小议攀缘植物的分类及应用

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1 双 歧 杆 菌 的 益 生 性 能 及 其 研 究 进 展 作 者 : 家 环 宇 上 海 交 通 大 学 生 命 学 院 研 究 生 学 号 : 摘 要 : 双 歧 杆 菌 是 人 和 动 物 肠 道 内 最 主 要 的 生 理 性 细 菌 之 一, 与 其 它 生 理 性 细 菌 成 员 构 成 了 微 生 物 群 落, 并 与 宿 主 构 成 一 个 微 生 态 系 统 因 其 具 有 维 持 微 生 态 平 衡 生 物 拮 抗 免 疫 调 节 营 养 等 多 方 面 的 益 生 性 能, 双 歧 杆 菌 已 被 广 泛 应 用 于 医 疗 保 健 食 品 等 领 域, 在 国 内 外 受 到 了 消 费 者 的 青 睐 本 文 就 双 歧 杆 菌 的 生 物 学 特 性 益 生 性 能 应 用 现 状 和 存 在 的 问 题 及 研 究 方 向 做 一 综 述 关 键 词 : 双 歧 杆 菌, 生 物 学 特 性, 益 生 性 能 双 歧 杆 菌 是 1899 年 由 法 国 巴 斯 德 研 究 院 的 Tissier 首 次 在 健 康 母 乳 喂 养 婴 儿 的 粪 便 中 发 现 并 分 离 出 来 的, 因 其 在 轻 度 弯 曲 的 末 端 常 见 分 叉, 因 而 命 名 为 双 歧 杆 菌 在 之 后 一 百 多 年 的 时 间 里, 各 国 科 学 家 对 双 歧 杆 菌 的 生 物 学 特 性 及 其 独 特 的 生 理 功 能 进 行 了 大 量 的 研 究 现 已 认 识 到 双 歧 杆 菌 是 终 生 存 在 于 人 和 动 物 体 内 并 与 健 康 息 息 相 关 的 益 生 菌, 参 与 免 疫 营 养 消 化 等 一 系 列 的 生 理 过 程, 发 挥 着 重 要 的 功 能 近 年 来, 随 着 现 代 微 生 态 学 理 论 体 系 的 形 成 和 发 展, 人 们 对 双 歧 杆 菌 的 研 究 认 识 和 开 发 利 用 也 发 生 了 质 的 飞 跃 1. 双 歧 杆 菌 的 生 物 学 特 性 及 种 类 双 歧 杆 菌 属 (Bifidobacterium ) 归 属 于 放 线 菌 纲 (Actinobacteria ) 双 歧 杆 菌 目 (Bifidobacteriales) 双 歧 杆 菌 科 (Bifidobacteriaceae) [1] 1.1 生 物 学 特 性 双 歧 杆 菌 细 胞 呈 现 多 样 形 态, 有 短 杆 较 规 则 形 或 纤 细 杆 状 具 有 尖 细 末 端 的, 有 球 形 的, 也 第 1 页, 共 1 页

2 有 长 而 稍 弯 曲 状 的, 呈 各 种 分 支 或 叉 形 棍 棒 状 或 匙 形, 单 个 或 链 状 V 形 栅 栏 状 排 列, 或 聚 集 成 星 状 菌 落 光 滑 凸 圆 边 缘 完 整 乳 脂 至 白 色 闪 光 并 具 有 柔 软 的 质 地 革 兰 氏 阳 性, 不 抗 酸 不 形 成 芽 孢, 不 运 动 过 氧 化 酶 阴 性, 不 还 原 硝 酸 盐, 吲 哚 反 应 阴 性, 明 胶 液 化 阴 性, 联 苯 胺 反 应 阴 性 [2] ; 厌 氧, 在 好 氧 条 件 下 它 们 不 能 在 平 皿 上 生 长, 不 过 对 氧 的 敏 感 性 不 同 的 种 和 菌 株 存 在 差 异 最 适 生 长 温 度 37~41 ; 最 低 生 长 温 度 25~28 ; 最 高 生 长 温 度 43~45 初 始 生 长 最 适 ph 6.5~7.0; 在 ph4.5~5.0 或 8.0~8.5 不 生 长 可 发 酵 葡 萄 糖, 产 酸 不 产 气, 主 要 产 生 乙 酸 和 乳 酸, 能 发 酵 乳 糖 和 麦 芽 糖 产 酸, 发 酵 蔗 糖 和 蜜 二 糖 微 产 酸, 不 发 酵 核 糖 阿 拉 伯 糖 棉 子 糖 木 糖 等 双 歧 杆 菌 对 抗 生 素 的 敏 感 性 大 多 数 菌 株 抗 多 粘 菌 素 B 卡 那 霉 素 庆 大 霉 素 链 霉 素 和 新 霉 素 ; 对 青 霉 素 万 古 霉 素 氯 林 可 霉 素 红 霉 素 和 杆 菌 肽 高 度 敏 感, 这 些 抗 生 素 对 90% 菌 株 的 抑 制 少 于 1.6μg/ml 所 有 的 菌 株 都 对 氯 霉 素 敏 感 (MIC90=(2.0~5.8)μg/ml), 对 林 可 霉 素 也 敏 感 (MIC50=(0.64~1.5)μg/ml), 对 四 环 素 的 敏 感 性 变 化 幅 度 大 不 同 种 和 菌 株 间 对 抗 生 素 的 敏 感 性 有 不 同 程 度 的 差 异 [3] 1.2 种 类 目 前 报 道 的 双 歧 杆 菌 共 有 32 种, 其 中 分 离 自 人 体 的 有 12 种 当 前 人 源 双 歧 杆 菌 应 用 于 生 产 的 菌 种 包 括 : 两 歧 双 歧 杆 菌 (B. bifidum) 长 双 歧 杆 菌 (B. longum) 青 春 双 歧 杆 菌 (B. adolescentis) 短 双 歧 杆 菌 (B. breve) 和 婴 儿 双 歧 杆 菌 (B. infantis) 双 歧 杆 菌 自 婴 儿 出 生 2~3d 开 始 增 殖,5~7d 达 高 峰, 并 占 绝 对 优 势 不 同 年 龄 人 群, 双 歧 杆 菌 的 种 类 不 同,5 岁 以 下 的 儿 童 以 婴 儿 双 歧 杆 菌 为 主, 青 壮 年 的 以 青 春 双 歧 杆 菌 为 主, 老 人 以 长 双 歧 杆 菌 为 主, 短 双 歧 杆 菌 和 两 歧 双 歧 杆 菌 在 各 年 龄 组 均 可 检 出 2. 双 歧 杆 菌 的 益 生 性 能 3. 1 生 物 拮 抗 作 用 双 歧 杆 菌 作 为 肠 道 中 的 优 势 菌, 与 其 它 正 常 菌 群 一 起 构 成 了 阻 止 外 来 菌 入 侵 的 定 植 阻 力 关 于 双 歧 杆 菌 对 肠 道 病 原 体 生 物 拮 抗 作 用 的 机 理, 目 前 认 为 有 以 下 几 种 可 能 : (1) 通 过 双 歧 杆 菌 细 胞 壁 的 磷 壁 酸 与 肠 粘 膜 上 皮 细 胞 特 异 性 结 合, 粘 附 并 占 据 肠 道 粘 膜 表 面, 形 成 一 层 生 物 菌 膜, 抑 制 致 病 菌 粘 附 到 肠 粘 膜 上, 起 到 占 位 性 保 护 作 用 [4] ; 第 2 页, 共 2 页

3 (2) 双 歧 杆 菌 可 以 通 过 产 生 细 胞 外 糖 苷 酶, 降 解 肠 粘 膜 上 皮 细 胞 上 致 病 菌 和 细 菌 毒 素 受 体, 从 而 阻 止 致 病 菌 对 肠 粘 膜 细 胞 的 侵 袭 ; (3) 在 代 谢 过 程 中 经 由 特 殊 途 径 的 双 歧 杆 菌 支 路 产 生 有 机 酸, 如 乙 酸 乳 酸 和 甲 酸 等, 降 低 肠 道 ph 和 氧 化 还 原 电 势 (Eh), 抑 制 致 病 菌 繁 殖, 从 而 形 成 肠 道 的 化 学 保 护 屏 障, 抑 制 致 病 菌 增 殖 [5] ; (4) 双 歧 杆 菌 能 合 成 结 合 胆 汁 酸 水 解 酶, 可 将 结 合 型 胆 酸 分 离 为 游 离 态, 游 离 态 胆 酸 抑 菌 作 用 较 结 合 态 胆 酸 强, 从 而 具 有 抑 制 细 菌 的 生 长 作 用 [6] ; (5) 产 生 Bifidin 和 Bifilong 两 种 抗 菌 物 质, 直 接 杀 伤 致 病 菌 ; (6) 调 节 和 协 调 其 它 肠 道 菌 群, 促 进 肠 蠕 动, 使 致 病 菌 粘 附 到 肠 粘 膜 上 皮 的 机 会 减 少 3. 2 免 疫 调 节 作 用 双 歧 杆 菌 的 免 疫 调 节 作 用, 是 通 过 肠 道 刺 激 肠 黏 膜, 诱 导 激 活 潘 氏 细 胞 和 肠 黏 膜 免 疫 系 统, 促 进 免 疫 球 蛋 白 (IgA) 的 分 泌 与 细 胞 因 子 和 抗 体 的 产 生, 进 而 提 高 了 胃 肠 道 黏 膜 的 免 疫 和 抗 感 染 能 力 其 发 挥 免 疫 作 用 的 途 径 有 两 种 : 一 是 诱 导 肠 道 内 具 有 免 疫 活 性 的 内 源 性 介 质, 然 后 再 诱 导 整 个 机 体 的 免 疫 功 能, 激 活 淋 巴 母 细 胞 的 分 化 繁 殖, 使 血 液 中 的 淋 巴 细 胞 增 多 ; 二 是 激 活 巨 噬 细 胞 的 活 性 以 及 NK 细 胞 等 多 种 免 疫 活 性 细 胞 的 功 能, 从 而 激 活 机 体 吞 噬 细 胞 的 吞 噬 活 性, 提 高 抗 感 染 能 力 双 歧 杆 菌 全 菌 及 其 表 面 结 构 成 分 具 有 赋 活 机 体 的 免 疫 监 视 功 能, 提 高 自 然 杀 伤 细 胞 和 巨 噬 细 胞 活 性, 提 高 局 部 或 全 身 的 抗 感 染 和 防 御 功 能 的 作 用 3. 3 营 养 作 用 双 歧 杆 菌 体 内 含 有 大 量 的 消 化 酶, 能 消 化 一 些 机 体 内 依 靠 本 身 的 酶 系 不 能 消 化 的 营 养 物 质, 促 进 体 内 营 养 物 质 的 吸 收 同 时, 双 歧 杆 菌 直 接 或 间 接 地 参 与 维 生 素 B1 B6 B12 烟 酸 叶 酸 以 及 除 泛 酸 和 维 生 素 K 之 外 的 水 溶 性 维 生 素 的 合 成 吸 收 和 利 用, 并 能 以 氨 为 氮 源 在 肠 道 内 合 成 氨 基 酸 和 尿 素, 从 而 有 效 降 低 血 氨 浓 度, 提 高 体 内 蛋 白 质 积 蓄 [7] 双 歧 杆 菌 在 肠 道 中 产 生 的 乳 酸 和 醋 酸 可 降 低 环 境 ph 值, 亦 有 利 于 二 价 铁 钙 及 维 生 素 D 的 吸 收 双 歧 杆 菌 具 有 磷 蛋 白 磷 酸 酶, 能 分 解 α- 酪 蛋 白, 提 高 蛋 白 消 化 吸 收 率 [8] 第 3 页, 共 3 页

4 另 外, 双 歧 杆 菌 通 过 抑 制 某 些 维 生 素 分 解 菌 来 保 障 体 内 维 生 素 的 供 应, 如 抑 制 分 解 维 生 素 B1 的 芽 孢 杆 菌, 通 过 改 变 肠 道 内 微 生 物 构 成, 保 证 机 体 对 维 生 素 的 需 要 3. 4 毒 性 降 解 作 用 一 些 致 病 菌 的 代 谢 产 物 如 甲 酚 胺 吲 哚 等 具 有 较 强 的 毒 性, 如 果 这 些 产 物 积 累 较 多, 大 大 超 过 了 肝 脏 的 解 毒 能 力, 将 导 致 肝 脏 功 能 紊 乱, 循 环 系 统 失 常, 还 将 干 扰 神 经 系 统 的 活 动 由 于 双 歧 杆 菌 能 抑 制 腐 败 菌 的 生 长, 从 而 抑 制 这 些 物 质 的 产 生 ; 同 时 双 歧 杆 菌 可 降 解 肠 道 中 的 有 毒 物 质, 清 除 致 病 菌 毒 性 代 谢 产 物, 防 止 内 毒 素 吸 收 引 起 内 毒 素 血 症, 保 护 肝 脏 的 功 能 ; 还 可 清 除 肠 内 致 癌 原 如 亚 硝 酸 胺 等, 能 明 显 降 低 肿 瘤 发 病 率 3. 5 抗 肿 瘤 作 用 双 歧 杆 菌 的 抗 肿 瘤 作 用 是 由 于 双 歧 杆 菌 的 存 在 及 其 生 成 的 代 谢 产 物 优 化 了 肠 道 内 的 菌 群 组 合, 增 强 了 免 疫 功 能, 非 特 异 性 增 强 肿 瘤 局 部 反 应, 改 善 肿 瘤 病 人 淋 巴 细 胞 亚 群 分 布 和 促 进 细 胞 免 疫 功 能, 抑 制 了 肿 瘤 细 胞 的 增 殖 和 致 癌 物 的 产 生, 同 时 使 某 些 诱 发 癌 症 的 酶 失 活, 诱 发 癌 症 凋 亡 基 因 的 表 达 关 于 双 歧 杆 菌 抗 肿 瘤 作 用 的 机 制 和 应 用, 目 前 认 为 可 能 主 要 通 过 以 下 途 径 完 成 : (1) 双 歧 杆 菌 及 其 细 胞 壁 肽 聚 糖 通 过 刺 激 巨 噬 细 胞 产 生 一 些 活 性 因 子, 从 而 间 接 发 挥 抑 瘤 作 用 ; (2) 诱 导 肿 瘤 细 胞 凋 亡 细 胞 凋 亡 是 有 核 细 胞 在 基 因 调 控 下 发 生 的 一 种 细 胞 主 动 死 亡 方 式, bcl 基 因 可 阻 止 细 胞 凋 亡 信 号 的 产 生,Bax 基 因 大 量 表 达 时, 可 形 成 大 量 Bax- Bax 同 二 聚 体 和 Bax- Bel- 2 异 二 聚 体, 通 过 细 胞 内 氧 化 作 用, 促 进 钙 离 子 跨 膜 运 动 等 途 径 多 种 因 素 诱 导 细 胞 凋 亡 给 荷 瘤 鼠 经 腹 腔 注 射 分 叉 双 歧 杆 菌,Bax 基 因 的 表 达 量 显 著 增 强,bcl 基 因 表 达 量 下 调, 最 终 诱 导 肝 肿 瘤 细 胞 凋 亡 ; (3) 增 强 一 氧 化 氮 合 酶 的 蛋 白 表 达 水 平, 促 进 NO 的 合 成, 从 而 抑 制 肿 瘤 细 胞 增 长 小 鼠 皮 下 注 射 双 歧 杆 菌 液 可 诱 导 血 液 中 NO 水 平 升 高 通 过 与 肿 瘤 代 谢 关 键 酶 活 性 部 位 Fe-S 结 合 使 其 失 活 或 与 氧 结 合 形 成 强 有 力 的 杀 伤 性 的 羟 自 由 基, 使 瘤 细 胞 死 亡 ; (4) 双 歧 杆 菌 能 耐 受 胃 部 酸 性 条 件 到 达 肠 道, 从 而 抑 制 一 些 致 癌 前 体 物 质 向 致 癌 物 质 转 化 的 酶 生 成 或 降 低 酶 的 活 性 还 可 以 结 合 致 癌 物 质 及 食 物 中 的 诱 变 剂, 从 而 减 少 致 癌 物 的 形 成 活 化 滞 留 的 机 会 3. 应 用 现 状 第 4 页, 共 4 页

5 3.1 双 歧 杆 菌 微 生 态 调 节 剂 微 生 态 制 剂 是 指 在 微 生 态 学 理 论 指 导 下, 用 有 利 于 人 体 的 益 生 菌 及 其 代 谢 产 物 或 生 长 促 进 物 质 制 成 的 制 剂 双 歧 杆 菌 微 生 态 调 节 剂 的 生 产 方 法 是 首 先 制 取 发 酵 培 养 液, 调 配 灭 菌 后 接 入 发 酵 剂, 发 酵 后 灌 装 可 得 活 性 双 歧 杆 菌 的 微 生 态 调 节 剂, 或 制 成 片 剂 干 粉 胶 囊 目 前, 国 内 的 双 歧 杆 菌 微 生 态 调 节 剂 有 回 春 生 ( 由 双 歧 杆 菌 制 成 的 干 粉 胶 囊 ) 三 株 口 服 液 ( 由 双 歧 杆 菌 乳 杆 菌 和 肠 球 菌 组 成 ) 双 歧 王 ( 由 双 歧 杆 菌 发 酵 脱 脂 乳 制 成 ) 裴 菲 康 ( 由 双 歧 杆 菌 与 肠 球 菌 构 成 的 干 粉 胶 囊 ) 金 双 歧 ( 同 回 春 生 ) 五 株 王 功 能 液 ( 由 双 歧 杆 菌 乳 杆 菌 和 乳 链 球 菌 共 5 株 菌 组 成 ) 生 态 源 口 服 液 ( 由 双 歧 杆 菌 发 酵 脱 脂 乳 制 成 ) 康 健 活 性 功 能 液 ( 由 双 歧 杆 菌 乳 杆 菌 乳 链 球 菌 发 酵 大 豆 制 成 ) 等 3.2 双 歧 因 子 制 剂 Tissier 从 母 乳 中 分 离 出 N- 乙 酰 -β-d 氨 基 葡 萄 糖 苷, 该 物 质 能 促 进 肠 道 内 双 歧 杆 菌 的 生 长 繁 殖, 称 为 双 歧 因 子 (Bifidus growth factors) 这 种 物 质 是 一 系 列 低 聚 糖, 主 要 为 异 构 化 乳 糖 研 究 表 明, 在 婴 儿 奶 粉 中 加 入 异 构 化 乳 糖, 可 促 进 肠 道 菌 群 占 7.5% 的 双 歧 杆 菌 迅 速 繁 殖 至 57% 这 种 物 质 已 广 泛 应 用 于 饮 料 糖 果 咀 嚼 性 片 糖 婴 儿 食 品 老 年 食 品 中, 医 学 上 治 疗 便 秘 和 肝 昏 迷 等 其 它 双 歧 因 子 制 剂 有 低 聚 异 麦 芽 糖 低 聚 木 糖 低 聚 龙 胆 糖 我 国 佳 木 斯 医 学 院 研 制 的 中 药 903 和 中 药 号 中 国 康 复 中 心 研 制 的 乳 果 糖 和 云 芝 多 糖 珠 海 巨 大 集 团 的 巨 五 株 等 3.3 双 歧 杆 菌 酸 奶 双 歧 杆 菌 酸 奶 的 生 产 工 艺 可 分 为 两 种 : 分 自 发 酵 法 和 混 合 发 酵 法 常 用 的 双 歧 杆 菌 有 两 歧 双 歧 杆 菌 长 双 歧 杆 菌 青 春 双 歧 杆 菌 短 双 歧 杆 菌 和 婴 儿 双 歧 杆 菌, 最 常 用 的 发 酵 菌 为 两 歧 双 歧 杆 菌 4. 存 在 的 问 题 及 研 究 方 向 随 着 社 会 的 不 断 发 展, 人 们 对 健 康 生 活 日 益 重 视, 对 自 然 的 有 益 健 康 的 制 品 越 来 越 关 注, 益 生 菌 食 品 是 功 能 性 食 品 中 发 展 极 快 的 一 个 领 域 研 究 发 现, 要 获 得 所 期 望 的 保 健 效 果, 益 生 菌 必 须 达 到 足 够 的 数 量 一 般 来 说, 食 品 中 活 菌 数 应 不 少 于 10 6 cfu/g 或 日 摄 人 量 在 10 8 cfu/g 左 右 [9] 由 于 双 歧 杆 菌 属 于 专 性 厌 氧 菌, 培 养 较 困 难, 且 不 耐 高 温, 不 耐 酸, 不 耐 胆 盐, 因 此 在 实 际 应 用 中 也 出 现 了 一 些 问 题, 如 菌 种 易 失 活, 生 产 运 输 和 保 存 比 较 困 难, 易 造 成 生 物 活 性 降 第 5 页, 共 5 页

6 低, 在 肠 道 内 繁 殖 速 度 较 慢 等 这 样 就 造 成 双 歧 杆 菌 制 剂 的 质 量 较 差, 活 菌 数 较 少 或 无, 在 使 用 时 用 量 较 大, 增 加 了 成 本 此 外, 部 分 双 歧 杆 菌 具 耐 药 因 子, 如 果 活 菌 制 剂 含 有 耐 药 因 子, 一 旦 服 用 就 会 将 其 携 带 的 耐 性 质 粒 转 移 给 人 类 肠 道 中 的 致 病 菌, 不 利 于 人 体 健 康 [10] 所 以, 人 们 不 仅 做 了 大 量 的 工 作 来 提 高 双 歧 杆 菌 的 作 用 效 果, 如 提 高 生 产 设 备 和 技 术 的 要 求 筛 选 培 育 更 优 良 的 菌 株 加 入 双 歧 因 子 提 高 活 性 对 产 品 进 行 微 胶 囊 化 提 高 保 护 力 与 其 他 菌 种 配 合 协 同 发 挥 作 用 等, 并 对 含 有 双 歧 杆 菌 的 活 菌 制 剂 进 行 耐 药 因 子 的 检 验 随 着 微 生 态 理 论 的 发 展 和 生 物 工 程 技 术 的 进 步, 双 歧 杆 菌 制 剂 将 在 以 下 几 个 方 面 取 得 进 展 : (1) 改 进 剂 型 制 剂 的 组 成 和 制 备 技 术, 以 提 高 制 剂 的 稳 定 性 和 疗 效, 延 长 保 存 期 ; (2) 加 强 双 歧 因 子 制 剂 的 研 制 与 开 发, 克 服 活 菌 制 剂 在 生 产 困 难 和 保 存 期 失 活 等 方 面 开 辟 新 的 有 效 途 径 ; (3) 采 用 生 物 工 程 技 术, 对 双 歧 杆 菌 菌 株 进 行 基 因 改 良, 将 耐 氧 基 因 和 耐 酸 基 因 片 段 导 入 双 歧 杆 菌 遗 传 物 质 中, 并 使 其 表 达, 来 提 高 菌 株 的 耐 氧 性 和 耐 酸 性, 培 育 出 各 方 面 性 能 都 比 较 优 良 的 生 产 型 菌 种 参 考 文 献 [1] George M. Garrity. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology. 2nd Edition [M]. New York: Springer, [2] 刘 辉, 周 迪, 刘 文 波, 等. 双 歧 杆 菌 的 研 究 与 应 用 [J]. 畜 牧 兽 医 科 技 信 息, 2002(3):527. [3] 郭 兴 华. 益 生 菌 基 础 与 应 用 [M]. 北 京 : 北 京 科 学 技 术 出 版 社, [4] Amrouche T., Boutin Y., Moroni O., et al. Production and characterization of anti -bifidobacteria monoclonal antibodies and their application in the development of an immunoculture detection method[j]. Journal of Microbiological Methods, 2006, 65: 159~170 [5] 赵 桂 英, 马 黎, 周 斌, 等. 双 歧 杆 菌 对 仔 猪 生 长 性 能 的 影 响 [J]. 饲 料 工 业,2007,28(1): [6] 赵 敏, 李 德 斌, 张 静. 双 歧 杆 菌 及 微 生 态 制 剂 [J]. 中 国 微 生 态 学 杂 志,2003,15(6): [7] 刁 治 民, 张 文 静, 马 永 贵. 双 歧 杆 菌 的 生 理 作 用 及 开 发 前 景. 青 海 科 技, 2002(6) : 37~40 [8] Donkor O.N., Henriksson A., Vasiljevic T., et al. Effect of acidification on the activity of probiotics in yoghurt during cold storage[j]. International Dairy Journal, 2005: 1~9 第 6 页, 共 6 页

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http://life.nthu.edu.tw/~b861614/mic/mic47.htm 56 KB-complex Henry Tissier B. infantis B. infantis B. breve B. longum B. pseudolongumb. thermophilum B. suis B. infantisb. 14 200412384 breve B. longum B.

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