32 12 OOD & MACHINERY 2016 12 食品与机械 Vol.32,No.12 Dec.2016 DOI:10.13652/j.issn.1003-5788.2016.12.031 Ⅱ BindingandinteractionefectofthreekindsofplantextractsonGlycolipid MetabolisminType Ⅱ DiabeticMice 1 1,2 1,2 1 ZHANG Ji-yuan 1 LIU Jin-fu 1,2 XIAO Ping 1,2 LIU Zi-xuan 1 (1.,3003842.,300384) (1.Food Scienceand Bioengineering Colege,Tianjin Agricultural University,Tianjin300384,China 2.Tianjin Engineering and Technology Research Centerof AgriculturalProducts Procesing,Tianjin300384,China) Abstract:Inthispaper,thetype Idiabetesmodelwasestablished andtheoptimaldoseofthepumpkinpolysaccharide,puerariafla- : Ⅱ, thesinglecomponent(p<0.05).theresultsrevealedthatthecom- binations of pumpkin polysaccharide and pu-erh theabrowns,, (FBG) (INS) puerariaflavonoidsandpu-erhtheabrownswereefective.however, (TG) (TC) (HDL) thepumpkinpolysaccharidefactorialanalysesshowedthattheinter- actionsofthethreesubstanceswereinteractive.thesynergisticex- (LDL), 3 periment showed that pumpkin polysaccharide combined with Ⅱ, Puerarialobataflavonoidsorcombination withtea-flavonoidsignifi- FBG INS HDL LDL cantlyreducedtgcontent(p<0.05).thecombinationoftheaflavin (P<0.05),3 andpuerariaflavonoidsinreducingthecontentoffbg,tc,ldl, wassignificantlybeterthanflavonoids,andtheefectoftg and TG (P< INSwasbeterthanthatofthepuerariaflavonoidsandpu-erhthe- 0.05) FBG TC LDL abrownsgroup (P<0.05).The molecularmechanism experiments,tg INS showedthatasingleoneandtwoofthethreecomponentsplayedan (P<0.05),3 importantroleintheexpressionofpi3k/aktproteinpathway. PI3K/Akt Keywords:pumpkinpolysaccharidepuerariaflavonoidspu-erhthe- abrownstypeⅡ DiabeticbindingefectPI3K/Aktpathway : Ⅱ PI3K/Akt vonoidsandpu-erhtheabrownsweredeterminedby measuredblood glucose.onthebasis,thefastingbloodglucose (FBG),insulin (INS),insulinresistance(),highdensitylipoprotein (HDL)and lowdensitylipoprotein (LDL)werealsoinvestigated.TheFBG, INS,,HDL,LDLcombinedgroupwassignificantlybeterthan Ⅱ, Ⅱ [1],,, Ⅱ, [2] [3-4] [5], [6-8] : ( :13ZCZDNC01800) 3 / B ( :14ZXNZNC00036) (PI3K/Akt), :,, PI3K Akt, : (1961-),,, E-mail:f123@tjau.edu.cn [9-11] :2016-10-21 [12], 142
2016 12, PI3K Akt,4, 12h, 3d (STZ)35mg/kg,1 24h, Ⅱ, 11.0 mmol/l T2DM,,, 4 [13], 1.2.2 PI3K/Akt (PI3K p110 p-akt T308), Ⅱ 3, 1 (2) : 12h,, 1.1, 4 20 min,12000r/min 1.1.1 20min,, : 64.9%, 48.3%, TC TG HDL LDL (ELISA) 8%, 12%, : 53%, 24.8%, 6.3%, : 78%, 3.8%, 3.7%, :,20~22g, (78.8% 10% 10% :8925, Thermo :JY600 +, Bio-Rad :JY-SP-DT, Bio-Rad :DYCZ-40D, Bio-Rad :chemidoc TM XRS+, Bio-Rad 1.2 1.2.1 112 2.1, 20~22g 1, 14, 8 (62.5,125,250,500 mg/kg), (50,100,200, 400mg/kg), (225,450,900,1350mg/kg)( STZ Ⅱ, 1.2.3 (1) :, (FINS) (FBG), (1) (HOMA-) H = A B 22.5, ( 1) : H (HOMA-) A (FINS),mU/L B (FBG),mmol/L 1% 0.2% ) : 1.2.4 ( 1) 1.1.2 ( 2) ( 3) (TC) (TG) (HDL), (LDL) : 10% 4% SDS-PAGE 4,, 5% TBST, (STZ) : 13000 (P110 T-308),4, β -actin IgG(P110) IgG 11000, 1h,,ECL (T-308): 5min,, β-actin 1.1.3 1.2.5 2 2 2 2 :752,, 2 2 :, 2 :GLAMOUR3000, MD 2, 1.2.6 SPSS19.0, ± ( 珚 x ±SD), t, F P<0.05,P<0.01 2 3 4 3 1~6 1~3, (pumpkinpolysaccharide) (puerariafla- ), vonoids) (pu-erhtheabrowns) ( 143
第 ３２ 卷第 １２ 期 张继媛等 三种植物提取物对 Ⅱ 型糖尿病小鼠糖脂代谢改善作用研究 Ｌ 胰岛素 单 位 为 ｍｕ Ｌ 及 胰 岛 素 抵 抗 纵 坐 位为 ｍｍ 由 图 １ ２ ４ ５ 可 知 随 着 不 同 剂 量 的 增 加 南 瓜 多 糖 和 标 ＥＬＩ ＳＡ 试剂盒得到 的 数 值 图 ４ ６ 中 横 坐 标 为 不 同 剂 葛根黄酮改 善 糖 脂 代 谢 的 效 果 越 好 分 别 在 ２５０ ｍｇ ｋｇ 和 量下 的 南 瓜 多 糖 ｎ ｐ ｈ 葛 根 黄 酮 ｐｕｍｐｋ ｙ 茶 褐 素 ｖｎ ｈ ｈ ｂ ｗｎ 干 预 下 的 ｐｕ ｐｕ ２００ ｍｇ ｋｇ 剂量时各 指 标 与 模 型 组 差 异 显 著 而 图 ３ ６表 胆固醇 甘 油 三 酯 高 密 度 脂 蛋 白 低 密 度 脂 蛋 白 单 位 为 量为 ４５０ ｍｇ ｋｇ 时 各指 标 与 模 型 组 差 异 显 著 但 随 着 剂 量 Ｌ 纵坐标为生化仪得到的数值 ｍｍ 不断增加最高剂量的效果反而下 降 证 明 １３５０ ｍｇ ｋｇ 茶 褐 明随着茶褐素浓度的增加其改善糖 脂 代 谢 的 效 果 越 好 在 剂 素超出了其有效剂 量 不 能 良 好 改 善 Ⅱ 型 糖 尿 病 病 症 所 以 高剂 量 的 茶 褐 素 反 而 不 会 良 好 地 改 善 糖 脂 指 标 试 验 表 明 图 １ 不同剂量南瓜多糖与血糖指标关系 １ Ｒ ｎｈ ｗ ｎ ｎ ｐ ｂ ｂ ｗ ｎ ｐｕｍｐｋ ｎ Ｂ ｎ ｐ ｈ ｙ Ｇ ｕ Ｉ ｎｘ 图 ４ 不同剂量的南瓜多糖与血脂指标关系 ４ Ｒ ｎｈ ｗ ｎ ｎ ｐ ｂ ｎｐ ｈ ｎｂ ｎｘ ｐｕｍｐｋ ｙ ｐ 图 ２ 不同剂量葛根黄酮与血糖指标关系 ２ Ｒ ｎｈ ｗ ｎ ｎ ｐ ｂ ｎ ｐｕ ｖｎ ｎ ｎｘ Ｇ ｕ Ｉ Ｂ 图 ３ 不同剂量的茶褐素与血糖指标关系 ３ Ｒ ｎｈ ｗ ｎ ｎ ｐｕ ｈ ｐｂ ｈ ｂ ｗｎｎｂ Ｇ ｕ Ｉ ｎｘ １４４ 图 ５ 不同剂量葛根黄酮与血脂指标关系 ５ Ｒ ｎｈ ｗ ｎ ｎ ｐ ｂ ｖｎ ｎｂ ｎｘ ｐｕ ｐ 图 ６ 不同剂量茶褐素与血脂指标的关系 ６ Ｒ ｎｈ ｗ ｎ ｎ ｐｕ ｈ ｐｂ ｈ ｂ ｗｎｎｂ ｎｘ ｐ
2016 12 3,P<0.05,, 1~3,, 250mg/kg, 200mg/kg, 450mg/kg FBG INS TC HDL LDL,, (F >F ), 2.2 2 2 (F >F ) 2 2, 250mg/kg,INS TC HDL LDL, 200mg/kg 450 mg/kg INS,TC HDL LDL3, 1~3 (F <F ) 1 FBG INS TG TC HDL LDL Table1 TheposthocanalysisresultofFBG,INS,,TG,TC,HDL,LDLofsingleand combinedextracts( 珚 x ±SD,n=6) 2.92±0.05 6.88±0.09 0.89±0.04 c 0.83±0.09 3.14±0.80 1.71±0.24 0.43±0.08 17.82±2.25 # 13.05±0.45 # 10.77±0.15 # 2.73±0.89 # 6.23±0.92 # 0.87±0.12 # 2.10±0.20 # 12.42±1.93 * 9.44±0.42 * 5.21±0.96 * 1.85±0.26 * 4.78±0.60 * 1.31±0.08 * 1.32±0.05 * 12.85±1.65 * 9.67±0.28 * 4.05±0.72 * 1.86±0.11 * 4.64±0.06 * 1.35±0.17 * 1.22±0.11 * + 9.65±1.87 # * 7.85±0.28 # * 3.34±0.05 # * 1.43±0.12 # * 4.30±0.12 # * 1.51±0.03 # * 1.03±0.15 # * F 6.447 92.817 1.388 0.106 23.502 21.338 21.266 F 1.759 5.223 0.001 203.633 0.736 48.682 5.567 P 0.007 0.000 0.007 0.750 0.000 0.046 0.000 #,P<0.05* 2 FBG INS TG TC HDL LDL Table2 TheposthocanalysisresultofFBG,INS,,TG,TC,LDL,HDLofsingleand combinedextracts( 珚 x ±SD,n=6) 17.82±2.25 # 13.05±0.45 # 10.77±0.15 # 2.73±0.89 # 6.23±0.92 # 0.87±0.12 # 2.10±0.20 # 12.42±1.93 * 9.44±0.42 * 5.21±0.96 * 1.85±0.26 * 4.78±0.60 * 1.31±0.08 * 1.32±0.05 * 9.26±1.82 * 8.82±0.13 * 3.63±0.71 * 1.85±0.47 * 4.39±0.09 * 1.46±0.13 * 1.14±0.05 * +9.40±1.76 # * 8.01±0.17 # * 3.35±0.09 # * 1.38±0.09 * 4.12±0.09 * 1.62±0.14 # * 0.95±0.11 # * F 1.765 258.094 2.852 0.694 0.694 16.986 29.764 F 2.352 476.730 4.942 1.283 8.832 83.056 113.936 P 0.000 0.000 0.001 0.000 0.000 0.000 0.000 #,P<0.05* 3 FBG INS TG TC HDL LDL Table3 TheposthocanalysisresultofFBG,INS,,TG,TC,HDL,LDLofsingleand combinedextracts( 珚 x ±SD,n=6) 2.92±0.05 6.88±0.09 0.89±0.04 c 0.83±0.09 3.14±0.80 1.71±0.24 0.43±0.08 17.82±2.25 # 13.05±0.45 # 10.77±0.15 # 2.73±0.89 # 6.23±0.92 # 0.87±0.12 # 2.10±0.20 # 12.85±1.65 * 9.67±0.28 * 4.05±0.72 * 1.86±0.11 * 4.64±0.06 * 1.35±0.17 * 1.22±0.11 * 9.26±1.82 * 8.82±0.13 * 3.63±0.71 * 1.85±0.47 * 4.39±0.09 * 1.46±0.13 * 1.14±0.05 * +8.77±1.73 # * 7.43±0.15 # * 2.90±0.05 * 1.33±0.15 * 3.73±0.12 # * 1.57±0.16 # * 0.92±0.19 # * F 1.302 195.651 0.931 12.191 15.229 26.275 61.680 F 2.171 486.033 9.093 0.165 5.412 14.178 55.809 P 0.332 0.000 0.536 0.692 0.019 0.033 0.001 #,P<0.05* 145
32 12 : Ⅱ 2.3 4 FBG INS Table4 TheSynergisticefectresultofFBG,INS, 500mg/kg 400mg/kg 900 mg/kg 250 mg/kg 200mg/kg 250mg/kg 450mg/kg 200 mg/kg 2.92±0.05 c 6.88±0.09 d 0.89±0.04 c 450mg/kg, 4 5 4 5, TG 9.66±1.38 b (P<0.05) 9.22±1.57 bc FBG TC LDL 11.18±1.58 b 8.17±0.12 b 8.14±0.11 b 8.11±0.54 b 3.51±0.06 b 3.42±0.07 b 4.05±0.12 b,tg INS + 9.65±1.87 b 7.85±0.28 bc 3.34±0.05 bc (P<0.05) + 9.40±1.76 b, + 8.77±1.73 c 8.02±0.17 b 7.43±0.15 c 3.35±0.09 bc 2.89±0.05 bc, 5 ofsingleandcombinedextracts( 珚 x±sd,n=6) 17.82±2.25 a 13.05±0.45 a 10.77±0.15 a,p<0.05 TG TC HDL LDL Table5 TheSynergisticefectresultofTG,TC,HDL,LDLofsingleandcombinedextracts( 珚 x±sd,n=6) 0.83±0.09 d 3.14±0.18 c 1.71±0.24 c 0.43±0.08 d 2.73±0.12 a 6.23±0.22 a 0.87±0.12 a 2.10±0.20 a 1.77±0.10 b 4.43±0.27 b 1.48±0.14 b 1.17±0.01 b 1.65±0.11 bc 4.20±0.04 bc 1.52±0.02 b 1.04±0.07 bc 1.70±0.10 bc 4.39±0.10 bc 1.46±0.09 b 1.13±0.16 b + 1.43±0.12 cd 4.30±0.12 bc 1.51±0.03 b 1.03±0.15 bc +1.38±0.09 cd 4.12±0.09 bc 1.62±0.14 b 0.95±0.11 bc +1.33±0.15 d 3.73±0.12 c 1.57±0.16 b 0.92±0.19 c,p<0.05,, 2.4 PI3K/Akt,, 3 #,P<0.05* PI3K/Akt PI3K(P110)Akt(T-308) 7 PI3K, 2.3, 7~12 7~12 PI3K(P110)P-Akt(T 308) β-actin, (P<0.05), PI3K/Akt,PI3K (P110)P-Akt(T308),,PI3K(P110)P-Akt(T 308), (P<0.05), Ⅱ PI3K/Akt #,P<0.05* 8 PI3K PI3K(P110)P-Akt(T308),3 146 Figure7 Efectofpumpkinpolysaccharidespuerariaefla- vonoidsandcombinedexpressionofpi3kprotein Figure8 Efectofpumpkinpolysaccharidespu-ertheabrownin andcombinedexpressionofpi3kprotein
2016 12 3 3 Ⅱ,,,, 200mg/kg 450mg/kg,, Ⅱ PI3K/Akt #,P<0.05* 9 PI3K PI3K(p110) p-akt(t308), Figure9 Efectofpuerariaeflavonespu-ertheabrowninand, combinedexpressionofpi3kprotein Ⅱ Ⅱ, 3 #,P<0.05* lenceofdiabetesamongmenandwomeninchina[j].n EngJ 10 P-Akt Med,2010,362(12):1090-1101. [2],. [J]., Figure10 Efectofpumpkinpolysaccharidespuerariaefla- vonesandcombinedexpressionofp-aktprotein #,P<0.05* 2 [J]., 11 P-Akt 2015,31(9):14-19. Figure11 Efectofpumpkinpolysaccharidespu-ertheabrownin andcombinedexpressionofp-aktprotein [12]BREITBARTH,ROTMAN T,RUBINSTEIN S,etal.Role #,P<0.05* andregulationofpi3kinspermcapacitationandtheacrosome 12 P-Akt reaction[j].molcelendcrinol,2010,314(2):234-238. Figure12 Efectofpuerariaeflavonespu-ertheabrownin andcombinedexpressionofp-aktprotein [1]YANG Wen-ying,LUJu-ming,WENGJian-ping,etal.Preva- 2014,25(9):260-263. [3],. [J].,2009,31(4):145-146. [4],. [J].,2007,23(6):29-31. [5],. [J].,2009(2):38-41. [6],,,. HepG2/ [J].,2015,36 (9):8-12. [7],,,. [8].PI3K/Akt [J].,2008,14(7):113-115. [9],,,.PI3K-Akt [J].,2010,26(10):879-885. [10]. 2 PI3K/Akt [D]. :,2015: 1-48. [11]HANJi-wen,LIXin-yu,ZHAN Xiao-rong,etal.Impaired PI3K/Aktsignalpathwayandhepatocelularinjuryinhigh-fat fedrats[j].worldj Gastroenterol,2010,16(48):6111-6118. [13],,. [J].,1995,26(3):276-280. 147