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羊祥葛
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1 硕士学位论文论文题目细胞质胸苷激酶在血液系统恶性肿瘤中的意义研究生姓名吴静指导教师姓名傅晋翔专业名称研究方向论文提交日期血液病学血液恶性肿瘤预后指标 2011 年 5 月

3 细胞质胸苷激酶在血液系统恶性肿瘤中的意义中文摘要细胞质胸苷激酶在血液系统恶性肿瘤中的意义中文摘要目的探讨血液系统恶性肿瘤 ( 白血病淋巴瘤骨髓增生异常综合征和多发性骨髓瘤 ) 患者外周血细胞质胸苷激酶 (TK1) 水平变化与性别年龄外周血白细胞计数血红蛋白水平外周血血小板计数血清白蛋白血清乳酸脱氢酶血清 C- 反应蛋白的相关性, 并通过不同系统比较分析其在疾病诊断中的意义方法自 2010 年 3 月至 2010 年 12 月共 25 例患有血液系统恶性肿瘤的住院患者 ( 其中白血病 9 例, 淋巴瘤 7 例, 骨髓增生异常综合征 5 例, 多发性骨髓瘤 4 例 ), 15 例同期患有非血液系统恶性肿瘤的住院患者作为阴性对照组, 其他系统恶性肿瘤患者 ( 消化道肿瘤 34 例, 肺癌 23 例, 其他恶性肿瘤 14 例 ) 作为阳性对照组采用酶免疫化学发光法检测患者血清中细胞质胸苷激酶的浓度, 分析 TK1 浓度变化与患者其他生化或外周血改变的相关性, 按标准将 TK1 2.0PM/L 视为阳性病例, 分别计算出 TK1 在不同系统肿瘤中的敏感性或特异性, 分析其临床意义结果血液系统恶性肿瘤患者血清 TK1 浓度与患者性别年龄血清白蛋白血清乳酸脱氢酶血清 C- 反应蛋白白细胞数及血红蛋白水平的变化无相关性, 但患者外周血血小板计数变化与 TK1 相关,PLT 100*10 9 /L 的患者, 其 TK1 为 1.37± 0.89PM/L, 而 PLT<100*10 9 /L 时,TK1 为 2.37±1.40PM/L 与消化道肿瘤肺癌相比, 细胞质胸苷激酶在血液系统肿瘤中敏感性更高结论细胞质胸苷激酶在血液系统恶性肿瘤诊断的敏感性更高, 且其浓度变化水平可能与外周血血小板计数相关关键词细胞质胸苷激酶血液系统恶性肿瘤意义作者 : 吴静指导教师 : 傅晋翔 I

4 Abstract Thymidine kinase in the cytoplasm of the significance of hematological malignancies Thymidine kinase in the cytoplasm of the significance of hematological malignancies Abstract Objective To investigate the changes of serum cytoplasmic thymidinekinase (TK1) levels in patients with hematological malignancies (leukemia, lymphoma, myelodysplastic syndrome and multiple myeloma), and its role on diagnosis and pronosis, especially the relationship among the white blood cell count, hemoglobin level, blood platelet count, serum white protein, serum lactate dehydrogenase, serum C-reactive protein to the TK1 levels detected in the patients. Methods From March 2010 to December 2010, a total of 40 patients with different hematologic diseases was hospitalized to our department. Among those patients, 25 patients were diagnosed to have hematological malignancies, including 9 cases of leukemia, 7 cases of lymphoma, 5 cases of myelodysplastic syndrome and 4 cases of multiple myeloma, the other 15 cases with non-hematological malignancies served as negative controls. In the meantime, patients with other malignancies (34 cases of gastrointestinal cancer, lung cancer in 23 cases, 14 cases of other malignant tumors) were selected as a positive controls. Chemoluminescence dot-blot assay was employed to determine the concentration of TK1 in peripheral blood of those patients. To explore the effects of TK1 levels on diagnosis and prognosis of patients with different cancer, the changes of TK1 in serum was compared with peripheral blood count or other biochemical prolifes..those with the TK1 levels higher than 2.0PM / L was considered as positive cases. The sensitivity and specificity of TK1 in the different diseases were also determined. Results there was no significance of TK1 levels changes among the patients gender, age, serum albumin, serum lactate dehydrogenase, serum C-reactive protein, white blood cell count and hemoglobin level in group of hematological malignancies, but the high of levels TK1 was documented in those with higher peripheral blood platelet count. PLT 100*10 9 /L,the concentration of TK1 is 1.37±0.89PM/L, while PLT<100*10 9 /L,it is II

5 Thymidine kinase in the cytoplasm of the significance of hematological malignancies Abstract 2.37±1.40PM/L. In comparison with gastrointestinal tumors or lung cancers, the changes of TK1 levels in hematological malignancies seemed to be more sensitive and might be used to monitor the changes of the disease during chemotherapy. Conclusion The changes of TK1 levels in hematological malignancies seemed to be more sensitive, and its levels is related to the changes of peripheral blood platelet numbers Key words TK1 hematologic malignancies signification Written by: Wu Jing Supervised by: Fu Jinxiang III

7 目录研究背景...1 资料与方法...3 结果...8 讨论...12 结论...14 参考文献...15 综述...17 中英文对照缩略词表...25 致谢...26

9 细胞质胸苷激酶在血液系统恶性肿瘤中的意义研究背景研究背景在哺乳动物细胞中, 胸苷的磷酸化的补救途径是被两种胸苷激酶催化的 : 即细胞周期调节的细胞质胸苷激酶 1 和线粒体胸苷激酶 2 细胞质胸苷激酶在不分裂的细胞中是缺如的, 而线粒体胸苷激酶在这些细胞中是存在的在细胞的代谢中, 细胞质胸苷激酶和线粒体胸苷激酶用于维持充足的 dttp, 在 DNA 复制和修复的过程中细胞质胸苷激酶水平在细胞周期的合成前期 G1 和合成期 S 期交界处开始升高, 直至 S 期和合成后期 G2 期交界处达到高峰恶性肿瘤细胞中的 DNA 合成剧增导致肿瘤细胞的急剧增殖, 故细胞质胸苷激酶的升高与肿瘤细胞生长状态密切相关自 1980 年起, 血清细胞质胸苷激酶最早被用作一种增殖标志 [1] 国外研究中, 在慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 和非霍奇金淋巴瘤 (NHL) 中的相关研究较多对 CLL 患者血清 TK1 水平跟踪观察后认为它具有一定的预后意义, 结果 [2] 提示血清 TK1 水平高者总生存率 (OS) 低, 并且与免疫球蛋白可变区基因重排 CD38 与 ZAP-70 表达及随后有发展为弥漫大 B 细胞淋巴瘤 (DLBCL) 风险性相关有研究 [3] 表明高水平但无相应酶活性的细胞质胸苷激酶 mrna 标志着此酶处理作用的一种缺陷这种缺陷将打乱细胞正常的反馈系统, 从而影响恶性条件的发展此外, 还有细胞质胸苷激酶在临床侵袭性慢性淋巴细胞性白血病患者外周血淋巴细胞中的活性研究 [4] [5] 而在非霍奇金淋巴瘤研究中, 表明血清细胞质胸苷激酶对于评估化疗后非霍奇金淋巴瘤的治疗效果和预后是一个重要的参考值有研究表明细胞质胸苷激酶的浓度比活性更有研究意义 [6] 此外, 有细胞质胸苷激酶与线粒体胸苷激酶的比较研究 [7] 而在急性髓细胞性白血病急性淋巴细胞性白血病和骨髓增生异常综合征仅有少数报道 [8] 国内研究中, 表明细胞质胸苷激酶是肿瘤诊断和预后判断的有价值指标, 并在肿瘤的组织分型上有辅助诊断意义 [9] 在大肠癌中, 细胞质胸苷激酶可能参与大肠癌的发生, 但与大肠癌的进展无关 [10] 在乳腺癌中, 乳腺癌 Survivin 蛋白表达与细胞质胸苷激酶表达相关, 并与腋窝淋巴结转移相关 [11] 血液系统研究报道甚少在慢性淋 [12] 巴细胞性白血病中, 有研究显示在 Binet C 期的患者高乳酸脱氢酶患者高 β2 微球蛋白患者免疫球蛋白重链可变区基因重排状态患者 CD38 ZAP70 高表达患者 1

10 研究背景细胞质胸苷激酶在血液系统恶性肿瘤中的意义中细胞质胸苷激酶都是显著增高的, 并且是免疫球蛋白重链可变区基因突变的一个可 [13] 预测性的标记, 将应用于预后评估另有研究发现脂蛋白脂酶的表达和血清细胞质胸苷激酶的水平与慢性淋巴细胞性白血病其他预后因子显著相关, 并将成为免疫球蛋白可变区重链基因突变的可预测性的标记本研究纳入 25 例血液系统恶性肿瘤患者,15 例同期患有非血液系统恶性肿瘤的住院患者作为阴性对照组, 其他系统恶性肿瘤患者 ( 消化道肿瘤 34 例, 肺癌 23 例, 其他恶性肿瘤 14 例 ) 作为阳性对照组采用酶免疫化学发光法检测患者血清中细胞质胸苷激酶的浓度, 分析 TK1 浓度变化与患者其他生化或外周血改变的相关性, 按标准将 TK1 2.0PM/L 视为阳性病例, 分别计算出 TK1 在不同系统肿瘤中的敏感性或特异性, 分析其临床意义 2

11 细胞质胸苷激酶在血液系统恶性肿瘤中的意义资料与方法资料与方法 1. 患者资料 : 自 2010 年 3 月至 2010 年 12 月共 25 例患有血液系统恶性肿瘤的住院患者进入本研究, 其中男性 13 例, 女性 12 例, 年龄岁, 平均年龄 58.04±19.35 岁 ( 白血病患者 9 例, 淋巴瘤患者 7 例, 骨髓增生异常综合征患者 5 例, 多发性骨髓瘤患者 4 例 ) 16 例患者为既往明确诊断, 并既往接受过化疗再次入院复查治疗的患者 ;9 例为初发病例, 未接受任何治疗所有入院患者均按常规进行外周血白细胞计数血红蛋白水平外周血血小板计数血清血清白蛋白血清乳酸脱氢酶血清 C- 反应蛋白等相关检查阴性对照组为 15 例同期入院的非恶性肿瘤患者, 男性 7 例, 女性 8 例, 年龄岁, 平均年龄 50.80±22.85 岁阳性对照为自 2010 年 3 月至 2010 年 12 月在本科进行 TK1 检测的其他恶性肿瘤患者, 其中消化道肿瘤 34 例 ( 胃癌 13 例, 结肠癌 7 例, 直肠癌 5 例, 胰腺癌 3 例, 原发性肝癌 3 例, 胆囊癌 1 例, 胆管癌 1 例, 食道癌 1 例 ), 肺癌 23 例, 乳腺癌患者 9 例, 卵巢癌患者 2 例, 子宫内膜间质肉瘤患者 1 例, 宫颈癌患者 1 例, 阴道癌患者 1 例患者临床资料详见表 1 3

12 资料与方法细胞质胸苷激酶在血液系统恶性肿瘤中的意义表 1 入组病例基本临床资料姓名性别年龄诊断 WBC Hb PLT ALB LDH CRP TK1 *10 9 /L g/l *10 9 /L g/l U/L mg/l PM/L 张 XX 女 63 AML-M 陈 XX 女 57 NHL 陈 XX 男 38 AML-M 黄 XX 男 49 AML-M 薛 XX 男 55 MM 鲍 X 男 83 MM 周 XX 男 37 CML 葛 XX 女 90 AML-M 朱 XX 女 53 CML 凌 XX 男 73 AML-M 谢 XX 男 27 MDS-RCMD 陶 XX 男 79 MM 陈 XX 女 59 MM 徐 XX 女 75 NHL 杨 XX 女 57 NHL 傅 XX 男 76 NHL 顾 X 男 21 MDS-RAEB 姚 XX 女 67 NHL 何 XX 女 49 MDS 陈 X 女 25 NHL 冯 XX 女 72 ALL 沈 XX 男 87 MDS-RAEB 刘 XX 男 69 AML-M5b 徐 XX 女 45 MDS 低危型王 XX 男 45 NHL 阴性对照病例基本特征姓名性别年龄诊断 TK1 (PM/L) 王 X 女 32 继发性脾功能亢进 0.94 徐 XX 男 46 慢性再生障碍性贫血 0.66 吴 XX 男 46 急性再生障碍性贫血 1.88 吴 XX 女 60 全血细胞减少系统性红斑狼疮 0.9 王 X 男 31 单纯红细胞再生障碍性贫血 1.49 沈 XX 女 61 自身免疫性溶血性贫血 1.93 周 XX 女 85 缺铁性贫血 0.66 张 X 女 32 缺铁性贫血 1.35 胡 XX 女 24 特发性血小板减少性紫癜 2.32 马 XX 男 75 巨幼细胞性贫血 1.46 周 XX 女 60 血栓性血小板减少性紫癜 2.07 吴 XX 女 77 巨幼细胞性贫血 3.29 徐 XX 男 24 脾功能亢进 1.01 滕 XX 男 86 缺铁性贫血胃癌术后喉癌术后 1.36 唐 X 男 23 重型再生障碍性贫血

13 细胞质胸苷激酶在血液系统恶性肿瘤中的意义资料与方法消化道肿瘤患者病例姓名诊断 TK1 (PM/L) 张 XX 胃癌肝脏腹腔淋巴结转移癌 2.92 林 XX 胃癌骨后腹膜淋巴结转移癌 3.93 张 XX 结肠癌肝脏转移癌 0.81 宋 XX 结肠癌 0.19 钱 XX 胰腺癌肝脏肺转移癌 1.25 沈 XX 胃癌肺转移癌 1.6 张 X 胃癌肝脏腹腔转移癌 0.82 吴 XX 胰腺癌 4.2 吴 XX 贲门癌食道肝脏腹腔转移癌 1 叶 XX 胃癌淋巴结转移癌 1.09 朱 XX 结肠癌肝脏转移癌 0.89 张 XX 直肠癌 1.01 姚 XX 胆管癌 ( 临床诊断 ) 肝脏转移癌 0.53 王 XX 直肠癌肺转移癌 0.27 钦 XX 直肠癌肺转移癌 0.22 谷 XX 食管癌 0.53 谢 XX 结肠癌膀胱腹腔转移癌 0.42 张 XX 原发性肝癌 0.47 傅 X 结肠癌食管腺癌 2.09 颜 XX 原发性肝癌 0.75 王 X 结肠癌 0.98 方 XX 原发性肝癌 0.91 季 XX 胃癌 1.33 夏 XX 胰腺癌 1.14 蔡 XX 胆囊癌 0.66 施 XX 胃癌 1.31 陈 XX 胃癌 0.78 周 XX 直肠癌 0.97 宣 XX 胃癌 1.18 熊 XX 胃癌 1.09 陶 XX 残胃癌 1.46 蒯 XX 直肠癌 1.99 黄 XX 结肠癌黄 XX 胃癌

14 资料与方法细胞质胸苷激酶在血液系统恶性肿瘤中的意义肺癌患者病例姓名诊断 TK1 (PM/L) 王 XX 肺癌骨淋巴结肺内转移 1.61 黄 XX 左下肺癌 1.83 陆 XX 左肺癌骨脑转移张 XX 右肺癌 ( 腺癌 ) 胸壁骨转移 1.22 庄 XX 右下肺癌 ( 鳞癌 ) 0.68 顾 XX 左肺癌 ( 鳞癌 ) 肺内纵膈淋巴结转移 1.02 丁 XX 肺癌 ( 临床诊断 ) 左肺门右肾上腺转移 0.53 顾 XX 肺癌 ( 腺癌 ) 0.23 徐 XX 左上肺癌 ( 鳞癌 ) 0.61 诸 XX 右肺癌 ( 小细胞肺癌 ) 0.94 徐 XX 右肺癌 ( 鳞癌 ) 0.96 郑 XX 左肺癌 ( 腺癌 ) 1.94 沈 XX 肺癌 ( 腺癌 ) 肝骨淋巴结转移 0.71 王 XX 右肺癌 ( 腺癌 ) 1.09 江 XX 左肺癌 ( 腺癌 ) 1.48 孙 XX 左肺癌 ( 腺癌 ) 2.16 张 XX 右肺癌 ( 鳞癌 ) 0.61 徐 XX 右上肺癌 ( 低分化癌 ) 1.36 周 XX 右上肺肺癌 ( 鳞癌 ) 0.94 蔡 XX 左肺癌 ( 小细胞肺癌 ) 1.71 孙 XX 左肺癌 ( 临床诊断 ) 2.85 胡 XX 左肺癌 ( 临场诊断 ) 1.31 沈 XX 左肺癌 ( 小细胞肺癌 ) 0.84 其他恶性肿瘤患者病例姓名诊断 TK1 (PM/L) 周 XX 阴道癌 1.5 周 X 乳腺癌 ( 浸润性导管癌 ) 0.65 樊 X 乳腺癌 ( 浸润性导管癌 ) 3.12 相 XX 卵巢癌肝脏腹腔转移癌 0.87 黄 XX 宫颈癌 1.14 胡 XX 乳腺癌 ( 浸润性导管癌 ) 4.86 张 XX 子宫内膜间质肉瘤 1.7 周 XX 乳腺癌 ( 浸润性导管癌 ) 0.63 段 XX 乳腺癌卵巢癌盆腔转移癌 1.24 张 XX 乳腺癌 1 顾 XX 乳腺癌 ( 浸润性导管癌 ) 0.96 顾 XX 乳腺癌 ( 腺癌伴导管上皮增生 ) 0.55 管 XX 卵巢癌 <0.5 戴 X 乳腺癌 ( 浸润性导管癌 )

15 细胞质胸苷激酶在血液系统恶性肿瘤中的意义资料与方法 2. 方法所有患者的外周血 TK1 检测均采用化学发光法测定, 利用深圳华瑞同康生物技术有限公司提供的 TK1 检测试剂盒进行测定, 操作按说明进行 2.1 检测原理将含有 TK1 抗原的血清滴在硝酸纤维素膜固相载体上,TK1 酶抗原与抗人 TK1-IgY 抗体直接反应, 产生抗原 - 抗体复合物, 再与相对应的生物素化抗 IgY 二抗 SA-HRP( 亲和素化辣根过氧化物酶 ) 结合, 最后形成了 TK1 抗 TK1-IgY 生物素化抗 IgY 二抗 SA-HRP 复合物, 通过检测 HRP 与发光剂反应发出信号的强弱, 计算出血清中 TK1 的浓度 2.2 检测步骤实验前配置稀释液洗涤液和封闭液, 加入校准品和待测样本, 洗涤封闭后加入抗 TK1-IgY 抗体反应 120 分钟, 洗涤后加入生物素化抗 IgY 二抗反应 40 分钟, 洗涤后加入 SA-HRP 反应 60 分钟, 洗涤后加入 ECL 发光试剂反应 1 分钟, 将膜放入化学发光成像分析仪内待 5 分钟计时结束进行拍摄分析 2.3 检测结果正常人血清内 TK1 含量小于 2.0PM, 若检测值大于 2.0PM 预示存在细胞增殖性疾病的风险 3. 统计学方法采用 SPSS17.0 软件, 将 25 例血液系统恶性肿瘤患者血清 TK1 的均值与阴性对照组 15 例进行配对 t 检验, 比较两者之间是否有差异 ; 其次, 分别将 TK1 测定值与对患者的性别年龄外周血白细胞计数血红蛋白水平外周血血小板计数血清血清白蛋白血清乳酸脱氢酶及血清 C- 反应蛋白变化进行统计分析将测定的 TK1 的浓度大于 2.0PM/L 的病例视为阳性病例, 分别计算出在不同系统中阳性病例占有总病例数的比率即阳性率不同指标分组情况详见表 2 表 2 不同指标分组情况指标例数 WBC(n=25) 10*10 9 /L 7(28.0%) <10*10 9 /L 18(72.0%) Hb(n=25) 100g/L 10(40.0%) <100g/L 15(60.0%) PLT(n=25) 100*10 9 /L 12(48.0%) <100*10 9 /L 13(52.0%) ALB(n=25) 35g/L 17(68.0%) <35g/L 8(32.0%) LDH(n=25) 160U/L 17(68.0%) <160U/L 8(32.0%) CRP(n=23) >5mg/L 10(43.5%) 5mg/L 13(56.5%) 7

16 结果细胞质胸苷激酶在血液系统恶性肿瘤中的意义结果 1. 实验组 (25 例血液系统恶性肿瘤患者 ) 与对照组 (15 例非血液系统恶性肿瘤患者 ) 细胞质胸苷激酶浓度比较表 3 实验组与对照组 TK1 浓度比较分组 (n=40) TK1(PM/L) P 值实验组 1.63±0.82 对照组 1.89± P>0.1 由上表可以看出, 患有血液系统恶性肿瘤患者与非血液系统恶性肿瘤患者比较, 细胞质胸苷激酶的浓度的差异无统计学意义 (P>0.1) 2. 不同指标分组 : 两组间细胞质胸苷激酶比较 2.1 不同性别比较表 4 不同性别 TK1 浓度比较性别 (n=25) TK1(PM/L) P 值男 2.20±1.17 女 1.55± P>0.1 由上表可以看出, 无论男女, 细胞质胸苷激酶的浓度的差异无统计学意义 (P> 0.1) 2.2 不同年龄比较表 5 不同年龄 TK1 浓度比较年龄 (n=25) TK1(PM/L) P 值 60 岁 1.55±0.98 <60 岁 2.16± P>0.1 由上表可以看出, 无论年龄 60 岁或者 <60 岁, 细胞质胸苷激酶的浓度的差异无统计学意义 (P>0.1) 2.3 不同外周血白细胞计数比较 8

39 应信息与通信工程学院信息与通信工程全日制 40 张信息与通信工程学院信息与通信工程全日制 41 时 **

39 应 ** 信息与通信工程学院信息与通信工程全日制 40 张 ** 信息与通信工程学院信息与通信工程全日制 41 时 ** 1 林 ** 100138092010346 381 83 78 信息与通信工程学院 081000 信息与通信工程全日制 2 刘 ** 100138111310146 380 76 76 信息与通信工程学院 081000 信息与通信工程全日制 3 曲 * 100138111310204 355 82 75 信息与通信工程学院 081000 信息与通信工程全日制 4 姚 * 100138111310389