼 科 镊 将 神 经 或 血 管 从 组 织 中 仔 细 分 离 出 来 需 特 别 注 意 保 持 局 部 的 自 然 解 剖 位 置, 不 要 把 结 构 关 系 搞 乱 切 不 可 用 带 齿 镊 分 离 和 用 止 血 钳 或 镊 子 夹 持 神 经 和 血 管, 以 免 受 损 分 离 完 毕 后, 在 神 经 或 血 管 的 下 方 穿 以 浸 透 生 理 盐 水 的 线, 以 备 刺 激 时 提 起 或 结 扎 之 用 然 后 盖 上 一 块 浸 以 生 理 盐 水
第 3 章 动 物 生 理 学 实 验 的 基 本 操 作 技 术 43 的 纱 布, 防 组 织 干 燥, 或 在 创 口 内 滴 加 适 量 温 热 (37 左 右 ) 石 蜡 油, 使 神 经 浸 泡 其 中 3 畅 7 畅 3 畅 2 兔 颈 部 神 经 血 管 和 气 管 的 暴 露 与 分 离 ( 见 MPG 3 1 兔 颈 部 气 管 插 管 神 经 和 血 管 的 分 离 ) 兔 的 颈 部 神 经 血 管 气 管 的 解 剖 位 置 关 系 清 晰 分 支 较 少 ; 更 为 突 出 的 是, 兔 的 减 ( 降 ) 压 神 经 单 独 为 一 支, 与 迷 走 神 经 交 感 神 经 颈 动 脉 伴 行 ( 图 3 畅 7 1), 是 进 行 心 血 管 活 动 及 内 脏 神 经 机 能 研 究 的 理 想 的 实 验 材 料 图 3 畅 7 1 颈 部 分 离 动 物 麻 醉 后 仰 卧 在 手 术 台 上, 颈 部 剪 毛 消 毒 后, 即 可 切 开 皮 肤 进 行 分 离 (1) 神 经 于 颈 总 动 脉 旁 有 一 束 神 经 与 其 伴 行 小 心 分 离 颈 总 动 脉 的 鞘 膜 后 仔 细 辨 认 该 神 经 束 中 的 3 条 神 经 : 其 中 最 粗 的 是 迷 走 神 经, 最 细 的 是 减 ( 降 ) 压 神 经, 交 感 神 经 粗 细 介 于 二 者 之 间 在 颈 部 中 央 段, 迷 走 神 经 位 于 最 外 侧, 减 ( 降 ) 压 神 经 靠 近 颈 总 动 脉, 交 感 神 经 位 于 二 者 之 间 减 ( 降 ) 压 神 经 细 如 毛 发, 常 与 交 感 神 经 紧 贴 在 一 起 用 玻 璃 分 针 将 所 需 要 的 神 经 分 离 出 1 ~2 cm, 穿 线 备 用 (2) 颈 总 动 脉 位 于 气 管 两 侧, 分 离 覆 盖 在 气 管 上 的 胸 骨 舌 骨 肌 和 侧 面 斜 行 的 胸 锁 乳 突 肌, 深 处 可 看 到 颈 动 脉 鞘 仔 细 分 离 鞘 膜 即 可 看 到 搏 动 的 颈 总 动 脉, 在 其 下 穿 线 备 用 需 要 剪 断 血 管 分 支 时, 必 须 使 用 双 结 扎 (3) 气 管 在 喉 头 下 缘 沿 颈 前 正 中 线 做 一 适 当 长 度 的 切 口 ( 家 兔 约 为 4 cm), 用 止 血 钳 分 开 胸 骨 舌 骨 肌 和 胸 锁 乳 突 肌, 即 可 看 到 气 管, 用 玻 璃 分 针 或 手 术 刀 柄 将 覆 盖 在 气 管 表 面 的 筋 膜 除 去, 使 气 管 完 全 暴 露 用 弯 头 止 血 钳 或 镊 子 在 气 管 下 穿 一 根 线 备 用 有 关 其 他 动 物 组 织 的 分 离 技 术 将 在 有 关 的 实 验 中 加 以 介 绍 3 畅 7 畅 3 畅 3 兔 内 脏 大 神 经 分 离 术 兔 麻 醉 仰 卧 固 定 于 手 术 台 上, 剪 去 腹 部 毛, 做 腹 部 正 中 切 口, 长 约 为 10 cm, 用 温 热 生 理 盐 水 纱 布 衬 垫 腹 部 的 右 侧, 将 腹 腔 内 脏 拉 出 并 推 到 纱 布 上 暴 露 左 侧 肾, 并 将 左 肾 向 下 推 压, 在 其 右 上 方 可 见 一 浅 黄 色 黄 豆 粒 大 小 的 肾 上 腺 内 脏 大 神 经 自 膈 肌 从 左 向 右 下 斜 行 进 入 肾 上 腺, 并 分 支 入 腹 腔 神 经 节 仔 细 分 离 其 主 干, 连 同 少 量 周 围 组 织 一 起 用 保 护 电 极 钩 住 ( 或 穿 线 ), 备 用 然 后 将 腹 腔 脏 器 复 位, 用 止 血 钳 关 闭 腹 腔 备 用 ( 见 MPG 3 2 兔 内 脏 大 神 经 的 分 离 ) 3 畅 7 畅 4 插 管 术 ( 见 MPG 4 动 物 插 管 术 ) 动 物 插 管 是 为 了 保 证 动 物 的 正 常 生 理 状 态 而 常 用 的 一 种 处 理 方 法, 如 为 了 保 证 动 物 的 肺 通 气 通 畅, 需 做 气 管 插 管, 使 动 物 通 过 气 管 插 管 进 行 呼 吸 ; 为 了 测 定 血 压 或 放 血 ; 注 射 取 血 输 液 等
44 第 一 部 分 总 论 需 采 用 血 管 插 管 3 畅 7 畅 4 畅 1 插 管 的 一 般 原 则 动 作 要 轻, 创 面 要 小, 尽 量 避 免 对 周 围 组 织 的 损 伤, 减 少 对 动 物 的 伤 害 ; 所 有 插 管 要 与 所 在 组 织 扎 牢, 以 免 脱 落 ; 保 持 所 裸 露 组 织 的 湿 润 ; 经 常 观 察 插 管 部 位, 以 防 意 外 情 况 出 现 3 畅 7 畅 4 畅 2 哺 乳 动 物 中 的 插 管 ( 见 MPG 3 1 兔 颈 部 气 管 插 管 神 经 和 血 管 的 分 离 ) (1) 气 管 插 管 动 物 ( 以 家 兔 为 例 ) 暴 露 游 离 出 气 管, 并 在 气 管 下 穿 一 较 粗 的 线 用 剪 刀 或 专 用 电 热 丝 于 喉 头 下 2 ~3 cm 处 的 两 软 骨 环 之 间, 横 向 切 开 气 管 前 壁 约 1 /3 的 气 管 直 径, 再 于 切 口 上 缘 向 头 侧 剪 开 约 0 畅 5 cm 长 的 纵 向 切 口, 整 个 切 口 呈 状 若 气 管 内 有 分 泌 物 或 血 液 要 用 小 干 棉 球 拭 净 然 后 一 手 提 起 气 管 下 面 的 缚 线, 一 手 将 一 适 当 口 径 的 Y 气 管 插 管 斜 口 朝 下, 由 切 口 向 肺 插 入 气 管 腔 内, 再 转 动 插 管 使 其 斜 口 面 朝 上, 用 线 缚 结 于 套 管 的 分 叉 处, 加 以 固 定 ( 图 3 畅 7 2) (2) 颈 动 脉 插 管 ( 见 MPG 4 1 兔 颈 动 脉 插 管 ) 事 先 准 备 好 插 管 导 管, 取 适 当 长 度 的 塑 料 管 或 硅 胶 管, 插 入 端 剪 一 斜 面, 另 一 端 连 接 于 装 有 抗 凝 溶 液 ( 或 生 理 盐 水 ) 的 血 压 换 能 器 或 输 液 装 置 上, 让 导 管 内 充 满 溶 液 给 动 物 静 脉 注 射 肝 素 (500 U /kg), 使 全 身 肝 素 化 ( 也 可 不 进 行 此 操 作 ), 分 离 出 一 段 左 颈 总 动 脉 ( 左 颈 总 动 脉 分 为 颈 外 和 颈 内 动 脉, 其 颈 内 动 脉 基 部 有 一 膨 大 处, 为 颈 动 脉 窦 ), 在 其 下 穿 两 根 线 备 用 将 动 脉 远 心 端 的 线 结 扎, 用 动 脉 夹 夹 住 近 心 端, 两 端 间 的 距 离 尽 可 能 长 用 眼 科 剪 在 靠 远 心 端 结 扎 线 处 的 动 脉 上 呈 45 剪 一 小 口, 约 为 管 径 的 1 /3 或 1 /2, 向 心 脏 方 向 插 入 动 脉 导 管, 用 近 心 端 的 备 用 线, 在 插 入 口 处 将 导 管 与 血 管 结 扎 在 一 起, 其 松 紧 以 开 放 动 脉 夹 后 不 致 出 血 为 度 小 心 缓 慢 放 开 动 脉 夹, 如 有 出 血, 即 将 线 再 扎 紧 些, 但 仍 以 导 管 能 抽 动 为 宜 将 导 管 再 送 入 2 ~3 cm, 并 使 结 扎 更 紧 些, 以 使 导 管 不 致 脱 落 用 远 心 处 的 备 用 线 围 绕 导 管 打 结 固 定 操 作 完 毕 后 将 血 管 放 回 原 处 ( 图 3 畅 7 3) 图 3 畅 7 2 气 管 插 管 示 意 图 图 3 畅 7 3 颈 总 动 脉 插 管 示 意 图 (3) 股 动 脉 股 静 脉 插 管 动 物 麻 醉 后 仰 卧 于 手 术 台 上, 剪 去 股 三 角 区 的 毛 后, 用 手 触 摸 股 动 脉 搏 动, 确 定 股 动 脉 走 向 沿 血 管 方 向 切 开 3 ~5 cm 的 皮 肤, 分 离 皮 下 组 织 及 筋 膜, 可 看 到 股 动 脉 股 静 脉 和 神 经 三 者 的 位 置 从 外 向 内 依 次 为 股 神 经 股 动 脉 和 股 静 脉 用 蚊 式 钳 小 心 地 将
第 3 章 动 物 生 理 学 实 验 的 基 本 操 作 技 术 45 股 神 经 分 出, 然 后 再 将 股 动 脉 和 股 静 脉 分 出, 血 管 周 围 的 结 缔 组 织 要 分 离 干 净 在 远 心 端 结 扎 血 管, 并 用 动 脉 夹 夹 闭 近 心 端 血 管 在 动 脉 夹 后 穿 线, 以 备 固 定 插 管 用 用 眼 科 剪 朝 心 脏 方 向 将 血 管 剪 一 小 斜 口, 然 后 用 一 插 管 从 剪 口 处 向 心 方 向 插 入 血 管 内, 再 用 结 扎 线 固 定 插 管 导 管 的 准 备 同 颈 总 动 脉 插 管 导 管, 其 末 端 插 入 粗 细 相 当 的 钝 针 头, 针 头 上 接 三 通 活 塞 用 注 射 器 通 过 三 通 活 塞 向 插 管 导 管 内 注 入 肝 素, 关 闭 活 塞 ( 图 3 畅 7 4) 图 3 畅 7 4 股 三 角 区 和 股 部 神 经 血 管 ( 魏 华 ) 3 畅 7 畅 4 畅 3 鱼 类 的 插 管 技 术 (1) 食 管 插 管 根 据 鱼 体 大 小 选 择 合 适 的 食 管 插 管 ( 一 般 选 择 内 径 1 畅 5 mm 外 径 2 畅 0 mm 的 塑 料 软 管 ) 将 鱼 麻 醉 后 放 置 在 具 有 循 环 流 水 系 统 的 手 术 台 上 ; 然 后 用 一 根 细 钢 丝 ( 直 径 为 0 畅 5 ~0 畅 8 mm) 穿 入 塑 料 导 管, 用 来 增 加 导 管 的 刚 韧 性, 防 止 插 管 时 导 管 弯 曲 ; 随 后, 将 导 管 从 鱼 口 腔 中 轻 轻 插 入, 在 经 过 口 咽 腔 时 会 遇 到 阻 力, 此 时 稍 微 用 力 即 可 穿 过 进 入 食 管, 根 据 鱼 体 大 小 和 鱼 种 类 确 定 插 入 的 深 度, 到 达 合 适 位 置 后 抽 出 钢 丝 ( 图 3 畅 7 5 ) ; 然 后 用 13 G 左 右 的 针 头 刺 穿 口 腔 皮 肤, 让 导 管 穿 过 其 中, 用 手 术 缝 合 线 将 食 管 插 管 固 定 在 口 腔 内 部 和 嘴 部 皮 肤 上 图 3 畅 7 5 鱼 类 食 管 插 管 注 意 : 在 穿 入 钢 丝 时, 不 要 让 钢 丝 头 从 导 管 中 冒 出, 以 防 止 钢 丝 尖 头 刺 伤 食 管 另 外, 食 管 插 管 时 可 遇 到 阻 力, 一 般 来 讲, 第 一 个 阻 力 来 自 进 入 口 咽 腔 时 的 阻 力, 此 时 可 稍 用 力 即 可 穿 过 去 ; 第 二 个 阻 力 是 导 管 抵 达 胃 底 或 者 肠 道 的 第 一 个 弯 折 时 的 阻 力, 此 时 不 能 再 用 力 插 入 导 管, 应 该 稍 微
46 第 一 部 分 总 论 回 撤 导 管, 防 止 用 力 过 猛 刺 破 消 化 管 (2) 血 管 插 管 1 背 主 动 脉 插 管 : (a) 准 备 一 根 长 50 cm 的 PE50 导 管 ( 内 径 :0 畅 5 mm; 外 径 :0 畅 96 mm), 一 端 用 解 剖 刀 切 出 45 斜 口, 用 肝 素 钠 浸 润 导 管 内 壁 再 准 备 一 根 不 锈 钢 导 丝, 尖 端 磨 尖 ; 将 导 丝 穿 进 PE50 导 管, 尖 端 突 出 导 管 至 少 1 mm (b) 将 鱼 类 麻 醉 后 背 位 固 定 在 V 形 手 术 台 上, 在 左 右 鳃 盖 下 插 入 小 胶 管, 使 循 环 流 动 的 含 低 浓 度 麻 醉 剂 的 溶 液 灌 注 鳃 部, 保 证 麻 醉 鱼 类 的 正 常 呼 吸 ( c) 扩 张 鱼 口 裂 至 最 大 位 置, 用 14 G 针 头 在 鱼 鼻 孔 上 方 穿 一 洞 至 口 腔 内, 将 PE150 导 管 ( 内 径 1 畅 5 mm) 穿 过 孔 洞 固 定, 以 便 穿 过 动 脉 插 管, 用 手 术 缝 合 针 在 口 腔 内 壁 穿 线 备 用, 以 用 来 固 定 动 脉 插 管 ( d) 用 止 血 钳 夹 住 穿 有 金 属 导 丝 的 PE50 管, 利 用 导 丝 针 尖 从 口 腔 内 背 面 第 2 和 第 3 鳃 弓 正 中 间 以 30 ~45 倾 角 刺 入 背 主 动 脉 ( 图 3 畅 7 6) 导 管 进 入 动 脉 后, 抽 出 导 丝, 此 时 可 见 血 液 进 入 导 管 (e) 将 导 管 通 过 三 通 阀 分 别 连 接 一 支 充 满 肝 素 钠 的 注 射 器 和 另 一 支 空 注 射 器, 先 用 空 注 射 器 抽 血 至 血 液 充 满 导 管 ; 然 后 将 肝 素 钠 注 入 导 管, 使 导 管 内 血 液 回 流 到 动 脉, 并 让 肝 素 钠 充 满 导 管 (f) 用 手 术 缝 合 线 将 导 管 固 定 在 上 颌 内 壁, 并 通 过 上 颌 顶 部 的 PE150 管 将 动 脉 插 管 引 出 体 外 连 接 仪 器 进 行 相 关 实 验 研 究 ( 如 采 血 注 射 药 物 等 )( 图 3 畅 7 7) 也 可 以 不 用 PE150 管, 直 接 从 口 腔 边 缘 或 鳃 盖 后 缘 穿 洞 将 导 管 引 出 体 外, 用 手 术 缝 合 线 固 定 好 空 腔 内 导 管 即 可 图 3 畅 7 6 穿 刺 针 和 动 脉 插 管 操 作 图 图 3 畅 7 7 鱼 类 背 主 动 脉 插 管 (g) 手 术 后 鱼 的 护 理 : 做 完 背 主 动 脉 插 管 后, 鱼 应 立 即 移 入 有 新 鲜 流 水 与 充 气 的 水 族 箱 中, 迅 速 使 其 苏 醒 如 因 麻 醉 较 深, 苏 醒 较 慢, 可 用 手 帮 助 其 口 腔 和 鳃 腔 运 动 苏 醒 后 的 鱼 应 移 入 特 制 的 用 塑 料 板 隔 成 长 格 的 流 水 式 水 族 箱 内, 每 格 只 能 放 一 尾 鱼, 而 且 使 其 安 静 不 能 游 动, 以 免 引 起 导 管 脱 落 手 术 后 至 少 要 有 24 h 的 恢 复 时 间 才 能 开 始 实 验 注 意 : 如 果 血 管 导 管 正 好 插 入 背 主 动 脉 内, 则 背 主 动 脉 的 血 会 沿 着 血 管 导 管 向 外 流 出 此 时 也 可 来 回 推 拉 注 射 器 观 察 血 管 导 管 内 血 液 的 流 动 情 况, 如 果 血 流 通 畅, 说 明 已 插 入 背 主 动 脉 ; 如 果 血 流 中 断, 说 明 血 管 导 管 并 没 有 插 入 背 主 动 脉, 必 须 将 血 管 导 管 抽 出, 再 进 行 插 管 操 作 2 腹 主 动 脉 插 管 : 腹 主 动 脉 插 管 和 背 主 动 脉 插 管 的 操 作 方 法 相 似, 只 不 过 导 管 是 沿 口 腔 内
第 3 章 动 物 生 理 学 实 验 的 基 本 操 作 技 术 47 腹 面 中 线 中 间 ( 第 2 和 第 3 鳃 弓 连 接 处 ) 以 30 左 右 倾 角 刺 入 腹 主 动 脉 ( 图 3 畅 7 8) 3 尾 部 血 管 插 管 : 用 18 号 针 头, 内 穿 过 口 径 适 宜 的 细 塑 料 管 塑 料 管 长 20 ~30 cm, 一 端 做 尖 锐 的 切 口, 另 一 端 连 接 注 射 器 和 针 头 ; 管 内 充 满 含 肝 素 的 生 理 盐 水 鱼 经 麻 醉 后 用 湿 毛 巾 包 住 前 半 部, 一 手 握 住 尾 柄, 另 一 手 将 内 含 细 塑 料 管 的 针 头 从 尾 柄 腹 部 插 入 体 壁 而 到 达 血 管 棘 用 连 接 细 塑 料 管 的 注 射 器 抽 取 有 少 量 血 液 进 入 管 内, 即 可 证 明 细 塑 料 管 前 端 已 插 入 尾 部 血 管 内 此 时, 可 仔 细 把 细 塑 料 管 推 进 到 血 管 内 数 厘 米, 然 后 小 心 把 注 射 针 头 从 入 针 部 位 拉 出 来, 并 脱 离 细 塑 料 管 最 后 用 细 线 把 塑 料 管 ( 即 导 管 ) 固 定 在 尾 鳍 基 部 ( 图 3 畅 7 9) 使 细 塑 料 管 充 满 含 肝 素 的 生 理 盐 水 后, 将 注 射 器 取 出, 用 大 头 针 将 导 管 末 端 塞 紧 并 避 免 出 现 气 泡 这 时 可 把 鱼 放 回 水 族 箱 内 待 它 完 全 恢 复 正 常 后 就 可 以 进 行 实 验 图 3 畅 7 8 鱼 类 头 部 主 动 脉 插 管 虚 线 表 示 体 内 的 导 管, 实 线 表 示 体 外 的 导 管 图 3 畅 7 9 鱼 类 尾 部 血 管 插 管 术 取 血 样 时, 可 用 注 射 器 先 将 导 管 内 的 含 肝 素 生 理 盐 水 及 少 量 血 液 取 出 弃 去, 然 后 换 上 另 一 支 注 射 器 吸 取 血 样 取 完 血 样 后 应 用 注 射 器 从 导 管 注 入 一 些 含 肝 素 的 生 理 盐 水, 并 用 大 头 针 将 导 管 末 端 塞 紧, 以 备 第 二 次 取 血 样 ( 李 大 鹏 ) 3 畅 8 动 物 实 验 意 外 事 故 的 处 理 在 生 理 实 验 中 由 于 手 术 时 的 操 作 不 慎 动 物 生 理 状 态 不 佳 或 一 些 无 法 预 测 的 因 素 造 成 动 物 窒 息 大 出 血 等 事 故, 一 旦 发 生 这 种 情 况, 不 要 慌 张, 首 先 确 定 造 成 意 外 情 况 的 原 因, 再 采 取 措 施, 防 止 情 况 进 一 步 恶 化 3 畅 8 畅 1 麻 醉 过 量 和 窒 息 麻 醉 是 动 物 手 术 中 必 不 可 少 的 过 程, 由 于 动 物 的 生 理 状 态 不 同, 有 时 会 产 生 麻 醉 过 量 现 象, 造 成 呼 吸 或 循 环 系 统 异 常 情 况, 此 时 应 根 据 过 量 的 程 度, 采 用 不 同 的 方 式 处 理 如 动 物 呼 吸 极 慢 而 不 规 则, 但 血 压 和 心 搏 仍 正 常 时, 可 施 行 人 工 呼 吸, 并 给 苏 醒 剂 若 动 物 呼 吸 停 止, 血 压 下 降, 但 仍 有 心 搏 时, 应 迅 速 施 行 人 工 呼 吸, 同 时 注 射 50% 的 温 热 葡 萄 糖 溶 液 1 10 000 肾 上 腺 素 及 苏 醒 剂 若 动 物 呼 吸 停 止, 而 且 心 搏 极 弱 或 刚 停 止 时, 应 用 5% CO 2 和 95% O 2 的 混 合 气 体 人 工 呼 吸, 进 行 心 脏 按 摩, 注 射 温 热 的 生 理 盐 水 心 搏 恢 复 后, 注 射 50% 葡 萄 糖 及 苏 醒 剂 常 用 苏 醒 剂 有 咖 啡 因 (1 mg /kg 体 重 ) 可 拉 明 (2 ~5 mg /kg 体 重 ) 和 山 梗 菜 (0 畅 1 ~1 mg /kg
48 第 一 部 分 总 论 体 重 ) 等 3 畅 8 畅 2 大 出 血 在 生 理 实 验 中, 由 于 操 作 失 误 或 无 法 预 见 的 原 因, 有 时 会 出 现 大 出 血, 遇 到 这 种 情 况 首 先 不 要 慌 张, 尽 快 查 明 出 血 原 因, 用 棉 球 吸 去 血 迹, 观 察 血 的 来 源 一 般 大 出 血 由 两 种 情 况 造 成 : 一 是 大 血 管 被 剪 破, 找 到 出 血 口 后, 立 即 用 止 血 钳 钳 住 出 血 口 的 两 侧, 如 出 血 口 不 是 很 大, 钳 住 一 段 时 间 后, 血 液 会 凝 固, 此 时 放 开 止 血 钳 后 不 会 再 出 血 ; 如 出 血 口 较 大, 则 用 止 血 钳 钳 住 后, 需 用 线 将 出 血 口 两 侧 进 行 结 扎, 以 防 进 一 步 出 血 有 时 出 血 量 非 常 大, 来 不 及 用 止 血 钳 止 血, 也 可 用 手 指 夹 住 出 血 口, 再 用 止 血 钳 止 血 二 是 渗 透 性 出 血, 虽 然 渗 透 性 出 血 是 由 一 些 小 血 管 造 成, 但 很 多 小 血 管 同 时 出 血, 造 成 的 总 体 出 血 效 应 还 是 相 当 严 重 的, 此 时 也 应 首 先 确 定 出 血 部 位, 然 后 用 温 生 理 盐 水 浸 过 的 棉 花 压 在 或 明 胶 海 绵 覆 盖 在 出 血 部 位 上 止 血, 也 可 用 上 面 提 到 的 烧 烙 止 血 法 烧 灼 出 血 部 位, 此 方 法 虽 然 对 组 织 有 一 定 伤 害, 但 却 是 对 付 渗 透 性 出 血 一 种 较 为 有 效 的 方 法 ( 魏 华 )