Qubit-DNA RNA 总浓度测定 dsdna BR Assay Kits 各试剂加样量 : 总量 ( 溶液体积 ) 50 或 250ml 1 或 5ml 1 或 5ml 待测 250µl 或 1.25ml 原始浓度 未知 0 ng/μl 100 ng/μl 待测 200 测定时要求浓度 未知 0 ng/μl 5000ng/ml 0~5000 ng/ml 1 备注 -Buffer:Qubit dsdna BR buffer (Component B); 标准 1:Qubit dsdna BR standard #1 (Component C), 溶于 TE Buffer; 标准 2:Qubit dsdna BR standard #2 (Component D), 溶于 TE Buffer; 样品 : 待测的 DNA 样品 ; 试剂 :Qubit dsdna BR reagent (Component A) ( 为荧光染色试剂, 使用及存放时注意避光 ) 试剂存放: dsdna HS Assay Kits 各试剂加样量 : 总量 ( 溶液体积 ) 50 或 250ml 1 或 5ml 1 或 5ml 待测 250µl 或 1.25ml 原始浓度 未知 0 ng/μl 10 ng/μl 待测 200 测定时要求浓度 未知 0 ng/μl 500 ng/ml 0~500 ng/ml 1 备注 -Buffer:Qubit dsdna HS buffer (Component B); 标准 1:Qubit dsdna HS standard #1 (Component C), 溶于 TE Buffer; 标准 2:Qubit dsdna HS standard #2 (Component D), 溶于 TE Buffer; 样品 : 待测的 DNA 样品 ; 试剂 :Qubit dsdna HS reagent (Component A) ( 为荧光染色试剂, 使用及存放时注意避光 ) 试剂存放:
Qubit TM ssdna Assay Kits 各试剂加样量 : 总量 ( 溶液体积 ) 50 ml 1 ml 1 ml 待测 250µl 原始浓度 未知 0 ng/μl 20 ng/μl 待测 200 测定时要求浓度 未知 0 ng/μl 1000 ng/ml 0~1000 ng/ml 1 备注 -Buffer:Qubit ssdna HS buffer (Component B); 标准 1:Qubit ssdna HS standard #1 (Component C), 溶于 TE Buffer; 标准 2:Qubit ssdna HS standard #2 (Component D), 溶于 TE Buffer; 样品 : 待测的 DNA 样品 ; 试剂 :Qubit ssdna HS reagent (Component A) ( 为荧光染色试剂, 使用及存放时注意避光 ) 试剂存放: Qubit RNA Assay Kits 各试剂加样量 总量 ( 溶液体积 ) 50 /250ml 1/5 ml 1/5 ml 待测 250µl/1.25ml 原始浓度 未知 0 ng/μl 10 ng/μl 待测 200 测定时要求浓度 未知 0 ng/μl 500 ng/ml 0~500 ng/ml 1 备注 -Buffer:Qubit RNA buffer (Component B); 标准 1:Qubit RNA standard #1 (Component C), 溶于 TE Buffer; 标准 2:Qubit RNA standard #2 (Component D), 溶于 TE Buffer; 样品 : 待测的 DNA 样品 ; 试剂 :Qubit RNA reagent (Component A) ( 为荧光染色试剂, 使用及存放时注意避光 ) 试剂存放:
Qubit RNA BR Assay Kits 各试剂加样量 总量 ( 溶液体积 ) 50/250 ml 1/5 ml 1/5 ml 待测 250µl/1.25ml 原始浓度 未知 0 ng/μl 100 ng/μl 待测 200 测定时要求浓度 未知 0 ng/μl 5000 ng/ml 0~5000 ng/ml 1 备注 -Buffer:Qubit RNA buffer (Component B); 标准 1:Qubit RNA standard #1 (Component C), 溶于 TE Buffer; 标准 2:Qubit RNA standard #2 (Component D), 溶于 TE Buffer; 样品 : 待测的 DNA 样品 ; 试剂 :Qubit RNA reagent (Component A) ( 为荧光染色试剂, 使用及存放时注意避光 ) 试剂存放: Qubit TM Protein Assay Kits 各试剂加样量 Buffer 标准 1 标准 2 标准 3 样品 染色试剂 总量 ( 溶液体积 ) 60/300 ml 1/5 ml 1/5 ml 1/5 ml 待测 300µl/1.2ml 原始浓度 未知 0 ng/μl 200 ng/μl 400 ng/μl 待测 200 测定时要求浓度 未知 0 ng/μl 10 ng/μl 20 ng/μl 0~20 ng/μl 1 189μL *** *** 10μL *** 1μL 备注 -Buffer:Qubit protein buffer (Component B); 标准 1:Qubit protein standard #1 (Component C), 溶于 TE Buffer; 标准 2:Qubit protein standard #2 (Component D), 溶于 TE Buffer; 标准 3:Qubit protein standard #2 (Component D), 溶于 TE Buffer(Component E); 样品 : 待测的 DNA 样品 ; 试剂 :Qubit protein reagent (Component A) ( 为荧光染色试剂, 使用及存放时注意避光 ) 试剂存放:
仪器操作步骤 : 1. 接通 Qubit 2.0 Fluorometer 仪器电源, 打开仪器电源开关, 仪器屏幕显示以 下界面 : 点击 Date/Time 菜单, 设置日期和时间 ; 点击 Brightness 菜单, 调整屏幕亮度 ; 点击 Version 菜单, 对仪器内置软件升级 ( 网上下载升级程序至 U 盘 www.invitrogen.com/qubit, 点击 Update 即可开始升级 ) 2. 返回仪器屏幕首页, 选择需要测定的项目 (DNA RNA Protein), 点击 Standard 按钮 3. 若利用以前校正值, 则不需要进行校正, 点击 No 按钮, 直接进行下一步样品浓度测定 ; 仪器首次使用或较长时间没有使用, 点击 Yes 按钮, 利用标准品进行校正,DNA RNA 设置两个标准浓度梯度,Protein 设置 3 个浓度梯度 ( 见上表 ) 4. 标准品加入 0.5ml 离心管中 (Qubit 仪器专用的 ), 各试剂所加的量见上表 涡旋 2~3 秒, 短暂低速离心, 室温静止放置 2(DNA RNA) 或 15 分钟 ( 蛋白质 ) 顺序测定标准样品, 先 Insert Standard1( 低浓度 ), 点击 Read 按钮 ; 然后测定 Insert Standard 2 或 3( 高浓度 ), 点击 Read 按钮 5. 校正完成, 出现以下新的标准图, 点击 No 图标, 开始测定样品浓度
6. 点击 Sample 图标, 将加好样的离心管放置在测定孔中, 盖好盖子, 点击 Read 图标, 测定样品 DNA RNA 或蛋白质浓度 若测定样品的浓度较大, 大于 标准样品的最大浓度, 需将样品稀释一定倍数之后重新测定 7. 样品原始浓度计算 : Concentration of your sample = QF value (200/X) 样品稀释倍数 QF value = the value given by the Qubit 2.0 Fluorometer( 仪器读数值 ) X = the number of microliters of sample you added to the assay tube( 加样体积 )