Microsoft PowerPoint 實驗室生物安全 [相容模式]

實驗室生物安全介紹高雄榮民總醫院黃采菽

Safe working protects: 背景介紹實驗室等級一般原則風險評估安全設備操作規範個人防護 -2- You Other lab workers Cleaners Visitors Your work

實驗室生物安全負壓實驗室生物安全櫃個人防護裝備 -3-

Chain of Infection 健康管理個人防護設備操作規範 -4- 設備 / 設施

實驗室生物安全等級選擇 - 一般原則背景介紹實驗室等級一般原則風險評估安全設備操作規範個人防護 -5- 指定特殊實驗工作之生物安全等級原則一般原則 : 以微生物病原之危險群 (Risk group) 分類, 作為評估其適合在何種生物安全等級實驗室中操作的風險因子 RG-1 在 BSL-1 實驗室 ; RG-2 在 BSL-2 實驗室考慮風險評估

風險評估安全設備操作規範 Risk v.s. Hazard 考慮因素 RG Individual risk Community risk Prophylaxis or treatment 1 No or very low No or very low 2 Moderate Low Usually available 3 High Low Usually available 4 High High Usually None 個人防護 -6-

1 (RG1) 背景介紹實驗室等級一般原則風險評估安全設備操作規範個人防護例如不產生內孢子之 Bacillus licheniformis, Escherichia coli- K12 Adeno-associated virus 第一型至第四型重組的不含潛在致癌基因產物或毒素之 adeno-associated virus, 且在無輔助病毒存在下進行培養 -7- 第一級危險群微生物與人類健康成人之疾病無關

2 (RG2) 背景介紹實驗室等級一般原則風險評估安全設備操作規範個人防護 -8- 第二級危險群微生物在人類所引起的疾病很少是嚴重的, 而且通常有預防及治療的方法細菌包括披衣菌等 41 類真菌 12 類寄生蟲 31 類病毒 17 類

3 (RG3) 背景介紹實驗室等級一般原則風險評估安全設備操作規範個人防護 -9- 第三級危險群微生物在人類可以引起嚴重或致死的疾病, 可能有預防及治療之方法細菌包括立克次氏菌等真菌 M. tuberculosis, Burkholderia pseudomallei, Burkholderia mallei, Pasteurella multocida, Bacillus anthracis, Yersinia pestis, Brucella spp., Francisella tularensis, Chlamydia psittaci, Rickettsia typhi, Orientia tsutsugamushi, shi Coxiella brnetii burnetii etc Histoplasma capsulatum, Coccidioides immitis, Blastomyces dermatitidis 寄生蟲 0 類病毒與變性蛋白 (prions) 等 SARS-CoV, Polio virus (all types) TSE (Transmissible spongiform encephalopathy), HIV, HTLV, Monkeypox, Yellow fever virus, Hantavirus, Chikungunya virus etc

SARS-CoV, MERS-CoV -10-

Mycobacterium tuberculosis -11-

Influenza virus H5N1 背景介紹實驗室等級 RG2: H1N1 H5N2 H6N1 RG3: H5N1 H7N9 衛生福利部感染性生物材料管理作業要點一般原則 -12-

Chikungunya virus 背景介紹實驗室等級一般原則風險評估安全設備操作規範個人防護 -13- Dengue: RG2 Chikungunya: RG3

Burkholderia pseudomallei -14-

Hantavirus -15-

Polio virus -16-

Bacillus anthracis -17-

Pasteurella multocida -18-

4 (RG4) 背景介紹實驗室等級一般原則風險評估安全設備操作規範個人防護 -19- 第四級危險群微生物在人類可以引起嚴重或致死的疾病, 但通常無預防及治療之方法細菌 0 類真菌 0 類寄生蟲 0 類病毒 Ebola virus, Marburg virus, Lassa virus, Crimean-Congo hemorrhagic fever virus,, hemorrhagic fever agents and viruses as yet undefined 疾病管制局 (94.9.26) 署授疾字第 0940000614 號令 : 感染性生物材料管理與傳染病病人檢體採檢辦法

Ebola 背景介紹實驗室等級一般原則風險評估安全設備操作規範個人防護 -20- Outbreak movie

病原微生物危害性分類基準 -21- 等級說明例子第一級危險 Bacillus subtilis 與人類健康成人之群 (RG1) 微 Escherichia coli-k12 疾病無關 adeno-associated associated virus Type 1-4 生物第二級危險在人類所引起的疾細菌包括披衣菌等 41 類病很少是嚴重的, 真菌 12 類群 (RG2) 微而且通常有預防及病毒 17 類 : 含 Inf A H1N1, H7N9 生物治療的方法寄生蟲 31 類在人類可以引起嚴細菌 : 肺結核, 類鼻疽, 炭疽桿菌, 鼠疫桿第三級危險重或致死的疾病, 菌可能有預防及治療病毒 : SARS, Poliovirus, HIV, HTLV, Yellow 群 (RG3) 微之方法 fever virus, Hantavirus, Chikungunya virus, 生物 Inf A H5N1 真菌 : 雙型性第四級危險在人類可以引起嚴病毒 : Ebola virus, Marburg virus, Lassa 重或致死的疾病, virus, Crimean-Congo hemorrhagic fever 群 (RG4) 微但通常無預防及治 virus,, hemorrhagic fever agents and 生物療之方法 viruses as yet undefined

資訊 - 疾管署網站

資訊 - 疾管署網站首頁 > 傳染病介紹 > 感染管制及生物安全 > 實驗室生物安全 > 感染性生物材料管理法規 > 感染性生物材料管理法規背景介紹實驗室等級一般原則風險評估安全設備操作規範個人防護 -23-

資訊 - 疾管署網站 -24-

資訊 - 菌株來源網站 BCRC

資訊 - 菌株來源網站 ATCC

資訊 - 菌株來源網站 ATCC -29-

Pathogen Safety Data Sheets (PSDS)

BSL-1-31-

BSL-2-32-

BSL-3-33-

BSL-4-34- Matthew G. et al. ABSL-4 Aerobiology Biosafety and Technology at the NIH/NIAID Integrated Research Facility at Fort Detrick hviruses 2014, 6(1), 137-150;

實驗室生物安全等級選擇 - 風險評估背景介紹實驗室等級一般原則風險評估安全設備操作規範個人防護 -35- 提高實驗室等級特定實驗會產生高濃度之氣膠時,BSL-3 實驗室之安全程度施可能比較適合, 以確保實驗室內更高等級之氣膠防護微生物病原及在某一區域首次出現之 RG3 微生物病原皆須在該區域的 BSL-4 實驗室進行處理可降低實驗室等級非病原體培養 : 血清學檢查抗原檢查去活性生物材料操作 : 病理切片無感染性生物材料操作 :: 萃取出的 DNA 或 RNA

感染性生物材料管理及傳染病病人檢體採檢辦法修正草案背景介紹實驗室等級一般原則風險評估安全設備操作規範個人防護 -36- 抗原檢查病理切片萃取出 DNA/RNA

HIV Blood sample 背景介紹實驗室等級一般原則風險評估安全設備操作規範個人防護 -37- Q: 病人檢體與感染性生物材料有何區別? A: 感染性生物材料指經確認含有病原體或具感染性衍生物之物質如為一般檢體 ( 例如糖尿病或血液常規檢驗 ), 或未經確認之傳染病病人檢體, 皆視為防疫檢體, 惟如該防疫檢體經確認含有病原體而需使用或保存, 則依據感染性生物材料管理及傳染病病人檢體採檢辦法辦理 Q: 感染性生物材料之操作實驗室等級如何評估? A: 有一觀念須先澄清, 感染性生物材料之等級 (RG) 及操作實驗室之生物安全等級 (BSL), 是不對等的, 亦即第三級感染性生物材料 (RG3) 不一定要在生物安全第三等級實驗室 (BSL-3) 中操作, 例如操作 HIV 之血清可於 BSL-2 實驗室中進行我國實驗室生物安全管理規定問答集 -20130723.pdf

實驗室生物安全等級 (Biosafety Level Laboratory, BSL) -38- US CDC BMBL 5th

Biosafety Symbol 背景介紹實驗室等級一般原則風險評估安全設備操作規範個人防護 -39- Whick one?

生物安全櫃 vs v.s. 無菌操作台氣流型態層流方向 -40- http://www.globalrph.com/aseptic.htm

HEPA Filter High efficiency particulate air filter 背景介紹實驗室等級一般原則風險評估安全設備操作規範個人防護 -41- Traps particulates only Efficiency of 99.97% with particles 0.3um

HEPA Filter -42- https://zh.wikipedia.org/wiki/%e9%ab%98%e6%95%88%e6%bb%a4%e7%bd%91

22 2.2 使用合適且經檢測合格之生物安全櫃 HEPA filter -43- Class I Class II B1

Class II 背景介紹實驗室等級一般原則風險評估安全設備操作規範個人防護 -44- Type A1 70% of air recirculated within the cabinet 30% exhausted through the HEPA filter into the room Type A2 (B3) Same as A1 except air is exhausted outside through a thimble unit connection. Type B1 30% of air recirculated 70% exhausted through the HEPA filter to the outside via a hard duct Type B2 (BSL-3 Lab) No recirculation with total exhaust through the HEPA filter to the outside via a hard duct

Class III BSC (BSL-4 Lab) -45-

生物安全櫃操作 - 揮發性化學物質 * -46- *lfpm: linear feet per minute

生物安全櫃操作 -Sash -47-

生物安全櫃操作 - 氣流背景介紹實驗室等級一般原則風險評估安全設備操作規範個人防護 -48- 開始工作前及完成工作後, 保留將污染空氣排出生物安全櫃之時間 ( 至少 5 分鐘 ) 工作移動手臂時, 避免破壞氣流

生物安全櫃操作 - 動線 -49-

What s Wrong? -50-

What s Wrong? -51-

What s Wrong? -52-

操作規範 -53-

Mouth -54-

Skin 傷口包紮針頭不回套使用專用容器風險評估安全設備操作規範個人防護 A-2 實驗室使用安全針具 -55-

減少氣膠產生之操作方法 Penetrating rubber septum vials Opening pop-top tubes Sonicating tissues Pipetting liquids Centrifugation Vortexing or mixing liquid Splash/spill -56-

Pipetting -57- Mix carefully Plugged with cotton Close to medium

Centrifugation 風險評估安全設備操作規範 Closed containers 個人防護 -58- In the BSC if needed Well balanced

Vortexing -59-

溢出物處理程序風險評估 Cover spill using paper Pour on bleach Wait for 10 min. Place spilled material into biohazard bag Clean up 安全設備操作規範個人防護 -60-

依規定妥善處理感染性廢棄物 -61-

特殊狀況 Working Outside sde Normal Hours 背景介紹實驗室等級一般原則風險評估安全設備操作規範個人防護 -62- 確認必要, 且有安全措施及緊急應變措施人員經主管 /PI 同意並授權 ASK.DO NOT guess 有疑問, 或沒處理過 :ASK Accident.Report

Should NEVER -63-

Should NEVER -64-

Remember to.. 遵守規則不自行修改規則 / 步驟 / 方法 -65-

個人防護裝備 (Personal Protective Equipment) 背景介紹實驗室等級一般原則風險評估安全設備操作規範個人防護 -66- 訂定 PPE 著 ( 卸 ) 裝程序, 以圖文方式呈現, 並張貼於人員著 ( 卸 ) 裝處人員進入實驗室均已穿著 PPE, 包括實驗衣手套及口罩等 ; 無穿著露趾鞋, 且長髮者需將頭髮盤 ( 束 ) 起或戴隔離帽

Hands -67-

Hands -68-

Eyes 背景介紹實驗室等級一般原則風險評估安全設備 C-3 受查核實驗室提供眼部防護具 ( 例如護目鏡, 拋棄式防護面罩 ), 並規範應使用之時機 Safety glasses 操作規範個人防護 -69- Face shields Safety goggles

Lab Coat 選擇合適的防護衣無穿著實驗室衣物離開實驗室, 或進入非實驗區使用過之防護衣物與乾淨衣物分開放置無將實驗衣物攜回家中 -70- Plastic aprons

Nose -71-

Thank you 但願那賜盼望的神, 因信將一切喜樂平安充滿你們但願那賜盼望的神, 因信將一切喜樂平安充滿你們使你們靠聖靈的能力, 充盈滿溢的有盼望 ( 羅馬書 15 章 13 節 )