1/17 血 液 学 基 础 一. 总 论 A. 血 液 的 成 分 血 浆 成 份 血 清 成 份 血 小 板 白 细 胞 血 饼 红 细 胞 加 入 抗 凝 剂, 离 心 作 用 血 液 自 然 凝 固 后, 静 放 30 分 钟 情 况 血 清 血 浆 蛋 白 质 凝 固 因 子 血 液 血 小 板 血 饼 血 球 白 细 胞 红 细 胞 B. 血 液 的 功 能 1. 搬 运 氧 气 至 全 身 ; 2. 进 行 人 体 免 疫 功 能 ; 3. 阻 止 血 液 外 流 ;
2/17 二. 各 论 A. 红 细 胞 (RBC) 1 红 细 胞 的 形 态 及 功 能 红 细 胞 模 型 图 形 态 : 扁 平 板 状, 中 央 凹 陷, 平 均 直 径 7-8µm 内 含 : 血 红 蛋 白 (HGB), 富 含 铁 份, 容 易 氧 化, 携 带 氧 气 至 全 身 功 能 : 搬 运 氧 气 特 点 : 细 胞 内 无 核, 柔 软, 可 进 入 比 本 身 直 径 更 小 的 毛 细 血 管 正 常 值 :400-600 万 /µl 2. 红 细 胞 的 成 熟 : 红 血 球 系 前 红 细 胞 嗜 碱 性 多 染 性 正 染 性 脱 核 网 状 红 细 胞 成 熟 红 细 胞 干 细 胞 红 细 胞 红 细 胞 红 细 胞 直 径 :18-25 µm 直 径 :12-18 µm 直 径 :9-12 µm 直 径 :8-10µm 有 RNA 留 下 细 胞 质 : 浓 青 色 细 胞 质 : 青 色 细 胞 质 : 青 灰 色 细 胞 质 : 赤 橙 色 有 核 小 体 无 核 小 体 血 红 蛋 白 合 成 分 裂 红 细 胞 由 骨 髓 中 生 成, 有 细 胞 核, 细 胞 核 在 分 裂 过 程 中 密 度 越 来 越 大, 体 积 越 来 越 小. 此 时 的 红 细 胞 为 幼 稚 细 胞, 分 布 于 骨 髓 中. 在 静 脉 血 中 只 留 有 网 状 红 细 胞 及 成 熟 红 细 胞, 网 状 红 细 胞 含 量 不 超 过 1%. 网 状 红 细 胞 内 有 RNA 留 下. 检 测 中, 用 一 般 试 剂 可 区 分 幼 稚 细 胞 与 成 熟 细 胞, 用 特 殊 试 剂 可 区 分 网 状 红 细 胞 与 成 熟 细 胞. 3. 异 常 举 例 : 缺 铁 性 贫 血 : 由 于 血 红 蛋 白 内 铁 份 不 足 所 致, 红 细 胞 呈 小 型 溶 血 性 贫 血 : 红 细 胞 于 内 部 膨 化, 导 致 细 胞 膜 破 裂, 红 细 胞 呈 大 型 恶 性 贫 血 : 由 于 细 胞 内 缺 乏 维 生 素 B12 导 致 细 胞 核 不 能 成 熟, 细 胞 呈 大 型 有 核 红 细 胞 再 生 不 良 性 贫 血 : 由 于 遗 传 原 因, 骨 髓 造 血 量 少, 导 致 红 细 胞 血 小 板 白 细 胞 等 数 量 少
3/17 B. 白 细 胞 (WBC) 1. 白 细 胞 的 分 类 形 态 及 成 份 分 类 : 二 分 类 淋 巴 球 其 他 白 细 胞 三 分 类 淋 巴 球 嗜 中 性 球 其 他 白 细 胞 五 分 类 淋 巴 球 单 核 球 颗 粒 球 嗜 中 性 球 嗜 酸 性 球 嗜 碱 性 球 五 分 类 中 各 种 白 细 胞 百 分 比 含 量 : 淋 巴 球 :20%- 40% 单 核 球 :2%- 10% 嗜 中 性 球 :40%- 60% 嗜 酸 性 球 :7% 以 下 嗜 碱 性 球 :1% 以 下 形 态 : ( 普 通 染 色 ) 淋 巴 球 单 核 球 嗜 中 性 球 嗜 酸 性 球 嗜 碱 性 球 直 径 7-17µm 15-20µm 12-15µm 13-1m8µ 10-15µm 核 近 似 球 形 凹 陷 倾 向 杆 状 分 节 不 整 形 细 胞 质 淡 青 色 青 灰 色 淡 橙 色 淡 青 色 淡 褐 色 颗 粒 赤 紫 色 赤 紫 色 橙 褐 色 赤 橙 色 暗 紫 色 粗 大 微 细 微 细 粗 大 大 小 都 有 少 数 多 数 多 数 充 满 核 上 也 有 形 态
4/17 2. 白 细 胞 的 功 能 产 生 人 体 免 疫 机 能, 直 接 攻 击 外 来 细 菌 或 产 生 抗 体 抗 源 反 应 正 常 值 :4000 9000/µL 侦 察 单 核 球 直 接 攻 击 情 报 通 信 T 型 淋 巴 球 ( 细 胞 性 免 疫 ) B 型 淋 巴 球 ( 体 液 性 免 疫 ) 细 菌 包 围 产 生 抗 体 * 嗜 酸 性 球 协 助 产 生 抗 体 3 异 常 举 例 : 艾 滋 病 : 患 者 体 内 无 淋 巴 球 白 血 病 : 患 者 体 内 白 细 胞 数 量 增 加 但 功 能 不 正 常 ( 恶 性 增 殖 ) 异 常 : 正 常 情 况 下, 静 脉 血 中 幼 稚 细 胞 量 极 少, 当 异 常 时, 幼 稚 细 胞 量 增 加, 当 大 于 1% 时, 应 马 上 检 查 C. 血 小 板 (PLT) 1 作 用 : 阻 止 出 血 特 征 : 容 易 凝 结 ( 不 稳 定 性 ) 正 常 值 :15 万 40 万 /µl 止 血 过 程 : 血 小 板 在 血 管 内 壁 附 着 ; 相 宜 凝 结 止 血 后 产 生 血 塞, 以 后 慢 慢 溶 解 2. 异 常 举 例 : 再 生 不 良 性 贫 血 : 血 小 板 数 量 少, 或 者 血 小 板 附 着 力 差. 可 进 行 成 份 输 血.
5/17 血 球 计 数 器 基 本 原 理 一 血 球 计 数 器 主 要 检 测 项 目 进 行 CBC 分 析 :WBC,RBC,HCT,HGB,PLT MCV,MCH,MCHC 二 基 本 原 理 : A. 粒 子 检 出 原 理 : 1 Ohm s 法 则 (DC 检 出 法 电 气 抵 抗 变 化 检 出 ): E( 电 压 )=I( 电 流 )*R( 电 阻 ) 由 于 血 液 内 各 种 细 胞 及 颗 粒 的 大 小 不 同, 加 压 后 电 阻 大 小 也 不 同, 然 后 转 换 成 脉 冲 信 号 输 出, 即 可 得 知 数 量 大 小 等 数 据 适 用 : 白 细 胞 红 细 胞 血 小 板 的 数 量 形 态 及 分 类 装 置 :
6/17 2. 激 光 散 乱 光 荧 光 检 出 方 式 (Flowcytemetry): 装 置 : 优 点 : 适 宜 于 各 种 细 胞 的 分 析, 应 用 广 泛, 例 如 白 细 胞 五 分 类 ( 需 用 特 殊 试 剂 ). 缺 点 : 激 光 如 果 用 半 导 体 产 生, 则 输 出 强 度 较 低 ; 如 果 用 Gas Laser 产 生, 则 使 用 寿 命 较 短, 更 换 后 调 整 麻 烦. 以 上 两 种 情 况 将 导 致 成 本 上 升. 3. 交 流 ( 电 阻 ) 检 出 方 式 : 装 置 : 以 交 流 电 作 为 输 入 信 号. 优 点 : 可 得 到 细 胞 内 核 的 信 息, 颗 粒 上 的 情 报 ( 信 息 ), 维 修 率 低, 不 需 精 密 的 ( 光 线 ) 调 整 缺 点 : 制 造 困 难, 要 求 波 的 信 号 稳 定 ; 不 易 得 到 细 胞 的 外 部 大 小 信 息.
7/17 B.HCT 体 积 测 定 原 理 : 1. 手 工 检 测 HCT 红 血 球 容 积 毛 细 管 法 内 径 :1mm 100% 长 度 :10cm 吸 入 检 体 l1 离 心 器 用 计 算 板 45% l2 0% 2. 用 血 球 计 数 器 检 测 HCT: Hct 值 =( 红 血 球 总 体 积 / 血 液 总 体 积 )* 100% = A *Σhk 将 标 本 5 万 倍 稀 释 后, 通 过 检 测 器 孔 时, 产 生 信 号 波, 将 信 号 波 的 大 小 加 总, 乘 以 一 常 数, 即 得 Hct 的 值
8/17 C.HGB 浓 度 的 测 定 原 理 : 比 色 分 析 法 : 1. 装 置 : 光 电 变 换 灯 泡 标 本 滤 光 器 受 光 器 Hgb 多 少 影 响 Hgb 浓 度, 影 响 光 透 过 的 强 度, 最 后 通 过 光 电 变 换 即 可 测 定 Hgb 浓 度. 1 空 白 结 果 (Blank); 2 标 本 结 果 (Sample); 3 实 际 结 果 (Real)=(Sample - Blank);
9/17 D. 定 量 方 法 : 1. 浮 球 式 定 量 器 ( 东 亚 专 利 ):( 绝 对 定 量 ) 优 点 : 检 出 器 小 孔 有 微 量 堵 塞 不 影 响 结 果 ; 缺 点 : 定 量 不 可 改 变 2. 水 式 定 量 器 :( 绝 对 定 量 ) 优 点 : 成 本 低, 检 出 器 小 孔 有 微 量 堵 塞 不 影 响 结 果 缺 点 : 内 壁 水 位 下 降 时, 可 能 遗 留 水 滴, 易 导 致 稀 释 倍 率 传 感 器 失 误, 结 果 不 如 浮 球 式 准 确. 3. 吸 引 量 = 流 速 * 时 间 :( 相 对 定 量 ) 优 点 : 成 本 很 低 缺 点 : 由 于 流 速 不 能 保 证, 因 此 极 易 影 响 吸 引 量 的 准 确 性. 4. 注 射 式 定 量 器 :( 绝 对 定 量 ) 优 点 : 马 达 转 速 控 制 简 单, 流 速 定 量 都 可 改 变. 多 用 于 高 档 仪 器 微 量 定 量. 缺 点 : 成 本 高, 密 封 引 起 的 磨 损 问 题 不 易 解 决, 需 要 定 期 维 修 保 养
10/17 E. 血 液 定 量 方 法 1. 旋 转 阀 SRV(Sample Rotor Valve): 优 点 : 故 障 率 低. 血 液 吸 引 管 内 的 一 点 点 堵 塞 不 影 响 定 量, 由 于 取 的 是 中 段 血, 血 液 定 量 很 稳 定. 缺 点 : 血 液 样 品 有 浪 费, 需 要 血 液 量 较 多, 制 作 成 本 高. 2. 注 射 式 : 优 点 : 马 达 转 速 控 制 简 单, 流 速 定 量 都 可 改 变, 用 于 微 量 血 液 定 量, 需 要 血 液 量 较 少, 成 本 低. 缺 点 : 密 封 问 题 较 难 解 决,2-3 年 需 更 换 密 封 装 置. 3. 薄 膜 泵 (DP 方 式 ): 优 点 : 耐 用, 稳 定,4-5 年 也 不 需 更 换 ; 缺 点 : 不 容 易 控 制 容 积, 需 正 负 压, 成 本 较 高.
11/17 F. 红 细 胞 的 主 要 公 式 : 1.MCV( 平 均 红 细 胞 容 积 ) MCV(fl) = Hct(%) 10 Rbc( 106/µL ) 2.MCH( 平 均 红 细 胞 血 红 蛋 白 浓 度 ) MCH(pg) = Hgb(g/dL) Rbc( 106/µL ) 10 3.MCHC( 平 均 红 细 胞 中 血 红 蛋 白 容 积 浓 度 ) MCHC(g/dl)= Hgb(g/dL) 1000 Hct(%) 4. 三 项 指 标 标 准 数 值 范 围 : MCV: 80-100 fl MCH: 28-32 pg MCHC: 32-36 g/dl 5. 异 常 举 例 : 1MCV 高,MCHC 低 可 能 Hct 高 2MCV 正 常,MCHC 高 可 能 Hgb 高 可 能 稀 释 倍 率 太 大, 导 致 Hct 及 Rbc 都 降 低. 6. 其 他 指 标 列 举 : W-SCR( 白 细 胞 小 型 细 胞 率 ), W-LCR( 白 细 胞 大 型 细 胞 率 ), W-MCR( 白 细 胞 中 型 细 胞 率 ), W-SCC( 白 细 胞 小 型 细 胞 数 ), W-LCC( 白 细 胞 大 型 细 胞 数 ), W-MCC ( 白 细 胞 中 型 细 胞 数 ),, P-LCR( 血 小 板 小 型 细 胞 率 ), MPV( 平 均 血 小 板 容 积 ), RDW( 红 细 胞 分 布 曲 线 宽 度 ), PDW( 血 小 板 分 布 曲 线 宽 度 )
12/17 G. 小 结 1. RBC, WBC, PLT, HGB, MCV, MCH, MCHC 的 主 要 机 能 正 常 值 范 围 及 计 算 公 式 : 项 目 主 要 机 能 正 常 值 计 算 公 式 RBC 搬 运 氧 气 400-600 万 /µl WBC 免 疫 4000-9000/µl PLT 阻 止 出 血 15-40 万 /µl Hgb 吸 收 氧 气 及 铁 分 11-18g/dl MCV ------ 80-100 fl Hct/Rbc MCH ------ 28-32 pg Hgb/Rbc MCHC ------ 32-36 g/dl Hgb/Hct 2.RBC, WBC, PLT, HGB 的 检 测 方 式 使 用 试 剂 及 稀 释 倍 率 : 项 目 检 测 方 式 使 用 试 剂 稀 释 倍 率 RBC DC( 电 阻 ) 检 测 方 式 稀 释 液 25000-50000 WBC DC( 电 阻 ) 检 测 方 式 稀 释 液 溶 血 剂 250-500 PLT DC( 电 阻 ) 检 测 方 式 稀 释 液 25000-50000 HGB 比 色 方 式 稀 释 液 溶 血 剂 250-500 半 自 动 简 单 的 血 球 计 数 器 只 是 一 种 试 剂 (WBC HGB 兼 用 ) WBC 三 分 类 以 上 的 机 器 大 部 分 WBC 与 HGB 所 用 溶 血 剂 不 同 ( 白 细 胞 使 用 溶 血 剂, 是 为 了 三 分 类 或 五 分 类 时, 使 一 部 分 白 细 胞 内 细 胞 质 缩 小, 改 变 原 来 形 态 ; 另 外 的 白 细 胞 不 改 变 原 来 形 态 ; 而 血 红 蛋 白 使 用 溶 血 剂, 将 彻 底 破 坏 白 细 胞 及 红 细 胞 ) 3. 定 量 方 法 小 结 : 使 用 场 所 标 本 计 数 方 式 浮 球 式 定 量 器 水 式 定 量 器 注 射 式 定 量 器 流 量 = 流 速 X 时 间 自 动 试 剂 分 注 DP 方 式 ( 稀 释 液 溶 血 剂 ) 注 射 式 血 液 定 量 注 射 式 SRV 旋 转 阀
13/17 H. 粒 度 分 布 曲 线 分 析 1 红 细 胞 粒 度 分 布 曲 线 分 析 : A :MCV 正 常 时, 红 细 胞 的 粒 度 曲 线, 此 时, 曲 线 最 大 值 约 为 90fL; B: 贫 血 时, 由 于 红 细 胞 内 缺 乏 HGB, 红 细 胞 小 型, 使 曲 线 左 移 ; C: 当 有 大 量 未 成 熟 红 细 胞 在 静 脉 血 中 时, 红 细 胞 大 型, 曲 线 右 移 ; 输 血 后, 红 细 胞 粒 度 曲 线 可 能 如 图 所 示, 有 2 个 顶 部, 应 该 视 为 正 常 现 象 2 血 小 板 粒 度 分 布 曲 线 分 析 : 正 常 血 小 板 粒 度 分 布 曲 线 有 小 灰 尘 (2~3μ) 时, 粒 度 分 布 曲 线 血 小 板 凝 集 时, 粒 度 分 布 曲 线
14/17 此 图 为 小 型 红 细 胞 对 血 小 板 曲 线 干 扰 曲 线 图, 机 器 可 以 认 为 A 为 PLT,B 为 RBC, 由 于 C 为 RBC,D 为 PLT,C 不 一 定 等 于 D, 因 此, 机 器 所 示 数 值 不 一 定 准 确, 这 时 候 最 好 用 手 工 方 法 检 查. 3. 白 细 胞 粒 度 分 布 曲 线 A: 白 细 胞 二 分 类 时, 粒 度 分 布 曲 线 ; B: 白 细 胞 三 分 类 时, 粒 度 分 布 曲 线 ; 白 细 胞 三 分 类 时, 需 要 使 用 特 殊 溶 血 剂, 以 减 少 单 核 球 的 细 胞 质, 及 降 低 核 的 密 度, 故 MONO 位 于 LYMP 与 NEUT 之 间. 此 图 为 没 有 用 特 殊 溶 血 剂 的 粒 度 分 布 曲 线, 不 易 进 行 三 分 类. 血 小 板 凝 集 时, 对 淋 巴 曲 线 干 扰 较 大 当 溶 血 不 良, 肝 病 及 婴 儿 血 液 时, 曲 线 乱 七 八 糟
15/17 血 液 分 析 仪 A. 血 液 分 析 仪 的 异 常 发 现 限 度 机 器 异 常 报 告 正 常 报 告 手 工 异 常 真 正 异 常 (TP) 假 伪 正 常 (FN) 正 常 假 伪 异 常 (FP) 真 正 正 常 (TN) T:True( 真 ) F:False( 伪 ) P:Positive( 异 常, 阳 性 ) N:Negative( 正 常, 阴 性 ) 注 :1. 手 工 指 由 专 家 确 认 的 手 工 检 测 结 果 ; 2. 要 尽 量 减 少 假 伪 正 常 与 假 伪 异 常 的 检 测 结 果 ; 3. 假 伪 正 常 与 假 伪 异 常 都 应 该 尽 量 低 但 两 者 调 整 方 法 有 矛 盾. 4. 假 伪 正 常 数 量 应 尽 量 低 (5% 以 下 ), 可 通 过 提 高 仪 器 灵 敏 度 实 现, 但 这 时 FP 更 高. 5. 假 伪 异 常 可 稍 高 ( 大 约 30%), 通 过 降 低 仪 器 灵 敏 度 实 现, 但 这 时 FN 更 高 ; 6. 假 伪 正 常 数 值 高, 检 测 员 忽 视 异 常 结 果 的 可 能 性 增 加, 导 致 误 诊 的 可 能 性 ; 7. 假 伪 异 常 数 值 高, 将 导 致 手 工 再 检 查 数 量 增 加, 影 响 工 作 效 率 ; 8. 以 上 限 度 百 分 比 根 据 普 通 检 测 员 异 常 发 现 的 能 力 限 度 制 定. B.Hgb 水 路 图 * 这 里 的 SV 都 比 较 简 单, 为 Pinch 阀. *SV3 故 障 较 多.( 阀 为 小 型 阀, 管 子 内 径 很 小 ) * 空 白 报 警 (Air Bubble): 正 常 范 围 :3000-4000 高 限 :7000-8000( 报 警 ) 低 限 :50 以 下 ( 报 警 ) (F820,F800) (F820,F800)
16/17 1.Hgb 检 测 水 路 Pinch 阀 开 关 顺 序 : SV1 SV2 SV3 冲 洗 ON ON ON 标 本 吸 引 ON OFF OFF 2.Hgb 检 测 步 骤 : 1 用 稀 释 液 冲 洗 ; 2 稀 释 光 电 变 换 ( 空 白 调 整 ); 3 标 本 吸 引 ; 4 标 本 光 电 变 换 ; 5R=S-B; 6 用 稀 释 液 冲 洗 ; 3. 异 常 分 析 : (1). 空 白 光 电 变 换 数 值 很 高 的 原 因 :( 除 了 光 度 调 整 的 问 题 以 外 ) *SV2 管 变 形, 有 汽 泡 产 生 ; * SV1 故 障, 排 水 不 畅, 空 白 调 整 时 有 稀 释 液 留 下 (Carry Over) (2). 标 本 是 稀 释 液 的 话, 空 白 正 常 ; 标 本 是 血 液 的 话, 空 白 很 高 的 报 警. *SV3 漏 液 (3).Hgb 结 果 不 稳 定, 有 时 正 常, 有 时 偏 低.( 除 了 灯 泡 光 度 不 稳 定 因 素 以 外 ) *SV3 漏 液, 导 致 B 值 大, 导 致 Hgb(=S-B) 小, 可 以 用 MCHC 来 检 查 Hgb 值 是 否 正 常. (4). 标 本 吸 引 不 能 停 止 : * SV2 故 障. (5). 空 白 报 警 : * 灯 太 暗 ; * 灯 上 灰 太 多 ; * 容 器 壁 太 脏, 有 气 泡 附 着 在 内 壁 上 ;( 用 漂 白 剂 清 洗 ) * 排 水 不 畅,SV2 堵 塞 ; * 灵 敏 度 太 高 ; *SV3 漏 液. (6). 标 本 不 能 吸 引 : * 管 子 有 堵 塞 ; *SV3 故 障 ;
17/17 C. 自 动 稀 释 装 置 (AD-270/260) * 血 液 注 射 筒 密 封 性 很 重 要 ; * 稀 释 倍 率 切 换 板 ( 注 射 筒 停 止 板 ) 位 置 重 要 ; * 吸 引 管 端 部 留 有 血 液, 影 响 稀 释 倍 率, 应 该 小 心 擦 除 端 部 血 液 ; * 吸 引 管 吐 出 血 液 时 可 能 产 生 气 泡 或 杯 子 本 身 质 量,( 如 有 灰 尘 ) 将 影 响 血 小 板 数 量, 故 杯 子 应 斜 放. D.F800/820 配 件 1. 检 测 器 内 径 :100μm 左 右 ( 用 于 检 测 WBC) 80μm 左 右 ( 用 于 检 测 RBC,PLT) 检 测 器 灵 敏 度 与 孔 内 径 成 反 比, 内 径 越 小, 灵 敏 度 越 高. * 小 孔 有 一 点 点 堵 塞, 导 致 灵 敏 度 提 高, 导 致 Hct 值 高, 影 响 MCV.MCHC; 2.Thermistor 目 的 :* 根 据 温 度 上 升, 电 阻 下 降, 以 辅 助 电 阻 来 自 动 调 节 Hct 稳 定 ; * 如 果 温 度 低, 溶 血 剂 不 易 破 坏 RBC 仪 器 使 用 室 温 :10 度 -30 度 稀 释 液 温 度 :18 度 -30 度 18 度 以 下 ( 温 度 低 ), 仪 器 白 细 胞 检 测 部 有 报 警. 3. 内 部 电 极 材 质 : 白 金 红 细 胞 经 溶 血 剂 后, 红 细 胞 皮 带 负 电, 将 附 着 到 内 部 电 极 上, 电 极 将 越 来 越 脏, 应 定 期 清 洗. 小 心 不 要 将 电 线 搞 断, 注 意 戴 手 套.