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1 DNA 条 形 码 技 术 在 深 圳 鱼 肉 制 品 鉴 定 中 的 应 用 王 敏 1, 刘 荭 2, 黄 海 3, 赵 晓 萌 1, 石 琼 1, 何 舜 平 1,4, 孙 颖 (1. 深 圳 华 大 基 因 研 究 院, 广 东 深 圳 ;2. 深 圳 出 入 境 检 验 检 疫 局 动 植 物 检 验 检 疫 技 术 中 心, 广 东 深 圳 ; 3. 三 亚 市 南 繁 科 学 技 术 研 究 院, 海 南 三 亚 ;4. 中 国 科 学 院 水 生 生 物 研 究 所, 湖 北 武 汉 ) 摘 要 : 以 线 粒 体 细 胞 色 素 氧 化 酶 亚 基 I(COI) 基 因 为 目 标 基 因, 应 用 DNA 条 形 码 (DNA barcoding) 技 术 鉴 别 深 圳 批 发 市 场 和 超 市 零 售 鱼 肉 制 品 的 种 类 来 源, 判 别 其 产 品 标 签 是 否 正 确 本 次 调 查 的 77 份 鱼 肉 制 品 均 能 扩 增 出 特 异 性 条 带,28 份 样 品 与 产 品 标 签 标 示 不 符, 错 贴 率 高 达 36.36%, 其 中 所 有 标 示 龙 俐 鱼 的 商 品 竟 然 都 是 低 价 的 巴 丁 鱼 (Pangasianodon hypophthalmus) DNA 条 形 码 技 术 可 用 于 鱼 肉 制 品 的 来 源 物 种 鉴 定 关 键 词 :DNA 条 形 码 ;COI 基 因 ; 物 种 鉴 定 ; 鱼 肉 制 品 1, Identifying Fish Products in ShenZhen through DNA Barcoding WANG Min 1, LIU Hong 2, HUANG Hai 3, ZHAO Xiao-meng 1, SHI Qiong 1, HE Shun-ping 1,4, SUN Ying 1, (1. BGI, Shenzhen , China; 2. Animal & Plant Inspection and Quarantine Technology Center, Shenzhen Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Shenzhen , China; 3. Sanya Science & Technology Academy for Crop Winter Multiplication, Sanya , China; 4. Institute of Hydrobiology, Chinese Academy of Sciences, Wuhan , China) Abstract:In this study, DNA barcoding was used to identify the exact species of fish products from Shenzhen wholesale and retail markets and to check if these products were correctly labeled. Using mitochondrial cytochrome C oxidase subunit I (COI) gene as the target, and analyze the sequences of COI from different samples. Our results showed that all 77 examined samples were successfully amplified by PCR. However, up to 36.36%(28/77)of them were inconsistent with their label descriptions, in which all the products labeled with "Long Li fish" were actually the low-cost Pangasianodon hypophthalmus. As a simple, rapid and efficient technology, DNA barcoding can be widely used for species identification of fish products. Key words:dna barcoding; COI gene; species identification; fish products 中 图 分 类 号 :Q95 文 献 标 志 码 :B 1 我 国 是 鱼 肉 消 费 大 国, 鱼 肉 制 品 繁 多, 包 括 生 鱼 片 冷 冻 加 工 品 ( 鱼 片 或 鱼 段 ) 烤 鱼 片 和 鱼 糜 制 品 等 近 年 来, 鱼 肉 制 品 的 掺 假 行 为 频 频 曝 光, 给 人 们 的 健 康 造 成 严 重 威 胁 [1-3] 鱼 肉 制 品 错 贴 标 签 的 现 象 并 非 中 国 独 有, 一 些 欧 洲 国 家 的 商 贩 也 以 次 充 好, 赚 取 更 高 利 润 如, 在 抽 检 的 德 国 产 鲽 类 鱼 中,1/4 与 标 注 名 称 不 符 ;24% 的 西 班 牙 产 虾 肉 样 品 中 存 在 欺 诈 行 为 ; 在 奥 地 利, 一 些 价 格 昂 贵 的 比 目 鱼 挪 威 三 文 鱼 也 通 常 成 为 假 冒 的 对 象 [4] DNA 条 形 码 的 概 念 由 加 拿 大 生 物 学 家 Paul Hebert 在 2003 年 首 次 提 出 [5,6], 是 一 种 利 用 线 粒 体 细 胞 色 素 C 氧 化 酶 亚 基 I(Mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I,COI) 基 因 一 段 长 度 为 648 bp 的 片 段, 对 物 种 进 行 准 确 快 速 鉴 [7] 定 的 方 法 在 国 外,DNA 条 形 码 技 术 已 用 于 鱼 肉 制 品 的 真 假 鉴 别 Cawthom 等 利 用 DNA 条 形 码 技 术 研 究 南 非 市 场 的 鱼 类, 发 现 在 批 发 商 和 零 售 商 中 贴 错 标 签 的 比 例 差 别 巨 大 ;Laura [8] 利 用 DNA 条 形 码 技 术 对 意 大 利 市 场 上 的 69 份 [9] 鱼 类 样 品 进 行 分 析, 发 现 有 22 个 样 本 (32%) 存 在 错 贴 标 签 现 象 ;Wong 等 利 用 DNA 条 形 码 技 术 对 市 场 上 的 91 个 [10] 样 品 进 行 分 析, 发 现 有 25% 的 海 产 品 的 标 签 与 实 物 不 符 ;Holems 等 研 究 了 澳 大 利 亚 附 近 海 域 的 221 份 鱼 翅 样 品, 结 果 发 现 有 许 多 鲨 鱼 被 列 入 世 界 自 然 保 护 联 盟 (IUCN) 红 色 名 录, 一 种 鲨 鱼 为 极 度 濒 危 物 种 ; 美 国 OCEANA 在 期 间 通 过 DNA 条 形 码 技 术 研 究 全 美 境 内 1247 份 鱼 类 制 品, 发 现 有 三 分 之 一 的 商 品 存 在 错 贴 标 签 现 象 [11] 但 在 我 国,DNA 条 形 码 技 术 主 要 集 中 在 分 类 学 和 物 种 鉴 定 研 究 中 [12-15], 而 用 于 食 品 鉴 定 的 文 献 报 道 较 少, 在 鱼 肉 鉴 定 方 面 的 也 是 最 近 两 年 才 有 少 量 报 道 [16-18] 收 稿 日 期 : 基 金 项 目 : 深 圳 市 科 技 计 划 深 港 创 新 圈 项 目 (SGLH ); 广 东 省 省 部 产 学 研 专 项 (2013B ) 作 者 简 介 : 王 敏 (1988 ), 男, 硕 士, 研 究 方 向 为 水 生 生 物 学 [email protected] 通 信 作 者 : 孙 颖 (1972 ), 女, 副 研 究 员, 博 士, 研 究 方 向 为 鱼 类 生 物 学 [email protected] 1

2 [19] 本 研 究 参 照 Ward 等 的 方 法, 选 用 COI 基 因 的 通 用 引 物, 对 深 圳 市 场 冷 冻 鱼 冻 鱼 片 进 行 DNA 提 取 扩 增 和 测 序, 并 对 线 粒 体 COI 基 因 序 列 进 行 分 析 比 对, 旨 在 建 立 准 确 高 效 的 鱼 肉 制 品 的 鉴 定 方 法, 为 鱼 肉 制 品 进 出 口 检 验 监 管 和 市 场 安 全 监 管 等 方 面 的 应 用 提 供 技 术 支 持 1 材 料 与 方 法 1.1 材 料 与 试 剂 2013 年 3 月, 从 市 场 上 随 机 购 买 77 份 鱼 肉 样 品 其 中 59 份 整 鱼 和 冻 鱼 块 在 深 圳 梅 林 批 发 市 场 购 得, 其 余 18 份 鱼 片 和 鱼 柳 等 在 深 圳 各 超 市 购 得 无 水 乙 醇 氯 仿 异 戊 醇 和 异 丙 醇 ( 分 析 纯 ) 生 工 生 物 工 程 有 限 公 司 ;Tris- 饱 和 酚 (ph 8.0) 北 京 索 莱 宝 科 技 有 限 公 司 ;Taq DNA 聚 合 酶 dntps(2.5 mmol/l) DNA Marker(DL100 bp) 广 州 瑞 真 生 物 科 技 有 限 公 司 ; 蛋 白 酶 K 德 国 Merck 公 司 ;EB 核 酸 染 料 生 工 生 物 工 程 ( 上 海 ) 股 份 有 限 公 司 1.2 仪 器 与 设 备 高 速 离 心 机 Eppendorf 公 司 ;PCR 仪 Life Technologies 公 司 ; 水 浴 锅 上 海 精 宏 ; 超 净 工 作 台 深 圳 市 优 之 净 环 境 科 技 有 限 公 司 ; 电 泳 仪 北 京 六 一 仪 器 厂 ; 凝 胶 成 像 系 统 上 海 天 能 科 技 有 限 公 司 ; 微 量 核 酸 蛋 白 测 定 仪 Implen 公 司 1.3 方 法 样 本 DNA 提 取 采 用 传 统 的 酚 - 氯 仿 法 取 10 mg 左 右 的 组 织 于 1.5 ml 的 离 心 管 中, 加 入 494 µl 的 DNA 裂 解 液 和 6 µl 的 蛋 白 酶 K(20 mg/ml); 将 离 心 管 于 56 恒 温 水 浴 锅 中 裂 解 3 小 时, 水 浴 完 后, 加 入 等 体 积 的 酚 : 氯 仿 : 异 戊 醇 (25:24:1), 摇 匀 至 乳 浊 液, 离 心 10 min,12000 r/min; 吸 取 上 清, 转 入 新 的 1.5 ml 离 心 管 中, 加 入 等 体 积 的 酚 : 氯 仿 : 异 戊 醇 (25:24:1), 摇 匀 至 乳 浊 液, 离 心 10 min,12000 r/min 吸 取 上 清, 转 入 新 的 1.5 ml 离 心 管 中, 加 入 两 倍 体 积 无 水 乙 醇 ( 提 前 预 冷 ), 颠 倒 混 匀,-20 静 置 30 min, 离 心 10 min,12000 r/min; 弃 去 上 清,75% 乙 醇 洗 涤 2 次 ; 烘 干 后 加 入 50 µl dh 2 O, 溶 解 DNA; 取 2 µl 制 备 1% 琼 脂 糖 凝 胶 进 行 电 泳 检 测, 同 时 吸 取 1 µl 稀 释 后 使 用 紫 外 分 光 光 度 计 进 行 检 测 ; 将 原 液 存 放 于 -20 冰 箱 保 存 COI 基 因 的 PCR 扩 增 和 测 序 鱼 类 通 用 引 物 [19] : FishF2_t1(5 -TGTAAAACGACGGCCAGTCGACTAATCATAAAGATATCGGCAC-3 ), VF2_t1(5 -TGTAAAACGACGGCCAGTCGACTAATCATAAAGATATCGGCAC-3 ); FishR2_t1(5 -TGTAAAACGACGGCCAGTCGACTAATCATAAAGATATCGGCAC-3 ), FR1d_t1(5 -CAGGAAACAGCTATGACACCTCAGGGTGTCCGAARAAYCARAA-3 ) PCR 反 应 体 系 为 25 µl:10 PCR Buffer 为 2.5 µl,dntps(2.5 Mm)1.0 µl,takara Taq(5 U/µL)0.5 µl, 引 物 各 0.25 µl,dna 模 版 1.0 µl, 去 离 子 水 19.0 µl PCR 反 应 程 序 :94 5 min;94 30 s,52 40 s,72 1 min,35 个 循 环 ;72 10 min PCR 扩 增 完 成 后, 以 1% 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 检 测 PCR 产 物, 挑 选 扩 增 成 功 且 条 带 单 一 的 产 物 送 测 序 列 比 对 及 分 析 将 测 序 成 功 的 序 列 人 工 比 对 拼 接, 将 处 理 过 的 序 列 放 到 BOLD( 以 及 NCBI ( 网 站 的 数 据 库 对 样 品 的 COI 序 列 进 行 鉴 定 以 及 相 似 度 分 析, 再 将 整 理 后 的 序 列 和 GenBank 下 载 的 相 关 序 列 应 用 DNAMAN7.0 软 件 进 行 多 序 列 比 对, 分 析 相 关 序 列 的 同 源 性 2 结 果 与 分 析 2. 1 样 品 DNA 浓 度 及 纯 度 电 泳 检 测 显 示,DNA 质 量 正 常 ; 紫 外 分 光 光 度 计 检 测 OD 260 /OD 280 在 1.8~2.0 之 间, 满 足 常 规 PCR 反 应 的 要 求 2. 2 COI 基 因 的 扩 增 和 克 隆 本 研 究 设 计 的 引 物 扩 增 目 标 片 段 约 为 750 bp, 经 1% 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 检 测 的 PCR 扩 增 产 物 分 子 量 与 设 计 相 符 ( 见 图 1) 将 DNA 片 段 纯 化 后 送 北 京 六 合 华 大 基 因 科 技 股 份 有 限 公 司 测 序, 所 有 77 份 获 得 测 序 序 列, 且 经 过 序 列 比 对 后 相 似 度 均 在 98% 以 上, 说 明 DNA 条 形 码 技 术 可 以 精 准 地 对 各 种 冻 鱼 鱼 片 以 及 鱼 柳 样 品 进 行 鉴 定 2

3 1000bp 500bp 目 的 片 段 1000bp 500bp 目 的 片 段 2.3 标 签 符 合 性 分 析 图 1 不 同 鱼 类 样 品 COI 基 因 的 扩 增 条 带 Fig.1 COI gene amplification from different commercial fish products 批 发 市 场 购 买 的 59 份 样 品, 经 基 因 测 序 后 其 序 列 与 NCBI 数 据 库 比 对 分 析 后 的 相 似 度 汇 总 于 表 1 研 究 表 明, 有 20 份 存 在 标 签 贴 错 的 混 乱 现 象, 误 贴 率 为 33.9%, 其 中 大 多 数 是 由 于 卖 家 没 有 专 业 的 分 类 知 识 所 致 除 了 金 线 鱼 (Nemipterus virgatus) 标 为 黄 花 鱼 ( 序 号 31) 蛇 鲻 (Saurida elongata) 标 为 九 江 鱼 ( 序 号 41) 这 2 份 样 品 存 在 严 重 的 错 标 外, 其 他 错 标 可 能 是 由 于 鱼 的 外 形 不 易 辨 别 而 导 致 的 商 品 错 标 如 众 多 标 有 池 鱼 的 商 品 是 花 腹 鲭 (Scomber australasicus) 和 日 本 鲭 (Scomber japonicus) 两 种 不 同 的 鱼 ; 标 有 金 线 鱼 红 衫 鱼 和 红 三 鱼 的 多 属 于 同 一 种 鱼 ; 史 氏 低 鳍 鲳 (Peprilus snyderi) 在 形 态 学 上 和 南 鲳 (Psenopsis anomala) 比 较 相 似 ; 长 尾 大 眼 鲷 (Priacanthus tayenus) 也 经 常 被 渔 民 当 作 红 衫 鱼 红 尾 圆 鲹 (Decapterus akaadsi) 与 花 腹 鲭 和 日 本 鲭 虽 然 在 种 属 差 别 很 大, 但 是 形 态 上 都 是 长 梭 形, 比 较 容 易 被 商 贩 误 以 为 是 池 鱼 表 1 批 发 市 场 样 品 鉴 定 结 果 Table.1 Identification results obtained from wholesalers 序 号 商 品 名 称 NCBI 比 对 结 果 相 似 度 (%) 1 黄 鳍 鲷 Acanthopagrus latus 黄 鳍 鲷 黄 鳍 棘 鲷 黄 鳍 鲷 Acanthopagrus latus 黄 鳍 鲷 黄 鳍 棘 鲷 秋 刀 鱼 Cololabis saira 秋 刀 鱼 秋 刀 鱼 Cololabis saira 秋 刀 鱼 秋 刀 鱼 Cololabis saira 秋 刀 鱼 秋 刀 鱼 Cololabis saira 秋 刀 鱼 秋 刀 鱼 Cololabis saira 秋 刀 鱼 秋 刀 鱼 Cololabis saira 秋 刀 鱼 秋 刀 鱼 Cololabis saira 秋 刀 鱼 秋 刀 鱼 Cololabis saira 秋 刀 鱼 池 鱼 Decapterus akaadsi 红 尾 圆 鲹 大 黄 鱼 Larimichthys crocea 大 黄 鱼 大 黄 花 鱼 黄 瓜 鱼 大 黄 鱼 Larimichthys crocea 大 黄 鱼 大 黄 花 鱼 黄 瓜 鱼 大 黄 鱼 Larimichthys crocea 大 黄 鱼 大 黄 花 鱼 黄 瓜 鱼 黄 花 鱼 Larimichthys crocea 大 黄 鱼 大 黄 花 鱼 黄 瓜 鱼 100 3

4 16 黄 花 鱼 17 黄 花 鱼 Larimichthys crocea 大 黄 鱼 大 黄 花 鱼 黄 瓜 鱼 99.1 Larimichthys crocea 大 黄 鱼 大 黄 花 鱼 黄 瓜 鱼 海 鲈 鱼 Lateolabrax japonicus 鲈 鱼 花 鲈 海 鲈 鱼 海 鲈 鱼 Lateolabrax japonicus 鲈 鱼 花 鲈 海 鲈 鱼 乌 头 鱼 Mugil cephalus 鲻 鱼 乌 头 乌 鲻 乌 头 鱼 Mugil cephalus 鲻 鱼 乌 头 乌 鲻 乌 头 鱼 Mugil cephalus 鲻 鱼 乌 头 乌 鲻 乌 头 鱼 Mugil cephalus 鲻 鱼 乌 头 乌 鲻 乌 头 Mugil cephalus 鲻 鱼 乌 头 乌 鲻 红 三 鱼 Nemipterus virgatus 金 线 鱼 红 衫 红 三 红 衫 鱼 Nemipterus virgatus 金 线 鱼 红 衫 红 三 金 线 鱼 Nemipterus virgatus 金 线 鱼 红 衫 红 三 红 衫 鱼 Nemipterus virgatus 金 线 鱼 红 衫 红 三 红 三 鱼 Nemipterus virgatus 金 线 鱼 红 衫 红 三 金 线 鱼 Nemipterus virgatus 金 线 鱼 红 衫 红 三 黄 花 鱼 Nemipterus virgatus 金 线 鱼 红 衫 红 三 多 宝 鱼 Paralichthys olivaceus 牙 鲆 多 宝 鱼 比 目 鱼 白 姑 鱼 Pennahia argentata 白 姑 鱼 南 鲳 35 南 鲳 Peprilus snyderi 史 氏 低 鳍 鲳 99.1 Peprilus snyderi 史 氏 低 鳍 鲳 大 眼 鲷 Priacanthus tayenus 长 尾 大 眼 鲷 大 眼 鲷 红 衫 鱼 Priacanthus tayenus 长 尾 大 眼 鲷 大 眼 鲷 南 鲳 Psenopsis anomala 刺 鲳 南 鲳 海 鲂 鱼 Pseudocyttus maculatus 斑 点 拟 短 棘 海 鲂 海 鲂 鱼 海 鲂 鱼 Pseudocyttus maculatus 斑 点 拟 短 棘 海 鲂 海 鲂 鱼 九 江 鱼 42 池 鱼 43 池 鱼 44 池 鱼 45 池 鱼 46 池 鱼 47 池 鱼 48 泥 蜢 49 泥 蜢 50 泥 蜢 Saurida elongata 长 体 蛇 鲻 蛇 鲻 100 Scomber australasicus 花 腹 鲭 花 池 鱼 100 Scomber australasicus 花 腹 鲭 花 池 鱼 100 Scomber japonicus 日 本 鲭 白 腹 鲭 花 池 鱼 100 Scomber japonicus 日 本 鲭 白 腹 鲭 花 池 鱼 100 Scomber japonicus 日 本 鲭 白 腹 鲭 花 池 鱼 100 Scomber japonicus 日 本 鲭 白 腹 鲭 花 池 鱼 100 Siganus canaliculatus 黄 斑 蓝 子 鱼 泥 蜢 99.8 Siganus fuscescens 褐 蓝 子 鱼 泥 蜢 99.8 Siganus fuscescens 褐 篮 子 鱼 泥 蜢 马 面 鲀 Thamnaconus septentrionalis 绿 鳍 马 面 鲀 马 面 鲀 大 眼 金 枪 鱼 Thunnus obesus 大 眼 金 枪 鱼 金 枪 鱼 金 鲳 鱼 Trachinotus ovatus 卵 形 鲳 鲹 金 鲳 金 鲳 鱼 Trachinotus ovatus 卵 形 鲳 鲹 金 鲳 金 鲳 鱼 Trachinotus ovatus 卵 形 鲳 鲹 金 鲳 金 鲳 鱼 Trachinotus ovatus 卵 形 鲳 鲹 金 鲳 鲳 鱼 58 鲳 鱼 Trachinotus ovatus 卵 形 鲳 鲹 金 鲳 100 Trachinotus ovatus 卵 形 鲳 鲹 金 鲳 带 鱼 Trichiurus lepturus 带 鱼 白 带 99.6 注 : 带 表 示 错 贴 和 误 贴 标 签 样 本 4

5 超 市 购 买 的 18 份 鱼 片 和 鱼 柳 样 品 经 基 因 测 序, 其 序 列 与 NCBI 数 据 库 比 对 分 析 后 的 相 似 度 汇 总 于 表 2 其 中, 超 过 三 分 之 一 的 样 品 存 在 以 价 格 较 低 的 鱼 标 成 价 格 较 高 的 鱼 的 现 象 龙 俐 鱼 一 般 指 舌 鳎 科 舌 鳎 属 的 几 种 鱼 类, 如 半 滑 舌 鳎 (Cynoglossus semilaevis); 然 而 此 次 调 查 所 有 标 有 龙 俐 鱼 的 商 品 竟 然 都 是 低 价 的 巴 丁 鱼 (Pangasianodon hyp ophthalmus); 而 罗 非 鱼 (Oreochromis niloticus) 也 被 标 为 价 格 较 高 的 鲷 鱼 ; 纯 正 鳕 鱼 一 般 为 大 西 洋 鳕 鱼 (Gadus m orhua) 格 陵 兰 鳕 鱼 (Gadus ogac) 和 太 平 洋 鳕 鱼 (Gadus macrocephalus) 三 种, 虽 然 细 鳞 壮 鳕 (Albatrossia pector alis) 不 能 被 当 作 传 统 意 义 上 的 鳕 鱼, 也 勉 强 可 以 叫 鳕 鱼, 然 而 一 些 商 家 竟 然 将 马 舌 鲽 鱼 (Reinhardtius hippoglossoid es) 标 为 鳕 鱼 片 ; 白 鲳 在 一 些 地 方 也 被 标 为 金 鲳 即 卵 形 鲳 鲹 (Trachinotus ovatu) 表 2 超 市 样 品 鉴 定 结 果 Table.2 Identification results obtained from supermarket 序 号 商 品 名 NCBI 比 对 结 果 相 似 度 (%) 1 鳕 鱼 片 Albatrossia pectoralis 细 鳞 壮 鳕 阿 拉 斯 加 黑 鳕 鱼 片 Anoplopoma fimbria 裸 盖 鱼 黑 鳕 野 生 黑 鱈 Anoplopoma fimbria 裸 盖 鱼 黑 鳕 大 西 洋 银 鳕 鱼 Dissostichus eleginoides 小 鳞 犬 牙 南 极 鱼 银 鳕 海 晨 行 银 鳕 鱼 片 Dissostichus eleginoides 小 鳞 犬 牙 南 极 鱼 银 鳕 银 鳕 鱼 Dissostichus eleginoides 小 鳞 犬 牙 南 极 鱼 银 鳕 银 鳕 鱼 Dissostichus eleginoides 小 鳞 犬 牙 南 极 鱼 银 鳕 真 鳕 鱼 柳 Gadus ogac 格 陵 兰 鳕 大 西 洋 真 鳕 鱼 片 10 鲷 鱼 11 鮰 鱼 段 12 龙 俐 鱼 13 龙 俐 鱼 14 龙 俐 鱼 柳 Reinhardtius hippoglossoides 马 舌 鲽 99.4 Oreochromis niloticus 吉 富 罗 非 鱼 100 Pangasianodon hypophthalmus 低 眼 巨 鲇 巴 丁 鱼 99.8 Pangasianodon hypophthalmus 低 眼 巨 鲇 巴 丁 鱼 99.8 Pangasianodon hypophthalmus 低 眼 巨 鲇 巴 丁 鱼 100 Pangasianodon hypophthalmus 低 眼 巨 鲇 巴 丁 鱼 狭 鳕 鱼 柳 Theragra finnmarchica 挪 威 狭 鳕 野 生 狭 鳕 Theragra finnmarchica 挪 威 狭 鳕 金 枪 鱼 丁 Thunnus albacares 黄 鳍 金 枪 鱼 金 枪 鱼 白 鲳 Trachinotus ovatus 卵 形 鲳 鲹 金 鲳 99.8 注 : 带 表 示 错 贴 和 误 贴 标 签 样 本 3 讨 论 3.1 市 场 错 贴 标 签 的 种 类 各 种 因 素 都 可 能 造 成 商 品 错 标 现 象 第 一, 渔 民 由 于 缺 乏 专 业 的 分 类 学 知 识 导 致 鱼 从 刚 捕 捞 上 来 就 被 贴 错 标 签 [7], 这 种 情 况 主 要 由 于 鱼 的 形 态 比 较 相 似 导 致, 在 此 次 调 查 中 这 类 现 象 普 遍 存 在, 如 花 腹 鲭 日 本 鲭 以 及 红 尾 圆 鲹 被 标 为 池 鱼, 而 金 线 鱼 则 被 标 上 金 线 鱼 红 衫 鱼 和 红 三 鱼 等 多 种 商 标 第 二, 有 些 鱼 的 形 态 相 差 甚 远, 但 鱼 肉 无 法 区 分, 使 得 一 些 价 格 较 低 的 鱼 可 能 被 标 成 价 格 较 高 的 鱼 这 种 行 为 不 仅 在 国 内 时 常 发 生, 在 欧 美 等 众 多 发 达 国 家 也 存 在, 一 些 渔 业 厂 商 甚 至 有 意 将 低 价 鱼 贴 上 名 贵 鱼 肉 的 标 签, 以 赚 取 更 高 利 润 [4,20-22] 在 我 们 对 收 集 的 样 品 进 行 检 测 后 发 现, 被 误 标 鱼 类 多 集 中 在 高 价 值 经 济 鱼 类, 如 罗 非 鱼 片 代 替 鲷 鱼, 巴 丁 鱼 代 替 龙 俐 鱼 鮰 鱼, 鲽 鱼 代 替 鳕 鱼 等 此 外, 一 些 禁 止 销 售 的 鱼 类, 也 会 发 生 贴 错 标 签 现 象 [23] [24] Birstein 等 利 用 DNA 条 形 码 分 析 发 现 23% 的 鱼 子 酱 标 注 的 鱼 类 名 称 错 误, 部 分 商 品 涉 及 濒 危 鱼 类 成 分 ; 商 贩 也 会 把 濒 危 和 受 保 护 的 物 种 贴 成 市 场 可 以 销 售 的 商 品 标 签, 例 如 Liu [25] 研 究 了 台 湾 境 内 548 份 鱼 翅 样 品, 结 果 显 示 有 2.5% 的 鲨 鱼 物 种 是 濒 危,50% 易 危,24.5% 近 危, 仅 有 23% 的 物 种 是 非 濒 危 物 种 的 错 贴 标 签 还 可 能 导 致 一 些 鱼 类 引 发 的 食 物 中 毒 [26], 我 国 沿 海 地 区 的 一 些 餐 馆 会 把 许 多 有 毒 的 5

6 河 豚 当 作 无 毒 的 河 豚 贩 卖, 最 后 导 致 悲 剧 的 发 生 [1] ; 此 次 我 们 尚 未 检 测 到 濒 危 物 种 和 禁 止 销 售 的 鱼 类 3.2 鱼 肉 真 伪 鉴 别 方 法 通 常 人 们 在 买 鱼 时 对 鱼 肉 好 坏 的 鉴 别 方 法 主 要 是 凭 借 感 觉 经 验 以 及 喜 好 程 度 进 行 评 判, 但 是 这 样 不 能 有 效 地 分 辨 鱼 的 种 类 研 究 表 明, 通 过 近 红 外 光 谱 法 可 对 鱼 糜 中 水 分 和 蛋 白 质 含 量 进 行 快 速 无 损 检 测 [27,28] Mounier [29] 研 究 发 现, 变 性 高 效 液 相 色 谱 (DHPLC) 是 一 种 快 速 有 效 的 肉 类 成 分 鉴 定 技 术, 可 判 断 鱼 糜 及 蟹 棒 中 成 分 组 成 酶 联 免 疫 吸 附 测 定 法 (ELISA) 也 被 广 泛 应 用 到 果 汁 饮 料 奶 类 产 品 和 动 物 源 性 成 分 的 检 测 和 鉴 别, 并 且 具 有 高 灵 敏 度 和 特 异 性 [30] 等 电 聚 焦 法 和 双 向 电 泳 法 可 以 对 不 同 种 类 冷 冻 虾 鲈 鱼 进 行 鉴 定 [31,32] 随 着 分 子 生 物 技 术 的 快 速 发 展, 近 年 来 DNA 鉴 别 法 越 来 越 常 见, 限 制 性 片 段 长 度 多 态 性 聚 合 酶 链 反 应 (PCR-RFLP) 技 术 可 以 对 肉 类 制 品 进 行 正 确 鉴 别 [33-35] [34], 如 Hsieh 等 利 用 PCR-RFLP 技 术 可 以 对 热 处 理 (121, 10~90 min) 的 河 豚 鱼 制 品 进 行 正 确 鉴 别 扩 增 片 段 长 度 多 态 性 (AFLP) 分 子 标 记 技 术 鉴 别 鱼 肉 品 种 早 有 报 道, 如 Zhang [36] 采 用 AFLP 和 变 性 梯 度 电 泳 (DGGE) 鉴 别 虹 鳟 鱼 和 大 西 洋 鲑 鱼, 结 果 表 明 AFLP 具 有 更 高 的 灵 敏 度, 可 以 [37] 对 鲑 鱼 进 行 准 确 鉴 定 Maldini 等 研 究 表 明,AFLP 分 子 标 记 技 术 可 以 用 于 32 种 冷 冻 鱼 类 和 家 畜 品 种 的 准 确 鉴 别, 也 可 以 用 于 热 处 理 海 产 品 的 鉴 别 最 近 几 年 来,DNA 条 形 码 技 术 也 已 被 越 来 越 多 应 用 到 食 品 鉴 定 中 [7-11,16-18,23-25,38] 3.3 DNA 条 形 码 技 术 的 优 势 与 传 统 形 态 鉴 定 相 比 较,DNA 条 形 码 技 术 具 有 诸 多 优 势 : 鉴 定 不 依 赖 形 态 特 征, 不 受 个 体 差 异 的 影 响, 能 够 鉴 定 到 种 的 水 平 [39,40], 对 实 验 人 员 的 操 作 技 能 要 求 低 等 特 点 使 得 物 种 鉴 定 过 程 变 得 简 单 有 效 和 统 一 与 一 般 的 蛋 白 质 鉴 定 方 法 相 比, 由 于 DNA 比 蛋 白 质 的 耐 热 性 强, 但 是 通 过 优 化 手 段 仍 然 可 以 从 加 工 产 品 中 提 取 小 片 段 的 DNA [41] ; DNA 本 身 的 复 杂 性 也 可 以 能 提 供 更 多 信 息 ; 而 且 DNA 条 形 码 技 术 不 受 组 织 类 型 年 龄 及 状 态 等 因 素 的 影 响 因 此, 该 技 术 具 有 更 高 的 特 异 性 灵 敏 度 和 可 靠 性 与 其 他 DNA 鉴 别 方 法 比 较,DNA 条 形 码 技 术 具 有 操 作 简 单 可 靠 快 捷 以 及 应 用 广 泛 等 优 势 PCR-RFLP 在 物 种 鉴 定 中 已 成 为 一 个 重 要 的 方 法, 但 由 于 物 种 的 种 内 变 异 可 能 导 致 在 鉴 定 过 程 中 出 现 误 判 ;AFLP 虽 然 相 对 可 靠 操 作 简 便, 但 AFLP 也 会 发 生 谱 带 错 配 或 缺 失, 而 且 其 成 本 也 比 DNA 条 形 码 技 术 高 [42] ;SSR 标 记 的 等 位 基 因 数 目 多 带 型 复 杂, 从 而 导 致 难 以 判 型, 给 DNA 指 纹 识 别 自 动 化 和 规 模 化 带 来 困 难 [43] 3.4 展 望 尽 管 DNA 条 形 码 技 术 具 有 许 多 优 势, 然 而, 在 食 物 鉴 定 方 面 还 存 在 一 些 挑 战 在 食 物 加 工 过 程 中 往 往 会 因 为 高 温 等 导 致 DNA 降 解, 以 及 植 物 油 添 加 剂 和 调 味 料 的 加 入 对 DNA 提 取 和 扩 增 有 很 大 影 响, 这 就 需 要 对 一 些 步 骤 进 行 各 种 优 化 ; 另 外, 一 些 鱼 丸 或 肉 丸 可 能 不 是 来 自 单 个 物 种, 这 就 无 法 对 食 物 种 源 进 行 准 确 鉴 定 此 外, 由 于 食 物 的 种 类 繁 多, 目 前 的 DNA 条 形 码 数 据 库 虽 然 物 种 量 比 较 丰 富 但 还 远 远 不 够 完 善, 因 此, 在 用 公 共 数 据 库 进 行 比 对 分 析 时 可 能 存 在 一 些 困 难 目 前, 我 国 对 DNA 条 形 码 技 术 的 应 用 主 要 集 中 在 分 类 学 和 物 种 鉴 定 研 究 中 [12-15], 在 应 用 领 域 处 于 刚 刚 起 步 的 阶 段 今 后,DNA 条 形 码 技 术 在 进 出 口 物 种 鉴 定 外 来 入 侵 物 种 监 管 和 食 品 鉴 定 等 方 面 将 会 发 挥 越 来 越 重 要 的 作 用 参 考 文 献 : [1] 闽 东 日 报. 春 季 河 豚 鱼 毒 性 最 强 谨 防 误 食 中 毒 [EB/OL].[ ]. [2] 时 代 商 报. 挪 威 三 文 鱼 九 成 是 假 冒 [EB/OL]. [ ]. [3] 东 方 网. 超 市 油 鱼 当 鳕 鱼 卖 马 伊 俐 发 微 博 称 女 儿 吃 油 鱼 腹 泻 [EB/OL]. [ ]. [4] 人 民 网. 鱼 肉 造 假 在 欧 美 更 严 重 : 美 国 纽 约 海 鲜 39% 涉 假 [EB/OL]. [ ]. [5] HEBERT P D N, CYWINSKA A, BALL S L, et al. Biological identifications through DNA barcodes [J]. Proceedings of the Royal Society of London B: Biological Sciences, 2003, 270: doi: / rspb [6] HEBERT P D N, RATNASINGHAM S, DEWAARD J R. Barcoding animal life: cytochrome c oxidase subunit I divergences among closely related species [J]. Proceedings. Biological Sciences, 2003, 270 (1): doi: /rsbl

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