GC-MS/MS 法测定中药材中 74 种农药 残留含量 摘要 : 本文利用岛津 GCMS-TQ8040 三重四极杆气质联用仪建立了 GC-MS/MS 测定 2015 版 中国药典 通则 2341 中规定的 74 种农药残留的方法 在 1~50µg/L 浓度范围内建立内标曲线, 线性关系良好, 相关系数 r 均大于 0.995 该方法适用于 2015 版药典中对中药材中农药残留量的快速定量测定 关键词 :GC-MS/MS 中药材有机磷类农药有机氯类农药拟除虫菊酯类农药自 1953 年第一部 中国药典 发行以来, 中国药典已成为国家监管药品质量的法定技术依据 2014 年 3 月, 国家药典委员会发布了关于 中国药典 2015 版通则 ( 草案 ) 公开征求意见通 知 与 2010 版药典相比,2015 版药典在收载品种数上有较大增幅, 在整体构架上也有较大调整, 主要表现在将 2010 版三部的附录凡例 制剂通则 分析方法指导原则等三合一, 独立成卷作为第四部, 制定了统一的技术要求 关于中药材中农药残留, 通则 2431 农药残留量测定法 建立和完善了中药材中农药残留量的测定方法, 包括气相色谱 - 串联质谱法和液相色谱 - 串联质谱法 其中气相色谱 - 串联质谱法涉及 74 种农药 ( 不含 2 种氘代内标 ), 并规定了检出限范围 05~25mg/kg 本文采用了 GC-MS/MS 的 MRM 多反应监测模式, 有效降低背景干扰, 避免了单四极杆 GCMS 因为基质干扰导致的定性不准问题, 提高了分析灵敏度, 大部分待测组分的检出限低于 1μg/L 该方法满足新版药典对中药材中农药残留含量测定的要求 1 实验部分 1.1 仪器 GCMS-TQ8040 三重四极杆气质联用仪 1.2 分析条件 GC-MS/MS 参数 : 色谱柱 :InertCap-5ms NP/Sil, 30m 0.25mm 0.25µm 进样口温度 :250 进样方式 : 不分流进样进样时间 :1min 载气控制方式 : 恒线速度载气线速度 :47.2cm/sec 柱温程序 :50 (1min)_25 /min _125 _ 16 10 /min _300 (3.5min) 接口温度 :280 离子源温度 :200 碰撞气 : 氩气检测器电压 : 调谐电压 +0.6kv 农药组分 MRM 采集条件见表 1
No. 保留时间 (min) 表 1. 农药组分保留时间及 MRM 参数 化合物名称英文名称 CAS No. 1 5.97 敌敌畏 Dichlorvos 62-73-7 2 9.61 四氯硝基苯 Tecnazene 117-18-0 定量离子对 (CE) 185.0>93.0 260.9>202.9 定性离子对 (CE) 185.0>109.0 260.9>230.9 3 11 二苯胺 Diphenylamine 122-39-4 169.1>66.0 169.1>77.0 4 10.34 氟乐灵 Trifluralin 1582-09-8 5 10.30 杀虫脒 Chlordimeform 6164-98-3 6 10.80 alpha- 六六六 BHC-alpha 319-84-6 7 10.88 六氯苯 Hexachlorobenze ne 118-74-1 306.1>264.1 196>181 218.9>182.9 283.8>248.8 8 10.98 五氯甲氧基苯 Pentachloranisole 1825-21-4 265>237(15) 9 11.08 氯硝胺 Dicloran 99-30-9 10 11.25 氘代莠去津 ( 内标 ) Atrazine-d5(IS) - 11 11.39 五氯硝基苯 Quintozene 82-68-8 12 11.38 beta- 六六六 BHC- beta 319-85-7 13 11.53 特丁硫磷 Terbufos 13071-79-9 14 11.49 gamma- 六六六 BHC- gamma 58-89-9 15 11.92 七氟菊酯 Tefluthrin 79538-32-2 16 11.85 百菌清 Chlorothalonil 1897-45-6 17 12.07 delta- 六六六 BHC-delta 319-86-8 Pentachloroanilin 18 12.39 五氯苯胺 527-20-8 e 206.0>176.0 205.0>127.0 294.8>236.8 218.9>182.9 231.0>174.9 218.9>182.9 177.0>127.1 265.9>230.8 218.9>182.9 262.80>191.9 (21) 306.1>206.1 181>140 (15) 218.9>144.9 283.8>213.8 280>265 206.0>16 205.0>105.0 (15) 294.8>264.8 218.9>144.9 231.0>128.9 218.9>144.9 177.0>137.1 265.9>168.0 218.9>144.9 264.80>193.9 (21) 19 12.64 甲基毒死蜱 Chlorpyrifos-meth yl 5598-13-0 20 12.71 乙烯菌核利 Vinclozolin 50471-44-8 17 285.9>93.0 285.0>212.0 285.9>270.9 285.0>178.0
21 12.77 甲基对硫磷 Parathion-methyl 298-00-0 22 12.92 七氯 Heptachlor 76-44-8 23 12.97 皮蝇磷 Fenchlorphos 299-84-3 24 13.11 八氯二丙醚 Octachlorodiprop yl ether (S421) 18 263.0>109.0 271.8>236.9 284.9>269.9 127-90-2 130>95 263.0>136.0 271.8>117.0 (32) 284.9>93.0 181>85 25 13.27 杀螟硫磷 Fenitrothion 122-14-5 277.0>26(6) 277.0>109.1 26 13.38 甲基五氯苯基 硫醚 Methyl-pentachlor ophenyl sulfide 1825-19-0 296>263(15) 246>211 27 13.39 苯氟磺胺 Dichlofluanid 1085-98-9 223.9>123.1 223.9>77.0 28 13.63 艾氏剂 Aldrin 309-00-2 29 13.56 毒死蜱 Chlorpyrifos 2921-88-2 30 13.67 氯酞酸甲酯 31 13.62 氘代倍硫磷 ( 内标 ) Chlorthal-dimethy l 1861-32-1 Fenthion-d6(IS) - 32 13.72 对硫磷 Parathion 56-38-2 33 13.78 三唑酮 Triadimefon 43121-43-3 262.9>193.0 313.9>257.9 300.9>222.9 284.0>169.0 (15) 291.1>109.0 208.1>181.0 262.9>203.0 313.9>285.9 300.9>272.9 284.0>115.0 291.1>137.0 (6) 208.1>127.0 34 13.90 仲丁灵 Butralin 33629-47-9 266.1>236.1 266.1>190.1 35 13.89 三氯杀螨醇 Dicofol - 36 14.01 溴硫磷 Bromophos 2104-96-3 37 14.21 二甲戊灵 Pendimethalin 40487-42-1 38 14.30 氟虫腈 Fipronil 120068-37-3 39 14.39 氧化氯丹 Chlordane-oxy 27304-13-8 40 14.39 环氧七氯 B 异构体 41 14.47 环氧七氯 A 异构体 Heptachlor 1024-57-3 exo-epoxide 25>139.0 25>215.0 330.9>315.9 330.9>285.9 252.1>162.1 252.1>191.1 366.9>212.9 366.9>254.9 (30) 386.8>287.0 386.8>323.0 352.8>262.9 352.8>281.9 Heptachlor 28044-83-9 352.8>289.0(6) 352.8>253.0 endo-epoxide 366.9>212.9 366.9>254.9 42 14.61 腐霉利 Fipronil 120068-37-3 (30)
43 14.61 三唑醇 Triadimenol 55219-65-3 168.1>7 168.1>112.1 19 (4) 44 14.62 哌草丹 Dimepiperate 61432-55-1 145.1>112.1 145.1>69.1 45 14.80 乙基溴硫磷 Bromophos-ethyl 4824-78-6 46 14.85 反式氯丹 Chlordane-trans 5103-74-2 47 14.91 o,p'- 滴滴伊 o,p'-dde 3424-82-6 48 14.96 氟节胺 Flumetralin 62924-70-3 49 15.10 顺式氯丹 Chlordane-cis 5103-71-9 50 15.11 α- 硫丹 Endosulfan I 959-98-8 51 15.53 p,p'- 滴滴伊 p,p'-dde 72-55-9 358.9>302.9 372.8>336.8 246.0>176.0 (30) 143.00>107.00 (21) 372.8>336.8 338.9>16 246.0>176.0 (30) 358.9>330.9 372.8>263.9 246.0>211.0 143.00>83.00 372.8>263.9 338.9>266.9 246.0>211.0 52 15.64 狄氏剂 Dieldrin 60-57-1 276.9>241.0 276.9>17 (38) 53 15.66 o,p'- 滴滴滴 o,p'-ddd 53-19-0 54 15.82 溴虫腈 Chlorfenapyr 122453-73-0 55 16.04 异狄氏剂 Endrin 72-20-8 56 16.01 除草醚 Nitrofen 1836-75-5 57 16.25 β- 硫丹 Endosulfan II 33213-65-9 58 16.34 p,p'- 滴滴滴 p,p'-ddd 72-54-8 59 16.37 o,p'- 滴滴涕 o,p'-ddt 789-02-6 60 16.98 硫丹硫酸盐 Endosulfan sulfate 235.0>165.0 247.1>227.0 262.9>191.0 (30) 282.9>162.0 338.9>16 235.0>165.0 235.0>165.0 235.0>199.0 247.1>20 262.9>193.0 282.9>253.0 338.9>266.9 235.0>199.0 235.0>199.0 386.8>288.8 386.8>252.9 1031-07-8 61 17.04 p,p'- 滴滴涕 p,p'-ddt 50-29-3 235.0>165.0 235.0>199.0 62 17.88 联苯菊酯 Bifenthrin 82657-04-3 181.1>166.1 181.1>153.1 63 17.98 溴螨酯 Bromopropylate 18181-80-1 340.9>182.9 340.9>184.9 64 18.09 甲氰菊酯 Fenpropathrin 39515-41-8 265.1>210.1 265.1>172.1
65 18.08 甲氧滴滴涕 Methoxychlor 72-43-5 66 18.47 苯醚菊酯 Phenothrin 26002-80-2 67 18.69, 18.87 227.1>169.1 183.1>168.1 227.1>212.1 183.1>153.1 氯氟氰菊酯 -1,2 Cyhalothrin-1,2 68085-85 - 8 197.0>161.0 197.0>141.0 68 19.02 氟丙菊酯 Acrinathrin 101007-06-1 289.1>93.0 289.1>77.0 270>235(5) 69 19.01 灭蚁灵 Mirex 2385-85-5 272.>237(15) 70 71 72 73 19.71, 19.83 20.24, 20.34, 20.40, 20.45 20.57, 20.68, 20.73, 20.77 20.73, 20.93 氯菊酯 -1,2 Permethrin-1,2 52645-53-1 氟氯氰菊酯 -1,2,3,4 氯氰菊酯 -1,2,3,4 氟氰戊菊酯 -1, 2 Cyfluthrin-1,2,3,4 68359-37-5 Cypermethrin-1,2, 3,4 52315-07-8 Flucythrinate-1,2 70124-77-5 74 20.77 喹禾灵 Quizalofop-ethyl 76578-14-8 75 76 21.47, 21.67 22.05, 22.27 1.3 样品前处理 183.1>168.1 226.1>206.1 181.1>152.1 199.1>157.1 372.1>299.1 183.1>165.1 226.1>199.1 (6) 181.1>127.1 199.1>107.1 372.1>272.1 氰戊菊酯 -1,2 Fenvalerate-1,2 51630-58-1 419.1>225.1(6) 419.1>167.1 溴氰菊酯 -1,2 Deltamethrin-1,2 52918-63 - 5 252.9>93.0 252.9>171.9 精确称取 3g 党参粉碎样品, 加入 1% 冰醋酸溶液 15mL, 涡旋混匀后静置 30min, 加入 15mL 乙腈与 100µL 内标 涡旋混匀后震荡 5min, 加入 7.5g 无水硫酸镁与无水醋酸钠混合粉末 (4:1,m/m), 摇散后震荡 3min, 冰浴中冷却 10min, 离心 5min, 移 取上清液 9mL 置固相分散萃取净化管 ( 无水硫酸镁 900mg,PSA300mg,C18 键合硅胶 300mg, 石墨化炭黑 90mg, 硅胶 300mg) 中, 涡旋混匀, 震荡 5min, 离心 5min, 移取上清液 5mL, 氮吹至约 0.4mL, 乙腈定容至 1mL 涡旋混匀,0.22µm 滤膜过滤, 取滤液供上机分析 20
2 结果 2.1 标准样品谱图混标溶液 (10 μg/l)mrm 总离子流谱图如图 1 所示 部分农药组分 (5 μg/l)mrm 质量色谱图如图 2 所示 (x100,000) 4.0 3.0 2.0 1.0 7.5 1 12.5 15.0 17.5 2 22.5 图 1. 混标溶液 MRM 总离子流谱图 (10 μg/l) (x1,000) (x10,000) 7.5 (x1,000) 1.25 5.0 1.00 5.0 0.75 2.5 0.50 2.5 0.25 0 5.79 6.00 13.50 13.75 13.52 13.75 敌敌畏毒死蜱对硫磷 (x1,000) (x100) (x10,000) 6.0 4.0 5.0 3.0 3.0 4.0 2.0 2.0 3.0 2.0 1.0 1.0 1.0 16.00 16.22 16.9 17.0 17.1 19.00 19.21 异狄氏剂硫丹硫酸盐灭蚁灵图 2. 部分农药组分 MRM 图 (5 μg/l) 2.2 标准曲线使用基质空白配制农药混合标准系列, 浓度分别为 1 2 5 10 20 50µg/L 以浓度比为横坐标, 峰面积比为纵坐标, 制作内标曲线 因篇幅所限, 部分农药组分内标曲线如下所示, 各组分内标曲线相关系数见表 2 21
5.0 2.5 峰面积比 (x0.1) 25.0 浓度比 75 50 25 峰面积比 2.0 1.0 峰面积比 25.0 浓度比 22 7.5 5.0 2.5 峰面积比 (x0.1) 0 50 浓度比 敌敌畏毒死蜱对硫磷 00 25.0 浓度比 峰面积比 10 07 05 03 00 25.0 浓度比 0.50 0.25 峰面积比 0 25.0 浓度比 异狄氏剂 硫丹硫酸盐 灭蚁灵 图 3. 部分组分标准曲线 2.3 检出限及重复性 根据 1μg/L 标准溶液数据, 计算方法检出限 (3 倍噪声计算 ),5μg/L 标准溶液重复测定 6 次, 考察仪器重复性 各组分检出限及重复性见表 2 表 2. 相关系数及检出限 No. 化合物名称 相关 系数 LOD (μg/l) RSD % (n=6) No. 化合物名称 相关 系数 LOD (μg/l) RSD % 1 敌敌畏 0.9996 3 7.30 39 氧化氯丹 0.9999 0.7 4.15 2 四氯硝基苯 0.9991 2 6.95 40 3 二苯胺 0.9995 0.14 3.70 41 环氧七氯 B 异 构体 环氧七氯 A 异 构体 (n=6) 0.9993 0.18 6.16 0.9979 0.91 6.63 4 氟乐灵 0.9996 3 6.81 42 腐霉利 0.9998 6 8.69 5 杀虫脒 0.9996 0.27 7.50 43 三唑醇 0.9980 0.52 6.43 6 alpha- 六六六 0.9995 2 7.03 44 哌草丹 0.9987 9 4.38 7 六氯苯 0.9997 2 8.33 45 乙基溴硫磷 0.9985 1 7.40 8 五氯甲氧基苯 0.9998 2 4.76 46 反式氯丹 0.9991 3 2.79 9 氯硝胺 0.9987 0.35 8.98 47 o,p'- 滴滴伊 0.9971 5 3.58 10 氘代莠去津 ( 内标 ) - - 5.49 48 氟节胺 0.9981 2 9.76 11 五氯硝基苯 0.9988 0.22 9.09 49 顺式氯丹 0.9989 0.14 5.05 12 beta- 六六六 0.9992 1 8.30 50 α- 硫丹 0.9957 0.95 6.52 13 特丁硫磷 0.9992 0.18 5.57 51 p,p'- 滴滴伊 0.9997 1 4.56 14 gamma- 六六 0.9989 1 8.38 52 狄氏剂 0.9991 0.45 6.33
六 15 七氟菊酯 0.9996 1 8.12 53 o,p'- 滴滴滴 0.9980 1 3.36 16 百菌清 0.9953 0.36 8.93 54 溴虫腈 0.9963 0.42 8.96 17 delta- 六六六 0.9993 7 6.67 55 异狄氏剂 0.9998 1.06 7.39 18 五氯苯胺 0.9996 1 8.65 56 除草醚 0.9978 6 7.52 19 甲基毒死蜱 0.9990 0.75 7.92 57 β- 硫丹 0.9966 0.97 7.92 20 乙烯菌核利 0.9995 6 7.32 58 p,p'- 滴滴滴 0.9986 1 4.85 21 甲基对硫磷 0.9997 0.13 6.37 59 o,p'- 滴滴涕 0.9982 1 7.25 22 七氯 0.9988 3 8.42 60 硫丹硫酸盐 0.9959 0.24 6.29 23 皮蝇磷 0.9988 2 4.04 61 p,p'- 滴滴涕 0.9995 1 8.52 24 八氯二丙醚 0.9989 3 10.48 62 联苯菊酯 0.9992 5 3.39 25 杀螟硫磷 0.9995 0.11 8.29 63 溴螨酯 0.9989 1 2.68 26 甲基五氯苯基 硫醚 0.9995 1 9.34 64 甲氰菊酯 0.9961 0.35 3.61 27 苯氟磺胺 0.9951 0.10 6.82 65 甲氧滴滴涕 0.9993 0.95 7.38 28 艾氏剂 0.9995 0.11 9.64 66 苯醚菊酯 0.9977 0.36 4.69 29 毒死蜱 0.9986 8 8.88 67 氯氟氰菊酯 0.9955 0.37 8.39 30 氯酞酸甲酯 0.9994 2 5.80 68 氟丙菊酯 0.9951 0.49 6.74 31 氘代倍硫磷 ( 内标 ) - - 4.88 69 灭蚁灵 0.9987 1 9.55 32 对硫磷 0.9988 0.13 6.85 70 氯菊酯 0.9983 0.69 3.92 33 三唑酮 0.9969 0.69 10.81 71 氟氯氰菊酯 0.9999 0.72 6.74 34 仲丁灵 0.9970 7 10.76 72 氯氰菊酯 0.9986 0.76 6.7 35 三氯杀螨醇 0.9996 5 8.68 73 氟氰戊菊酯 0.9962 0.89 5.49 36 溴硫磷 0.9988 4 4.69 74 喹禾灵 0.9982 4 5.67 37 二甲戊灵 0.9992 2 8.65 75 氰戊菊酯 0.9980 0.36 8.03 38 氟虫腈 0.9994 5 3.49 76 溴氰菊酯 0.9988 0.57 8.11 2.3 加标回收率 对空白样品进行 5ng/kg 加标回收测试, 所得色谱图如图 4 所示, 回收率见表 3 1.75 1.50 1.25 1.00 0.75 0.50 0.25 0 (x1,000,000) 7.5 1 12.5 15.0 17.5 2 22.5 图 4. 5ng/kg 加标样品的 MRM 图 23
表 3. 5ng/kg 加标回收率 No. 化合物名称加标回收率 % No. 化合物名称加标回收率 % 1 敌敌畏 106.40 39 氧化氯丹 82.83 2 四氯硝基苯 83.38 40 环氧七氯 B 异构体 102.02 3 二苯胺 107 41 环氧七氯 A 异构体 76.62 4 氟乐灵 99.94 42 腐霉利 106.01 5 杀虫脒 78.06 43 三唑醇 97.23 6 alpha- 六六六 90.59 44 哌草丹 97.41 7 六氯苯 67.21 45 乙基溴硫磷 69.71 8 五氯甲氧基苯 65.56 46 反式氯丹 91.56 9 氯硝胺 101.40 47 o,p'- 滴滴伊 87.80 10 氘代莠去津 ( 内标 ) - 48 氟节胺 94.76 11 五氯硝基苯 66.24 49 顺式氯丹 79.07 12 beta- 六六六 103.71 50 α- 硫丹 68.37 13 特丁硫磷 99.96 51 p,p'- 滴滴伊 84.04 14 gamma- 六六六 97.38 52 狄氏剂 76.99 15 七氟菊酯 96.55 53 o,p'- 滴滴滴 90.89 16 百菌清 65.26 54 溴虫腈 83.60 17 delta- 六六六 93.82 55 异狄氏剂 110.47 18 五氯苯胺 62.51 56 除草醚 96.86 19 甲基毒死蜱 85.01 57 β- 硫丹 60.82 20 乙烯菌核利 102.69 58 p,p'- 滴滴滴 107.46 21 甲基对硫磷 94.41 59 o,p'- 滴滴涕 89.26 22 七氯 88.66 60 硫丹硫酸盐 79.32 23 皮蝇磷 84.84 61 p,p'- 滴滴涕 76.35 24 八氯二丙醚 92.54 62 联苯菊酯 84.36 25 杀螟硫磷 96.85 63 溴螨酯 94.11 26 甲基五氯苯基硫醚 62.59 64 甲氰菊酯 100.82 27 苯氟磺胺 97.35 65 甲氧滴滴涕 90.98 28 艾氏剂 84.49 66 苯醚菊酯 66.64 29 毒死蜱 82.75 67 氯氟氰菊酯 108.85 30 氯酞酸甲酯 92.37 68 氟丙菊酯 83.06 31 氘代倍硫磷 ( 内标 ) - 69 灭蚁灵 65.91 32 对硫磷 96.28 70 氯菊酯 70.41 33 三唑酮 77.02 71 氟氯氰菊酯 94.76 34 仲丁灵 100.62 72 氯氰菊酯 90.92 35 三氯杀螨醇 89.89 73 氟氰戊菊酯 95.90 36 溴硫磷 78.04 74 喹禾灵 75.35 37 二甲戊灵 84.56 75 氰戊菊酯 83.39 38 氟虫腈 113.88 76 溴氰菊酯 89.89 24
3 结论 采用岛津公司 GCMS-TQ8040 三重四极杆气质联用仪分析 2015 版 中国药典 通则 2341 中规定的农药组分, 方法操作简单, 在 1~50µg/L 浓度范围内, 大部分农药线性良好, 相关系数大于 0.995, 加标回收率在 60~120% 之间, 可以应对 2015 版 中国药典 中对中药材中农药残留量的测定要求 25