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1 目 录 (2009 年第 3 期总 234 期 ) 年度报告中国 2008 年淋球菌耐药监测及质量控制工作报告 性病实验室室间质量控制总结报告 年梅毒试剂评估工作报告 学术论坛淋球菌对头孢曲松耐药基因研究进展 单纯疱疹病毒 II- IgG 抗体检测试剂的比较 经验交流广东省性病实验室规范化建设与质量管理工作介绍 海南省 2008 年度开展梅毒血清学实验室间质量评价简介 上海市性病实验室质量管理体系初步建设的体会 深圳市慢性病防治中心淋球菌耐药监测项目工作心得 天津市性病实验室网络建设情况介绍 消息报道第五届全国性病实验室技术工作组会议纪要 年全国淋球菌耐药监测研讨会在上海召开 年全国性病实验室质量管理工作研讨会会议纪要 全国淋球菌分离鉴定首次室间质评活动全面启动 性病参比实验室通过中国合格评定国家认可委员会的认可 年全国性病实验室室间质量评价活动

2 中国 2008 年淋球菌耐药监测及质量控制工作报告 中国淋球菌耐药监测工作自 1987 在卫生部的领导下开展以来, 为中国的淋病预防和治疗工作提供了重要的信息 2007 年, 中国疾病预防控制中心根据 卫生部办公厅关于进一步加强性病监测工作的通知 ( 卫办疾控发 号 ) 的要求, 下发了 全国性病监测方案 ( 试行 ), 将淋球菌耐药监测工作作为全国性病监测工作的内容之一, 并结合各地区性病流行情况和工作基础, 在全国 25 个省市建立了 30 个中国淋球菌耐药监测检测点 目前各点都已经积极开展工作, 但由于各点现有的工作条件不一样, 所以工作进展情况有所差异, 现将 2008 年中国淋球菌耐药监测工作结果报告如下 一 背景资料 1. 中国淋病的流行现状 2008 年全国淋病的报告病例数是 例, 报告发病率 10.16/10 万, 淋病位居全国乙类法定传染病发病的第 6 位, 其淋病的发病趋势见图 报告发病率 ( 年份 图 年 2008 年淋病报告病例的发病率情况 2. 淋球菌抗生素药物敏感性现状由于抗生素的不合理使用等原因, 造成淋球菌对抗生素的耐药性日趋严重 为了监测我国淋球菌对抗生素的敏感性, 从 1987 年组织了全国淋球菌耐药监测协作组, 在全国范围内开展了淋球菌耐药监测工作,20 年来连续用琼脂稀释法共检测了 株淋球菌临床分离株, 其结果显示淋球菌在中国已对青霉素 四环素以及环丙沙星高度耐药, 而对大观霉素和 - 1 -

3 头孢曲松目前耐药率还是很低 所以目前我国推荐的淋病治疗方案为 : (1) 推荐治疗方案 : 头孢曲松 250mg, 肌内注射, 单次给药 或大观霉素 2g( 子宫颈炎 4g), 肌内注射, 单次给药 或头孢噻肟 1g, 肌内注射, 单次给药 (2) 替代治疗方案 : 头孢克肟 400mg, 口服, 单次给药 或其它已证明其疗效较好的第三代头孢菌素类 3. 淋球菌抗生素耐药机理淋球菌耐药机制非常复杂, 包括染色体介导的低水平耐药和质粒介导的高水平耐药, 其耐药的分类及判断标准见表 1 表 1 淋球菌的耐药分类及判断标准 分类 缩略词 标准 产青霉素酶淋球菌 PPNG B- 内酰胺酶阳性四环素 MIC 16ug/ml 质粒介导的耐四环素淋球菌 TRNG B- 内酰胺酶阴性四环素 MIC 16ug/ml 产青霉素酶淋球菌 / 质粒介导的耐四环素 B- 内酰胺酶阳性 PPNG/TRNG 淋球菌四环素 MIC 16ug/ml 染色体介导的耐青霉素和四环素淋球菌 CMRNGPT, 青霉素和四环素 MIC 1ug/ml 染色体介导的耐青霉素淋球菌 CMRNGP, 青霉素 MIC 1ug/ml 染色体介导的耐四环素淋球菌 CMRNGT, 四环素 MIC 1ug/ml 染色体介导的耐喹诺酮淋球菌 QRNG 环丙沙星 MIC 0.5ug/ml 染色体介导的耐环丙沙星淋球菌 CRNG 环丙沙星 MIC 1ug/ml 染色体介导的耐大观霉素淋球菌 大观霉素 MIC 128ug/ml 耐 cefozopran 淋球菌 CZRNG cefozopran MIC8-16 ug/ml 阿奇霉素 MIC 1 ug/ml 二 2008 年标本来源及人口学资料从全国 14 个监测点一共收集了 1397 株淋球菌临床分离株, 是 20 年来参加耐药检测省份最多及收集菌株最多的一年 所有的菌株均来自性病门诊的就诊病人, 其各检测点的收集菌株数及有关人口学资料见表 2-2 -

4 表 2 全国 2008 年度淋球菌耐药监测点报告收集菌株数及人口学资料 组织实施单位 收集菌株数 男性 女性 年龄 ( 岁 ) 深圳市慢性病防治中心 广东省皮肤性病防治中心 183 / / / 中国 CDC 性病控制中心 ( 南京 ) 上海市皮肤病性病医院 福建省皮肤病防治院 四川省人民医院皮肤病性病研究所 广西区皮肤病防治研究所 广州市皮肤病防治所 74 / / / 陕西省西安市第四医院 浙江省皮肤病防治研究所 天津市疾病预防控制中心 重庆第一人民医院 新疆维吾尔族自治区疾病预防控制中心 海南省皮肤性病防治中心 武汉市皮肤病防治研究所 0 甘肃省疾病预防控制中心 0 湖南省疾病预防控制中心 0 银川市疾病预防控制中心 0 上海市疾病预防控制中心 0 贵州省疾病预防控制中心 0 江西省疾病预防控制中心 0 上饶市皮肤病防治所 0 山东省皮肤病防治研究所 0 江苏省疾病预防控制中心 0 山西省临床检验中心 0 北京市疾病预防控制中心 0 河南省疾病预防控制中心 0 大连市皮肤病医院 0 云南省疾病预防控制中心 0 安徽省皮肤病防治所 0 三 抗生素耐药监测 2008 年全国 14 个点, 严格按照 全国淋球菌耐药监测实施方案, 采用最低抑菌浓度稀释法 (MIC) 对 1397 株淋球菌临床分离株进行了五种抗生素药物的敏感性检测, 其各点的检测结果见表 3-3 -

5 表 3 各监测点对五种抗生素药物的敏感性 监测点 大观霉素环丙沙星头孢曲松四环素青霉素菌数耐药中敏敏感耐药中敏敏感耐药中敏敏感 TRNG PPNG 广东 南京 上海 广西 福建 海南 深圳 新疆 西安 四川 浙江 广州 重庆 天津 合计 百分率 (%) 四 质量控制为了保证各监测点检测数据的准确性和可比性, 参比实验室从 2007 年开始对各监测点进行室间质控, 目前为每年一次,2008 年发放质控品为 3 份, 其各点对质控品检测结果见表 4 表 年淋球菌耐药室间质控结果回报总结 抗生素监测点 质控 菌株 青霉素 (PPNG) 头孢曲松 (μg/ml) 环丙沙星 (μg/ml) 大观霉素 (μg/ml) 四环素 (TRNG) 考评结果 参考值 QA1 QA2 QA3 PPNG TRNG 002 QA1 QA2 QA3 PPNG TRNG 合格 008 QA1 QA2 QA3 PPNG PPNG TRNG 005 QA1 AQ2 QA3 PPNG TRNG 合格 006 QA1 QA2 QA3 PPNG TRNG 合格 - 4 -

6 007 QA1 QA2 QA3 PPNG TRNG 合格 010 QA1 QA2 QA3 PPNG TRNG 合格 004 QA1 QA2 QA3 PPNG TRNG TRNG 合格 001 QA1 QA2 QA3 PPNG QA1 QA2 QA3 PPNG > TRNG 合格 003 QA1 QA2 QA3 标本送本中心参比室, 质控未做 五 讨论 1. 从 1987~2008 年我国淋球菌耐药监测结果 ( 见表 5) 可以发现, 有质粒介导的高浓 度耐药株 PPNG 和 TRNG 已分别达到 38.80% 和 50.18%, 环丙沙星的耐药率高达 96.13%, 提示我国抗生素不规范用药的问题比较严重 目前淋球菌对大观霉素和头孢曲松的耐药率还 是比较低, 说明此两种药物仍可作为我国淋病治疗的一线药物, 但局部区域出现了高比例耐 头孢曲松的临床分离菌株, 这是一个非常危险的信号, 提示我们一方面要密切注意耐药流行 趋势 另外一定要加强宣传, 规范用药, 以免耐药菌株的快速蔓延 表 5 中国 年分离的淋球菌对五种抗生素的耐药情况 耐药率 % 年份青霉素四环素大观霉头孢曲环丙沙星总 PPNG 总 TRNG 素松

7 淋球菌耐药监测为我国制订性病防治策略以及临床诊疗方案提供了科学的参考依据 但目前此项工作有待进一步完善, 其中包括 :1 目前 50% 监测点开展耐药监测工作 ; 有些省份目前有关耐药流行资料还是空白 ;2 有些监测点的收集菌株数太少, 不能达到基本数据的要求 ;3 个别监测点报告的人口学资料不完善 4 质控结果表明, 大部分监测点考评结果合格, 能够保证监测结果的准确和可靠, 但也有个别点还存在检测误差 根据以上问题, 2008 年应开展以下工作 :1 进一步加强各检测点能力建设, 包括人员培训 ;2 加强各检测点资料管理和分析 ;3 加强各监测点的督导工作 ( 中国 CDC 性病控制中心参比实验室 ) 2008 性病实验室室间质量控制总结报告 中国疾病预防控制中心 (CDC) 性病控制中心参比实验室对全国省级实验室及国家级 性病监测点等性病检测实验室进行梅毒 生殖道沙眼衣原体感染以及淋病实验室的室间质量 考核活动 其考核结果报告如下 一 梅毒血清学检测 其中梅毒血清学检测分为梅毒特异性抗体和梅毒非特异性抗体检测 ; 要求参加单位为各 省级性病中心实验室 国家级淋球菌耐药监测点 国家性病监测点 ; 部分性病检测实验室自 愿参加了本次活动 本次共发放质控品 168 套 ( 每套有 5 份考核样本 ), 收到结果反馈单位 146 家 ( 两家单位未开展此项检测 ) 质控结果见表 1 3 表 年梅毒检测项目参加单位地区分布情况 省份北京上海天津重庆福建广西新疆山东参加单位数 2(1)* 3(1) 2(1) 5(2) 11(3) 6(4) 7(3) 4(3) 省份湖北海南广东贵州江苏陕西河南山西参加单位数 6(5) 9(2) 9(6) 5(2) 7(6) 3(1) 1(0) 4(3) 省份安徽江西辽宁青海浙江甘肃吉林四川参加单位数 5(4) 7(5) 4(2) 3(2) 6(4) 4(3) 4(3) 4(3) 省份宁夏云南西藏黑龙江内蒙古河北湖南参加单位数 2(1) 5(4) 1(0) 5(2) 3(2) 4(2) 5(4) *: 括号内为国家性病监测点单位数 - 6 -

8 表 年梅毒检测项目参加单位及开展项目情况 单位分类 参加单位数 开展两项检测单位 开展单项检测单位 省中心实验室 (%) 31(100) 31(100) 0 国家淋球菌耐药监测点 (%) 29(100) 29(100.00) 0 国家性病监测点 (%) 83(79.05) 77(73.33) 6(5.71) 表 年梅毒检测项目考核成绩 综合得分 100 分 80~99 分 60~79 分 60 分 80 分 省中心实验室 (%) 27(87.10) 4(12.90) (100.00) 国家淋球菌耐药点 (%) 24(82.76) 5(17.24) (100.00) 国家性病监测点 (%) 38(45.78) 30(36.14) 12(14.46) 3(3.61) 68(81.93) 合 计 83(57.64) 46(31.94) 12(8.33) 3(2.08) 129(89.58) 二 沙眼衣原体抗原检测本次活动共向全国 168 家性病防治机构发放了质控样品, 收到反馈结果或说明的单位为 132 家 7 个单位在反馈信息时, 说明不能开展 CT 抗原检测 1. 考核单位全国共有 132 家性病检测单位参加, 其中省级 29 家, 性病监测点 75 家, 自愿参加的各级性病检测实验室 28 家 2. 考核样品由中国 CDC 性病控制中心参比实验室统一制备质量样品, 主要通过邮寄方式发放到各性病检测实验室, 共发放 CT 抗原样品 5 份 ( 包括 3 份不同强度的阳性标本和 2 份阴性标本 ) 3. 质控样品的检测质控样品的检测应由进行常规检测的人员进行检测, 必须使用实验室的常规检测方法, 这样才能反映常规工作水平 各实验室应在规定的时间内进行检测, 并将检测结果回报性病控制中心参比实验室 4. 评分标准如每份样品检测结果与预期结果一致得 20 分 ; 不一致者得 0 分, 满分为 100 分 考核成绩 100 分为优秀 ;80 分为合格 ;60 分为一般 ;<60 分为不合格 5. 质控样品考核结果从表 4 可见,67.42%(89 个单位 ) 检测实验室回报结果与预期结果完全相符, 考核成绩为优秀 ;15.15%(20 个单位 ), 考核成绩为合格 ;13.64%(18 个单位 ), 考核成绩为一般 ;3.79%(5 个单位 ), 考核成绩为不合格 表 个参评单位沙眼衣原体检测项目考评成绩 参评单位总数优秀 (%) 合格 (%) 一般 (%) 不合格 (%) (89/132) 15.15(20/132) 13.64(18/132) 3.79(5/132) 6. 诊断试剂使用情况本次参加室间评价的实验室使用的检测方法分别为 CT 快速抗原检测 EIA( 酶免法 ) 及 PCR-ELISA 法 3 类, 共涉及 12 种不同的检测试剂及厂家 对检测试剂的分析表明,93.94% 性病检验实验室使用 CT 快速抗原检测试剂 ;3.03% 单位使用 EIA 或 PCR 法, 见表 5 CT 快速抗原检测试剂具有快速简便等优点, 目前, 仍为临床性病实验 - 7 -

9 室首选检测方法之一 表 5 沙眼衣原体室间质量评价质控样品检测试剂使用情况 检测方法使用单位数 (%) 快速抗原检测 EIA( 酶免法 ) 检测 PCR 检测 124(93.94) 4(3.03) 4(3.03) 三 淋球菌初步鉴定 2008 年分别选择了不同级别共 55 个实验室进行了淋球菌初步鉴定质控品的预试验, 包括 :31 个省 自治区 / 直辖市的性病检测中心实验室,21 个国家性病监测点,3 个自愿报名参评的实验室 1. 质控品的制备及组成由中国 CDC 性病控制中心参比实验室统一将质控品制成冷冻干燥品, 每组质控品由 5 份样本组成,1 份为 WHO 提供的标准株,1 份为中国 CDC 性病控制中心临床基地的临床分离株,3 份为阴性样本, 其编号分别为 质控品的发放由中国 CDC 性病控制中心统一用特快专递邮寄到全国 31 个省 / 直辖市的性病中心实验室,21 个国家性病监测点的质控品通过各省性病中心实验室转发至各监测点实验室 3. 质控品的检测按照淋病诊断标准 (WS ) 中淋球菌感染的实验室诊断中有关淋球菌初步鉴定的方法进行操作 要求各实验室在收到质控品后, 从实验操作到报告发放全过程, 将质控品当作临床样本对待 4. 结果 (1) 共发放 55 个实验室, 反馈结果 41 个, 有 13 个实验室由于不具备条件等原因而未参加质评, 有 1 个实验室结果回报过了时间 ( 见表 6) 9 个省中心实验室未完成的原因 :1 实验室条件具备, 但未进行 NG 培养, 正在做准备工作,2 不具备条件 (6 个实验室 )3 未开展淋球菌检测工作 (2 个实验室 ) 4 个国家性病监测点实验室未完成的原因 :1 有 2 个实验室只做涂片检查, 未开展淋球菌培养鉴定 ;2 有 2 个实验室因条件不完善, 培养基过期了等原因 表 6 参评实验室分布及完成情况 31 个省中心实验室国家性病监其它合计 CDC 系统皮防系统临床检验中心测点发放实验室数 检测完成数 13(61.90%) 9(100%) 1(100%) 17(80.95%) 3(100%) 41(74.54%) (2) 结果反馈表显示 41 个参评实验室使用的方法均为培养法, 使用的培养基购买商 - 8 -

10 品化的有 28 个实验室, 自配的有 13 个实验室, 使用的培养基为淋球菌选择性培养基 (TM) 和血平皿培养基 (3) 5 份质评样品检测结果 ( 见表 7 表 8) 表 7 每份质控品检测结果的符合率 质控品编号 实验室数 符合率 97.56% (40/41) 87.80% (36/41) (37/41) (28/41) 97.56% (40/41) 实验室分布实验室数 表 8 5 份质控品检测结果的符合率 符合率为 100% 符合率为 60% 以上 结果全部为阴性 CDC 皮防 CDC 皮防临检 CDC 皮防监测点其它监测点系统系统系统系统中心系统系统 监测点 ( 率 ) 57.14% 66.67% 33.33% 100% 4.76% 22.22% 28.57% 100% 4.76% 11.11% 29.52% 合计 65.85%(28/41) 21.95%(9/41) 9.76%(4/41) 四 讨论 年梅毒血清学检测 沙眼衣原体抗原检测以及淋球菌的初步鉴定的室间质控, 了解了现阶段各级性病检测实验室在梅毒检测中方法的应用和试剂使用情况, 收集到了各参 加单位对性病实验室质量管理体系建立的意见和建议 2. 这次有关沙眼衣原体室间质评结果反映出问题如下 : (1) 本中心共向全国 168 家性病防治机构发放了沙眼衣原体质控品, 收到反馈结果或 说明的单位为 138 个家 ( 其中 7 个单位在反馈信息时说明, 目前尚不能开展 CT 抗原检测 ) 说明部分省 市级性病实验室需要加强性病检测能力, 尽快开展了沙眼衣原体检测并参与中 国 CDC 性病控制中心组织的性病实验室间质评工作 (2) 从表 9 可见, 有 26 个单位性病检测实验室在使用 CT 快速抗原检测试剂时, 没严 格按照说明书进行操作, 将 2 份 ( 和 ) 预期值为阴性的质控样品误报为阳性 结果, 应引起重视, 实验室要从试剂质量和操作方法等方面查找原因 5 份质控样品检测结 果的符合率分别为 90.84% 93.13% 89.31% 85.50% 和 80.02% 表 年 5 份沙眼衣原体质控样品检测结果的符合率 质控样品号 参评单位数 ( 家 ) 符合 (%) 不符合 (%) (90.84) 12(9.16) (93.13) 9(6.87) (89.31) 14(10.69) (85.50) 19(14.50) (80.02) 17(12.98) - 9 -

11 (3) 仍有 2 个单位因检测方法选择错误, 即用检测抗体的试剂来检测抗原, 导致检测 结果错误 还有的因试验操作不当 试剂质量等原因, 将 5 份质控样品误报为全部阴性或全 部阳性 (4 个单位全部误报为阴性 ;1 个单位全部误报为阳性 ) 因此, 选用高质量的试剂和 规范的操作程序是保证性病检测质量的关键 (4) 从进口试剂与国产试剂的使用情况发现,2 种试剂的使用率较接近, 分别为 % 和 48.85%, 见表 10 国产试剂的使用情况和符合率与 2007 年相比均有较大提高 表 10 进口试剂与国产试剂使用情况的比较 试剂种类 使用单位数 (%) 进口试剂国产试剂 67(51.15) 64(48.85) 合 计 131(100.0) 年首次对淋球菌检测进行的室间质控预试验, 从这次质控结果表明, 存在部分实验室不开展淋球菌的培养, 开展培养的实验室存在培养及鉴定技术不符合要求的问题, 因此需要进一步加强人员培训, 提高淋球菌的检测技术 年, 我们主要对省级性病防治机构以及全国性病监测点性病防治机构开展了室间质控活动 但全国医疗机构性病实验室室间质控一直是一个亟待解决的问题, 需要有一个完善的全国性病实验室质量管理网络来开展这项工作 所以建议卫生部能够给与这一方面的支持, 尽快出台性病实验室质量管理办法, 从而能够开展各级开展性病诊疗服务机构的实验室质量控制工作 ( 中国 CDC 性病控制中心参比实验室 ) 2008 年梅毒试剂评估工作报告 为了解国内市场梅毒诊断试剂的情况, 中国疾病控制中心性病控制中心于 2008 年 月组织了梅毒诊断试剂临床质量评估活动 一 评估方法 : ( 一 ) 参加单位本次评估由性病参比实验室组织实施, 上海市皮肤性病医院 广西壮族自治区皮肤病防治研究所 福建省皮肤病防治院等三家省级实验室参与 ( 二 ) 样品的组成和采集由 504 份样品构成, 包括已知样本 139 份和未知样本 365 份 已知样本为卫生部临检中心临床考核血清盘 ( 梅毒螺旋体 )40 份 梅毒 ( 特异 ) 室内质控血清 3 份 梅毒 ( 非特异 ) 室内质控血清 1 份及性病参比实验室的已知样本 95 份 未知样本 365 份由各参评单位采自

12 STD 门诊, 由参评单位结合临床症状并用其常规检测方法及试剂检测后确定的阳性及阴性标本 ( 三 ) 评估试剂本次评估选择了 13 个厂家的 18 种试剂 评估试剂全部由性病参比实验室从市场购买 避免由厂家直接送检, 以保证其真实性 实行双盲检验, 即操作者不知设计安排者选用样品的真实情况 ( 四 ) 参比试剂 1. 美国 BD 公司生产的 梅毒快速血浆反应素环状卡片试验诊断试剂盒 (RPR 试剂盒 ) ( 批号 : ) 2. 日本富士株式会社生产的 梅毒螺旋体抗体诊断试剂 ( 凝集法 )(TPPA 试剂盒 )( 批号 :VN80807) 3. 抗梅毒螺旋体抗体 (IgG) 检测试剂盒 ( 免疫印渍法 )(16 人份 / 盒 )( 批号 :D081009A1) ( 五 ) 质评样品的检测实验前, 所有参加本次评估的检测人员均进行过统一培训 参评试剂由所有参评的技术人员在参比实验室共同完成 二 评估结果 : 1. 本次评估的非梅毒螺旋体血清学检测用试剂符合率见表 1 表 1 非梅毒螺旋体抗原血清学检测用试剂敏感性和特异性试剂名称生产厂家生产批号敏感性 (%) 特异性 (%) RPR 上海科华生物技术有限公司 TRUST 上海荣盛生物技术有限公司 TRUST 兰州生物制品研究所 TRUST 英科新创 ( 厦门 ) 科技有限公司 TRUST 郑州安图绿科生物工程有限公司 TRUST 北京万泰生物药业有限公司 MZ RPR: 梅毒快速血浆反应素环状卡片试验诊断试剂盒 TRUST: 梅毒甲苯胺红不加热血清试验诊断试剂盒 2. 梅毒螺旋体抗原血清学检测用试剂的敏感性和特异性见表 2 3 表 2 梅毒螺旋体血清学检测用试剂 (ELISA 法 ) 的敏感性和特异性 试剂名称 生产厂家 生产批号 敏感性 (%) 特异性 (%) 梅毒螺旋体抗体诊断试剂 珠海丽珠试剂有限公司 ( 双抗夹心法 )(ELISA-TP) 梅毒螺旋体抗体诊断试剂 英科新创 ( 厦门 ) 科技有限公司 ( 双抗夹心法 )(ELISA-TP) 梅毒螺旋体抗体诊断试剂 北京华大吉比爱生物技术有限公司 ( 双抗夹心法 )(ELISA-TP) 梅毒螺旋体抗体诊断试剂 北京万泰生物药业有限公司 N ( 双抗夹心法 )(ELISA-TP)

13 梅毒螺旋体抗体诊断试剂 北京现代高达生物技术 ( 双抗夹心法 )(ELISA-TP) 有限责任公司 梅毒螺旋体抗体诊断试剂 北京金豪制药股份有限公司 ( 双抗夹心法 )(ELISA-TP) 梅毒螺旋体抗体诊断试剂 上海科华生物技术有限公司 ( 双抗夹心法 )(ELISA-TP) 表 3 梅毒螺旋体血清学检测用试剂 ( 快速 ) 的敏感性和特异性 试剂名称 生产厂家 生产批号 敏感性 (%) 特异性 (%) 梅毒螺旋体抗体诊断 北京万泰生物药业有限公司 试纸盒 ( 胶体金法 ) 梅毒螺旋体抗体检测 英科新创 ( 厦门 ) 科技有限公司 试纸条 ( 胶体金 ) 梅毒螺旋体抗体胶体 韩国 SD 公司 金诊断试剂梅毒螺旋体抗体胶体 艾康生物技术 ( 杭州 ) 有限公司 金诊断试剂 三 讨论 : 1 非梅毒螺旋体抗原血清学检测用试剂在 07 年试剂评估的基础上选择了美国 BD 公司生产的 RPR 试剂为标准比对试剂, 本次检测 RPR 试剂的敏感性为 97.2%, 特异性为 93.4%, TRUST 试剂的敏感性在 84.3~97.2% 之间, 特异性在 92.0~96.2% 之间 每种试剂均出现阳性漏检的情况, 而在已知样本卫生部临检中心临床考核血清盘 ( 梅毒螺旋体 ) 的检测中, 有 4 种试剂多个弱阳性样本未能检出 说明国产试剂的质量还有待于提高 2 梅毒螺旋体抗原血清学检测用试剂选择梅毒螺旋体抗体诊断试剂( 凝集法 )(TPPA 试剂盒 )+ 免疫印迹法为扩大金标准 ELISA 法的敏感性在 97.7~99.6% 之间, 特异性在 93.8~ 99. 6% 之间 快速检测试剂的敏感性在 87.8~98.1% 之间, 特异性在 93.8~100% 之间 酶免试剂的总体水平较高, 快速试剂的质量参差不齐, 有的试剂漏检情况较严重 如何加强试剂的检定工作, 减少试剂批间差异, 促进生产厂家产品质量的改进是非常迫切的 ( 中国 CDC 性病控制中心参比实验室 ) 淋球菌对头孢曲松耐药基因研究进展 中国疾病预防控制中心性病控制中心 袁柳凤尹跃平 目前有关淋球菌对头孢菌素类抗生素耐药机制的研究报道很多, 但是淋球菌对头孢曲松的耐药机制还不明确 头孢曲松属于 β 内酰胺类抗生素, 与 β 内酰胺类抗生素耐药相关基因主要有 pona pena porb penc gyra parc mtrr tem-1 等基因 pona 基因编码

14 青霉素结合蛋白 1(PBP1),penA 基因编码青霉素结合蛋白 2(PBP2),β 内酰胺类抗生素与它们结合从而干扰细菌肽聚糖的合成, 导致细菌死亡 如果 pona pena 突变就会导致 β 内酰胺类抗生素敏感性降低 penc 突变与 pona 突变存在协同作用, 可产生对青霉素的高水平耐药 porb 基因编码孔蛋白 (Porin), 孔蛋白是淋球菌外膜的主要蛋白, 具有物质运输功能,porB 基因突变导致孔蛋白对抗生素的渗透性下降 mtrr 基因编码阻遏蛋白 MtrR, mtrr 突变导致 MtrR 减少, 从而导致 MtrCDE 外排泵系统表达增加, 菌体内药物排出增多, 药物敏感性下降, 与多重耐药相关 gyra parc 基因突变主要与氟喹诺酮类药物耐药密切相关, 还可能与头孢菌素类抗生素敏感性降低有关 tem-1 基因主要位于质粒上, 编码 β- 内酰胺酶, 降解 β 内酰胺类抗生素 淋球菌对头孢曲松耐药主要由染色体介导, 目前大多数研究主要关注 pena 和 mtrr 等基因在淋球菌对头孢曲松耐药中的特殊作用 1 pena 基因研究发现含有镶嵌状结构的 pena 基因可能是导致淋球菌对头孢曲松敏感性下降的原因之一 Ito 等对 55 株头孢克肟敏感性下降菌株及 15 株头孢克肟敏感菌株进行 pena 基因测序后发现 10 种不同的 PBP2 氨基酸序列 (Ⅰ Ⅹ), 其中 Ⅰ Ⅸ 型 pena 中都有密码子 (Asp-345a) 插入,Ⅱ Ⅸ 型 pena 中还存在其它点突变, 只有 Ⅹ 型 pena 中存在镶嵌状结构 67%(47/70) 的菌株含有镶嵌状结构 pena, 并且都对头孢曲松敏感, 但是它们对头孢曲松的最小抑菌浓度 (MICs) 比含有 Ⅰ Ⅸ 型 pena 基因的菌株高 Tanaka 等从 398 株淋球菌中检出 1 株对头孢曲松敏感性下降并且对其它几种抗生素亦耐药的多重耐药株, 对其进行 pena pona mtrr 等基因测序后发现含有镶嵌状结构 pena 基因与头孢曲松敏感性有关 Lindberg 等对 18 株头孢克肟和头孢曲松低敏菌株和 2 株敏感菌株进行测序分析发现含有镶嵌状结构 pena 基因与头孢克肟 头孢曲松敏感性下降密切相关 最近 Osaka 等对头孢克肟和头孢曲松敏感性下降菌株进行 pena 基因测序后发现 pena 基因有 2 种类型 : 一种存在镶嵌状结构, 另一种不存在镶嵌状结构 存在镶嵌状结构的 pena 与其它奈瑟氏属菌的 pena 基因存在同源性, 另一种不存在镶嵌状结构的 PBP2 中存在 Ala-501-Val 突变 这两种类型的 pena 基因都与头孢克肟 头孢曲松敏感性下降有关, 另外他们还发现头孢烯类抗生素敏感性下降与 PBP2 构象改变有关 但也有研究结果发现 PBP2 的镶嵌状结构对淋球菌耐头孢曲松的作用不明显 Whiley 等对 109 株头孢曲松敏感性下降菌株进行营养分型 血清分型 基因分型 pena 基因测序后发现头孢曲松敏感性下降菌株的亚型及 pena 基因 DNA 序列都存在多样性, 头孢曲松敏感性下降与镶嵌状结构 pena 基因两者之间并无明显相关性 Takahata 等通过镶嵌状结构 pena 基因转化实验也发现含有镶嵌状结构的 PBP2 对头孢克肟的抗生素活性影响较大, 但是对头孢曲松的活性影响较小 蒋法兴等对 11 株头孢曲松低敏菌株及 2 株头孢曲松敏感菌株进行 pena 基因测序,PBP2 中共发现 5 种氨基酸插入或置换模式, 没有发现镶嵌状结构模式, 故认为 PBP2 的镶嵌状结构可能不是导致淋球菌对头孢曲松敏感性下降的主要因素 2 mtr R 及其它基因

15 Lindberg 等研究发现除了 pena 基因与淋球菌对头孢曲松敏感性下降有关之外, 还发现 mtrr porb1b pona 基因多态性变化也与头孢克肟 头孢曲松敏感性下降密切相关 赖维等通过体外人工诱导头孢曲松耐药株, 然后应用抑制性消减杂交及基因芯片技术分析耐药机制, 研究发现淋球菌对头孢曲松耐药与 mtrr mtrc 等有关, 可能通过外排泵活性增强途径介导耐药 单纯疱疹病毒 Ⅱ-IgG 抗体检测试剂的比较 中国疾病预防控制中心性病控制中心 余艳华 近年来, 无论在西方发达国家还是发展中国家, 生殖器疱疹 (genital herpes,gh) 的发 病率呈迅速增加趋势 在我国有统计资料显示,GH 发病人数的年增长率在 70% 以上, 尤其 在我国南方的发病率较高 单纯疱疹病毒 2 型 (herpes simplex virus 2,HSV2) 是 GH 的主 要病原体, 也是实验室检测的主要对象 由于 HSV2-IgG 抗体检测试验是判断无症状感染者 以及原发性感染的最好方法, 是发现亚临床感染 流行病学调查的最可行手段 又因其操作 简单 快速且费用较低, 国内已有不少医院开展了用 HSV2-IgG 抗体血清学检测法进行 GH 的筛查工作 在我们用此方法进行 GH 的流行病学调查工作中, 发现不同品牌的试剂同时检 测同一批标本却出现了不同的 甚至差异较大的结果, 现将此结果报告如下 标本来源自 2003~2006 年福州市农贸市场普通体检人群 2008 年 3~5 月广西自治区皮 肤性病防治所性病科就诊患者 试剂选取国内目前常用的的 7 种品牌 HSV2-IgG 抗体 ELISA 检测试剂, 其中 3 种为美国 爱尔兰 瑞典的进口产品, 并有美国 FDA 欧盟 CE 认可证书 另 4 种为美国进口的和北京 深圳国内生产的产品 具体情况见表 1 表 1 HSV2-IgG 抗体检测试剂一览表 编号 品牌 产地 规格 ( 人份 / 盒 ) 批号 有效期 R.01 FOCUS 美国 R.02 Trinity 爱尔兰 / R.03 FUJIREBIO 瑞典 ( 康乃格 ) -514 R.04 Biocheck 美国 / 中国海南 96 RN R.05 ZEUS 美国 R.06 赛尔 深圳 R.07 贝尔 北京 结果表明 R01(Focus) R02(Trinity) R03(Fujirebio) 三组试剂之间的阳性结果比较 一致, 统计学处理均为 p>0.01, 无显著性差异 三组试剂检测结果相符率达到 95% 以上 而 R01 07 四中试剂各组之间的结果相比, 经统计学处理均为 p<0.01, 有显著性差异

16 四组试剂检测结果与 R01(Focus) 的相符率在 54%~75% 之间 Focus Diagnostics 试剂盒采用的是重组 gg2 抗原检测, 以 Chion RIBA 蛋白印迹条方法为标准, 其敏感性为 97.7%(95% CI,86.5~99.9), 特异性为 94.5%(95%CI,83.9~98. 6) Ashley 综述该试剂盒与蛋白印迹方法相比的敏感性为 96%~100%, 特异性为 97~98% 在本实验中 R02(Trinity) R03(Fujirebio) 两试剂的检测结果与其的相符率高达 95% 以上, 以此验证了 Focus 试剂检测的准确性 此方法也是在同类产品中美国 FDA 最早认可批准的, 所以本实验以 Focus Diagnostics 试剂为比较方法 尽管在这里对这些试剂的敏感性 特异性没有进行评价, 但以上的方法比较足以引起我们的重视 一个实验室检测诊断的水平如何, 选用的试剂是关键 一定要选用经过相关单位批准认可的试剂 因感染 HSV2 病毒后,IgG 抗体长期存在, 说明用此方法即使检测其显示阳性, 在临床上也要根据临床症状来确诊是否为现症病人 但在患者的急性感染期 HSV2-IgG 抗体滴度却很低, 甚至查不到抗体 此时应改用其他检测方法, 例 IgM 或抗原的检测 所以选用高敏感性 高特异性的试剂对准确筛查或诊断 GH 有着十分重要的意义 广东省性病实验室规范化建设与质量管理工作介绍 广东省皮肤性病防治中心 郑和平 为了加强我省性病实验室规范化管理, 根据 中国预防和控制艾滋病中长期规划 ( ) 和 广东省预防与控制艾滋病中长期规划( ) 要求, 结合我省实际情况, 广东省卫生厅签发 ( 粤卫 [2002]216 号 ) 关于印发广东省性病实验室管理工作规范( 试行 ) 和 ( 粤卫 [2003]79 号 ) 关于开展广东省性病实验室评定工作的通知 文件要求依据各实验室的任务 人员和设备等条件, 采用三级和中心实验室模式开展全省性病实验室规范化建设, 并通过实验室室内质控和室间质评方式建立性病实验室质控体系 在各级卫生主管部门的领导下, 在各地市性病防治中心的积极配合下, 广东省性病实验室规范化建设进展顺利, 经过起步阶段 ( 年 ), 发展阶段 ( 年 ), 初步建立起全省性病实验室质量管理体系 2008 年起进入应用再发展阶段 一 全省性病实验室规范化建设全省性病实验室规范化建设达标数量快速增长 2003 年 15 家,2004 年发展到 75 家, 2005 年发展到 98 家, 2006 年为 173 家,2007 年 207 家, 至 2008 年 12 月发展到 224 家 224 家性病实验室中,5 家一级性病实验室通过评审后重新申报二级, 经省专家评审通过 实验室级别分布包括三级性病实验室 9 家, 二级 / 市中心性病实验室 81 家, 一级 / 县 ( 区 ) 级中心性病实验室 134 家 按照医疗机构性质分为皮防系统 60 家, 综合性医院 164 家 ( 占

17 73.2%) 至此, 全省 21 个地级市中 17 个地市完成性病中心实验室的建设, 各地性病实验 室规范化建设达标数量见表 各地性病实验室规范化建设达标数量表 级别 东莞 韶关 深圳 肇庆 江门 广州 珠海 佛山 云浮 清远 梅州 揭阳 阳江 茂名 惠州 汕头 中山 潮州 湛江 汕尾 河源 三 二 一 合计 二 各地市成立性病实验室专家委员会根据卫生厅文件的要求,2003 年 4 月成立了广东省性病实验室专家委员会, 负责全省性病实验室规范化建设的技术指导和评定工作 为配合全省工作的开展, 各地市在完成市中心性病实验室的规范化创建工作后, 先后成立市级专家小组, 负责当地性病实验室的规范化建设 技术指导 培训和初评工作 目前已成立市级性病实验室评审小组的地市有广州市 深圳市 佛山市 珠海市 江门市 韶关市 肇庆市 惠州市 中山市 东莞市 云浮市 清远市和茂名市 三 建立三级性病实验室质量管理网络, 推动性病实验室的规范发展为了确保实验室的规范化发展, 根据 ( 粤卫 [2002]216 号 ) 文件要求, 逐步建立起性病实验室质量管理网络 省性病中心实验室负责全省性病实验室的质量管理及达标后的督导工作, 地市性病中心实验室负责当地性病实验室的质量管理及技术督导工作, 县区性病中心实验室负责本县区性病实验室的质量管理及技术督导工作 每年开展性病实验室室间质评和监督管理活动, 质评项目包括了所有性病实验室诊断试验, 如衣原体, 支原体培养鉴定, 淋球菌培养鉴定, 梅毒初筛定性 定量试验, 梅毒确证定性 定量试验, 生殖器疱疹, 滴虫读片, 念珠菌读片, 细菌性阴道病读片, 软下疳读片等 省级性病实验室室间质量考评工作逐渐完善, 参加实验室逐年增加 2004 年 19 家,2005 年 95 家,2006 年共计 135 家实验室参加室间质量考评,2007 年将达到 185 家,2008 年达到 207 家 累计发放质控样本 2 万余份 通过质评结果的反馈和对不合格实验室的现场调查, 使得各实验室质量得到进一步改进完善 2005 年共计 95 家参评实验室中,9 家 (9.5%) 实验室考评不及格 经认真整改后,2006 年度质评结果明显提高, 结果成绩优秀 81 家 ( 占 60%), 良好 44 家 ( 占 32.6%), 合格 9 家 ( 占 6.7%), 不合格 1 家, 仅占 0.7% 合格率较 2005 年有明显增加 2007 年 2008 年质评总合格率维持在为 100%~99.5% 实验室的检测水平明显提高, 在全省性病防治和各项干预项目中发挥着重要的作用

18 年全省性病实验室质评成绩 年份 实验室数 优秀率 良好率 合格率 不合格率 总合格率 市级性病实验室质量考评和督导工作随着规范化实验室达标数量的增加而逐步开展起来 2006 年起江门市和广州市每年开展性病监测点实验室室间质评活动 深圳市自 2006 年起加强性病实验室的规范化建设并开展室间质评活动, 同时将其列入性病防治工作中, 对提高性病防治工作的质量起到积极的作用 四 创建广东省性病实验室规范化管理信息系统经过多年的努力, 创建了广东省性病实验室规范化管理信息系统 该系统包括性病实验室管理和室间质量管理系统 实验室管理系统可进行检测数据 原始数据 报病及感染率 室内质控 人事制度 SOP 文件 仪器设备 试剂购置等管理 ; 室间质量管理系统可直接进行数据的网上直报 全省结果分析评价 试剂评价 方法学评价 直接报告和成绩查询等 该项工作在全国领先, 将进一步推动我省性病实验室的规范化建设 五 开展试剂质评活动, 为性病实验室的质量管理提供依据 目前性病诊断试剂种类繁多, 不同厂家试剂质量参差不齐, 严重影响性病实验室的检测质量 根据卫生厅文件要求, 制定了 广东省性病实验室试剂质评工作方案, 并于 2005 年 3 月成立了广东省性病实验室试剂质量评价小组 该小组成员包括各三级性病实验室 市中心性病实验室和部分二级性病实验室, 主要职责是 : 在省中心实验室的组织下, 联合评价性病实验室诊断试剂, 并向全省通报试剂质量情况, 为性病实验室的规范化建设提供参考 2005 年 6 月, 组织了由广东省 广州市 江门市 中山市性病中心实验室和中山大学附属第一医院参加的现场质评活动,4 种支原体培养基质评结果显示存在较大的质量问题, 有些试剂的检测敏感性为 0% 2005 年参加 WHO 项目 Clearview 衣原体试剂的临床应用评价, 与国际公认的标准方法 Roche PCR 法比较, 结果发现其用于女性阴道的敏感性为 32.8%, 宫颈拭子的敏感性为 49.7%, 而特异性较好, 为 97.9%~99.2% 此外, 通过室间质评工作分析试剂质量,2008 年全省共计使用支原体培养基 10 种, 鉴定正确符合率从 53~91% 不等 ; 衣原体快速检测试剂 3 种, 总体符合率为 63~98% 通过测评活动为各实验室的质量管理提供了参考依据 六 加强培训工作, 促进理论水平的提高省地市分别举办 性病实验室规范化建设与新技术培训班, 促进性病实验室规范化建设工作和实验室技术人员的理论水平提高 自卫生厅文件下发以来, 先后举办或协办国家级

19 培训班 1 期, 省级培训班 10 期, 市级 20 余期 共计培训学员约 5000 余人次 七 建立全省规范化性病实验室质量控制年度考核总结制度为了确保实验室的规范化发展, 与各实验室签订性病实验室规范化管理协议书, 保证履行各自的职责, 同时建立全省规范化性病实验室室间质评年终总结制度, 表扬优秀单位, 批评整改质量差单位, 撤销整改不合格的实验室 实施有奖有惩的制度, 确保规范化性病实验室的健康发展 如 2005 年质评不合格的实验室, 委托当地性病中心实验室组织专家现场调查, 并写出原因报告和整改措施到省性病实验室评定委员会办公室 经整改后全部 8 家实验室在 2006 年度室间质量考评中获得优异的成绩 每年举办年度全省性病实验室室间质量评价会议, 对优秀 良好和合格的单位颁发证书, 以资鼓励 八 积极参与性病防治工作, 提供可靠的实验室数据 2008 年起草制定 广东省性病实验室规范化建设和质量管理综合考核方案 督促全省性病实验室规范化建设与质量控制工作全面有效地开展, 及时发现和解决不同地区开展工作中存在的问题和困难 更好地发挥性病实验室在性病疫情监测 项目管理 临床诊治中的作用, 为性病防治对策制定和评价性病防治效果等提供实验室依据 落实卫生部 2007 年 性病监测工作 精神, 开展广东省淋球菌耐药检测活动 连续监测广东省淋球菌耐药菌株的地区分布 流行趋势, 为定期修订我省淋病治疗指南提供依据 逐步开展全省淋球菌分子流行病学研究 目前已经建立由多个地区中心实验室参加的全省淋球菌耐药及分子流行病学监测网络 充分发挥规范化性病实验室及质控网络在性病防治工作中的作用 2007 年国家 性病监测工作 要求监测的 5 种性病, 实验室的规范化建设和质量管理为疫情检测提供了科学的数据 各地市先后将本地区的性病实验室网络应用到性病防治项目中, 如深圳市 母婴梅毒控制项目, 开展全市孕产妇梅毒的筛查和中心实验室的确证工作, 保证了报告的准确性 ; 东莞市将性病实验室规范化建设列为医疗机构性病行医资格的标准 ; 惠州市 国家梅毒控制示范点项目, 性病实验室为梅毒诊断 质量 基线调查和干预效果评估提供了科学的依据 ; 江门市 WHO 项目 以梅毒筛查为重点的梅毒综合防治项目, 充分发挥了性病规范化实验室网络的作用 ;2009 年国家重大科技专项 防治性病对预防艾滋病的作用研究 也将在我省开展, 规范化性病实验室的建设和质量管理无疑为项目的顺利进行奠定了基础 九 积极总结经验努力提高水平先后 6 次应邀参加各种类型的全国性病 / 艾滋病防治工作和研讨会, 总结和介绍了我省性病实验室规范化建设和质量管理的经验 同时积极总结工作经验, 先后在国家级 省级等刊物上发表相关论文 15 篇 十 存在问题与努力方向 1. 各地区发展不平衡, 有些地区由于种种原因至今未开展当地的性病实验室规范化建设的工作 今后将加大这些地区的工作力度, 争取全省的性病实验室水平的全面提高 2. 性病实验室逐级管理制度尚待完善 室间质评和技术督导是确保性病实验室规范化

20 建设健康发展的重要手段 在确保省级质评活动的基础上, 要求各地市中心实验室开展对当地性病实验室的质量管理工作 3. 加强理论知识的培训工作, 举办 性病实验室理论技术培训班 和 性病实验室质量管理与新进展 培训班, 提高技术人员的理论水平 4. 由于经费问题, 限制了性病实验室试剂质评工作 今后将结合项目立项, 逐步开展各项性病检测试剂的评价工作, 为提高全省性病实验室的诊断质量提供参考 海南省 2008 年度开展梅毒血清学实验室间质量评价简介 海南省皮肤性病防治中心 钟娜张丽芬陆玉珠郑文爱王芳乾占旭吴杰娜许书杰 为了解海南省医疗单位梅毒实验室血清学检测情况, 规范梅毒实验室血清检测, 提高检测水平 在海南省卫生厅组织下, 海南省皮肤性病防治中心 2008 年 6 月 -9 月对 44 家参加 海南省预防与控制梅毒母婴传播项目 的单位进行现场检查,11 月份对各实验室进行梅毒血清学检测室间质量评价活动, 现将结果报告如下 一 材料与方法 1 质评对象 2008 年参加海南省预防与控制梅毒母婴传播项目的医疗单位共 44 家 2 质控品样品制备质控品制备用血浆来源于血液中心, 分别进行了非梅毒螺旋体抗体及梅毒螺旋体抗体血清学试验, 选择梅毒血清学试验阳性标本 3 份和阴性标本 2 份进行分装并编号, 保存于 -85 冰箱备用 3 质控品发放由省皮防中心向各参加单位发文, 通知准备参加梅毒实验室间质评活动事宜, 次周通过快递邮寄质控品到各单位 每家单位质控标本 5 份, 每份 250ul, 随质控品发放的还有本次活动的具体要求与说明 结果回报表和意见反馈表 4 各参与实验室按照自己日常使用的筛查和/ 或确认试剂进行检测, 要求筛查试验的定性结果用加号 + 报告, 阳性标本并进行定量试验, 必须做到最高稀释反应浓度 ; 确认试验仅做定性试验 二 结果 1 44 家单位参加,37 家回报结果 2 梅毒非特异性抗体定性试验和定量试验检测结果, 见下表

21 表 1 37 家实验室梅毒血清非特异性实验质评结果 标本号 定性试验定量试验预期值结果符合单位符合率 (%) 预期值结果符合单位符合率 (%) 阳性 :16/1: 阳性 / 弱阳性 阴性 阳性 :8/1: 阴性 阴性 阴性 阴性 家单位回报了室间质评结果, 其中 23 家实验室同时检测了梅毒非特异性抗体定 性和定量试验, 梅毒特异性抗体定性试验 ;14 家实验室仅检测梅毒非特异性抗体定性和定 量试验, 没有开展梅毒血清学特异性抗体定性试验 ;23 家单位开展梅毒特异性抗体检测, 其中 15 家是皮防单位 现将梅毒特异性抗体检测结果及梅毒血清学试验总体符合率总结如 下表 2 表 3 表 2 23 家实验室梅毒血清特异性实验质评结果 标本号 梅毒确证定性试验预期值结果符合单位数符合率 (%) 阳性 阳性 阳性 阴性 阴性 表 年三种梅毒血清学试验质评结果 项 目 参加实验室数 样本总数 符合数 符合率 (%) 非特异抗体定性 非特异抗体定量 特异性抗体定性 三 讨论室间质量评价是由室外机构 ( 组织者 ) 客观评价参加室间质控评价活动的各实验室对发放质控标本的检测结果, 其目的是解决实验室的准确度和建立室间的可比性, 及时发现误差并纠正, 是实验室质量体系中质量保证的重要环节 2008 年省皮防中心第一次组织全省 44 家参加 海南省预防与控制梅毒母婴传播项目 单位实验室进行梅毒血清学检测室间质评活动, 梅毒血清学试验非特异抗体定性 定量及特异性抗体定性总体符合率分别为 85.95% 60.54% 90.43% 因各实验室条件 操作方法 试剂及报告标准的差异, 个别试验结果的准确性和可比性尚有偏差, 主要存在问题如下 1. 梅毒非特异性抗体检测试剂均由省皮防中心统一发放上海荣盛公司生产的 TRUST 试剂, 但定性试验符合率为 85.95%, 主要原因是 号标本为弱阳性标本, 有 16 家

22 实验室检测为阴性 ; 为阴性标本, 也有两家实验室检测为阳性 ; 还有两家实验室 3 份阳性标本检测都为阴性 可能是这些实验室保存试剂的条件不当 梅毒检测的旋转仪不合要求 ( 应 100 转 / 分 ) 操作不规范, 没有按标准旋转 8 分钟等因素引起实验假阴性和假阳性 2. 非梅毒螺旋体抗体定量试验符合率仅为 60.54%, 除了以上所说的原因外, 可能还有加样的量不准确, 各实验室的加样器没有按要求定时校准, 定量检测结果离散度比较大, 符合率比较低, 从回报结果的信息中, 有些实验室还不懂得如何进行定量实验, 报告定量结果时用 + 的多少来表示, 还有定量实验的操作规程及临床意义不明确, 有待加强培训及提高操作技能 可能还缺乏统一的判断标准, 定性弱阳性或阴性的标本忽视了做定量实验的重要性 ( 前带现象 ) 3. 梅毒螺旋体抗体检测符合率 90.43%, 使用检测方法分别有 TPPA TPHA ELISA-TP, 从回报单位的信息中看到,5 家实验室使用 TPHA 方法检测, 其中实验结果有 2 例假阴性及 1 例假阳性 ;17 家实验室使用 TPPA 和 1 家使用 ELISA-TP 检测, 结果均符合 可能由于试剂盒检测敏感性或操作人员技术等有关因素引起实验结果不符 上海市性病实验室质量管理体系初步建设的体会 上海市皮肤病性病医院上海市性病治疗质量控制中心顾伟鸣王学民 一 背景 2001 年以来, 上海市性病报告病例上升非常快速, 发病率位居全国的前列 流行病学专家估计, 实际感染人数是报告数的 5 至 10 倍, 如果按阳性率为 5% 估计, 需要开展检测的数量非常巨大 在经济利益和市场需求的驱动下, 各类医疗机构纷纷开设了性病的检测项目, 但是各实验室使用的实验方法和试剂五花八门, 结果差异很大, 法律纠纷不断, 患者的切身利益得不到保障 在此背景下, 上海市先后出台了 上海市医疗机构管理条理 上海市性病防治管理条例 和 整顿和规范性病诊疗市场实施方案 等文件, 希望加强本市性病诊疗的质量控制, 规范性病诊疗市场 2002 年, 上海市卫生局摆擂台, 通过能力水平公开评议成立了 23 家专项科目的 诊疗 质控中心, 上海市性病治疗质量控制中心 挂靠上海市皮肤病性病医院, 负责全市的性病检测 诊断和治疗的质量管理工作 二 现状调查为了在短期内有效的提高性病检测水平和管理质量, 我们决定先进行充分调研, 在把脉问题的关键后, 重点突破 由于 2003 年初的 SARS, 针对 60 家二级和三级医院实验室调查

23 是在下半年进行的 主要内容是 :1. 质控样品的室间质量评价 ;2. 现场的人员资质 仪器设备功能状态 ;3. 实验人员的能力评价等 从梅毒实验室检测为切入点, 结果 5 份样品梅毒血清学检测全部合格的医院仅 30%, 其中梅毒特异性试验的合格率为 90.6%, 梅毒非特异性试验的合格率为 72.8%; 实验室现场发现, 梅毒非特异性试验使用水平摇床的占 28%, 其中仅有 16% 的设备在 转速 和 定时 二项指标符合要求 ; 操作人员在梅毒非特异性实验时样品未涂布均匀 稀释倍数不准确 结果判读有误差等问题 男性分泌物涂片检查 : 超过 90% 操作人员对涂片中的白细胞没有描述, 个别人员报告涂片找到淋球菌, 漏报和误报其他可以提示感染状态的观察等 支原体检测全部使用液体培养,3 份质控样品检测全部符合的医院为 31.7%, 主要存在 30%Mh 假阳性, 另外由于液体培养方法存在检测标准上的缺陷, 也发现近 60% 的 Uu 假阳性, 商品化液体培养试剂有 13 种, 质量参差不齐 三 开展活动 ( 一 ) 针对调查情况, 我们采取了一系列的措施和步骤, 结合应用研究和管理创新, 力图通过不断地提高服务意识, 来提高性病检测质量管理的效率 从 2003 至 2008, 在全市范围内举行了 8 次性病检测质控工作会议,8 次学术研究和进展的讲座, 还特邀了加拿大萨斯卡彻温大学 科学与艺术学院院长 国际知名微生物著名的 Dillon 教授作 淋球菌耐药分子机理的研究现状与展望 的专题报告,10 次关于提高检测质量的理论和 / 或操作培训 包括公立和民营医院 独立实验室 企业医院在内的全市 300 余家实验室累计受益 3700 人次 我们还对开展性病检测有问题的单位上门指导或电话咨询服务, 设立了性病质控专用电子信箱解答提问 结合室间质评结果中出现的主要问题, 分别召集实验操作人员进行专题的培训 由于我们实验室主要面对的是临床门诊的服务工作, 性病质控管理工作不但没有任何收入, 还花费了大量的人力和时间, 如何克服人员和资金紧张问题成为我们的首要任务 为了科学 高效的开展质控工作, 在没有任何经费资助的情况下, 自主开发建立电子化网络管理平台, 不仅可以减少大量数据录入出错的机会, 也为今后开展便捷的网络质量讲评 业务培训等奠定基础 ( 二 ) 鉴于梅毒成为严重影响我国公共卫生的传染病之一, 而梅毒血清学的检测方法相对容易规范化管理 我们首先从抓好梅毒检测质量着手, 下面是 间 8 次梅毒血清学 EQA 情况 : 平均回报率 97% 梅毒特异性试验总体合格率接近 98%, 不同级别医院的合格率差异不大 ; 梅毒非特异性试验中, 阴性和中 高滴度样品合格率均达到或超过 80%, 临界和弱阳性样品分别 32.7% 和 73.3%, 而 1:16 或以上滴度 CV 在 10% 以下, 弱阳性样品的 CV 要超过 90%, 但 CV 有降低的趋势, 检测合格率按降序分别为二级医院 (85.3%) 三级 (83.5%) 民营(81.0%) 和一级 (76.6%) 经过几年的能力, 梅毒血清学检测全部合格的医院提升到 80%, 虽然不同级别医院存在着检测质量的总体差异, 但正在逐步缩小, 而弱阳性样品的梅毒非特异性试验是影响 EQA 主要问题 为此, 我们进一步探索梅毒血清试验 室内质控 方案的可行性研究, 并且进行了梅毒非特异性实验标准化的试点研究, 取得了非常好的效果 如果得以推广实施, 将进一步加快提升检测水平

24 ( 三 ) 由于性病检测和诊疗的管理特殊性, 需要促进不同专业医疗卫生机构功能的融合与协调配合, 有效地整合资源, 提高工作效益和质量, 提升卫生系统整体效能, 共同履行好医疗救治和疾病预防控制功能 为减少基层单位穷于应对各类检查的工作和经济压力, 上海市性病治疗质量控制中心 转变服务理念, 成功地探索与 上海市临床检验中心 联合督查, 做到检查有交叉, 管理有覆盖, 完善了管理体制和治理框架 努力做到管理科学化, 技术标准化, 操作人性化 ( 四 ) 加强实验室自身能力建设, 也是做好性病质控管理工作的重要基础 我们的实验室参加了卫生部和上海市临床检验中心 中国 CDC 性病控制中心 上海市性病治疗质量控制中心 上海 CDC 以及部分国际机构的专项室间质评活动, 现在实验室检测项目的室内质控和室间质评覆盖 : 微生物 分子生物学 免疫学 生化 血液 体液 显微镜形态学 ; 还参加了性病规范化实验室 Ⅱ 级标准生物安全实验室 CNAS 质量和能力认可等管理体系的建设, 增加了实验室 LIS 实验室温度湿度控制 员工指纹考勤和档案管理系统等的管理技术手段, 派出人员在国内外进修以提高技术能级 四 展望怀着责任感和使命感, 坚持以公益性为导向, 提倡不断优化服务理念 多年来, 在各级领导的支持和关心, 在中国 CDC 性病控制中心的帮助下, 依靠全体同仁的协力, 充分调动和发挥人的聪明才智, 集中有限的资源办事, 以解决临床需求为服务目标, 在部分性病检测项目质量管理上取得了明显成效, 我们的团队在实践中经受了考验和锻炼 但是与兄弟省市比起来, 无论规模 深度和水平都有交大差距, 需要我们调整管理模式, 探索提高检测和管理质量的方法 实验室是重要的检测部门, 可靠的实验结果不仅是诊疗的依据, 也关系到我们国家性病疫情数据的准确性 因此, 加强性病检测实验室的质量管理, 是我国性病防治工作的重要基础之一 深圳市慢性病防治中心淋球菌耐药监测项目工作心得 深圳市慢性病防治中心冯铁建何亮张丽君王峰 深圳市慢性病防治中心承担着国家性病中心多项性病监测任务, 是我国首批淋球菌耐药监测点, 由于组织 人员等种种原因, 前几年淋球菌耐药监测工作进展不大, 领导班子对此非常重视, 多次到相关科室调研, 通过资源分析 需求分析 政策调研 专家论证 对策探讨及工作指南等六个方面的科学分析与规划, 对工作进行了调整布局, 安排性病防治科及病原检验科负责项目的组织实施, 着重强调网络建设 人员调整 能力建设 政策经费及运行支持建设, 分阶段, 分侧重从以下 6 个方面展开工作 : 1. 以全国淋球菌耐药监测实施方案为蓝本, 结合深圳市实际情况, 组织制定了 深圳

25 市性病监测工作方案, 由市卫生局发文至全市各相关单位, 同时配套制定了 深圳市性病监测工作经费补助办法, 为项目实施提供了经费保障 2. 以中心性病防治成熟的项目管理经验及人员队伍为依托, 建设以市慢性病防治中心为龙头 各区慢性病防治院为枢纽 各二级性病实验室单位为基础的三级网络体系, 确定了各个单位需完成的监测量, 并明确了市慢病中心 各区慢病院及各个耐药监测点的职责与分工 : 深圳市慢性病防治中心负责 :1 监测方案和计划制定, 并组织实施 ;2 项目组织培训 技术指导 质量控制和督导管理 ;3 监测项目所需培养基 试剂的采购和发放 ;4 全市分离株的鉴定和耐药性检测 ;5 本单位淋病疑似病例临床样本采集 分离培养 鉴定 ;6 监测资料的收集和统计分析, 并上报市卫生局 国家和省性病监测管理机构 区慢病院为本辖区淋球菌耐药监测的业务管理和负责单位, 主要负责 :1 选择确定辖区耐药监测实施单位监测点, 并上报市慢性病防治中心备案 ;2 辖区各监测单位淋球菌分离菌株的收集 保存和转运, 并做好相应登记工作 ;3 辖区内淋球菌耐药监测工作的技术指导和质量控制, 以及监测资料的收集整理工作 监测点负责本单位淋病疑似病例临床样本采集 分离培养和初步鉴定, 并按要求将初步分离菌株送辖区慢性病防治院 ; 填报相关登记表 3. 建立了室间及室内质量控制计划 : 室间质量控制计划 : 市慢病院参加中国疾病预防控制中心性病控制中心每年组织的室间质评 ; 全市各规范化性病实验室参加广东省和深圳市性病监测机构组织的室间质量考评 室内质量控制计划 : 各监测点检验科应建立实验室工作人员守则和实验操作细则 ; 人员培训 : 淋球菌分离培养人员应接受广东省或我市规范性病实验室检测技术专业培训 ; 制度建立 : 建立实验室工作制度 管理制度及生物安全制度 ; 制定标准操作程序 (SOP): 制定一系列实验操作 仪器设备使用及维护 生物安全及质量管理等 SOP 文件 4. 编制了专门的淋球菌耐药监测项目申请单 ; 设计制作了计算机网络申报系统与统一样式的申报表格 ; 5. 项目于 2008 年 5 月 29 日在我中心启动, 并先进行了预实验, 对拟订的方法技术路线进行了检测, 收到良好的效果 在此基础上, 于 2008 年 6 月 17 日召开了全市淋球菌耐药监测及性病患病率调查实验室技术培训班, 分别对理论及试验内容进行培训, 同时, 编制了工作流程图及试剂耗材发放签收表 ;2008 年 7 月 1 日, 我市淋球菌耐药监测项目及性病患病率调查项目正式启动 ; 各个区也相继开展了项目培训及任务布置, 在项目执行过程中, 分别通过电话沟通及现场督导的方式进行实时监督, 至项目完成, 共收集淋球菌菌株 211 株 6. 申请了深圳市继续医学教育项目 2008 年淋球菌耐药监测研讨总结, 邀请中国疾病预防控制中心性病控制中心及广东省皮肤性病防治中心临床与实验室相关领导就性病实验室质量管理进行培训, 各个区慢病院检验科主任及性病防治科主任就各区工作进行总结交流, 大家相互学习, 取长补短, 并对 2008 年深圳市淋球菌耐药监测工作进行了总结 在 2009 年工作中, 我们还将加强能力建设, 完善组织管理, 严格质量控制, 把握培训

26 时机, 强调工作重点, 争取在淋球菌耐药的分子流行病学方面有所创新! 天津市性病实验室网络建设情况介绍 天津市疾病预防控制中心性病艾滋病防治所 郑钟洁 一 背景天津市自 1989 年在长征医院发现第一例梅毒,1990 年疾控中心成立性病科并开展性病艾滋病检测工作, 于 1991 年发现首例 HIV 感染者, 年市长征医院和医大总医院先后成立性病门诊 1997 年我中心性病科更名为 天津市性传播疾病控制中心, 同年开始建设天津市性病实验室网络 二 工作依据 1. 天津市人民政府津政发 [1997]100 号关于印发 天津市有关部门预防控制艾滋病性病工作职责 的通知 2. 天津市卫生局津卫防 [2001]2 号关于印发 天津市性病诊疗规范 ( 暂行 ) 的通知 3. 全国性病监测方案( 试行 ) 4. 天津市性病监测方案 三 中心职责 1. 公安系统收教人员入监前有关性病检查 ( 注 : 由我中心检测,2005- 至今由公安医院检测 ); 2. 婚前检查人员的梅毒鉴定并出具证明 ; 3. 健康人员有关性病检查 ; 4. 医疗机构可疑性病的确认 ; 5. 监狱羁押人员的性病检查 ; 6. 全市性病门诊的培训, 其中包括实验室 临床医生及预防保健人员 四 性病实验室网络的建设依据市政府文件, 自 1997 年在全市医疗 卫生机构开始建立性病门诊 ; 至 2008 年底全市已建立性病诊疗机构 42 家, 遍布全市 18 个区县中的 15 个 全市性病实验室区县分布编号区县数量 ( 个 ) 1 和平区 5 2 河西区 3 3 河东区 3 4 河北区 6 5 红桥区 2 6 南开区

27 7 塘沽区 5 8 汉沽区 1 9 大港区 2 10 津南区 3 11 北辰区 1 12 西青区 1 13 宝坻区 1 14 武清区 1 15 静海县 2 合 计 42 全市性病实验室机构分布 (1997~2008 年底 ) 编号 部 门 数量 ( 个 ) 1 医疗机构 29 2 疾控机构 2 3 妇幼系统 9 4 公安机构 1 5 计生部门 1 合 计 42 五 相关资料的收集 2008 年进行一次全面的网络内实验室的人员情况 资源状况 检测情况 需求等各方面的调查 ; 根据汇总情况计划进行有针对性的再培训及现场检查等工作 六 实验室网络的质量管理 1. 中心性病实验室内部管理天津市性病艾滋病实验室已于 2002 年通过国家实验室认可 ; 人员定位及分工明确 ; 中心质量管理办公室实行月查 季查和半年内部评审 ; 建立了本实验室的生物安全手册 ; 我中心实验室所有检测活动均在 BSL-2 级实验室内完成, 以确保生物安全要求 2. 对全市性病实验室的管理定期或不定期派专业人员对实验室进行现场检查 指导 ; 性病中心实验室尚未对各实验室进行系统的样本的考核, 拟于 2009 年开始实施 ; 对从事性病检测技术人员均已培训持证上岗 3. 实验室检测质量综合考评依据 天津市性病监测方案 制定考核 督导等计划 ; 考评内容 : 检测的仪器设备 ; 检测试剂使用情况 ; 检测及报告的规范性 ; 检测结果的准确性 ; 实验室的质量控制和质量管理情况等 ; 考评方式 : 网络内实验室随机抽查 盲样检测 现场检查 ; 结果反馈并以以文字的形式反馈至被考评单位及相关卫生行政管理部门 加强督导工作, 每年组织一次, 涵盖各系统性病实验室

28 4. 网络实验室工作督导 4.1 内容包括各市检测网络的现状及管理情况 各实验室建设及布局情况 实验室检测的规范性 实验室原始记录的溯源性和完整性 实验室的质量控制 各筛查实验室生物安全防护意识及具体防护措施及样品的保存及管理 4.2 方式 : 现场发放检测标本, 观看该实验室标本流程及检测的全过程 生物安全防护 检测的原始记录 标本的保存等 ; 现场检查该实验室规章制度 实验室相关 SOP 文件 仪器设备使用记录 原始记录的溯源性 完整性及原始记录的保存情况 ; 现场对该实验室进行技术指导 ; 把检查的情况向该单位进行总结反馈 ; 督导人员组成来自全市从事性病检测主任专家 5. 网络实验室人员培训 2008 年对全体性病诊疗机构性病门诊医生 实验室及预防保健人员先后进行了系统培训, 所有从事性病诊治 检测人员均参加培训, 并对考核合格者发放证书 诚请国家性病控制中心专家教授亲临授课, 并针对性病的流行及防制策略 全国及天津市性病监测方案 性病检测技术规范 性病检测实验室的质量管理 性病检测实验室的生物安全及防护 淋菌耐药性检测及性病的流行形势及规范化诊断等方面进行详细讲解, 获益菲浅 6. 存在的问题通过培训调查掌握还有部分医生及检测人员知识匮乏, 技能有待进一步提高 我中心实验室需进一步加强自身的建设, 提高检测能力和管理水平, 不断强化性病检测的各项要求 ; 进一步加强网络内各实验室检测的质量控制及质量管理工作 ; 强化生物安全的防护及管理, 进一步完善 ; 全面开展工作, 扩大交流合作的技术平台 7. 中心能力及发展方向 7.1 我中心实验室开展的性病检测项目包括梅毒抗体检测 (RPR TPPA ELISA FTI-ABS) 淋病双球菌检测( 常规检测 耐药检测 ) 沙眼衣原体( 抗原检测 ELISA PCR 法 细胞培养法 ) 霉菌 ( 镜检和培养 ) 滴虫 ( 湿片 ) 细菌性阴道病 ( 涂片染色 ) 人乳头瘤病毒 (HPV) 及分型检测 (PCR 法, 目前用于科研 ) 及多重 PCR 检测性病多个项目 7.2 发展方向与临床密切配合, 服务于临床 ; 结合分子生物学实验技术于性病诊断 ; 加强疾病预警机制, 开展 HPV 高危型及衣原体混合感染感染的基线调查, 评估天津女性宫颈癌发生的风险, 建立预警机制 ; 科研方向 --- 与国内外科研机构的交流与合作

29 第五届全国性病实验室技术工作组会议纪要 2008 年 4 月 11 日, 第五届全国性病实验室技术工作组会议在上海召开, 中国医学科学院皮肤病研究所副所长张国成 中国 CDC 性病控制中心陈祥生副主任, 部分专家组成员和性病参比实验室全体工作人员参加了会议 会议由性病参比实验室主任尹跃平主持, 主要议程是 :2008 年实验室工作情况通报, 包括 : 全国性传播疾病检测工作管理办法 进展 省级性病中心实验室验收方案 试剂评估工作 ; 全国性传播疾病检测技术规范 编写大纲讨论 ; 美国北卡大学 NIH 梅毒耐药检测项目介绍 尹跃平主任首先通报了 08 年工作组参与的相关工作的进展情况 : 全国性传播疾病检测工作管理办法 经卫生部召集相关专家的多次评审会后, 送审稿已于 08 年 9 月完成并上报 省级性病中心实验室验收方案已基本定稿, 等管理办法出台后, 省级性病中心实验室的验收工作将全面展开 梅毒临床试剂的评估工作已开展两年, 其评估结果的发布将根据专家组的意见按相关要求尽快进行 为了进一步完善淋球菌耐药检测工作, 今年在综合采集的菌株的数量 检测结果的准确 临床资料的完整及结果回报是否及时等四个方面表现突出的单位给予奖励, 上海市皮肤性病医院 深圳慢性病防治院分获综合及单项奖 专家们还就 2009 年性病实验室相关工作进行了充分的讨论, 共达成以下共识 : 1. 实验室技术工作组的相关工作应充分发挥工作组在全国性病实验室工作中指导 咨询和督导的作用 工作组每年应制订其工作要求 计划及目标, 并有年度报告对全年工作完成及进展情况进行总结和通报 2. 试剂评估工作在梅毒试剂评估已开展两年的基础上, 性病参比实验室 08 年又进行了 HSV 试剂的评估工作 专家建议评估结果先在卫生部疾控局与性病控制中心主办的 性病情况简报 及性病控制中心的网站上公布, 同时也应该在 HIV 和性病监测年会上进行通报以扩大影响 今年性病控制中心还将开展衣原体检测试剂 淋球菌培养基等的评估工作 3. 淋球菌耐药监测工作此项工作已开展了 22 年, 如何使此项工作能可持续性的发展, 政策的支持是很关键的, 同时经费的合理使用也是非常重要的 应采用准入制对工作好的单位从多方面给予重点扶持, 对于 3 年不能开展此工作的监测点要取消其资格, 这些单位如果条件达到还可以重新申请 尽可能多方面去争取各种途径的经费支持 对于每年的结果要通过多种渠道予以通报, 以引起各级相关部门的重视 今年性病控制中心将以中心发文并与参加单位签定协议的形式来加强这方面的工作 4. 全国性传播疾病检测技术规范 的编写专家们讨论了技术规范的编写大纲 首先明确编写的内容应该选择成熟的方法, 对不成熟或目前有争议的方法暂时不写 规范中既要有卫生部 性病诊断标准与处理原则 中常见的 8 种性病的实验室检测, 也应增加临床并不多见的阴虱病的相关内容 同时要将检测方法

30 的应用策略 流程图及临床意义等内容写进规范中 会议就规范的编写进行了分工, 性病中心将尽快将编写的时间进度要求发给相关人员, 以保证在规定的时间内完成初稿 5. 梅毒螺旋体对阿奇霉素耐药的分子流行病学研究项目 ( 梅毒耐药项目 ) 梅毒耐药项目是美国北卡大学申请美国 NIH 的一个国际合作项目, 项目希望通过建立我国检测梅毒螺旋体基因突变的实验室方法, 了解我国不同地区和不同人群的梅毒患者中出现基因突变的发生率及相关因素, 评价该方法在梅毒螺旋体分子流行病学监测和研究中的应用价值, 为加强我国梅毒的防治效果提供有用的信息并为决策部门制定相关策略提供依据 该项目目前在我国选择了广东 广西 江苏 新疆 福建 四川地区等 6 家合作单位, 经过近一年的准备, 共收集相关样本 135 份, 目前正在进行预试验阶段的工作 项目负责人之一陈祥生教授在讨论中进一步阐述了项目的意义, 并强调参与项目不是任务而是一种合作, 希望通过这种合作能建立一种交流的平台, 以加强合作并优势互补 ( 中国 CDC 性病控制中心魏万惠 ) 2009 年全国淋球菌耐药监测研讨会在上海召开 为了更好地开展全国淋球菌耐药监测工作, 中国疾病预防控制中心性病控制中心于 2009 年 4 月 14 日 ~15 日在上海召开了 2009 年全国淋球菌耐药监测研讨会 世界卫生组织官员张岚 上海市卫生局副处长陈昕 中国疾病预防控制中心性病控制中心张国成副所长 陈祥生副主任等领导出席了本次大会, 并在会议开幕式上致辞讲话 参加本次会议的代表分别来自全国 24 个省 ( 直辖市 自治区 ) 的疾病预防控制中心 (CDC) 皮肤病防治所 部分医院等机构 78 名代表 中国疾病预防控制中心性病控制中心参比实验室主任尹跃平研究员主持了本次会议 会议主要就如何进一步加强中国淋球菌耐药监测及研究工作邀请了相关人员作了报告, 内容包括 : 中国 2008 年淋球菌耐药监测及质量控制工作总结 ; 深圳市淋球菌耐药监测项目 工作实施体会 ; 上海地区淋球菌耐药基因研究工作介绍 ; 淋球菌对头孢曲松耐药基因研究进展 ;2008 年全国淋球菌耐药检测试验室间质评结果分析及 2009 年质评工作说明与要求等 尹跃平研究员首先对我国 2008 年中国淋球菌耐药监测工作进行了总结汇报并提出了 2009 年的工作计划 报告 2008 年是 20 多年来参加省份最多及检测菌株数最多的一年, 全国 14 个耐药监测点共完成 1397 株淋球菌临床分离株 MIC 的测定, 其他 16 个监测点目前还未开展此项工作 从资料的完整性来看, 有 12 个点资料完整,2 个点未上报临床资料 ;10 个点检测菌株数未达到要求,4 个点检测菌株数达 100 株以上 与此同时, 还介绍了 2008 年各点五种抗生素的耐药情况 2003 年 ~2008 年五种抗生素的耐药情况及趋势 以及淋球菌耐药有待完善等 为了确保淋球菌耐药数据的准确性,2008 年对其中的 10 个耐药监测点

31 进行了淋球菌耐药检测试验质控 结果的回报率达 90%, 合格率达 77.78% 同时分析了各耐药监测点结果符合率及每种抗生素结果整体符合率以及目前工作开展存在的问题 报告还提出了 2009 年的主要工作计划 : 进一步加强各检测点能力建设 加强各检测点资料管理和分析 加强各检测点工作的督导工作 特殊菌株的鉴定及分析 建立淋球菌分子生物学研究小组 本次大会还特邀了深圳市慢性病防治中心冯铁健主任, 介绍了 2008 年 深圳市淋球菌耐药监测项目 工作实施体会 从项目组织 政策经费支持 网络建设 项目培训 实施与督导 总结交流 经验与不足等几方面进行了展开 深圳是最早参加淋球菌耐药监测项目的城市之一, 由于种种原因, 连续十年未参加 2008 年中心对科室的布局 人员分工进行了调整, 深圳在 2008 年淋球菌耐药工作方面取得了巨大成绩 为了解目前淋球菌耐药研究方面的进展, 本次会议还邀请了上海市皮肤病性病医院顾伟鸣主任, 介绍了关于淋球菌耐药基因研究方面的工作 各位代表对此研究工作表现出极高的热情 关于建立淋球菌分子生物学研究小组的消息刚刚宣布, 就有 6 家单位自愿报名参加 为了提高各耐药监测点的工作积极性, 本次大会对 2008 年淋球菌耐药工作完成情况进行了评比, 设立两个奖项 : 分别为综合考核成绩优秀奖 ; 检测菌株数第一名鼓励奖 此奖项将会议推向了高潮 奖项考核的依据 :1) 综合考核成绩优秀奖 : 完成耐药检测菌株数在 100 株以上 ; 耐药室间质评考核成绩合格 ; 耐药资料的完整性 ; 按规定的时间将结果上报 2) 检测菌株数第一名鼓励奖 : 全年完成耐药检测菌株株数最高者 本次会议同时提出, 如果国家耐药监测点连续 3 年无检测结果上报, 将取消该耐药监测点, 等条件成熟以后再重新申报 本次会议的召开得到了世界卫生组织驻北京办事处的大力支持, 张岚官员全程参加了会议, 并在会议的闭幕式上作了发言 强调了抗生素耐药监测的重要性, 抗生素耐药监测不仅仅局限淋球菌, 还要深化到其它病原体 张岚官员还就性病实验室目前的现状 取得的进展 2008 年产生的结论性建议以及 2009 年需解决的问题及面临的挑战作了总结, 同时提出了建议, 希望下次会议有更多的领域参加, 将会对淋球菌耐药监测工作产生推动作用 中国疾病预防控制中心性病控制中心陈祥生副主任对本次大会的顺利召开作出了总结性的发言 指出了淋球菌耐药是我们工作的根本, 也是我们工作的重中之重, 将来可以考虑通过协议 发文的形式, 把淋球菌耐药工作规范起来 ; 就各耐药监测点目前的现状, 需要进一步理顺调整, 从而保证中国淋球菌耐药监测工作的可持续性发展 通过本次会议的召开, 就如何加强全国淋球菌耐药监测工作大家达成了一致的共识 :1 淋球菌耐药监测工作开展比较繁琐 性病控制中心应进一步争取卫生部 中国 CDC 给与各省行政政策的支持, 以便于各点更好地开展此项工作 2 加强淋球菌耐药点的能力建设 新监测点人员的培训方式 : 采取首次开展检测时, 将标本送至性病控制中心, 通过参与检测达到一对一培训 3 有关淋球菌耐药监测的判定标准 全世界目前有 3 个系统 ( 美国 CDC 系统 欧洲系统 WHO 西太区系统 ), 对头孢曲松的敏感判断标准不一致, 目前中国仍以 WHO 西太区系统为标准 4 淋球菌耐药临床资料问题 临床资料的空缺, 直接影响流行病学资料

32 的分析, 今后将进一步加强临床资料的管理 5 有关 CDC 系统如何进一步开展淋球菌耐药监测工作 因大部分 CDC 系统无性病门诊, 收集菌株难, 但可以根据部分点的经验, 通过网络形式加强菌株的收集 ( 中国 CDC 性病控制中心戴秀芹 ) 2009 年全国性病实验室质量管理工作研讨会会议纪要 2009 年 4 月 12~13 日, 中国 CDC 性病控制中心在上海市组织召开了 2009 年全国性病实验室质量管理工作研讨会 来自全国 30 个省 / 直辖市的性病防治机构 ( 疾病预防控制中心 / 皮肤病防治机构 ) 参加 2008 年全国性病实验室室间质评医疗机构 通过国家性病规范化门诊验收的医疗机构 部分全国性病监测点以及全国性病控制中心近 100 名代表参加了本次会议 会议由性病控制中心性病参比实验室尹跃平主任主持, 中国医学科学院皮肤病研究所 / 中国 CDC 性病控制中心张国成副所院长 中国 CDC 性病控制中心陈祥生副主任 上海市卫生局疾控处陈昕副处长 上海市皮肤病性病医院徐伟民院长 上海申康医院发展中心于广军主任,WHO 驻华办事处张岚官员出席了会议并致开幕辞 会议首先由尹跃平主任对 2008 年全国性病实验室管理工作进行了总结, 主要内容有 : 1. 性病实验室工作现状调查 : 对全国 31 个省 / 直辖市性病实验室工作现状进行了调查, 调查的主要内容 :1 是否明确有从事性病实验室管理工作的机构 ;2 目前能常规开展性病实验室质量管理工作的单位 ;3 是否有明确的经费支持 ;4 能否开展性病实验室方面的专业技术培训 结果 :90% 以上省 / 市有明确实验室管理工作的机构,16% 省 / 市能开展性病实验室质量管理工作,13% 省 / 市有经费支持,50% 省 / 市能开展专业技术培训 2. 编写 全国性传播疾病检测工作管理办法 :2008 年 6 月组织召开了第四次全国性病实验室技术工作组扩大会议, 会议召集了性病实验 临床和流行病学领域的专家, 共同讨论和制订了 全国性传播疾病检测工作管理办法, 并于 9 月完成了送审稿 希望通过此管理办法的出台, 进一步提高全国性病实验室检测工作的质量 3. 全国性病实验室质量控制 2008 年对全国 31 个省 / 直辖市的省中心实验室 国家淋球菌耐药监测点 国家性病监测点及自愿参加的部分医疗机构进行了梅毒 沙眼衣原体感染的淋球菌培养初步鉴定 ( 预试验 ) 室间质量考核工作 考核结果显示 : 部分性病实验室尚未全部开展考核项目, 提示性病实验室检测能力还亟待加强 4. 性病检测试剂评估

33 (1) 为了解国内市场梅毒诊断试剂的情况, 中国疾控中心性病控制中心组织 4 家单位开展了非梅毒螺旋体抗原血清学和梅毒螺旋体抗原血清学检测两大类试剂盒评估, 共评估了 21 种试剂, 结果 : 国产非梅毒螺旋体抗原血清学检测试剂的质量有待于提高, 梅毒的酶免试剂总体质量较高, 快速检测试剂的质量良莠不齐 (2) 对国内外常用 HSV-IgG 抗体检测试剂进行了评估, 共评估了 4 个国家生产的 8 种检测试剂盒, 结果 : 符合率在 95% 以上的均为国外检测试剂 5. 性病参比实验室申请国家实验室认可性病控制中心性病参比实验室于 2008 年 7 月申请国家实验室认可,12 月接受国家认可委专家对实验室的现场评审, 于 2009 年 4 月取得中国合格评定国家认可委员会实验室认可证书 通过实验室认可, 进一步推动了质量管理体系的有效运行, 为今后的长期发展奠定了坚实的基础 尹跃平主任还就 2009 年全国开展性病实验室管理工作进行了部署, 主要的工作重点为 : 1 结合卫生部性病防治工作的重点及策略开展性病实验室管理工作 ;2 协助卫生部进一步完善 全国性传播疾病检测工作管理办法 ( 初稿 );3 组织专家编写 全国性传播疾病检测技术规范, 并由国家 CDC 下发实施 ;4 进一步完善性病实验室质控体系, 对部分省中心实验室进行考核 预验收 ;5 继续开展性病实验室室间质量评价活动 ;6 进一步开展各类性病检测试剂的评估工作 ;7 通过国家级继续医学教育项目加强对各级性病实验室人员的培训 会议邀请了中国 CDC 性病控制中心陈祥生副主任和新西兰奥克兰医学诊断实验室微生物专家 Michael D. McCarthy 等进行了有关性病领域的学术讲座, 内容包括 : 全国性病流行状况与综合防治 性病实验室诊断技术及新进展 梅毒血清学检测方法应用策略探讨和沙眼衣原体感染的诊断现状和技术应用策略 会议还邀请了上海市皮肤病性病医院 天津市 CDC 广东省皮肤性病防治中心和海南省皮肤性病防治中心等单位的代表介绍了开展性病实验室质量管理工作的经验, 与会代表参观了上海市皮肤病性病医院, 分享其开展性病实验室质量管理以及淋球菌耐药监测工作的成功经验 会议就 如何将性病实验室质量管理工作结合到艾滋病防治工作中 等议题进行了热烈讨论, 代表们各抒己见, 讨论了不同机构如疾病预防控制中心 皮肤病防治等机构开展性病实验室质量管理工作的现状以及遇到的问题, 提出了目前最迫切需要解决的是政策支持, 建议尽快出台 全国性传播疾病检测工作管理办法, 以进一步提高全国性检测工作的质量, 更加有效的对全国性病检测工作进行监督管理 本次会议形式多样 内容丰富, 不仅对 2008 年全国性病实验室质量工作进行了总结, 部署了 2009 年的主要工作, 并有学术讲座 经验交流 现场参观等内容, 本次工作会议的召开, 进一步加强了性病实验室之间的技术和信息交流, 提高了性病实验室质量管理水平, 推动了性病实验室检测工作的发展, 更好的为性病防治工作服务 ( 中国 CDC 性病控制中心施美琴 )

34 全国淋球菌分离鉴定首次室间质评活动全面启动 为了贯彻执行 中华人民共和国传染病防治法, 更好地落实国务院 中国遏制与防治艾滋病行动计划 ( ) 有关加强性病防治管理和性病检测实验室质量控制的要求 贯彻 卫生部办公厅关于进一步加强性病监测工作的通知 精神, 中国疾病预防控制中心性病控制中心性病参比实验室今年首次全面组织开展 全国淋球菌分离鉴定室间质评活动 本次淋球菌分离鉴定室间质评活动的对象为各省级性病中心实验室 国家级性病监测点 国家级淋球菌耐药监测点 各级性病检测实验室 ( 自愿参加 ) 为了使本次室间质评活动开展顺利, 在质控品发放前, 我们利用召开 2009 年性病实验室质量管理工作研讨会暨 2009 年中国淋球菌耐药监测研讨会期间, 对各级性病实验室目前开展淋球菌分离鉴定情况作了摸底调查, 结果显示 :41 家单位参加了调查,10 家单位只开展淋球菌涂片或未开展此项工作 ; 15 家单位开展淋球菌初步鉴定 ;16 家单位可以同时开展淋球菌初步鉴定和确证试验, 这表明我国目前有关淋病的实验室检测水平参差不齐 通过本次活动的开展, 我们将进一步深入了解我国淋病实验室检测现状, 从而为指导淋病防治工作提供参考依据 质控品已于 2009 年 4 月 20 日通过 EMS 方式发放到各级性病实验室, 除了少数单位未发放外, 今年共发放淋球菌分离鉴定质控品 171 家 各省级中心实验室均在 48 小时内收到了质控品, 这为本次淋球菌分离鉴定室间质评活动的顺利进行提供了保证 ( 中国 CDC 性病控制中心戴秀芹 ) 性病参比实验室通过中国合格评定国家认可委员会的认可 中国医学科学院皮肤病研究所 性病控制中心参比实验室在所院 中心领导的支持以及相关职能部门的配合下, 全科室人员齐心协力 认真准备, 经过 3 年多锲而不舍的努力, 于 2009 年 4 月份顺利通过中国合格评定国家认可委员会的严格的现场和书面审查, 获得认可证书 ( 证书编号 :CNAS L4011) 这标志着实验室的检测结果得到相应权威机构的认可, 同时实验室的管理水平 技术能力也迈上了新的台阶 国家实验室认可对实验室的管理以及技术操作有非常严格的要求, 性病参比实验室从 2004 年开始, 根据中国实验室国家认可委员会制定的 ISO/IEC17025 的 实验室认可准则 CNAL/AC 的要求, 积极准备国家实验室认可的各项准备工作, 于 2006 年初步建立了质量管理体系文件 2008 年根据国家认可委新标准 CNAS-CL01:2006 检测和校准实验室能力认可准则 及 实验室资质认定评审准则 的要求, 所院领导对实验室进行了授权及人员任命, 实验室负责人组织科室人员对 质量手册 等体系文件进行了修订 更新, 实验室布局进行了调整等, 于 2008 年 7 月份向国家认可委正式递交了申请书, 并于 12 月初接受

35 了国家认可委派专家对实验室进行现场评审 性病参比实验室通过认可的检测领域为 : 生物 ( 消杀产品 ) 医学( 细菌学 / 病毒学 ), 检测的产品类别有 : 消杀产品 血液 尿液及分泌物, 检测的病原体包括淋球菌 沙眼衣原体 梅毒螺旋体 支原体 生殖器疱疹病毒 HIV 阴道毛滴虫 实验室将以 公正 科学 准确 及时 为质量方针, 完成国家的防治 科研任务以及提供相关的技术服务 ( 中国 CDC 性病控制中心施美琴 ) 2009 年全国性病实验室室间质量评价活动 2009 年中国 CDC 性病控制中心组织的全国性病实验室室间质评活动包括梅毒血清学检 测 沙眼衣原体检测以及淋球菌分离鉴定 其中梅毒检测项目为梅毒非特异性抗体和梅毒特 异体抗体检测 一 检测项目 项 目 批号 样本编号 梅毒非特异抗体 梅毒特异性抗体 沙眼衣原体检测 淋球菌分离鉴定 二 日程安排标本发送日期 : 2009 年 4 月 21 日建议测定日期 : 2009 年 4 月 27 5 月 10 日报告截止日期 : 2009 年 5 月 24 日统计结果反馈日期 :2009 年 8 月 30 日三 操作要求 1. 梅毒血清学检测 (1) 梅毒血清学检测质控样本每支 0.25ml 收到质控样本后, 应立即检查质控样本的批号 数量是否与说明相符, 检查质控样本是否渗漏 检测前请将样本离心, 使样本沉在管底以保证足够的检测量 (2) 质控样本虽经灭活处理, 但由于潜在的传染因素, 仍需按传染性样本对待. (3) 梅毒血清学检测质控样本使用时不需特殊处理, 与临床血清 ( 浆 ) 标本采用同一方法进行检测 质控样本应保存在 -18 以下, 复溶后存放 2-8 一周内检测完, 不能再分装

36 或冻存使用 2. 沙眼衣原体检测 (1) 沙眼衣原体检测质控样本为拭子 收到质控样本后, 应立即检查质控样本的批号 数量是否与说明相符 (2) 沙眼衣原体检测质控样本使用时, 与临床标本采用同一方法按检测试剂说明书进行检测 3. 淋球菌分离鉴定 (1) 淋球菌分离鉴定质控品为冻干品, 本次质评共发放 5 份样本, 每支 0.3ml 收到质控品后, 应立即检查质控品的编号 规格 数量 保存条件是否与说明相符, 包装是否完好, 并确认质控品无破损 铝盖无松动脱落, 菌粉无潮解现象 质控品应冷冻保存在 -20 以下, 并尽快复苏接种 (2) 溶解冻干质控品时, 用 0.3ml 灭菌的磷酸盐缓冲液或注射用无菌生理盐水溶解, 旋涡振荡器充分混匀后, 用移液器取 40μl 或无菌滴管取 2 滴接种培养基上, 分区划线后, 36,5%-10%CO 2 条件下培养 24~48 小时观察结果并作进一步鉴定 (3) 质评样本应与常规标本放在一起做, 当作病人的标本同样对待 (4) 质控品应当做有传染性物质, 高压灭菌后才能丢弃 (5) 淋球菌分离鉴定结果回报表填写说明 :G 染色 ( 阳性 / 阴性, 用 G + /G - 表示 ) 菌落形态 ( 描述典型形态 ) 氧化酶试验( 阳性 / 阴性, 用 +/- 表示 ) 糖发酵试验( 发酵 / 不发酵, 用 +/- 表示 ) 鉴定结果( 淋球菌 / 非淋球菌, 用 +/- 表示 ); 存在 2 种或 2 种以上微生物时, 只要求报告淋球菌 ; 建议淋球菌耐药监测点做糖发酵试验 四 注意事项 1. 请务必注意建议检测日期和报告截止日期 认真填写测定结果回报表的每项内容 填写报告的字迹一定要清晰并在规定的时间内回报结果, 在报告截止日期之后回报的结果将不予统计 2. 室间质评活动中的问题可与参比实验室联系 联系方式 : 魏万惠 ( 梅毒项目电话 : weiwh@ncstdlc.org ) 钟铭英 ( 沙眼衣原体项目电话 : zhongmy@ncstdlc.org) 戴秀芹 ( 淋球菌项目电话 : daixq@ncstdlc.org) 3. 室间质评测定结果报告表可采用邮寄或电子发送方式反馈 : 邮寄地址 : 中国 CDC 性病控制中心性病参比实验室 ( 江苏省南京市蒋王庙街 12 号, ) 顾敏敏电话 / 传真 : lab@ncstdlc.org ( 中国 CDC 性病控制中心参比实验室 )