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1 第 6 卷第 5 期中国药剂学杂志 Vol. 6 No 年 9 月 Chinese Journal of Pharmaceutics Sep p.219 文章编号 :(2008) 联苯苄唑乳胶剂的制备及质量考察荣蓉, 陈继平, 刘淑琴, 徐晓娣, 李赫, 何仲贵 ( 沈阳药科大学药学院, 辽宁沈阳 ) 摘要 : 目的制备含药质量分数为 1% 的联苯苄唑乳胶剂, 并对其进行质量考察, 以期增加药物在皮肤局部的积累, 减少药物的全身吸收方法采用超声乳化法将联苯苄唑制成 O/W 型乳剂, 再与卡波姆 940 凝胶基质混合均匀制备 O/W 型乳胶剂 ; 对所制备的乳胶剂中联苯苄唑进行含量测定初步稳定性试验皮肤刺激性试验以及制剂体外经皮渗透性与 12 h 大鼠体外皮肤滞留量试验结果所制备的联苯苄唑乳胶剂兼有乳剂和凝胶的优点, 外观细腻富有光泽, 无油腻感, 极易涂布和洗除, 制剂稳定无刺激性, 且药物透过皮肤的量小, 但 12 h 大鼠体外皮肤滞留量显著大于市售联苯苄唑乳膏剂和凝胶剂结论该制剂制备工艺可行, 质量稳定, 是一种优良安全的新型联苯苄唑局部外用制剂关键词 : 药剂学 ; 外用乳胶剂 ; 超声乳化法 ; 联苯苄唑 ; 质量考察中图分类号 : R 94 文献标志码 : A 联苯苄唑 (bifonazole) 又名白肤唑比佛拉唑, 临床上广泛应用于皮肤癣菌酵母菌等浅部真菌感染的治疗对麦角甾醇合成的双重抑制作用, 使其抗菌活性远胜于一般咪唑类抗真菌药 [1-2] 目前上市的制剂有乳膏剂凝胶剂栓剂溶液剂等将联苯苄唑制成局部外用剂型, 能提高局部药物的浓度, 对治疗部位具有针对性以往的技术都是将其溶于脂溶性半固体基质中制成乳膏剂 [3] 联苯苄唑的水不溶性使其在水凝胶剂制备中存在较多困难, 通常需加入大量的丙二醇聚乙二醇乙醇等有机溶剂 [4] 长时间的高温加热使其溶解, 影响了药物的稳定性 ; 长期放置后凝胶基质卡波姆吸水, 导致药物析出, 制剂粒度增大, 影响疗效乳胶剂由水相油相表面活性剂组成, 兼有乳剂和凝胶的优点, 用于皮肤表面, 其涂抹性好, 无油腻感, 不污染衣物有关联苯苄唑乳胶剂的制备及大鼠体外经皮渗透性及皮肤滞留量的研究尚未见报道作者采用超声乳化法, 制备一种含药质量分数为 1% 的联苯苄唑 O/W 型乳胶剂, 将其制成 O/W 乳剂再分散于卡波姆凝胶基质中, 对所制备的乳胶剂中联苯苄唑的含量进行测定并进行初步的稳定性试验皮肤刺激性试验以及制剂体外经皮渗透性试验 12 h 大鼠体外皮肤滞留量试验, 以期增加药物在皮肤局部的积累, 从而起到持续的药物释放作用, 减少药物的全身吸收, 避免药物的毒性及不良反应, 达到其皮肤靶向性的目的 1 仪器与材料高效液相色谱仪 (LC-10A VP HPLC Pump SPD-10A VP UV-VIS Detector ANASTAR 色谱收稿日期 : 作者简介 : 荣蓉 (1982-), 女 ( 汉族 ), 辽宁沈阳人, 硕士研究生, Tel , rong @163.com; 何仲贵 (1965-), 男 ( 汉族 ), 宁夏盐池人, 教授, 博士, 主要从事药物新剂型与新技术研究, Tel , hezhonggui@gmail.com

2 220 中国药剂学杂志第 6 卷工作站, 日本岛津公司 ),LDZ5-2 低速自动平衡离心机 ( 北京医用离心机厂 ),DF-101S 集热式恒温加热磁力搅拌器 ( 河南巩义英峪予华仪器厂 ),JY92-2D 超声波细胞粉碎机 ( 宁波新芝科器研究所 ),KQ-250 超声波清洗器 ( 江苏昆山超声仪器有限公司 ),85-2 恒温磁力搅拌器 ( 江苏常州国华电器有限公司 ),SC-15 超级恒温槽 ( 宁波新芝科器研究所 ),CJJ-6 六联磁力搅拌器 ( 江苏金坛市大地自动化仪器厂 ), 改进的 Franz 立式扩散池 ( 沈阳玻璃仪器厂 ) 联苯苄唑原料药 ( 广东环叶制药有限公司, 纯度质量分数为 99.6 %), 联苯苄唑对照品 ( 中国药品生物制品检定所, 批号 ), 联苯苄唑凝胶 ( 重庆华邦制药股份有限公司, 批号 ), 联苯苄唑乳膏 ( 北京四环医药科技股份有限公司, 批号 ), 油酸油酸乙酯液体石蜡丙二醇 Tween 80 Tween 20 Tween 85 三乙醇胺( 天津博迪化工有限公司 ), 肉豆蔻异丙酯 ( 上海顺强生物科技有限公司 ), 大豆油中链油 ( 辽宁铁岭北亚药用油有限公司 ),Labrafac CC Plurol oleique CC 497 Labrafil 1944 Labrasol( 法国 Gattefosse 公司 ), Cremophor EL 35 Cremophor RH 40( 德国巴斯夫辅料有限公司 ), 卡波姆 940( 四川奔威有限公司 ), 尼泊金乙酯 ( 天津科密欧化学试剂开发中心 ), 丁羟基茴香醚 ( 国药集团化学试剂有限公司 ), 甲醇 ( 色谱纯, 天津康科德科技有限公司 ), 三乙胺 ( 分析纯, 天津康科德科技有限公司 ), 其他试剂 ( 分析纯, 市售 ) 大耳白家兔, 体质量 2.2~2.5 kg; 雄性 Wistar 大鼠, 体质量 (200±20)g 上述动物均由沈阳药科大学实验动物中心提供, 动物合格证号 SYXK( 辽 ) 方法与结果 2.1 联苯苄唑乳胶剂的制备采用超声乳化法, 将联苯苄唑制成 O/W 型乳剂, 分散于卡波姆凝胶基质中, 混合均匀, 制备成含药质量分数为 1 % 的 O/W 型联苯苄唑乳胶剂油相的选择水浴加热 70 条件下考察联苯苄唑在大豆油中链油油酸油酸乙酯肉豆蔻异丙酯液体石蜡 Labrafac CC Plurol oleique CC 497 等油相中的溶解情况其中满足载药量要求的为油酸 ( 药物溶解度 >200 mg g -1 ) 乳化剂种类的选择选择几种 O/W 型乳化剂进行试验, 固定油相油酸的用量为处方总量质量分数的 10 %, 乳化剂为 5 %, 乳化温度 70, 制备空白乳剂, 以所形成空白乳剂的外观为指标, 对乳化剂的种类进行筛选, 结果见表 1 可以看出,Tween 20 Tween 80 Cremophor EL-35 这三种乳化剂形成的空白乳外观良好但用 Cremophor EL-35 制备的含药乳表面有大量油滴, 而用 Tween 20 Tween 80 制备的含药乳外观无显著差别, 因此选择毒性更小的 Tween 80 作为乳化剂

3 第 5 期荣蓉等 : 联苯苄唑乳胶剂的制备及质量考察 221 Table 1 Appearance of blank emulsions with different kinds of emulsifier Emulsifier Tween 20 Tween 80 Tween 85 Cremophor EL-35 Cremophor RH-40 Labrafil Labrasol Appearance of blank emulsions ivory white without oil drops on the surface ivory white without oil drops on the surface ivory yellow with somelarge oil drops on the surface nice blue opalescence unable to form emulsions unable to form emulsions unable to form emulsions 乳化剂用量的选择选择 Tween 80 为乳化剂, 固定油相用量为处方总质量的 10 %, 分别选择乳化剂用量为处方总质量的 1 % 2 % 5 % 10 % 进行乳化结果用量为 1 % 的乳化不完全, 所形成的乳剂有油滴 ; 用量为 2 % 的能够形成乳剂, 但粒径比用量 5 % 的大, 用量为 10 % 时所形成的乳剂黏度较大, 且不稳定, 静置最先分层最后确定乳化剂用量为处方总质量的 5 % 凝胶基质的选择卡波姆凝胶基质除具有很好的黏和性及凝胶性外, 还具有良好的乳化性增稠性助悬性和成膜性, 用此基质制备的凝胶剂, 释药快, 作用迅速, 皮肤渗透性好, 无油腻性, 易于涂部和洗除, 对皮肤和黏膜无刺激中和的卡波姆 940 凝胶的流变性质受离心研磨加温或长期放置的影响不大, 本研究中选择卡波姆 940 为凝胶基质卡波姆的用量以及三乙醇胺的浓度决定了凝胶剂的黏度和其是否具有良好的涂展性考察卡波姆和三乙醇胺的用量, 结果发现三乙醇胺用量过大时, 卡波姆凝胶胶凝度大黏稠, 不利于药物分散其中用量小时, 涂展性不好最终确定卡波姆的用量质量分数为 1 % 三乙醇胺用量质量分数为 0.6 % 时凝胶较为均匀, 且具有良好的涂展性抗氧剂种类和用量的选择由于所加入的油酸易发生氧化造成乳胶剂外观呈现黄色, 因此需加入抗氧剂维生素 C 和枸橼酸等抗氧剂易变黄, 影响制剂外观, 而丁羟基茴香醚等抗氧剂, 可阻滞自氧化反应中链反应的进行, 是一类自身不被消耗的抗氧化剂, 且不影响制剂外观选择丁羟基茴香醚为抗氧剂, 考察丁羟基茴香醚用量分别为处方总质量的 % 0.01 % % 0.02 % 时, 放置 10 d 后发现, 丁羟基茴香醚用量为 % 的颜色略有变色, 而用量为 0.01 % % 0.02 % 的无颜色变化, 所以确定丁羟基茴香醚的用量为处方总质量的 0.01 % 防腐剂的选择乳胶剂中有水相油相, 这些物质易受细菌真菌的侵袭微生物的滋生不仅可以污染制剂, 且有潜在的毒性, 制剂中需加入防腐剂本实验中选用尼泊金乙酯为抑菌剂, 由于其在水中几乎不溶, 因此加入适量丙二醇使其溶解参照药用辅料手册选择尼泊金乙酯用量为处方总质量

4 222 中国药剂学杂志第 6 卷的 0.1 % 处方组成与制备处方联苯苄唑 0.1 g, 油酸 0.5 g, 丁羟基茴香醚 g,tween g, 卡波姆 g, 三乙醇胺 0.06 g, 丙二醇 0.25 g, 尼泊金乙酯 0.01 g, 纯化水 g 制备工艺 1) 称卡波姆 g 加入纯化水 4.58 g, 溶胀一夜备用 ; 2) 称油酸 0.5 g, 再向其中加入药物联苯苄唑 0.1 g, 乳化剂 0.25 g, 油溶性抗氧剂丁羟基茴香醚 g, 水浴加热 70 溶于油相中 ; 3) 称纯化水 g, 作为水相, 在水浴加热 70 条件下, 将水相缓慢滴入油相中, 同时进行磁力搅拌, 搅拌速度 r min -1, 制备成初乳 ; 4) 将所得初乳进行探头超声, 功率 600 W, 超声时间 3 s, 间隔时间 3 s, 超声 5 min, 得终乳 ; 5) 将制备好的终乳加入到溶胀好的卡波姆基质中, 加入三乙醇胺 0.06 g, 混合均匀 ; 6) 将 0.01 g 的尼泊金乙酯溶于 0.25 g 丙二醇中, 加入到上述乳胶剂中即得 2.2 联苯苄唑乳胶剂中主药含量测定采用 HPLC 法色谱条件选择色谱柱 :ODS-C 18 柱 (4.6 mm 200 mm,5 μm); 流动相 : 甲醇 - 水 - 三乙胺 ( 体积比 84:16:0.2); 检测波长 :254 nm; 柱温 :30 ; 流速 :1 ml min -1 进样量:20 μl 溶液的制备对照品溶液精密称取联苯苄唑对照品 50 mg, 置 100 ml 量瓶中, 用甲醇溶解并加至刻度, 精密量取 1 ml 置 10 ml 量瓶中, 用甲醇稀释至刻度, 摇匀, 得 50 mg L -1 的对照品溶液供试品溶液精密称取联苯苄唑乳胶剂适量 ( 约相当于联苯苄唑 50 mg), 置 100 ml 量瓶中, 加甲醇至刻度, 超声, 使乳胶剂中联苯苄唑充分溶解, 过滤, 吸取续滤液 1 ml, 用甲醇稀释至 10 ml, 摇匀, 即得供试品溶液联苯苄唑含量测定取自制的样品 3 批, 按将条方法制备对照品溶液和供试品溶液, 分别进样测定, 记录色谱图按外标法计算含量, 结果分别为 101.2% 99.6% 100.3%, 均在 90.0%~110.0% 之间, 参照市售联苯苄唑乳膏剂的质量标准, 含量合格 2.3 初步稳定性试验分别考察样品在加热冷冻 ( ) 光照(4 000 lx±500 lx) 离心(3 500 r min -1, 30 min) 等影响因素条件下的稳定性试验结果表明, 样品在 40 4 或光照条件下放置 5 10 d 外观

5 第 5 期荣蓉等 : 联苯苄唑乳胶剂的制备及质量考察 223 无显著变化 ;-20 条件下放置 5 10 d, 样品成冰冻状态 ;3 500 r min -1 离心 30 min 后外观未见分层含量测定结果见表 2, 结果表明, 所制备的联苯苄唑乳胶剂外观性状含量稳定 Table 2 Stability of bifonazole emulgel at different conditions Influencing factor t/d w/% Illumination (4 000±500) lx Centrifugalization(3 500 r min -1 ) 30 min 皮肤刺激性试验取健康家兔 4 只, 体质量 2.0~2.5 kg, 于给药前 24 h 用理发推和剃胡刀剃除背部脊柱两侧毛, 每侧面积约为 64 cm 2, 将 l.0 g 供试品 ( 自制的联苯苄唑乳胶剂和酮洛芬乳胶剂 ) 均匀涂抹于家兔一侧背上, 做好标记 ; 另一侧涂等量的空白乳胶剂以作对照用二层纱布覆盖, 胶布封闭固定 24 h 后用温水去除残留乳胶, 去除乳胶后, 于 h 观察涂抹部位有无红斑和水肿的情况结果表明, 联苯苄唑乳胶剂是安全的, 无皮肤刺激性 2.5 大鼠体外经皮渗透性及皮肤滞留量考察采用改进的 Franz 立式扩散池, 扩散池内径 0.75 cm, 有效扩散面积 1.77 cm 2, 容积 8 ml 大鼠皮肤的处理实验使用的皮肤为雄性 Wistar 大鼠的腹部皮肤首先用浓度为 200 g L -1 乌拉坦溶液 (4 ml kg -1 ) 腹腔注射使大鼠麻醉, 用理发推和剃胡刀剃除大鼠腹部毛, 断颈处死大鼠, 用手术剪从腹部取下 4 块皮肤并除去皮肤上的脂肪及多余组织, 用重蒸水和生理盐水清洗皮肤后将其放在 -20 条件下保存并在 7 d 内使用在每次实验前将皮肤用重蒸水和 ph 7.4 磷酸盐缓冲液清洗 1 次, 用滤纸吸干多余水分后用于实验接受液的选择在体外经皮实验中, 为了模拟皮肤的生理环境, 一般采用生理盐水做接受液因联苯苄唑水溶性差, 为了保持其漏槽条件, 本研究中选用体积分数为 40% 的 PEG 400 水溶液做接受液体外经皮渗透性试验取处理好的大鼠皮, 分别用铁夹固定于改进的 Franz 立式扩散池的接受器上口, 加入体积分数为 40 % 的 PEG400 水溶液 8 ml, 使接受液与鼠皮充分接触, 无气泡分别加入自制联苯苄唑

6 224 中国药剂学杂志第 6 卷乳胶剂市售联苯苄唑凝胶剂乳膏剂各 1.0 g, 使制剂与鼠皮充分接触无气泡将此装置于 32.0 恒温水浴, 并磁力搅拌, 分别在 h 取出 2 ml 接受液, 同时补加同体积的空白接受液, 按 HPLC 法测定不同时间接受液的药物浓度, 并求出累积透过量以时间 (t) 为横坐标, 累积透过量 (Q) 为纵坐标作图, 得药物体外经皮渗透曲线, 见图 1 可以看出, 虽然乳胶剂的累积透过量要大于凝胶和乳膏, 但三者的药物累积透过量总体都很小, 这会使血液中的药量极低, 不良反应小, 有利于皮肤病的治疗 7 6 Q /(µg cm -2 ) t /h Emulgel; Gel; Cream Fig. 1 Permeation profiles of BFZ through excised rat skin from three different preparations(n=3) 皮肤滞留量试验将 12 h 停止实验时取下的皮肤, 反复用生理盐水冲洗, 用甲醇擦去皮肤表面制剂, 剪去周边部分, 称质量, 剪碎, 加入甲醇 10 ml, 密封浸泡 24 h 后,600 W 超声 3 s, 间歇 3 s, 超声 10 min, 将皮肤打碎匀化, r min -1 离心 15 min, 取上清液, 用 0.45 μm 的微孔滤膜过滤, 弃去初滤液, 取续滤液, 得大鼠体外皮肤联苯苄唑乳胶剂市售乳膏剂和凝胶剂的甲醇提取液, 用 HPLC 法测定含量, 结果见表 3 Table 3 Retention content(c)of three different preparations in rat skin after 12 h application(n=3) Preparation c 1 /(μg g -1 ) c 2 /(μg g -1 ) c 3 /(μg g -1 ) c mean±s /(μg g -1 ) Emulgel ±23.47 Gel ±28.77 Cream ±14.54 由于不同大鼠的鼠皮差异较大, 因此在比较不同制剂时采用同一大鼠的鼠皮可以看出联苯苄唑乳胶剂的大鼠体外皮肤滞留量与市售凝胶剂和乳膏剂相比有显著提高 (P<0.05) 3 讨论 a. 联苯苄唑具有水不溶性, 在制备成凝胶剂时, 通常需加入大量的丙二醇聚乙二醇乙

7 第 5 期荣蓉等 : 联苯苄唑乳胶剂的制备及质量考察 225 醇等溶剂 [4], 长时间高温加热使其溶解, 影响了药物的稳定性, 长期放置后凝胶基质卡波姆吸水, 导致药物析出, 制剂粒度增大, 影响疗效, 因此考虑制备成乳胶剂溶胀后的卡波姆基质也可以作为水相的一部分加入到油相中进行乳化, 再用三乙醇胺调 ph 值, 但制得的乳胶剂外观较粗糙粒度大 ; 若将卡波姆基质先加入三乙醇胺调 ph 值, 再与所得的乳剂混合, 由于二者黏度差距较大, 会导致混合不均匀, 剂量不准确本研究中所制备的乳胶剂, 其中油相油酸易氧化, 因此加入了油溶性抗氧剂丁羟基茴香醚 ; 抑菌剂尼泊金乙酯不易溶于水, 因此考虑先将其溶于丙二醇, 再混合到制剂中 b. 所制备的联苯苄唑乳胶剂与传统的乳膏基质相比外观更细腻涂布性好皮肤滞留量较大 ; 与外用溶液剂相比较, 在皮肤表面的停留时间长, 是一种使用更方便的剂型 ; 与普通水凝胶剂相比, 能够较好地包裹亲油性药物, 作为难溶性药物的载体, 对药物有增溶作用, 使药物具有高度分散性 c. 体外经皮渗透性实验结果显示, 联苯苄唑在乳胶剂中的累积透过量要显著大于凝胶剂和乳膏剂, 这是由于乳胶剂中的油相, 能够使药物更易进入角质层此外, 作为油相的油酸为促渗剂, 增加了药物的皮肤渗透性, 但三者的药物累积透过量总体都很小, 说明能够进入血液中的药量极低, 不良反应小对制剂的皮肤滞留量研究显示, 联苯苄唑乳胶剂与市售联苯苄唑乳膏剂和凝胶剂相比能显著提高药物在皮肤中的滞留量, 有利于皮肤病的治疗 4 结论所制备的联苯苄唑乳胶剂兼有乳剂和凝胶的优点, 外观细腻富有光泽, 无油腻感, 极易涂布和洗除, 制剂稳定无刺激性, 且药物透过皮肤的量小, 但 12 h 大鼠体外皮肤滞留量显著大于市售联苯苄唑乳膏剂和凝胶剂该制剂制备工艺可行, 质量稳定, 是一种优良安全的新型联苯苄唑局部外用制剂参考文献 : [1] 王斌, 王宏图. 局部抗真菌药联苯苄唑 [J]. 中国新药与临床杂志, 1999, 18(4): [2] 于波, 屈毅. 局部抗真菌药联苯苄唑 [J]. 黑龙江医药, 2003, 16(4): 306. [3] 康钦树, 钟惠平, 田应敏. 联苯苄唑乳膏的制备及含量测定 [J]. 中国医院药学杂志, 1994, 14(12): 568. [4] 万新祥, 曾凡林, 刘海华. 复方联苯苄唑凝胶剂的研制与质量评价 [J]. 中国医院药学杂志, 2004, 24(4): Preparation and characterization of bifonazole emulgel RONG Rong, CHEN Ji-ping, LIU Shu-qin, XU Xiao-di, LI He, HE Zhong-gui (School of Pharmacy, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang , China) Abstract: Objective To prepare bifonazole emulgel and investigate its properties in order to increase

8 226 中国药剂学杂志第 6 卷 the topical accumulation of the drug in the skin and decrease its systemic absorption. Methods Ultrasonic emulsifying method was applied to prepare bifonazole oil-in-water emulsions, then oil-in-water emulgel was prepared by dispersing the emulsion into carbomer 940 containing base. The properties of bifonazole emulgel, including drug content, preliminary stability, skin irritation, the permeability of the drug across the excised rat skin from the preparation and the retention capacity of the preparation in rat skin after 12 h application, was investigated. Results The prepared emulgel was glossy, non-greasy, easy to spread and remove, stable without irritation. The permeability of drug across the excised rat skin was poor, in contrast, its retention in rat skin was obviously greater than that of the commercially available preparations including cream and gel. Conclusions The preparation techniques of emulgel is feasible. The emulgel is a superior, stable and safe new preparation for topical external application. Key words: pharmaceutics; external application emulgel; ultrasonic emulsifying method; bifonazole; quality study ( 责任编辑高明 )

g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min

g ml 10% ph 色谱条件 kinetex C μm 100 A 4. 6 mm 150 mm 25 5 μl A B 10 mmol /L ml /min 25 4 2013 8 监测技术 5 1 2 1 ( 1. 江苏省疾病预防控制中心, 江苏南京 210009; 2. 南京医科大学第二附属医院, 江苏南京 210029) 5 Phenomenex kinetex C 18 2. 6 μm 4. 6 mm 150 mm 10 mmol /L ph 2. 5 + 60 40 DAD 280 nm 5 20. 0 mg /L ~ 100 mg /L 0.