Microsoft Word doc

Transcription

1 目录 (2012 年第 2 期总 259 期 ) 年度报告 2011 年梅毒诊断试剂临床评估结果 年全国梅毒血清学检测室间质量评价活动总结 年全国淋球菌分离鉴定室间质评结果分析 年全国沙眼衣原体检测室间质量评价 年全国淋球菌耐药监测实验室药敏试验室间质评工作总结 年全国淋球菌耐药监测工作总结 学术论坛 HSV-2 与 HIV-1 感染相关性研究进展... 口腔黏膜渗出液在 HIV 梅毒抗体检测中的研究进展 泌尿生殖道沙眼衣原体感染流行病学研究进展 沙眼衣原体耐药性的分子机制的研究新进展 Taqman MGB 生殖支原体荧光 PCR 检测方法的建立及应用 生殖支原体感染及其抗菌药物研究现状 年大连市淋球菌耐药结果分析 例患者检测单纯疱疹病毒 Ⅱ 型抗体的结果分析 消息报道 性病实验室常用检测方法操作手册及教学 VCD 简介 实验室质控数据及淋球菌耐药数据的网络化管理 全国性病实验室工作要点及考核指标研讨会在南京召开 蒙古国国家传染病预防控制中心性病艾滋病实验室专业人员来我中心学习访问... 32

2 2011 年梅毒诊断试剂临床评估结果 中国疾病预防控制中心性病控制中心魏万惠王红春尹跃平韩燕 根据卫生部 2011 年性病防治任务的工作要求, 中国 CDC 性病控制中心组织的梅毒诊断 试剂临床评估活动于 2011 年 10~12 月进行, 评估结果报告如下 : 一 材料和方法 ( 一 ) 参加单位 本次评估由性病控制中心性病参比实验室负责组织实施, 广西壮族自治区皮肤病防治研 究所 北京市疾病预防控制中心 云南省疾病预防控制中心 甘肃省疾病预防控制中心 浙 江省皮肤病防治研究所等单位共同参与完成 ( 二 ) 血清盘构成 1. 非梅毒螺旋体血清学试验 : 由 300 份样本构成 2. 梅毒螺旋体血清学试验 : (1) 卫生部生物制品检定所 : 由 10 份阳性参比品 20 份阴性参比品 4 份灵敏度参比 品和 10 份精密度参比品组成 (2) 临床样本血清盘由 300 份样品组成 ( 三 ) 评估试剂 :6 种非梅毒螺旋体血清学试验检测试剂和 18 种梅毒螺旋体血清学试 验检测试剂由市场随机购买, 其试剂名称及生产厂家见表 1 2 表 年梅毒血清学诊断试剂临床质量评估用试剂名称和生产厂家 ( 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 ) 试剂名称 试剂厂家 ( 试剂简称 ) 批号 有效期 梅毒快速血浆反应素环状卡片 上海科华生物技术有限公司 试验诊断试剂 (RPR) ( 上海科华 RPR) 梅毒甲苯胺红不加热血清试验 上海荣盛生物技术有限公司 诊断试剂盒 (TRUST) ( 上海荣盛 TRUST) 梅毒甲苯胺红不加热血清试验 北京金豪制药有限公司 诊断试剂盒 (TRUST) ( 北京金豪 TRUST) 梅毒甲苯胺红不加热血清试验 北京万泰生物药业有限公司 M 诊断试剂盒 (TRUST) ( 北京万泰 TRUST) 梅毒甲苯胺红不加热血清试验 英科新创 ( 厦门 ) 科技有限公司 诊断试剂盒 (TRUST) ( 厦门英科 TRUST) 梅毒甲苯胺红不加热血清试验 郑州安图绿科生物工程有限公司 诊断试剂盒 (TRUST) ( 郑州安图 TRUST) 1

3 表 年梅毒诊断试剂临床质量评估用试剂名称和生产厂家 ( 梅毒螺旋体抗原血清学试验 ) 试剂名称 试剂厂家 ( 试剂简称 ) 批号 有效期 梅毒螺旋体抗体诊断试剂 上海科华生物技术有限公司 (ELISA-TP) ( 上海科华 ELISA) 梅毒螺旋体抗体胶体金诊断试剂 艾康生物技术 ( 杭州 ) 有限公司 (RT-TP) ( 杭州艾康 RT) 梅毒螺旋体抗体酶联免疫诊断试 北京华大吉比爱生物技术有限 剂盒 (ELISA-TP) 公司 ( 北京华大 ELISA) 梅毒螺旋体抗体诊断试剂 北京金豪制药有限公司 (ELISA-TP) ( 北京金豪 ELISA) 梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒 北京科美东雅生物技术有限公司 ( 化学发光法 ) ( 北京科美发光 ) 梅毒螺旋体抗体诊断试剂 北京科卫生物技术有限公司 (ELISA-TP) ( 北京科卫 ELISA) 梅毒螺旋体抗体诊断试剂 北京万泰生物药业有限公司 N (ELISA-TP) ( 北京万泰 ELISA) 梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒 北京万泰生物药业有限公司 (RT-TP) ( 北京万泰 RT) 梅毒螺旋体抗体诊断试剂 北京现代高达生物技术有限 (ELISA-TP) 公司 ( 北京现代 ELISA) 梅毒螺旋体抗体检测试纸条 北京蓝十字有限公司 剂盒 (ELISA-TP) ( 北京蓝十字 RT) 梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒 潍坊三维生物工程集团有限 (ELISA-TP) 公司 ( 潍坊三维 ELISA) 梅毒螺旋体抗体酶联免疫诊断试 英科新创 ( 厦门 ) 科技有限公司 剂盒 (ELISA-TP) ( 厦门英科 ELISA) 梅毒螺旋体抗体诊断试剂 英科新创 ( 厦门 ) 科技有限公司 (RT-TP) ( 厦门英科 RT) 梅毒螺旋体抗体诊断试剂 珠海丽珠试剂有限公司 (RT-TP) ( 珠海丽珠 ELISA) 梅毒螺旋体抗体诊断试剂 Standard Diagnostics,Inc.( 韩国 ) (RT-TP) ( 韩国 SD-RT) 梅毒螺旋体抗体诊断试剂 广州万孚生物技术有限公司 W C (RT-TP) ( 广州万孚 RT) 梅毒螺旋体抗体诊断试剂 Inverness Medical Japan Co.,Ltd #1B (RT-TP) ( 雅培 RT) 梅毒螺旋体抗体诊断试剂 Lab21 Healthcare Ltd.( 美国 ) ( 血球凝集法 ) ( 美国 TPHA) ( 四 ) 参比试剂 1. 非梅毒螺旋体血清学试验 : 美国 BD 公司生产的 RPR 试剂 2. 梅毒螺旋体血清学试验 : 日本富士瑞必欧株式会社生产的 TPPA 试剂, 当检测结果 2

4 与参考结果不一致时, 选择欧蒙医学实验诊断股份公司 ( 德国 ) 生产的抗梅毒螺旋体抗体检 测试剂盒 ( 免疫印记法 ) 进行确认 ( 五 ) 样品的检测 实验前, 所有参加本次评估的人员均进行过统一培训 操作时采用统一的技术方法 同 一仪器设备 同一时间 由同一批检测人员严格按各试剂说明书操作要求进行 采用同步盲 法测试原则以保证结果的真实可靠 二 评估结果 ( 一 ) 本次评估的非梅毒螺旋体血清学试验用试剂敏感性和特异性及功效率由高到低排 列结果见表 3 表 3 非梅毒螺旋体血清学试验用试剂评估结果 试剂简称 敏感性 (%) 特异性 (%) 功效率 (%) Kappa 值 上海科华 RPR 上海荣盛 TRUST 北京金豪 TRUST 北京万泰 TRUST 厦门英科 TRUST 郑州安图 TRUST ( 二 ) 本次评估的梅毒螺旋体血清学试验用试剂敏感性和特异性及功效率由高到低排列 结果见表 4 表 4 梅毒螺旋体血清学试验用试剂评估结果 方法 试剂简称 敏感性 (%) 特异性 (%) 功效率 (%) Kappa 值 北京华大 北京现代 厦门英科 ELISA 北京科卫 潍坊三维 北京金豪 珠海丽珠 北京万泰 上海科华 化学发光 北京科美 凝集法 美国 TPHA 杭州艾康 免疫层析 广州万孚 快速试验 北京万泰 北京蓝十字 雅培 韩国 SD 厦门英科

5 三 讨论和分析 本次评估的非梅毒螺旋体血清学检测用试剂,6 种试剂的敏感性和特异性分别在 84.9%~97.2% 和 79.9%~98.5% 之间 总体质量基本同于 2010 年 定量检测中不同厂家的 差别小于 2010 年, 没有强阳性 (RPR 滴度 >1:8) 标本漏检 而非梅毒螺旋体抗原血清学检 测方法中 RPR 和 TRUST 实验要求反应卡片圆圈直径为 18mm, 所加抗原量为 17 微升 (60 ±1 滴 / 毫升 ), 而在我们评估的同一批次的试剂中, 每盒试剂抗原滴管的滴加量差别非常大, 尤其是使用一次性滴管做抗原滴管的试剂, 同一厂家同一批次试剂盒中抗原的滴加量的误差 达到 19.51%(15.15~20.00 微升 ), 不同厂家抗原量的误差高达 46.34%(12.3~24.4 微升 ) 这些问题将给试剂使用者在实际工作中带来很多麻烦 应引起相关试剂生产厂家的重视并对 其产品质量加以改善 非梅毒螺旋体血清学检测用试剂盒抗原滴数和纸卡圆圈直径见表 5 表 5 非梅毒螺旋体血清学检测用试剂盒抗原滴数和纸卡圆圈直径 厂 家 抗原滴管 抗原滴数 ( 滴数 / 毫升 ) 纸卡圆圈第一盒第二盒第三盒第四盒直径 (mm) 上海科华 滴管 + 针头式 上海荣盛 滴管 + 针头式 郑州安图 滴管 + 针头式 北京金豪 一次性滴管 北京万泰 一次性滴管 厦门英科 一次性滴管 在梅毒螺旋体血清学检测血清盘检测中使用的 ELISA 和发光试剂的敏感性和特异性分别在 92.0%~96.4% 和 98.4%~99.5% 之间, 敏感性和特异性均略低于 10 年,TPHA 试剂的敏感性和特异性均低于上两种试剂, 快速检测试剂的敏感性和特异性为 92.0%~97.3% 和 97.3%~100.0% 快速试剂的敏感性和特异性均比 2010 年高 10 种 ELISA 及化学发光试剂 TPHA 试剂和 5 种快速试剂均出现阳性漏检 在卫生部生物制品检定所梅毒螺旋体抗体检测试剂参比品血清盘检测中, 各有 4 种 ELISA 试剂阳性样本漏检,1 种 ELISA 试剂灵敏度参比品阴性样本假阳性 ; 而精密性参比品的检测, 有 3 种试剂样本重复检测的误差较大 2011 年全国梅毒血清学检测室间质量评价活动总结 中国疾病预防控制中心性病控制中心魏万惠王红春尹跃平 为贯彻落实卫生部 中国预防与控制梅毒规划 ( 年 ) 及 关于进一步加强性病监测工作 的精神, 加强全国梅毒检测实验室质量管理工作, 中国疾病预防控制中心性病控制中心参比实验室组织的 2011 年全国性病实验室梅毒血清学检测室间质量评价活动于 4

6 2011 年 4~8 月进行, 现将活动结果总结如下 : 一 方法 : ( 一 ) 参加单位 : 本次活动由中国 CDC 性病控制中心正式发文, 性病参比实验室具体实施 参加单位为省级性病中心实验室 全国淋球菌耐药监测点实验室 全国性病疫情检测哨点辖区内两家医疗机构及部分自愿参加的性病检测实验室, 共 231 家 ( 二 ) 质评方法 1. 质控品的准备 : 质控品制备用血浆来源于本实验室库存标本, 经灭活 离心 过滤处理后,-20 冰箱备用 2. 质控品的发放 : 本次质评活动的质控样本为 5 份, 每支质控品含量 300μl, 质控品的包装采用 WHO 要求的三级包装, 随质控品发放的还有本次活动的具体要求与说明和结果回报表 3. 质控品的检测质控品与常规标本处理方式相同 按照实验室的常规检测方法在规定的时间内进行检测并将检测结果回报性病控制中心 4. 质控样品预期值的确定 : 每份质控样品根据 80% 以上参加单位的报告结果为依据, 确定其预期值 各参加单位的结果与预期值进行比较 ( 三 ) 评分标准 : 各参加单位按活动要求对质控品进行检测, 每份样品的检测结果与预期结果一致得 20 分, 否则为 0 分,5 份样品满分为 100 分 考核成绩由样品检测结果 ( 占 80%) 和表格填写完整性 ( 占 20%) 综合而成 未在本次活动规定时间内将检测结果上报性病控制中心的单位成绩为 0 分 二 质评结果 : ( 一 ) 本次活动共发放质控品 252 套 ( 每套有 5 份考核样本 ), 收到结果反馈单位 231 家, 参加单位地区分布见表 1 表 年全国性病实验室梅毒血清学检测室间质量评价活动地区分布情况省份上海陕西甘肃宁夏天津重庆广西湖北北京参加单位数 5(4)* 8(7) 10(9) 5(4) 3(2) 5(4) 9(8) 11(10) 3 (2) 省份海南广东江苏江西辽宁安徽浙江山西云南参加单位数 5(4) 14(12) 15(12) 11(10) 6(4) 11(10) 10(8) 8(6) 9(8) 省份吉林河北黑龙江湖南参加单位数 7(6) 9(8) 7(6) 11(10) 省份 ** 山东河南福建青海内蒙古新疆四川贵州西藏参加单位数 11(10) 7(6) 11(5) 4(3) 4(3) 7(3) 4(3) 3(2) 1(0) *: 括号内为国家性病监测点辖区内医疗机构数 **: 未完成国家性病监测点辖区内医疗机构参加质控的省份 5

7 ( 二 )2011 年全国性病实验室梅毒血清学检测室间质量评价活动考核成绩见表 2 表 年全国性病实验室梅毒血清学检测室间质量评价活动考核成绩 综合得分 参加单位数 100 分 80~99 分 80 分 80 分 所有参加单位 (35.1) 141(61.0) 9(3.9) 222(96.1) 省中心实验室 (%) 31 15(48.4) (51.6) 31(100.0) 国家淋球菌耐药点 (%) 26 12(46.2) 14(53.8) 0 26(100.0) 国家监测点医疗机构 (%) (32.3) 119(63.0) 9(4.8) 180(95.2) ( 三 ) 2011 年全国性病实验室梅毒血清学检测室间质量评价活动符合率见表 3 表 年全国性病实验室梅毒血清学检测室间质量评价活动符合率 梅毒非特异性抗体检测 * 梅毒特异性抗体检测 参加单位数定性符合率 (%) 定量符合率 (%) 符合率 (%) 所有参加单位 省中心实验室 国家淋球菌耐药点 国家监测点医疗机构 * *3 家单位未参加梅毒非特异性抗体项目的检测 *3 家单位未参加梅毒特异性抗体项目的检测 ( 四 ) 2011 年全国性病实验室梅毒血清学检测室间质量评价活动试剂符合率见表 4 表 年全国性病实验室梅毒血清学检测室间质量评价活动试剂符合率特异性抗体检测非特异性抗体检测试剂使用单位数符合率 (%) 试剂使用单位数定性符合率 (%) 定量符合率 (%) TPPA TRUST ELISA 其他 RPR *4 家单位未参加梅毒非特异性抗体项目的检测 *3 家单位未参加梅毒特异性抗体项目的检测三 问题和建议 : 根据 2011 年卫生部性病防治任务工作的要求, 中国疾病预防控制中心性病控制中心在组织实施 2011 年全国性病实验室室间质量评价活动时要求各省组织国家级性病监测点辖区内提供性病诊疗服务的两家医疗机构参加质评活动, 并将此作为 2011 年度各省性病防治工作的考评指标之一 从今年各单位结果反馈的情况来看,9(29%) 个省未能完成组织相关医疗机构参加质评活动要求 其中一个省没有一家性病监测点或相关医疗机构参加,4 个省只有性病监测点负责机构而没有相关医疗机构参加 针对这一情况, 性病参比实验室已于今年举办一期性传播疾病实验室诊断技术培训班, 为各省实验室培训师资, 以提高这些省中心实验室的自身综合能力, 并举办了两期全国性病监测点医疗机构性病实验室检测技术培训班, 在加强性病监测点相关医疗机构性病实验室检测能力的同时也增加了各省性病实验室网 络的覆盖范围 6

8 在所有参加单位中, 非梅毒血清学试验定性检测项目的符合率低于 2010 年, 而定量检测项目的符合率则略高于 2010 年, 梅毒血清学试验检测项目的符合率基本同于 2010 年, 考核成绩大于 80 分的单位和 2010 年相同, 均为 96.1%, 但由于 2010 年的参加单位为 231 家, 远大于 2010 年的 128 家, 所以 2010 年考核单位获得满分的单位比 2010 年多了 50 家 所以虽然合格率相同, 但 2011 年的总体成绩好于 2010 年, 但由于许多单位是今年第一次参加我们组织的质控, 考核成绩低于 80 分的单位有所增加, 因此在今后的工作中加强各参加单位的相关培训, 使其质量控制和质量管理意识及自身能力进一步得到加强 在省级性病中心实验室中, 今年 31 个省中心实验室全部参加了质控, 从参加数量和满分率均好于 2010 年 梅毒非特异性抗体定性和定量检测项目均高于 2010 年, 但梅毒特异性抗体检测略低于 2010 年, 出现了阳性漏检的情况 在国家淋球菌耐药点单位中, 今年的梅毒非特异性抗体定性和定量检测及梅毒特异性抗体检测项目的符合率均好于 2010 年, 满分率由 7 家增加到 12 家 在国家性病监测点单位中, 今年要求各省组织国家级性病监测点辖区内提供性病诊疗服务的两家医疗机构参加质评活动, 在回报结果的 189 家单位中, 有 7 (3.7%) 家单位只能做一个项目的检测, 如何提高这些单位的检测水平是我们在今后的工作中需要关注 57 家单位参加过我们质控活动的单位考核成绩均在 80 分以上, 这也进一步说明这些单位通过参加性病实验室室间质量评价活动其综合能力得到了提高 本次活动中, 梅毒非特异性抗体检测项目两种试剂的使用率基本同于 2010 年, 而 TRUST 试剂定性项目符合率低于 2010 年, 定量项目高于 2010 年,RPR 试剂定性和定量的符合率均高于 2010 年, 两种试剂均出现假阳性结果 特异性抗体检测项目 ELISA 试剂的使用率由 14.3% 上升到 33.8% 有较大幅度的增长, 其符合率基本与 2010 年相同, 但特异性抗体检测项目使用的试剂中均有阳性漏检的情况 本次活动在结果回报表填写中有 121(52.4%) 家单位出现表格填写不完整的情况,18 (7.9%) 家单位的结果报告不规范, 参比实验室在今后的工作中既要重视专业技能的培训也要加强专业人员工作责任心等综合素质的相关培训 2011 年全国淋球菌分离鉴定室间质评结果分析 中国疾病预防控制中心性病控制中心 戴秀芹 为了解我国目前各级性病医疗卫生机构对淋球菌的分离鉴定能力, 中国疾病预防控制中心性病控制中心依据中华人民共和国卫生部颁布的 临床实验室室间质量评价要求 的标准, 于 2011 年继续对全国各级性病医疗卫生机构开展淋球菌分离鉴定室间质评活动, 现将室间质评结果报告如下 : 一 方法 1. 发放对象全国共有 203 家性病医疗卫生机构参加了本次室间质评活动, 其中国家 7

9 级淋球菌耐药监测点 / 省级中心实验室 34 家 国家级性病监测点 / 辖区内医疗卫生机构 4 家 自愿参加的性病医疗卫生机构 5 家 2. 样本的制备与组成 由中国疾病预防控制中心性病控制中心统一制备, 采用冷冻干 燥法 将待发的质评样本大量增菌后, 制成冻干品, 同时对质评样本的状态进行检测, 主要 包括样本的均匀性 稳定性及无污染试验等, 以保证质评样本的质量 质评样本由 5 份样 本组成, 分别是 2 份纯淋球菌 1 份混合菌和 2 份非淋球菌, 样本的编号分别为 考核方法各级性病医疗卫生机构收到质评样本后, 按照质评说明与要求进行试验 参照淋病诊断标准 WS , 由常规实验人员进行操作, 对淋球菌进行分离鉴定, 各实 验室应在规定的时间内进行实验, 并将实验结果回报中国疾病预防控制中心性病控制中心 4. 样本预期结果 以本实验室的鉴定结果作为参考标准, 本实验室对发放的 5 份质评 样本均按淋病诊断标准 WS 进行了鉴定 预期结果分别为 :110101( 纯淋球菌 ) ( 纯淋球菌 ) ( 混合菌 ) ( 非淋球菌 ) ( 非淋球菌 ) 5. 评分标准 考核满分为 100 分, 其中结果回报表的填写完整性占 20 分, 质评样本的 考核占 80 分 每份质评样本鉴定结果与预期结果一致者得 分, 不一致者得 0 份 考核成 绩 80 分为合格, <80 分为不合格 二 结果 1. 结果回报 本次共对 252 家单位发放了质评样本, 除了贵州省外, 全国 30 个省 自治区 直辖市各级性病医疗卫生机构共 203 家单位回报了结果, 其结果的总回报率为 80.56%(203/252), 各级性病医疗卫生机构质评结果回报情况见表 1 表 家性病医疗卫生机构淋球菌分离鉴定室间质评结果回报 参评实验室类别 发放单位 ( 家 ) 回报单位 ( 家 ) 结果的回报率 (%) 国家级淋球菌耐药监测点 / 省级中心实验室 (34/41) 国家级性病监测点 / 辖区内医疗卫生机构 (4/202) 自愿参加的性病医疗卫生机构 (5/9) 合计 (203/252) 2. 质评综合考核成绩 在 203 家参评单位中, 80 分的有 3 家, 合格率为 80.30% (3/203) 各参评实验室室间质评综合考核结果见表 2 表 家参评单位淋球菌分离鉴定室间质评综合考核成绩 综合考核成绩 ( 分 ) 参评实验室类别 参评数 <60 80(%) 国家级淋球菌耐药监测点 (88.24) / 省级中心实验室 国家级性病监测点 (78.05) / 辖区内医疗卫生机构 自愿参加的性病医疗卫生机构 (71.43) 合计 (%) (53.69) 54(26.60) 24(11.82) (7.88) 3 (80.30) 8

10 3. 质评样本的正确率在 203 家参评单位中,2 株纯淋球菌的鉴定结果正确率分别为 82.76%(8/203) 87.68%(178/203); 混合菌的鉴定结果正确率为 69.46%(141/203);2 株非淋球菌的鉴定结果正确率分别为 86.21%(175/203) 96.06%(195/203) 结果见表 3 表 家参评单位淋球菌分离鉴定室间质评结果 样本编号 样本预期结果 参评单位 ( 家 ) 结果正确单位 [ 家 (%)] 纯淋球菌纯淋球菌混合菌非淋球菌非淋球菌 (82.76) 178(87.68) 141(69.46) 175(86.21) 195(96.06) 4. 检测方法的符合率 203 家参评单位中, 采用不同检测方法的开展率及结果的正确 率见表 4 表 家参评单位室间质评不同检测方法的结果 试验方法 参评单位 ( 家 ) 开展率 [ 家 (%)] 结果正确单位 [ 家 (%)] 直接镜检法 203 3(1.48) 0(0.00) 培养法 + 初步鉴定试验 (23.65) 25(52.08) 培养法 + 初步鉴定试验 + 确证试验 (73.40) 81(54.36) 核酸扩增试验 203 2(0.99) 2(100.00) 快速抗原检测 203 1(0.49) 0(0.00) 5. 检测试剂的符合率 203 家参评单位中, 不同检测试剂的使用及结果的正确率见表 5 表 家参评单位室间质评不同检测试剂的结果 试剂类型 参评单位 ( 家 ) 使用单位 [ 家 (%)] 结果正确单位 [ 家 (%)] 自配培养基 (12.81) (61.54) 商品化培养基 (74.38) 82(54.30) 核酸扩增试验试剂盒 203 2(0.99) 2(100.00) 快速抗原检测试剂盒 203 1(0.49) 1(0.00) 三 问题和建议室间质量评价是权威机构或上级业务部门利用实验室间的比对试验来确定实验能力的一种技术活动, 在实验室认可领域中越来越受到国际实验室认可组织及各国实验室认可组织的重视, 成为实验室认可活动中不可或缺的一项重要内容 其用途主要包括八个方面 :1 识别实验室间的差异, 评价实验室的检测能力 ;2 识别问题并采取相应的改进措施 ;3 改进分析能力和实验方法 ;4 确定重点投入和培训需求 ;5 实验室质量的客观证据 ;6 支持实验室认可 ;7 增加实验室用户的信心 ;8 实验室质量保证的外部监督工具 本次室间质评活动全国共有 203 家单位参加 从结果回报来看, 省份的参与率达 96.78% (30/31) 结果的总回报率达 80.56%(203/252), 分别较 2010 年室间质评活动提高了 9.68% 13.89%, 尤其是国家级性病监测点 / 辖区内医疗卫生机构结果的回报率提高较明显, 提高率 9

11 达 19.62% 表 2 结果表明, 在 203 家参评单位中, 质评的综合考核成绩 80 分的有 3 家, 合格率为 80.30%(3/203), 较 2010 年室间质评活动的合格率降低了 6.74% 通过对参评单位的回访, 分析合格率降低的原因 :1 部分参评单位首次参加此项活动, 对室间质评工作的重要性认识不足 ;2 在开展的性病检测项目中, 未开展淋球菌培养检测 ; 3 缺乏相关的实验技术人员 ;4 未掌物相应病原体的检测方法和相关的试剂 质评活动中合格率最高的是国家级淋球菌耐药监测点 / 省级中心实验室, 合格率达 88.24%(30/34), 而国家级性病监测点 / 辖区内医疗卫生机构及自愿参加的性病医疗卫生机构的合格率则明显较低 表 3 结果表明,2 株纯淋球菌和 2 株非淋球菌的鉴定结果正确率较高, 均在 80% 以上, 而混合菌的结果鉴定正确率只有 69.46%(141/203), 鉴定的难度相对较大 质评样本正确率的高低与检测的方法 使用的试剂以及实验人员的技术经验等密切相关 表 4 结果表明, 使用分离培养法的实验室有 197 家, 占总参评数的 97.04%(197/203), 而使用非培养法的只有 6 家, 分别为直接镜检法 核酸扩增试验和快速抗原检测, 占总参评数的 2.96%(6/203) 分离培养后采用初步鉴定试验的参评单位, 其结果的正确率为 52.08% (25/48); 分离培养后采用初步鉴定试验和确证试验的参评单位, 其结果的正确率为 54.36% (81/149) 非培养法中有 3 家单位采用了直接镜检法, 其鉴定结果的正确率为 0.00%(0/3), 有 2 家单位采用核酸扩增试验, 其鉴定结果的正确率为 100%(2/2),1 家单位采用快速抗原检测, 其鉴定结果的正确率为 0.00%%(0/1) 由此可见, 正确地采用淋球菌检测方法对鉴定淋球菌至关重要, 可预防淋病的误诊或漏诊 培养法因具有较高的敏感性和特异性, 目前仍是诊断淋病的金标准, 而直接镜检法仅适用于男性有症状的淋病诊断, 其灵敏度可达 90%~95%; 而对于女性淋病, 其灵敏度只有 50%~70%, 而核酸扩增试验因敏感性高 特异性强 快速 可检测尿标本和易自动化操作, 在筛查和诊断淋球菌感染中有其优越性, 但不能用于确定淋球菌对抗生素的敏感性监测 检测方法的选择固然重要, 但检测试剂的质量好坏也将对检测结果产生直接影响 表 5 结果表明, 自配培养基对淋球菌的鉴定结果的正确率要略高于商品化培养基, 自配培养基的质量易于控制和保证 室内质控是考察实验室试验结果的重复性, 而无法检验其正确性 ; 而室间质评则是考察试验结果的正确性, 是检查不同实验室间的操作差异 室间质评是提高细菌总体水平的重要手段, 经常组织或参加室间质量评价有助于检验机构及时发现存在的问题 提高其检测技术能力 10

12 2011 年全国沙眼衣原体检测室间质量评价 中国疾病预防控制中心性病控制中心 钟铭英尹跃平 生殖道沙眼衣原体 (Ct) 是我国 105 个国家性病监测哨点上重点监控的性传播疾病之一, 为了进一步提高我国性病临床实验室沙眼衣原体检验质量, 中国疾病预防控制中心性病控制 中心于 2011 年 5 月对全国性病诊疗机构的实验室沙眼衣原体检测室进行了室间质量评价活 动 本年度参加室间质评单位共 222 家, 其中省级 CDC 中心实验室 29 家 (2 个省级 CDC 实验室目前尚未开展 Ct 检测工作 ), 国家级性病监测点 182 家, 自愿参加的各级皮肤性病防 治机构 11 家 现将结果报告如下 一 材料和方法 ( 一 ) 参评单位 参评单位共 222 家, 其中省级 CDC 中心实验室 29 家, 国家级性病监 测点 182 家, 自愿参加的各级皮肤性病防治机构 11 家 ( 二 ) 质控品 质控品由性病控制中心参比实验室统一制备, 通过邮寄方式发放到各性 病检测实验室 Ct 质控品共 5 份, 由 2 份阴性质控品和 3 份不同强度的阳性质控品组成 以参考本实验室检测结果确定质控品的预期结果 ( 三 ) 评分标准 若每份质控品检测结果与预期结果一致得 20 分, 否则为 0 分,5 份 标本结果均一致, 为满分 (100 分 ) 100 分评为优秀 ;80 分为合格 ;60 分为一般 ;<60 分 为不合格 根据优秀和合格数计算合格率 二 结果 ( 一 ) 考核结果 在参评的 222 个单位中,52.25%(1/222) 检测实验室回报结果与 预期结果完全相符, 考核成绩为优秀 ;38.29%(85/222), 考核成绩为合格 ;7.66%(17/222), 考核成绩为一般 ;1.80%(4/222), 考核成绩为不合格 2011 年 Ct 实验室检测室间质评考核 成绩及考核成绩分布情况见表 1 表 2 表 家性病诊疗防治机构性病实验室考核成绩 实验室 考评成绩 ( 分 ) 合格率 (%) 类别 参评数 <60 80 省级中心实验室 29 17(58.62) 11(37.93) 1(3.45) 监测点实验室 18 93(50.10) 70(38.46) 15(8.24) 4(2.20) 自愿参加实验室 11 6(54.55) 4(36.36) 1 (9.10) 表 年全国 Ct 抗原检测室间考核成绩分布情况 参评单位 参评数 100 分 80 分 60 分 40 分 0 分 省级实验室 自愿参加实验室 监测点实验室

13 ( 二 ) 质控品检测结果的符合率 本年度 5 份质控样品检测结果的符合率分别为 94.59% 96.40% 90.99% 65.32% 和 95.50% 从表 3 可以看出, 弱阳性质控样品检测结果 的符合率较低, 仅为 65.32%; 有 18 家性病检测实验室因试剂质量或试验操作不当等原因, 将 2 份预期值为阴性的质控样品误报为阳性结果, 值得高度应引起重视 表 年 5 份沙眼衣原体质控样品检测结果的符合率 质控样品号 参评单位数 符合率 (%) 不符合率 (%) ( 强阳性 ) (210/222) 5.41(12) ( 阴性 ) (214/222) 3.60(8) ( 阳性 ) (202/222) 9.00(20) ( 弱阳性 ) (145/222) 34.68(77) ( 阴性 ) (212/222) 4.50(10) ( 三 ) 参评单位试剂使用情况参加 2011 年室间质评的实验室使用的检测方法分别为 Ct 抗原快速检测 EIA( 酶免法 ) 和 PCR 法 3 类 其中,86.94%(193/222) 性病检测实验室使用 Ct 快速抗原诊断试剂 ;10.81%(24/222) 使用 PCR 法 ;2.25%(5/222) 使用 EIA 法 值得指出的是, 被 WHO 推荐为检测 Ct 的 扩大金标准 PCR 法在性病临床的应用逐年提高, 使用率从 2007 年 1.4%(1/73) 提高 2011 年的 10.81%(24/222) 三 问题及建议通过室间质量评价活动比较实验室测定结果与实际靶值之间的差异, 发现误差并及时纠正, 是实验室质量保证的重要环节 2011 年全国 Ct 抗原检测室间质量评价总体成绩较好, 均分为 分, 合格占 90.54% 省级性病检验实验室 国家级性病监测点实验室和自愿参加的各级性病实验室合格率分别为 96.55% 89.56% 和 90.91% 国家级性病监测点实验室考核成绩与 2007 年相比较有较大提高, 合格率从 2007 年的 72.73% 提高到 2011 年的 89.56% 本年度室间质评主要存在以下问题 1. 与省级性病检验实验室和自愿参加的各级性病实验室相比较, 监测点性病检测实验室存在一定差距, 考核成绩总体偏低 由表 2 可见, 在 21 家考核成绩欠佳的实验室中, 监测点实验室就占了 19 家, 其中 1 个监测点实验室考核成绩为 0 分 2. 因使用的试剂存在质量问题或试验操作不当等原因, 6 个实验室将 5 份质控样品全部误报为阴性 少数性病检测实验室在使用 Ct 抗原快速检测试剂时, 没严格按照试剂说明书进行操作, 未在规定的时间内判读结果, 因延长反应时间将 2 份预期值为阴性的质控样品误报为阳性结果 3. 个别国产诊断试剂灵敏度较低, 易造成弱阳性标本漏检, 是导致检测结果不准确的原因之一 Ct 抗原检测试剂具有快速简便等优点, 目前仍为我国性病临床实验室首选方法之一 但由于肉眼判读结果带有主观性, 直接影响了检测结果的准确性 4. 个别实验人员未接受过相关专业培训, 无证上岗 ; 结果回报表填写不完整 ( 缺项较多 ), 有的结果回报表实验室主任和实验人员均未签名 ; 还有的结果回报表无试剂名称 检测方法及生产厂家等信息 12

14 2011 年全国淋球菌耐药监测实验室药敏试验室间质评工作总结 中国疾病预防控制中心性病控制中心 戴秀芹 为了更好地贯彻执行 中华人民共和国传染病防治法, 落实 卫生部办公厅关于进一步加强性病监测工作的通知 精神, 进一步加强全国淋球菌耐药监测工作, 中国疾病预防控制中心性病控制中心自 2007 年起开始组织全国淋球菌耐药监测实验室室间质量评价活动, 根据全国目前淋球菌耐药监测点工作的开展情况, 中国疾病预防控制中心性病控制中心于 2011 年继续对全国淋球菌耐药监测实验室开展室间质量评价活动 本年度共对全国 13 个淋球菌耐药监测点发放了耐药盲样考核样本 每组考核样本均由 3 份样本组成, 其耐药表型的组成包括 : 质粒介导的产青霉素酶淋球菌 (PPNG) 和质粒介导的高度耐四环素淋球菌 (), 以及高度耐环丙沙星淋球菌 考核样本的预期结果, 见表 1; 各监测点药敏试验室间质评考核结果, 见表 2 考核样本编号 11QA1 11QA2 11QA3 表 年 3 份盲样考核样本对 5 种抗生素的 MIC 值预期结果 青霉素 头孢曲松 环丙沙星 大观霉素 四环素 (PPNG/ (μg/ml) (μg/ml) (μg/ml) (/ ) 非 ) 非 PPNG 表 2 结果表明, 本年度有 12 家回报了结果, 其结果的回报率为 92.31%(12/13); 结果的合格率为 91.67%(11/12), 其中有 5 家考核成绩为满分, 其优秀率达 41.67%(5/12), 本次室间质评活动不合格的只有 1 家 5 种抗生素的总体符合率分别为 : 青霉素 (PPNG) 为 91.67%(33/36), 头孢曲松为 83.33%(30/36), 环丙沙星为 88.89%(32/36), 大观霉素为 100%(36/36), 四环素 () 为 97.22%(35/36) 表 2 监测点考核样本编号编号 QA1 11QA2 11QA 年 12 家淋球菌耐药监测点药敏试验室间质评考核结果 青霉素 (PPNG/ ) PPNG 头孢曲松 (μg/ml) 环丙沙星 (μg/ml) 大观霉素 (μg/ml) 四环素 (/ 非 ) 非 考核成绩 优秀 QA 合格 11QA 非 11QA3 PPNG

15 003 11QA 优秀 11QA 非 11QA3 PPNG QA1 PPNG 不合格 11QA2 PPNG > 8 非 11QA > QA 优秀 11QA >32 非 11QA3 PPNG QA 合格 11QA 非 11QA3 PPNG QA 优秀 11QA >32 32 非 11QA3 PPNG QA 合格 11QA 非 11QA3 PPNG QA 优秀 11QA > 非 11QA3 PPNG QA 合格 11QA 非 11QA3 PPNG QA 合格 11QA 非 11QA3 PPNG 非 QA 合格 11QA 非 11QA3 PPNG 本次室间质评考核结果总体较好, 只有个别单位的考核结果符合率较低, 而 5 种抗生素的总体符合率表明 : 符合率较高的有 PPNG 和大观霉素 ; 符合率相对较低的有头孢曲松和环丙沙星 其头孢曲松符合率低则与头孢曲松结果不易判读有关, 而环丙沙星符合率低则与溶剂的选择有着直接的关系 淋球菌耐药监测工作是一项长期而又艰巨的任务, 其检测结果的好坏将直接影响我国对淋病治疗指南及相关控制对策的制定, 室间质评工作的开展可及时地发现各点耐药监测结果存在的问题, 以确保耐药检测结果的准确性 14

16 2011 年全国淋球菌耐药监测工作总结 中国疾病预防控制中心性病控制中心 戴秀芹尹跃平 为了更好地贯彻卫生部办公厅 关于进一步加强性病监测工作的通知 ( 卫办疾控发 [2007]158 号 ) 文件精神, 进一步加强全国淋球菌耐药监测工作, 为确保淋球菌耐药监测工作质量, 中国疾病预防控制中心性病控制中心根据目前各点耐药监测工作情况, 及时采取有效措施,2010 年与全国 11 家淋球菌耐药监测点签订了为期 3 年的协议 现将 2011 年各点淋球菌耐药监测完成情况总结如下 : 一 各监测点测定淋球菌对 5 种抗生素的敏感性情况 2011 年全国共有 12 个点参加了此项工作, 分别为上海 深圳 新疆 广州 浙江 广东 海南 天津 四川 大连 西安 ; 除广西外, 其他 11 个点为淋球菌耐药监测协议加强点 全年共完成 1317 株淋球菌临床分离株对 5 种抗生素的敏感性测定工作, 其测定的各抗生素敏感性结果见表 1 表 年我国分离的 1317 株淋球菌对 5 种抗生素的敏感性测定结果 序号 耐药监测点 检测菌株数 ( 株 ) 青霉素四环素大观霉素环丙沙星头孢曲松 PPNG 耐药 敏感 株数 株数 (%) (%) 耐药 中敏 敏感 耐药 中敏 敏感 阳性 阳性 株数 株数 株数 株数 株数 株数 株数 株数 (%) (%) (%) (%) (%) (%) (%) (%) 1 上海 135 0(0.0) 135(100.0) 130(96.3) 5(3.7) 0(0.0) 0(0.0) 69(51.1) 66(48.9) 69(51.1) 53(39.3) 2 深圳 126 0(0.0) 126(100.0) 125(99.2) 1(0.8) 0(0.0) 0(0.0) 26(20.6) 100(79.4) 36(28.6) 58(46.0) 3 新疆 111 0(0.0) 111(100.0) 111(100.0) 0(0.0) 0(0.0) 0(0.0) 10(9.0) 101(91.0) 44(39.6) 26(23.4) 4 广州 114 0(0.0) 114(100.0) 112(98.2) 1(0.9) 1(0.9) 0(0.0) 63(55.3) 51(44.7) 46(40.4) 59(51.8) 5 浙江 123 0(0.0) 123(100.0) 123(100.0) 0(0.0) 0(0.0) 0(0.0) 68(55.3) 55(44.7) 52(42.3) 54(43.9) 6 广东 127 0(0.0) 127(100.0) 123(96.9) 2(1.6) 2(1.6) 0(0.0) 59(46.5) 68(53.5) 41(32.3) 53(41.7) 7 海南 101 0(0.0) 101(100.0) 99(98.0) 2(2.0) 0(0.0) 3(3.0) 83(82.2) 15(14.9) 31(30.7) 54(53.5) 8 天津 106 0(0.0) 106(100.0) 100(94.3) 2(1.9) 4(3.8) 1(0.9) 11(10.4) 94(88.7) 30(28.3) 27(25.5) 9 四川 123 0(0.0) 123(100.0) 121(98.4) 2(1.6) 0(0.0) 0(0.0) 32(26.0) 91(74.0) 89(72.4) 49(39.8) 10 大连 108 0(0.0) 108(100.0) 108(100.0) 0(0.0) 0(0.0) 0(0.0) 59(54.6) 49(45.4) 64(59.3) 26(24.1) 11 西安 111 0(0.0) 111(100.0) 103(92.8) 8(7.2) 0(0.0) 0(0.0) 94(84.7) 17(15.3) 45(40.5) 43(38.7) 12 广西 ( 非加强点 ) 32 0(0.0) 32(100.0) 31(96.9) 1(3.1) 0(0.0) 0(0.0) 20(62.5) 12(37.5) 9(28.1) 19(59.4) 合计 (%) (0.0) 1317(100.0) 1286(97.6) 24(1.8) 7(0.5) 4(0.3) 594(45.1) 719(54.6) 556(42.2) 521(39.6) 二 各监测点完成淋球菌耐药监测的综合质量 为了促进各监测点的淋球菌耐药监测工作,2011 年从七个方面对各点的淋球菌耐药监 测工作完成情况进行综合评比, 并对 11 个协议点的淋球菌耐药监测工作进行评优 评比结 15

17 果表明 : 绝大多数耐药监测点能按照要求完成 完成较好的项目内容包括测定的菌株数 数据上报的按时性 资料上报的完整性 但仍有 1/3 耐药监测点的上报数据核实不准确, 表格填写不完整, 有待进一步完善 三 问题与建议 1. 淋球菌临床分离株收集未按要求保存 : 部分监测点对监测的淋球菌临床分离株只保存 1 管, 待监测结果出现问题需复测时, 待测菌株已死亡或已污染 建议各点在监测淋病一线治疗药物大观霉素和头孢曲松时, 如监测到耐药菌株, 需及时复测, 同时将菌株传代后多保存几管, 以备国家性病控制中心进行复测并作进一步鉴定 2. 工作责任心不够 :1 个别监测点将上报资料邮箱弄错, 导致上报资料未能在规定的时间内到达 2 统计结果时不够细心, 如实验原始记录结果与监测药物分布图及监测药物结果汇总表数据不一致 建议各点在上报资料时仔细核对邮箱, 尽量使用新的资料上报表, 以避免结果上报错误 结果表明, 本年度 11 家淋球菌耐药监测协议点综合质量完成情况较 2010 年有较大进步 综合质量考核前四项各点基本能按要求完成, 第七项考核内容为新增部分, 国家性病控制中心今年将耐药室间质评考核结果作为综合质量考核的重点, 此点正是能真实地反映各点耐药检测水平的一个重要依据 淋球菌耐药监测工作是卫生部性病防治工作的一项重要任务, 全国淋球菌耐药监测综合质量考核细则的出台势在必行, 国家性病控制中心已经制定了淋球菌耐药监测综合质量考核细则初步方案, 该方案将会在今年全国淋球菌耐药工作总结会上征求各点意见, 再由国家性病控制中心下发全国淋球菌耐药监测综合质量考核细则, 以便进一步推动全国淋球菌耐药监测工作 HSV-2 与 HIV-1 感染相关性研究进展 中国疾病预防控制中心性病控制中心 陈绍椿尹跃平陈祥生 生殖器溃疡性性传播疾病可提高 HIV-1 的传播效率, 是 HIV-1 感染的危险因素之一 而 HSV-2 是引起生殖器溃疡的最常见病原体之一 本文回顾了 HSV-2 与 HIV-1 感染和传播效率相关性的流行病学证据及其潜在的生物学机制及假说, 为未来是否将抗疱疹病毒治疗纳入 HIV-1 防治策略提供理论依据 一 HSV-2 与 HIV-1 相互作用的血清流行病学证据 HSV-2 血清流行率在不同地区 不同人群和不同年龄存在差异 : 世界上非洲和南美洲流行率最高, 西欧和南欧高于北欧和北美, 亚洲最低, 性病门诊患者和商业性工作者等高危人群中流行率较高, 特定年龄段高危人群中女性流行率高于男性 整体来说 HSV-2 血清流行率在全球还处于相当高的水平, 而 HSV-2 的流行率与 HIV-1 血清流行率有着很密切的联系 ( 一 )HSV-2 感染与 HIV-1 感染流行病学联系

18 HSV-2 血清阳性人群中 HIV-1 感染率要比 HSV-2 血清阴性人群高 中国云南性工作者中 HSV-2 具有高流行率, 对云南昆明男女性工作者的研究发现 HSV-2 流行率高达 33%, HSV-2 血清阳性人群中 HIV-1 感染率要比 HSV-2 血清阴性人群高 (5.5% 比 0.9%,P=0.002; OR: 6.4,P = 0.006) 根据不同文献,HIV-1 血清阳性人群中 HSV-2 的流行率大于 50% 因此,HSV-2 和 HIV-1 在流行率上存在密切的联系 ( 二 ) HSV-2 感染促进 HIV-1 的传播 HSV-2 可以促进 HIV-1 的传播, 增加 HIV-1 的感染危险 队列研究发现 HSV-2 感染大部分先于 HIV-1 血清转化,HSV-2 和 HIV-1 合并感染者中 HSV-2 促进了 HIV-1 的感染 系统性综述分析计算出 HSV-2 血清阳性促进 HIV-1 感染的 RR 值为 2.1,HSV-2 血清阳性患者中 HIV-1 的感染危险增加了约两倍 另一项系统性分析发现不同人群中 HSV-2 血清阳性对 HIV-1 感染危险的影响有所不同, 男性人群中 RR 值为 2.7, 女性人群中为 3.1,MSM 人群 RR 值为 1.7, 每个人群中 HSV-2 血清阳性对 HIV-1 感染都具有促进作用 另外,HSV-2 新发感染一般症状较重, 第一年复发频繁, 所以 HSV-2 新发感染比慢性感染更易于促进 HIV-1 感染 二 HSV 促进 HIV-1 感染和传播的生物学机制 HSV 促进 HIV-1 感染和传播具有多重生物学机制, 相互作用证据分为体外实验和体内实验两部分 ( 一 ) 体外相互作用证据体外实验主要提供了三方面的证据 : 1.HSV 通过转录调控 转录后修饰和蛋白表达调控影响 HIV-1 的复制 2.HSV 通过刺激细胞引起免疫激活, 或通过抗原识别作用使细胞释放细胞因子, 促进 HIV-1 的增殖 3. 通过增加 HIV-1 受体的数量和扩展 HIV-1 感染细胞的类型促进 HIV-1 的增殖 ( 二 ) 体内研究证据 1.HSV-2 引起的生殖器溃疡破坏上皮屏障, 为 HIV-1 感染提供入口, 从而促进 HIV-1 的感染与传播 2.HSV-2 感染增加了机体特定部位 HIV-1 靶细胞数量 3.HSV-2 复发频率与 HIV-1 病程密切相关,HSV-2 感染可以引起 HIV-1 感染者血浆和生殖道分泌物 HIV-1 病毒载量上升三 抗 HSV-2 治疗作为 HIV-1 防控策略的探讨最近几年医学界围绕抗 HSV-2 治疗能否对 HIV-1 的感染和传播效率起到积极地防控作用进行着研究和讨论 Nagot 等人在布基纳法索的研究表明进行日常的 HSV-2 抗病毒治疗可以有效降低血浆中 HIV-1 病毒载量 0.53 log 10 拷贝每毫升, 也能有效降低生殖道中 HIV-1 的病毒载量 在秘鲁和南非的两项随机对照试验也发现阿昔洛韦治疗可以有效降低 HSV-2/HIV-1 合并感染女性血浆和生殖道 HIV-1 载量 在秘鲁 MSM 人群中进行日常的 17

19 HSV-2 抗病毒治疗可以有效降低 HSV-2/HIV-1 合并感染男性精液中 HIV-1 载量 一项系统性综述评价了 HIV-1 合并感染疾病的治疗对防控 HIV-1 传播的效果, 发现 HSV-2 抗病毒治疗可以有效抑制血浆中的 HIV-1 RNA 浓度 根据这些研究结果用阿昔洛韦治疗 HIV-1 和 HSV-2 合并感染者, 可以有效减缓 HIV-1 的病程, 可以考虑阿昔洛韦治疗作为 HIV-1 进行 HARRT 治疗前的一项辅助治疗 近期新英格兰医学杂志上报道了 Celum 的团队在非洲 14 个实验点的研究结果, 他们召集了 3,408 对夫妇进行了一项随机对照实验, 夫妻两人有一人为 HIV-1/HSV-2 合并感染者, 受试者分为两组, 一组采用阿昔洛韦抗病毒治疗 ( 每次 400 mg, 一天两次 ), 另一组采用安慰剂作为对照, 以伴侣感染 HIV-1 作为试验终止点, 并通过 HIV-1 病毒测序以确定感染者确实为性伴传播 最终有 132 对夫妻中发生了 HIV-1 传播, 其中 84 对为性伴间传播, 阿昔洛韦治疗组有 41 对, 安慰剂组有 43 对 阿昔洛韦治疗可以有效降低血浆 HIV-1 载量 0.25 log 10 拷贝每毫升, 并减少 HSV-2 造成的生殖器溃疡的发生频率, 但没有降低 HIV-1 的传播危险 研究者认为降低 HIV-1 的传播危险很可能需要 HIV-1 病毒载量下降很多, 阿昔洛韦对 HIV-1 病毒载量的抑制作用还不足以降低 HIV-1 的传播危险 2008 年在坦桑尼亚进行的一项随机双盲对照试验也得出了类似的结论, 实验结果表明日常阿昔洛韦抗病毒治疗并不能降低 HIV-1 的感染危险 最近在自然杂志上发表的研究发现,HSV-2 感染引起了机体的免疫反应, 使炎症细胞带有了易感 HIV-1 的细胞受体,HSV-2 抗病毒治疗并不能消除这些细胞上的受体, 所以 HSV-2 抗病毒治疗能够降低 HIV-1 病毒载量 延缓病程, 但不能降低因为 HSV-2 感染而升高的 HIV-1 感染危险 四 结语和展望流行病学证据表明 HSV-2 感染可以促进 HIV-1 的感染和传播 HSV-2 病毒在长时间的进化过程中不断地改造自己, 适应其靶细胞的微环境, 以利于其自身的复制繁殖, 在这一过程中, 也为 HIV-1 复制提供了良好的条件, 两者之间产生了一定的协同作用 通过 HSV-2 抗病毒治疗能够有效降低 HIV-1 和 HSV-2 合并感染者血浆和生殖道 HIV-1 的载量, 但不能降低 HIV-1 的传播危险 防控 HIV-1 的传播还需要制定综合策略, 通过防治合并感染和行为干预来切实有效的降低 HIV-1 的流行 口腔黏膜渗出液在 HIV 梅毒抗体检测中的研究进展 中国疾病预防控制中心性病控制中心 郑冰洁尹跃平 口腔黏膜渗出液 (OMT) 是一种复杂的体液, 含有各种蛋白质 核酸 脂肪酸以及微生 物等, 血液中的各种蛋白质成分同样存在于其中 OMT 能反映血液中各种蛋白质和抗体水平 的变化, 因此可以代替血液作为感染性疾病筛查所用的诊断性液体 同时,OMT 具有采集方 18

20 便 易操作 快速 经济 贮存与携带方便和无创性等特点, 常可作为无创检测的标本来源 一 OMT 的收集方法一般有两种收集 OMT 的方法, 直接收集法和特殊设备收集法 早期使用的是直接收集法, 通过流涎或吐口水的方式收集, 但这种方法收集的全唾液中抗体含量较低, 收集量不够, 并且可能因为不太雅观而不被一些病人所接受 目前以特殊设备收集法为主, 使用含有吸收垫 抗蛋白水解物 缓冲液及稳定剂等的特殊设备在口腔前庭 牙齿唇颊面颈 1/3 和牙龈间摩擦, 能最大程度收集到抗体含量较高的齿龈隙液体 二 OMT 抗体检测方法由于 OMT 中免疫球蛋白含量较低, 故宜采用较敏感的方法 临床上常用的是酶联免疫吸附法 (ELISA) 主要有抗体捕捉 ELISA 实时荧光免疫技术等 三 OMT 抗体检测在 HIV HSV 梅毒检测中的应用 ( 一 ) HIV 抗体检测美国 OraSure 公司出品的 OraQuick HIV1/2 快速检测试剂是第一个在临床实验室推荐的 HIV 快速 OMT 检验试剂盒, 也是 FDA 唯一批准的可以同时使用 OMT 指尖血 血浆样本 全血的试剂盒 它操作简单, 可以被没有临床背景的操作人员使用, 试剂盒说明书显示该方法检测 OMT 标本的特异度为 99.8%(95%CI:99.6%~99.6%) 此外, 尚有爱尔兰 TrinityBiotech 公司出品的 SalivaCard HIV-1/HIV-2 快速检测试剂盒和以色列 Orgenics 公司出品的 ImmunoCombⅡHIV-1/HIV-2 快速检测盒 这二者都是基于间接 ELISA 的原理 SalivaCard 基于胶体金技术与免疫层析技术, 在硝酸薄膜纤维基质上包被 HIVgp41/gp36 蛋白抗原, 可以同时检测唾液中的 HIV-1/HIV-2 与 IgG 抗体, 主要检测 HIV 的 IgA 和 IgG 抗体, 整个过程耗时 12 分钟左右, 其敏感度以及特异度与 HIV 酶联免疫吸附法 (ELISA) 法相近, 但也有研究发现 Salivacard 的灵敏度只有 79.7% ImmunoCombⅡ 则包被 HIV-2gp36 HIV-1gp41/gp120 蛋白抗原, 可同时检测唾液中的 HIV-1/HIV-2 抗体 整个过程耗时 35 分钟左右 Saville 等的研究显示 Salivacard 和 ImmunoCombⅡ 的灵敏度均为 100%, 但前者的特异度较后者低, 分别为 99.8% 和 100% 由于 OMT 检测中存在的假阳性以及假阴性, 所以其检测结果应该被认为是初步结果, 国际通行的指导推荐, 所得的阳性标本须经过 Western bolt 或者免疫荧光分析法 (IFA) 进行确认 ( 二 ) 梅毒抗体检测目前针对梅毒 OMT 抗体检测的研究并不多, 因为 OMT 中的梅毒特异性 IgG 和 IgM 水平比血浆低了 1000 倍, 所以需要使用针对 IgG 和 IgM 抗体的高敏感性的免疫方法进行检测 2005 年, Bagμley 等首次使用实时荧光免疫技术检测 OMT 中的梅毒特异性抗体 研究显示, 所有的受试者都能正确使用收集设备并无不适 当使用均数 +3 倍标准差计算临界值时, 在所有病人中 OMT 检测的灵敏度和特异度分别是 76.5% 和 97.9%, 而在早期梅毒中, 这两个数字分别是 100% 和 97.9% 但使用均数 +5 倍标准差计算临界值时, 所有的早期梅毒都被检测出来并且没有假 19

21 阳性出现 2006 年,Maple 等在该研究的基础上进行了一个更大样本量的研究, 他们选择了 210 例受试者, 主要是感染 HIV 的男同性恋人群 其中 101 例在医疗机构已经血清学检测确证为梅毒, 全部收集血清和唾液标本 在剔除 14 例不合格 OMT 标本后, 经检测得到对于所有受试者 OMT 检测的敏感度和特异度分别是 95.8% 和 86.1%( 用阳性结果的 5% 计算临界值基础上 ) 通过混合模型分析得到的临界值计算的敏感度和特异度分别是 93.7% 和 91.1% 对于早期梅毒的患者, 敏感度是 87.5%, 二期和早期潜伏梅毒患者敏感度则分别是 100% 和 94.7% 研究者认为这个方法对于二期梅毒和早期潜伏梅毒有较高的敏感度和特异度 在早期梅毒患者检测的敏感度有所下降是因为检测方法对 IgM 敏感性不高, 并且样本保存时间较长增加了抗体的降解 由此可见, 在二期梅毒和早期潜伏梅毒患者中,OMT 检测可以代替血清学检测, 但因为目前还没有研发出针对特异性 IgM 敏感度较高的检测方法和避免 IgM 降解的样本保存技术, 不能检测 IgM 来判断有无早期感染和现症感染, 限制了其应用 四 展望 OMT 标本收集为非侵入性, 采集过程中生物安全性高 同时,OMT 中的病原体含量也低于血液, 样本收集后使用的器具较血液采集器具处理简捷 安全 另外,OMT 采集方法与指尖血和静脉血采集方法相比操作过程简单, 不需要对采集人员进行严格培训, 对检测场所 设备 人员技术背景要求不高, 可适合于条件有限的边远地区和农村使用 标本采集过程无疼痛感, 适合婴幼儿 肥胖人群 晕针者 害怕抽血者及浅表静脉不明显的人群, 对患者来说有更好的可接受性和依从性 因为在某些地区, 采血的低接受率是由于文化水平 宗教信仰 法律规定严格等造成的, 而 OMT 的采集则没有上述问题 虽然 OMT 的抗体检测有很多优点, 但尚存在需要解决的问题 OMT 检测的物质单一, 不能完全替代血液标本 OMT 中的酶原颗粒和蛋白酶等具有潜在的破坏作用, 因此需要加入一定量的稳定剂以保证标本的质量 OMT 标本中抗体含量不稳定, 其中含有的其他物质如病毒 细菌 胆红素等以及吸烟 服药 牙周炎等可能会影响检测的效率和准确性 另外,OMT 标本的抗体采集量和检测方法是有限的, 缺乏敏感的检测方法使得早期 HIV 检测 现症感染和一些经过抗逆转录病毒治疗 抗体载量减少的病例不能有效检出 对于特殊人群, 如孕妇等 OMT 的检测是否受到潜在机制的影响尚不明确 这些都有待今后的研究 20

22 泌尿生殖道沙眼衣原体感染流行病学研究进展 中国疾病预防控制中心性病控制中心郑冰洁尹跃平 沙眼衣原体 (Ct) 感染是目前世界范围内引起性传播感染的最常见的病原体 很多研究发现 Ct 的感染率和患病率均呈逐年升高趋势 一 国外 Ct 感染流行状况在美国, 泌尿生殖道 Ct 感染已是最普遍的性传播疾病 2000 年, 美国 CDC 报告了 702, 000 例新发病例, 而这个数字在 2005 年超过了 900,000 Fine D 报告生殖道 Ct 感染率在 年间增长了 46%, 且 8 年间新发感染每年以 5% 的比率递增 同样, 年, 英国 ~24 岁男女人群中 Ct 患病率为 10% 东欧地区,Ct 的感染率则维持在相对稳定的水平 Zwanlen M. 等报道 年 6 年间, 瑞士共有 例泌尿生殖道 Ct 感染, 男女之比为 1:2.5, 年报告泌尿生殖道 Ct 感染数据从 1997 年的 2573 例增加到 2003 年的 3449 例, 增长率为 31%, 男性增长了 65%, 女性增长了 25% Mahafzan MA 等报道, 约旦 Ct 的感染率在有症状的人群和无症状的人群中分别是 0.6% 和 0.5%, 这可能与宗教和当地风俗中对女性要求严格以及缺乏有效的诊断手段有关 二 国内 Ct 感染流行状况国内有研究者调查发现, 普通人群中, 女性的泌尿生殖道 Ct 感染率为 2.6%, 男性中该比率为 2.1% 不同的人群中,Ct 感染率有所不同 据 年中国健康与家庭生活普查数据显示, 流动人口中, Ct 感染率 接受有偿性交易比率显著高于固定人口, 且女性流动人群较女性固定人群更易发生 Ct 感染, 感染率是女性固定人群的三倍 徐俊杰等在矿区中调查后发现, 男性矿工中的 Ct 感染率是 6.5% 陈祥生等报道云南省女性工作者中,Ct 为患病率最高的 STD 病原体, 患病率为 58.6% 蒋娟等报道江苏省 MSM 人群中 Ct 感染率为 8.0%, 这个数值与其他地区 MSM 人群中的调查结果相似 这种逐年增加的趋势可能与 Ct 的无症状感染 检测人群的改变和检测手段的敏感性提高有关 但由于目前很少有针对男性 青少年及老年妇女 Ct 感染情况的筛查, 并且很多男性在临床上被诊断为非淋菌性尿道炎, 所以, 推测实际感染率和患病率可能更高 三 Ct 感染基因型的流行分布 Ct 基因型在不同国家和地区之间的分布不同, 其中以 E F D 型最常见 澳大利亚的一个研究检测了 400 份沙眼衣原体阳性标本中的 CT 基因型后发现主要的感染类型是 E 型 (42.36%) F 型 (23.65%) 和 G 型 (.26%), 且 G 型患者的平均年龄都大于其他基因型的感染者 阿根廷的 CT 基因型的分布稍有不同 123 份 CT 阳性标本中主要感染类型是 E 型 (46.3%), D 型 (19.5%) 和 F 型 (14.6%), 并有一例为 E 型和 F 型的混合感染 国内的调查结果稍有差异 高省等在大陆地区 6 个主要城市进行的 Ct 高危女性人群的流行病学研究中对宫颈拭子样本做基于 ompl 基因的 PCR 限制性片段长度多态性 (PCR-RFLP) 21

23 分析, 证实了 E(27.9%) F(23.5%) G(12.4%) D(11.1%) 型为最常见的基因型, 并且在地理上的分布无显著的不同 Ct 基因型在不同人群之间的分布不同, 导致的症状也不相同 多数研究证明 E 型感染以无症状感染为主 ;D 型毒力较强, 在男男性行为者中多见,D 和 E 型均可导致较长时间的感染 ;G 型与腹部疼痛有关 ;F 型多见于有症状者, 易引起盆腔炎, 且在年轻人群和单身人群中较为常见 Anttila T 等的研究表明 G 型和子宫颈癌有很大的关系,OR 为 6.6,I 和 D 型同样也能增加患子宫颈癌的风险 近年来, 陆续出现了一些新的 Ct 变种 2006 年, 瑞典发现了一个 Ct 变异体 对其研究后发现, 新型 CT 感染以无症状感染更为常见, 提示其与已知型别 Ct 链的毒力可能有所差别 通过多位点序列分型分析中, 证实了新变种是血清型 E 的变异体 四 总结泌尿生殖道 CT 感染是值得重视的公共卫生问题 Ct 感染率逐年增加, 常见于年轻女性及有 2 个以上性伴侣的人群 值得注意的是 Ct 发病年龄有前移的迹象即从青年向儿童蔓延的趋势 泌尿生殖道 Ct 感染应引起卫生部门的广泛重视 目前的研究主要针对年轻女性, 未来需要注重对青年男性 Ct 感染的筛查, 确定筛查的最佳时间间隔, 同时需要加强对各种族及各肤色人群 Ct 感染的研究, 并加强感染率较高年轻女性的生物学和免疫学机制的研究, 从而达到有效防治泌尿生殖道 Ct 感染的目的 沙眼衣原体耐药性的分子机制的研究新进展 中国疾病预防控制中心性病控制中心 于瑞星尹跃平 沙眼衣原体 (Chlamydia trachomatis,ct) 是性传播疾病的主要病原体之一 目前治疗 Ct 感染的主要药物有喹诺酮类 大环内酯类和利福平类药物, 对这几种药物耐药基因的分子机制研究的报道较多, 现分述如下 : 一 喹诺酮类药物喹诺酮类药物通过抑制 DNA 回旋酶和拓扑异构酶 IV 来干扰 DNA 的复制来发挥抗菌作用 DNA 回旋酶的 A 亚基是喹诺酮类药物的作用靶点, 通过形成 DNA 回旋酶 -DNA- 喹诺酮三元复合物, 抑制酶的切口活性和封口活性, 阻碍细菌 DNA 复制而达到杀菌作用 ; 拓扑异构酶 IV 通过解除 DNA 结节 解环连体和松弛超螺旋等功能, 协助细菌 DNA 复制, 喹诺酮类通过对拓扑异构酶 IV 的抑制作用, 干扰细菌 DNA 的复制, 从而发挥抗菌效应 近年来,Ct 对喹诺酮类药物的耐药报道越来越多, 其研究表明耐药主要与基因突变有关, 相关基因主要有 gyra gyrb parc pare 和 yged 等 二 大环内酯类药物 22

24 治疗 Ct 感染的大环内酯类药物主要有红霉素 罗红霉素 阿奇霉素 克拉霉素和交涉霉素等, 其主要作用机制是不可逆的结合到核糖体 50S 亚基靶位上, 其中 14 元大环内酯类药物主要是阻断肽酰基 t-rna 移位, 而 元大环内酯类抑制肽酰基的转移反应, 选择性抑制蛋白质的合成从而发挥抗菌效应 虽然大环内酯类药物是治疗 Ct 感染的一线药物, 但是国内外常有耐药菌株的报道 Ct 对大环内酯类药物的耐药机制主要与 ermb ermc 基因突变 编码核糖体蛋白 L4 L22 的基因突变和 23SrRNA 的转肽酶编码基因突变有关, 基因突变可导致灭活酶的产生 核糖体药物结合部位甲基化 摄入减少和排出增多等, 使 Ct 对大环内酯类药物产生耐药 三 利福霉素类药物利福霉素类药物特异性的与细菌依赖于 DNA 和 RNA 多聚酶的 β 亚单位结合, 阻碍 mrna 的合成, 对人和动物细胞内的 RNA 多聚酶无影响, 从而发挥杀菌效应 利福平高浓度时对沙眼衣原体和某些病毒也有作用, 但是单独使用利福平时易产生耐药性, 这与细菌的 RNA 多聚酶基因突变有关, 所以临床上不会单独选择这种药物用于治疗 Ct 感染, 另外单独用利福平 20 天后就可导致耐药性的产生, 但其与阿奇霉素联用无耐药, 且抑制 rrna 的合成较早 利福平耐药的首要机制是 ropb 基因突变, 使利福平对 RNA 聚合酶特别是其 β- 亚单位的结合力下降 Kutlin A 等人报道尽管 Ct 对利福平高度耐药, 但是在整个 ropb 基因中没有发现基因的改变, 所以认为是表观遗传, 这可能与 Ct 宿主细胞外排机制 糖基化酶 核糖基化酶 磷酸化酶等有关 Xia 等人新近发现利福霉素的衍生物 ( 例如利福拉齐 ) 有特殊的抗 Ct 能力和细胞穿透力, 对 ropb 基因突变的耐利福平菌株有效 因此,ropB 基因在利福霉素类药物中的耐药机理有待进一步探讨 四 结束语综合上述有关 Ct 耐药性的分子机制的研究进展, 表明不同的基因位点与 Ct 耐药有密切的相关性, 随着对 Ct 耐药的分子机制的进一步研究, 将深入了解 Ct 对不同抗菌药物的耐药相关基因的作用机制和原理, 这将为指导临床用药以及研究开发新的抗 Ct 药物提供重要的依据 Taqman MGB 生殖支原体荧光 PCR 检测方法的建立及应用 中国疾病预防控制中心性病控制中心 向志尹跃平施美琴王红春韩燕 生殖支原体 (Mycoplasma genitalium,mg) 于 1980 年于男性非淋球菌性尿道炎患者尿道中分离得到, 研究表明生殖支原体是性传播疾病 (STD) 的病原之一 目前生殖支原体的流行有增高的趋势, 甚至超过沙眼衣原体及淋病奈瑟菌 然而生殖支原体的培养十分困难, 我们建立 MGB 实时 PCR 方法, 并对该检测方法的检测范围 检测限及重复性等进行分析, 23

25 采用该方法对 404 份宫颈拭子进行生殖支原体的检测, 报道如下 : 一 材料 1. 生殖支原体标准菌株 : 标准菌株 G37,ATCC 标本来源 : 本研究通过中国医学科学院皮肤病研究所伦理委员会, 获得知情同意后, 采集自广西贺州女性性工作者的 404 份宫颈拭子标本进行生殖支原体的检测 3. 主要仪器和试剂 :Roche 公司 Lightcycler480 实时定量 PCR 仪,DNA 提取试剂盒 热启动 DNA Taq 酶 dntp 购自德国 Qiagen 公司, 引物合成于上海 Invitrogen 公司,MGB 探针合成于美国 ABI 公司,DNA 分子量标准购自大连宝生物工程有限公司 二 方法 1. 生殖支原体 DNA 提取 : 参照试剂盒说明进行,DNA 保存于 -20 冰箱 2. 引物和探针设计 : 上游引物 MgPa-355F 5'-GAG AAA TAC CTT GAT GGT CAG CAA-3', 下游引物 MgPa-432R 5'-GTT AAT ATC ATA TAA AGC TCT ACC GTT GTT ATC-3',Taqman MGB 探针为 MgPa-380 5'-FAM-ACTTTGCAA TCA GAA GGT-MGB-3', 扩 增目的片段长度为 78bp 3.PCR 反应体系及反应程序 :PCR 反应体系及反应程序参照热启动酶说明书, 每个反 应包括一个阳性及一个阴性对照 4. 标准品制备 : 取 0.05g 标准菌株冻干粉, 溶解于 1ml 蒸馏水, 制备为菌液, 按 QIAmp DNA 提取试剂盒说明提取 DNA, 紫外分光光度计测定 DNA 浓度 =22.84ug/μl, 根据公式拷 贝 /μl=con.(ng/μl) /660 bases 计算拷贝数, 将 DNA 稀释至 拷贝 /μl, 然后按 10 倍梯度稀释为其他 5 个浓度的标准品, 分别为 : 拷贝 /μl 拷贝 /μl 拷贝 /μl 拷贝 /μl 拷贝 /μl 把制备好的 6 个浓度标准品分 按以上 PCR 反应条件进行反应, 反应完毕制作标准曲线, 自动计算循环数 Cp, 生成标准曲线 5. 检测限 (LOD) 及定量限 (LOQ) 确定 : 对标准曲线最低浓度标准品进行 5 倍及 10 倍稀释后进行 PCR 反应, 检测其检测限及定量限值 测定 6. 重复性检测 : 对浓度为 拷贝 /μl 的标准品分别进行 10 次批内和批间重复性 7. 目的产物检测 :2% 琼脂糖凝胶电泳, 凝胶成像仪照相 三 结果 1. 标准曲线 : 经过 Lightcycler480 分析得到一斜率为 的标准曲线,PCR 扩增效率 为 1.90, 说明 PCR 效率高, 在模板浓度为在 拷贝 /μl 条件下仍有扩增, 说明此 Taqman MGB PCR 检测限为 拷贝 /μl~ 拷贝 /μl, 得到标准曲线回归方程 y = 3.982x ,R² = 0.993, 说明标准品浓度与循环数值 Cp 具有很好的线性关系 2. 检测限 (LOD) 及定量限 (LOQ) 确定 : 已知标准曲线的线性范围为 拷贝 /μ l 至 拷贝 /μl, 将 拷贝 /μl 标准品进行 5 倍及 10 倍稀释, 得到浓度分别为 拷贝 /μl 及 拷贝 /μl 的标准品, 对以上 3 个浓度的标准品进行 3 次 PCR 反应, 每 24

26 次 PCR 反应中每个标准品 3 孔重复加样进行 扩增结束后由 PCR 仪自动计算循环数值, 循环数平均值 标准差 其浓度为 拷贝 /μl 标准品 9 次 PCR 反应中 6 次生成扩增曲线, 即该实时定量 PCR 的检测限 LOD 为 拷贝 /μl, 即每个 PCR 反应最高可检出 10 个拷贝, 浓度为 拷贝 /μl 的标准品均有扩增曲线的生成, 定量限 LO 重复性: 对浓度为 拷贝 /μl 的标准品进行重复性测定, 结果批内循环数平均值为 31.62, 变异系数为 0.7%, 批间循环数平均值为 32.05, 变异系数为 1.09%, 说明该方法重复性好 3. 宫颈拭子检测结果, 采用浓度为 拷贝 /μl 的标准品为阳性对照, 对 404 份宫颈拭子标本进行检测, 共检出 49 份生殖支原体阳性, 该女性性工作人群中, 生殖支原体的流行率为 12.1% 四 讨论自 2004 Jensen 等建立靶基因为生殖支原体 Pa 基因的实时定量 PCR 方法以来, 研究者对该方法的敏感性及特异性进行验证,Edberg 等通过对以 SrRNA 及生殖支原体 Pa 基因为靶基因的荧光 PCR 的两种方法进行比对, 结果表明 2 种方法均具有高度的特异性, 但是生殖支原体 Pa 基因的荧光 PCR 方法具有较高的灵敏度, 因此本研究参照国外文献采用的引物及 MGB 探针, 建立了针对生殖支原体 Pa 基因的 MGB 荧光 PCR 方法 本研究中采用针对生殖支原体 Pa 基因的引物和探针建立了检测生殖支原体的实时定量 PCR, 该方法的灵敏度高, 每个 PCR 反应最高可检出 10 个拷贝, 并且确定了该方法的定量限为 拷贝 /μl, 该 Taqman MGB 实时 PCR 方法可对生殖支原体进行的快速的定性检测及定量分析 生殖支原体感染及其抗菌药物研究现状 中国疾病预防控制中心性病控制中心 韩燕尹跃平施美琴 生殖支原体 (Mycoplasma genitalium Mg) 是 Tully 等于 1981 年从患有非淋菌性尿道炎 (nongonococcal urethritis NGU) 男性患者的泌尿生殖道中分离出并命名的, 是医学界公认为寄居人体内的 种支原体中的一种 近年来研究表明, 泌尿生殖道是 Mg 的主要寄居和感染部位, 是性传播疾病的病原体之一 目前对 Mg 感染的流行病学 诊断治疗 药物敏感性等研究已经在世界范围内广泛开展 一 Mg 感染的流行病学研究国内外学者均对 Mg 在性病门诊 妇产科门诊 暗娼人群 男同性恋人群以及无症状的普通人群进行了广泛的流行病学研究 多项研究均发现,Mg 感染与有症状的 NGU 前列腺炎 附睾炎 宫颈炎 子宫内膜炎 盆腔炎 不孕不育及自然流产有关 Thurman 等研究显示, 感染 Mg 的妇女其性伴感染 Mg 的风险 5 倍于未感染 Mg 妇女的性伴,Mg 阳性病例主要集中在性活跃人群中 Tosh 等也发现 52 例女性 Mg 阳性者,98%(51/52) 有过性生活史, 亦有研究显示其感染率与性伴数量相关, 因此 Mg 是可以经生殖道 - 生殖道性交传播引 25

27 起相关疾病, 但能否通过口 - 生殖道性交传播国内外的研究还不一致 ; 而通过肛门 - 生殖道的性交传播 母婴垂直传播和家庭内接触传播还需进一步的研究 二 Mg 治疗药物的药效学研究平台 ( 一 ) 体外培养 :Mg 在普通的支原体培养基上不能生长, 须在特殊 SP-4 培养基中才能生长 Mg 在 SP-4 培养基中的初生时间一般都超过 30 天, 这给 Mg 的检测和研究带来诸多不便 1996 年 Jensen 等首次用 Vero 细胞培养 Mg 获得成功, 初代生长时间缩短至 20 天左右 Mg 的药物敏感性试验主要是琼脂稀释法 液体培养法 细胞培养法等 目前针对 Mg 进行药物敏感性的实验文献报道较少,Bebear 等研究其药物敏感性采用琼脂稀释法, 在含浓度为 0.015~32μg/ml 抗生素的 Hayflick 改良的各个琼脂培养基上均接种 10 4 ~10 5 颜色改变单位 (colour change unit,ccu) 的 Mg 经培养后, 以菌落的生长为观察终点 Duffy 等利用液体培养法进行药物敏感性的测定 : 将抗生素倍比稀释于 SP-4 支原体培养基里, 后加入 0.1 ml 的含 10 4 CCU /0.1 ml 的 Mg 培养物于微孔板中, 贴膜后在 37 孵育, 然后进行观察颜色的变化, 以培养基的颜色改变为观察终点 由于 Mg 难培养的特点, 这两种传统的培养方法对于 Mg MIC 用于临床还有很大难度, 比较费时费力, 且不易成功 基于细胞培养进行 Mg MIC 测定的方法是对细胞培养物进行实时定量 PCR, 观察其 DNA 的含量变化 Hamasuna 等将细胞培养法与传统的液体培养法进行了比较, 结果发现, 细胞培养法 MIC 值与液体培养法相比, 多西环素和四环素基本一致, 但红霉素和左氧氟沙星明显偏高 细胞培养法较传统的培养法的优势在于缩短了初代的生长时间, 可以大量地繁殖 Mg 以便满足 MIC 实验的需要, 观察的时间点较传统的方法自由, 另外此方法是对 DNA 的含量进行定量计算, 较观察 CCU 准确, 较观察菌落生长简便, 但是该结果应用至临床尚待进一步的研究 He 等利用无线磁致弹性的传感器对 Mg 的生长进行实时 长期 原位的评价了四环素及左氧氟沙星的抗菌效果, 这种方法估计亦能应用于药物对 Mg 敏感性的评价 ( 二 ) 动物模型 : 体外培养的方法不能模拟在活体内药物对 Mg 感染的疗效情况, 因此不能据此评估药物的效果 由于仓鼠 小鼠等小动物模型对 Mg 不敏感, 造模很难成功 ; 因此过去大多采用猕猴 猩猩 松鼠猴等对 Mg 易感的灵长类动物, 由于其与人类较接近, 因此能够很好的阐明 Mg 感染的过程 机体免疫反应 致病机制 组织病理改变 由于灵长类动物不易获得 价格昂贵 不宜广泛开展药物评价实验, 因此研究者的目光又再次转向具有良好成本效益的啮齿类动物如小鼠等用于构建动物模型 Taylor-Robinson 等研究发现,BALB/c 小鼠经孕酮或雌二醇处理后, 生殖道对 Mg 处于易感状态, 而 McGowin 等于 2010 年通过经阴道接种 Mg(G37 及传代较少的临床菌株 CCU/20μl), 首次成功建立了 Mg 生殖道感染的 Swiss Webster 小鼠模型 5 周龄的雌性 Swiss Webster 小鼠, 经支原体检验阴性后, 皮下注射长效的环戊丙酸雌二醇雌激素或孕激素后, 阴道内接种有活力 Mg 实验观察发现, 在接种后 3 天就可以在阴道分泌物中分离到有活力的 Mg,3~4 周后上生殖道组织可以分离到有活力的 Mg,7 天后膝关节可以检测到 26

28 Mg, 还发现近 60% 的实验小鼠有输卵管积水的存在 (3~10 周时间后 ),Mg 可以在下生殖道可以持续存在 77 天,10 周后 67% 左右的小鼠可以检测到抗免疫原性 MgPa 抗体的存在 三 结语 Mg 是危害人类生殖健康的病原体之一, 在高危人群中广泛流行, 由于其难以人工培养 难以建立动物感染模型等特点, 从而限制了对其开展临床诊治及实验研究 随着新技术的不断发展和应用及其啮齿类动物模型的成功建立, 将会不断推动 Mg 的发病机制 流行病学 分子流行病学 诊断试剂的开发 耐药监测 治疗药物的开发评价和应用以及有效疫苗的研制的发展, 从而为更好的指导人们预防和控制高危因素 降低 Mg 的感染率 2011 年大连市淋球菌耐药结果分析 大连市皮肤病医院刘晓虹周晓维张振国 淋病是我国高发性传播疾病之一, 据报道 2011 年淋病已成为我国法定报告传染病病例第四位, 随着抗生素的广泛应用, 其致病菌淋球菌对抗生素的敏感性不断发生变化, 不同地区的淋球菌对抗生素的耐药性有明显差别 为了解大连地区淋球菌耐药情况,2011 年我们收集了 108 株淋球菌, 进行耐药检测, 现将结果报告如下 一 材料与方法 ( 一 ) 材料 1. 菌株 2011 年 4~11 月来我院性病门诊就诊患者中分离培养的淋球菌标本 108 株, 所有菌株经革兰染色, 氧化酶试验和糖发酵试验确证后, 传代一次, 培养 18 小时后, 洗于脱脂牛奶中,-70 冰箱冻存备用 2. 抗生素和标准菌株 5 种抗生素 ( 青霉素, 四环素, 环丙沙星, 头孢曲松和大观霉素 ), 三株 WHOG,WHOJ, WHOL 淋球菌标准菌株均由中国疾病预防控制中心性病控制中心提供 3. 培养基 GC 基础培养基 ( 英国 Oxoid 公司 ) 加入 10% 新鲜脱纤维羊血 ( 二 ) 方法 1. 产青霉素酶淋球菌 (PPNG) 的测定采用纸片酸度法 : 滤纸吸足青霉素溶液 (0.2g 溴甲酚紫,5g 青霉素溶于 100ml PH8.0 的 0.05mol/L 的磷酸盐缓冲溶液 ) 置于空平皿中, 用接种环将 10 个左右菌落涂到滤纸上, 涂膜直径为 5mm,35 孵育 30min, 滤纸颜色由紫变黄, 为 PPNG 阳性, 不变色为阴性 2. 最小抑菌浓度测定 (MIC) 27

29 采用 WHO 西太区淋球菌耐药监测规划推荐的琼脂扩散法 培养基中抗菌药物浓度为 : 环丙沙星 0.0~8mg/L, 头孢曲松 0.002~0.5mg/L, 大观霉素 2~64mg/L, 四环素测定 8mg/L 和 mg/l 两个浓度 WHO G,J,L 标准菌株进行质量控制 结果判读以 WHO 西太区淋球菌耐药监测规划推荐为标准 3. 质粒介导的耐四环素淋球菌 () 菌株测定四环素 MIC mg/l 菌株即为 菌株二 结果 ( 一 ) PPNG 菌株测定结果 108 株淋球菌中检出 64 株 PPNG 菌株, 阳性率为 59%, 检出 26 株 菌株, 阳性率为 59% ( 二 ) 环丙沙星 头孢曲松和大观霉素对淋球菌 MIC 的测定结果环丙沙星对 108 株淋球菌的耐药率为 100%, 头孢曲松对 108 株淋球菌的敏感率为 44%, 中敏率为 56%. 大观霉素对 PPNG, 和环丙沙星耐药菌株全部敏感, 见下表 5 种抗生素对淋球菌耐药情况 菌株数 (%) 株数耐药中敏敏感 PPNG 青霉素 (59%) - 四环素 (24%) 环丙沙星 (100%) 头孢曲松 (56%) 48(44%) - - 大观霉素 (100%) - - 三 讨论 实验结果显示 : 本院 2011 年 PPNG 检出率为 59%, 明显高于谢俭等报道的广西地区 13.73%, 与柯丹等报道的重庆地区 57% 相近 阳性率为 24%, 和新疆地区 22% 相近, 提示本地区已进入 PPNG 和 的高流行区 美国疾病控制中心认为当一种抗菌药物耐药率超过 5%, 该药就不能作为治疗的首选药物, 由此认为青霉素和四环素已不能做为本地区淋病的首选药物 虽然青霉素和四环素已不是治疗淋病的首选药物, 但 PPNG 和 流行率仍是其耐药流行病学监测的重要指标之一 本数据表明, 淋球菌对环丙沙星耐药率 100% 与其它地区环丙沙星耐药率相似 喹诺酮类药物是一类广谱抗生素, 在性病门诊该药物常用于对衣原体, 支原体感染的治疗, 其价格相对低廉, 性病患者存在自行购买药物, 不规范用药, 可能是导致本地区淋球菌对环丙沙星的高耐药率发生原因 头孢曲松, 大观霉素对淋球菌耐药活性较高, 敏感率分别达到 44% 和 100%, 未发现耐药菌株, 但头孢曲松中敏率为 56%, 高于全国平均水平 47%, 故应加强临床上对头孢曲松用药规范, 治疗淋病要给足剂量 综上所述, 大连地区为 PPNG 株高流行区域, 对环丙沙星耐药率很高, 青霉素 四环素和环丙沙星已不能作为本地区治疗淋病的一线药物, 体外实验证明头孢曲松和大观霉素对淋球菌有较高的敏感性, 建议用于淋病的治疗 同时加强淋球菌耐药性持续性监测, 为本地区各级临床机构提供治疗依据 28

30 306 例患者检测单纯疱疹病毒 Ⅱ 型抗体的结果分析 大连市皮肤病医院李彩虹张振国苏宗义乐宏元 近年来, 在性病门诊中以生殖器糜烂或溃疡为主要症状就诊的患者愈来愈多, 由于单纯疱疹病毒 (HSV) 感染的临床表现多种多样, 给诊断和治疗带来许多困难, 常规的病毒分离虽能确诊看, 但费时长 费用高 易受条件限制, 且对分离的病毒株也不易分型 为了解该类患者单纯疱疹病毒 (HSV) 的感染情况, 我们于 2011 年 10~12 月间对来我院性病门诊就诊的此类患者应用 ELISA 方法进行血清 HSV-Ⅱ 型 IgM 和 IgG 抗体检测, 现报告如下 一 材料与方法 ( 一 ) 标本来源与采集 306 例来自我院 2011 年 10 月至 12 月性病门诊, 有的有不同程度的生殖器糜烂或溃疡, 有的无明显症状但有不洁性接触史, 有的自述有 HSV-Ⅱ 型既往史, 年龄 19~79 岁, 男 186 例, 女 120 例 均按标准的静脉穿刺技术抽取静脉血 3ml( 不低于 50μl 新鲜血清 ) 于 EDTA-K2 抗凝管中, 静置后尽快分离血清, 避免凝血 溶血和脂血, 试验若在两天内完成, 将血清存放在 2~8 的冰箱中, 若在两天后完成, 将血清保存在 -40 的冰箱中, 避免反复冻融 ( 二 ) 实验方法采用美国 Trinity Biotech PIC 公司生产的试剂盒, 用酶联免疫吸附试验 (ELISA) 检测 HSV-Ⅱ 型 IgM 和 IgG 抗体 严格按照试剂盒说明书进行操作, 并在试剂有效期内使用 ( 三 ) 仪器瑞士 Tecan Freedom Evolyzer 150/8 全自动酶免分析仪二 结果患者的抗体阳性检出率 :HSV-ⅡIgM 26.1%, 其中男性为 22.0% 女性为 32.5%;HSV-Ⅱ IgG 为 59.8%, 其中男性为 59.1% 女性为 60.8 %; 两者同时阳性的为 15.0%, 其中男性为 12.9% 女性为 18.3% 见下表 HSV-Ⅱ 型 IgM 和 IgG 抗体检测阳性结果表 IgM 阳性 IgG 阳性二者均阳性总例数百分率 (%) 例数百分率 (%) 例数百分率 (%) 例数男性 女性 总计 三 讨论 生殖器单纯疱疹病毒 (HSV) 感染是常见性传播疾病之一, 全世界每年有逾百万的人感染, 主要由 Ⅱ 型 HSV 引起 生殖器疱疹是一种 HSV 感染生殖器皮肤黏膜, 引起炎症 水疱 溃疡性病变的性传播疾病, 近年来其发病率逐年上升 本组患者 IgM 抗体阳性率 26.1%, 这与李维云等报道的 36.70% 阳性率较接近 说明生殖器疱疹的感染率还是相当的高, 尤其本组患者 29

31 都有或配偶有不洁性行为史, 提示临床医生面对这类高危人群应采取主动检测 在本组患者中 IgG 阳性率明显高于 IgM 阳性率, 这表明一方面提示患者曾有既往感染史 ; 另一方面由于有的患者患病到就医存在一定时间的间隔, 而 IgM 抗体在感染 2 周左右滴度就下降至检测不到的滴度 ; 还有的患者 HSV 原发感染后, 机体迅速产生特异性免疫力而康复, 且无明显症状, 但大多数个体不能彻底消除病毒, 病毒以潜伏状态长期存在于宿主体内, 而不引起临床症状, 当宿主机体抵抗力下降时, 潜伏状态的病毒被激活, 转为增殖性感染, 使机体产生病理性损害 由于这种病毒感染后产生的潜伏状态, 因此, 正常的非发病人群仍有较高的 HSV-ⅡIgG 抗体阳性率 血液中的 IgG 抗体的存在时间比较长, 在病毒感染后 1 周出现,3~4 周达高峰, 可持续多年 所以临床医生在检测抗体时应同时检测两种抗体, 以免漏诊 ELISA 方法敏感, 且相比其他的方法有较高的特异性 有报道称用该方法检测的阳性率偏低于荧光定量 PCR 法, 但因容易操作, 仍不失为一般实验室采用的方法 总之,HSV 的感染是性病患者的重要病原体之一, 值得临床工作者重视 单纯疱疹病毒 Ⅱ 型抗体的检测不仅对生殖器溃疡 水疱等明显体征的患者有意义, 而且对无症状者能够及时发现单纯疱疹病毒的隐性感染 监测性伴, 防微杜渐, 对临床诊断有相当大的帮助, 对性病的预防和治疗意义非浅, 应广泛开展 性病实验室常用检测方法操作手册及教学 VCD 简介 性病实验室常用检测方法操作手册及教学 VCD 是一套性病实验室检测的教学手册和视频教程, 该套教学手册及视频以尹跃平教授主编的 性病防治培训手册 - 实验室检测 一书为蓝本制作而成 实验室检测是性病防治工作的重要组成部分, 在性病诊疗 预防工作中发挥着越来越重要的作用 但我国地域辽阔, 各地情况迥异, 各级性病医疗卫生机构实验室的技术力量 检测能力及业务管理水平参差不齐, 性病检测及相关人员接收培训率比较低, 从临床医生的标本采集 标本处理到实验室检测各流程均存在不规范的问题 为了使性病实验室检测能够在性病防治工作中更好的发挥作用, 在卫生部的支持下, 中国疾病预防控制中心性病控制中心组织了国内性病实验室检测及相关领域的专家进行讨论, 由性病参比实验室拍摄并制作了 性病实验室常用检测方法操作手册及教学 VCD 该套教学视频旨在为性病 艾滋病防治人员培训提供详实而直观的教学资料, 使从事性病艾滋病防治工作的实验室检测人员的实验操作规范化 标准化, 从而提高各级性病医疗卫生机构实验室为临床服务 疫情管理以及性病相关防治项目服务的质量 本手册和教学视频主要包括国家法定报告性病, 即梅毒和淋球菌的实验室常规检测方法 梅毒实验室检测方法包括快速检测 RPR TPPA 法 ; 淋球菌实验室检测包括镜检 培 30

32 养 鉴定等方法 该套视频教程适用于各级性病艾滋病防治人员, 是性病艾滋病实验室检测 工作的规范教程, 同时也可为性病艾滋病的临床诊疗提供辅助参考 ( 中国疾病预防控制中心性病控制中心陈绍椿 ) 实验室质控数据及淋球菌耐药数据的网络化管理 在卫生部的支持下, 中国疾病预防控制中心性病控制中心拟将原有的监测 检测 规范化性病诊疗服务 综合干预 阶段小结及年度总结等以纸质材料 ( 或邮件 ) 形式改为以网络形式进行实时直报, 实行以省级性病防治机构审核为主, 各级按权限分享数据方式的 性病防治管理信息平台 Information Management of STD Prevention and Control 参比实验室作为这个信息平台的先行军, 将率先实现数据的网络化管理 该系统通过用户名和密码实现相关人员具有在线浏览或下载本中心参比实验室下发的文件通知 总结报告 实验室质控的成绩等, 上传或网络直报实验室质控 淋球菌耐药数据及考核指标等, 省级中心性病实验室对下属参加性病中心质控的单位的成绩进行查询 自动统计等, 从而实现全国性病实验室质控数据的网络化管理, 为各省级性病中心进一步管理性病实验室工作 开发利用相关信息资源提供便利 目前该系统中实验室数据管理部分已经在最后完善中, 并将在今年选择两个省级中心性病实验室及下属参加实验室质控的单位进行网络直报的预演, 以便发现并解决实际运行中存在的问题 ( 中国疾病预防控制中心性病控制中心韩燕 ) 全国性病实验室工作要点及考核指标研讨会在南京召开 为广泛征求对 2012 年度全国性病工作要点及考核指标的意见以及完善各省性病中心实验室验收方案, 中国疾病预防控制中心性病控制中心于 2012 年 2 月 18 日在南京组织召开了全国性病实验室工作要点及考核指标研讨会 中国疾病预防控制中心性病控制中心参比实验室主任尹跃平 湖南省 CDC 陈曦 辽宁省 CDC 吴少慧 天津市 CDC 郑钟洁 江苏省 CDC 傅更锋 大连市皮肤病医院张振国 浙江皮防所胡丽华 山东皮防所李富容等专家以及性病控制中心参比实验室相关人员共 15 人参加了会议 专家讨论会围绕工作要点各部分内容展开讨论, 提出了多方面的意见和建议 2012 年度工作要点中要求各省加强中心实验室能力建设与辖区内实验室质量管理, 加强技术督导 人员培训和参与性病检测试剂临床质量评估的能力 性病控制中心根据工作要点制定了 31

33 2012 年度考核指标 本次会议还讨论了省中心实验室考核验收方案,2012 年性病中心将完成 5 家省中心实验室的验收,2015 年之前将完成全国所有省中心实验室的验收工作 本次研讨会达成的共识将为 2012 年度性病实验室质量管理工作提供依据, 将为各省中心实验室的顺利验收提供有力的技术保障 ( 中国疾病预防控制中心性病控制中心陈绍椿 ) 蒙古国国家传染病预防控制中心性病艾滋病实验室专业人员来 我中心学习访问 应世界卫生组织要求, 为提高蒙古国性病艾滋病实验室检测和质量管理能力, 2012 年 2 月 29 日至 3 月 13 日中国疾控中心性病控制中心接待了蒙古国国家传染病预防控制中心性病艾滋病部 4 名专业人员来我中心性病参比实验室培训 蒙古国国家传染病预防控制中心承担了蒙古国内的性病艾滋病预防控制任务, 中心下属的性病艾滋病部负责性病实验室检测和国内性病实验室的质量管理 本次来访目的主要是学习性病实验室检测领域最新的检测技术, 规范常规检测实验的操作, 了解实验室质量管理体系的建立 维持和质控品制作方法 围绕培训目标, 性病控制中心设置了相关培训, 培训内容包括淋球菌 梅毒 衣原体 支原体的实验室检测方法, 性病实验室质量管理体系介绍以及常规质控品的制备方法 另外, 蒙古国学员还参观了性病控制中心的性病临床诊疗中心, 与临床医生进行了沟通交流, 了解了规范化性病门诊的实验室检测和诊断治疗流程 此次接待蒙古国学员培训将促进亚太地区不同国家之间在性病防控工作上的合作交流, 也推动了蒙古国性病预防控制工作的发展, 更有助于亚太地区性病实验室质量管理网络的进一步完善 ( 中国疾病预防控制中心性病控制中心陈绍椿 ) 32