324 藥物食品檢驗局調查研究年報 Ann. Rept. BFDA longum 嗜熱性鏈球菌 S. thermophilus 等 益生 菌的應用形式包括一種或數種菌種混合使用 應用範 圍除了以食用方式經口攝取 也有製成霧狀以應用至 上呼吸道或製成藥膏抹劑塗抹於泌尿道 進行局部的 治療 (7) 益生

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1 323 藥物食品檢驗局調查研究年報. 25 : Ann Rept. BFDA Tiwn R.O.C. 25 : 市售含益生菌奶粉中微生物品質之調查研究 許雅鈞 高長風 鍾月容 施養志 第五組 摘 要 本計畫於95年5月至2月間以價購方式於大台北地區抽購含益生菌奶粉共計5項 每項各2個批 次 共計件檢體 經檢測其乳酸菌含量 結果發現活性乳酸菌 雙叉桿菌及乳酸桿菌之菌數均與標 示相符 除利用鏡檢 觸酶反應及API 50 CHL醣類發酵試驗等表現型鑑別試驗 亦針對檢體所含乳酸 菌菌株選用6對引子組進行PCR反應 以鑑定檢體中乳酸菌種類 檢測結果所有檢體皆與產品標示菌 株相符 乳品類衛生標準規定 乳粉中大腸桿菌群每公克最確數0以下 大腸桿菌陰性 不得檢出李 斯特菌及沙門氏菌 本研究針對5項 件 檢體之李斯特菌 沙門氏菌 大腸桿菌及大腸桿菌群進 行檢驗 檢測結果均無不符合規定情形 關鍵詞 奶粉 活性乳酸菌 李斯特菌 沙門氏菌 大腸桿菌 前 言 乳酸菌廣泛存在於自然界中 一般生存於含有豐 富可溶性碳水化合物 蛋白質分解物 維生素以及含 氧量低的環境 多具有下列特徵 ⑴革蘭氏陽性菌 ⑵菌體型態為桿菌或球菌 ⑶除極少數乳酸桿菌屬 Ltoillus 外 幾乎不具有運動性 ⑷除了Sporoltoillus之外 皆為非產孢菌 ⑸營養需求複雜 ⑹通常缺乏觸酶 tlse 及細胞色素 為厭氧 微 好氧或兼性厭氧菌 ⑺可分為同型乳酸發酵菌及異型 乳酸發酵菌(,2) 99年Orl-Jensen(3)依據簡單的型態學與生理學 將乳酸菌分為Betterium Betous Streptoterium Streptoous Tetrous 及Thermoterium六 屬 隨著分子遺傳學的發達 以及對乳酸菌的生理活 性有更進一步的認識 又區分出更多新的菌屬 包括 乳酸桿菌屬 肉品桿菌屬 Crnoteium Atopoium Weissel 鏈球菌屬 Streptoous 腸球菌 屬 Enteroous 乳酸球菌屬 Ltoous 徘 徊球菌屬 Vgoous Aiotrophi 四連球菌屬 Pedioous 四體球菌屬 Tetrgenoous 白 念球菌屬 Leuonosto Oenoeous 有孢子乳桿 菌屬 Sporoltoillus Ltospher以及雙叉桿 菌屬 Bifidoterium 等(,4) 在人體的消化系統中 從胃 小腸到結腸分佈 有不同族群及數量的微生物 腸道內的微生物菌相主 要可以分為兩類 第一類為有益菌如Streptoous Bifidoterium和Ltoillus等 第二類為有害菌如 Bteriodes Euterium Esherihi oli Enteroous Veilonell Clostridium perfrigens Stphyloo- us Pseudomons eruginos及proteus等(5) 當有害菌 的數量上升 產生有毒物質時 會對人體造成危害 由於乳酸菌可以和有害菌競爭吸附腸道的位置 因此 產生競爭性抑制作用 當乳酸菌的數量上升時可以抑 制有害菌在腸道內的定殖作用(5) 另一方面 乳酸菌可 以產生多種小分子的抑菌物質 包含了有機酸 orgni ids 細菌素 terioins 雙乙醘 dietyl 及過氧化氫等 有機酸以乳酸及醋酸為主 可以抑制 大部分的腐敗菌(6) 此外 乳酸菌亦具提高營養價值 改善乳糖不耐症 維持腸內正常微生物菌相 改善便 秘 預防腹瀉 降低血清膽固醇 預防骨質疏鬆症 調節免疫功能以及抗腫瘤等功能 因此被當作益生菌 proiotis 來使用(7-) 乳酸菌的相關產品也因此受 到世人重視 目前流通在市面上的乳酸菌製品不計其 數 如優格 優酪乳 起士 泡菜 發酵香腸 及宣 稱含乳酸菌之奶粉等 益生菌 proiotis 有人譯為原生物素 生菌 素 生菌劑或原生保健性菌種 其來源衍生自希臘 語 意指為有益於生命 for life 的物質 最初由Lilly 及Stillwell於965年提出(2) 為原生動物 protozon 所產生能刺激他種生物生長的物質 Prker(3)認為proiotis是能夠維持宿主腸道菌相平衡的物質 Fuller(4) 更進一步提出 proiotis必須是一活的微生物 能夠 促進宿主腸內微生物菌相平衡 且對宿主具有正面效 益 近年來由於學者發現經由熱致死之菌體或是破碎 菌株所得之胞內物依舊保有抵抗病原菌感染及提高宿 主免疫功能等正面功效(9,5) Slminen等人(6)因此定義 proiotis為對宿主健康有益的微生物及其細胞組成物 質 不一定只是活菌 益生菌種類繁多 包括嗜乳酸 桿菌 保加利亞乳酸桿菌 L. ulgrius 雙岐雙叉桿菌 B. ifidum 龍根菌 B.

2 324 藥物食品檢驗局調查研究年報 Ann. Rept. BFDA longum 嗜熱性鏈球菌 S. thermophilus 等 益生 菌的應用形式包括一種或數種菌種混合使用 應用範 圍除了以食用方式經口攝取 也有製成霧狀以應用至 上呼吸道或製成藥膏抹劑塗抹於泌尿道 進行局部的 治療 (7) 益生菌在食品的應用約有70 應用於乳品 如作成發酵乳 乳酸菌飲料 優酪 含益生菌奶粉或 冰淇淋等 (7) 近幾年來 由於益生菌的臨床效益逐漸 被證實 益生菌因此也以醫療製藥的形式作為整腸 劑 下痢治療劑以及醫療輔助品 Snders和Veld (8)指出 每日至少需補充0 9~0 0 CFU益生菌數 對促進健康才有顯著效果 Cngnell 等人 (9)之研究則指出某些商品之實際菌株種類與標示 不符 Temmermn等人 ()檢測種乾燥乳酸菌粉產品 及25種乳製品 結果顯示乾燥乳酸菌粉產品中有47 之實際菌株種類或含量與標示不符 乳製品中也有 40 與標示不符 Hmilton-Miller等人 (2)檢測52種含 益生菌之產品 結果有67 產品之實際菌株種類或含 量與標示不符 因此有必要確認市售含益生菌奶粉中 實際乳酸菌種類及含量與標示之符合性 以確保產品 之功效性及消費者權益 在衛生品質方面 王等 (22)針 對乳品 鮮乳 保久鮮乳 調味乳 保久調味乳 60 件 乳粉0件及乾酪件 進行仙人掌桿菌 金黃色 葡萄球菌 沙門氏桿菌 大腸桿菌及大腸桿菌群之檢 驗 結果有件調味乳之大腸桿菌群最確數超出衛生標 準 其他均符合規定 依據乳品類衛生標準 (23)乳粉中 生菌數為每公克五萬以下 大腸桿菌群為最確數0以 下 大腸桿菌陰性 不得檢出李斯特菌及沙門氏菌 依據食品衛生管理法第十條 針對標示含乳酸菌產品 適用衛生標準之解釋 (24) 如有檢體檢出生菌數超過衛 生標準 而該檢體標示含乳酸菌者 先檢驗案內產品 中乳酸菌之含量 再評估生菌數過高之原因 如產品 乳酸菌含量相當高 則不適宜測生菌數 應另測大腸 桿菌群及大腸桿菌 必要時檢測沙門氏菌及李斯特菌 (25) 為了解市售含益生菌奶粉之衛生品質狀況 擬針 對含益生菌奶粉進行李斯特菌 沙門氏菌 大腸桿菌 及大腸桿菌群之檢驗 以確保消費者食用安全 材料與方法 一 實驗材料 灱參考菌株 L toillus idophilus BCRC 0695 L. delruekii susp. ulgris BCRC 0696 BCRC 0697 Bifidoterium longum BCRC 847 B. ifidum BCRC 465及B. nimlis susp. ltis BCRC 7394均購自新竹食品工業發展研究 所生物資源保存及研究中心 牞檢體來源 自95年5月至2月間以價購方式於超級市場 大賣 場及藥局等地區購得不同品牌或品目之標示含益 生菌奶粉5項 每項2個批次 共件檢體 犴培養基. 牛津培養基 Oxford medium, OXA Ltoilli MRS Agr及 Ltoilli MRS Broth均購自 美國Difo公司 2. 硫酸月桂胰化蛋白腖培養基 Luryl Sulfte Tryptose Broth, LST 木糖離胺酸去氧膽酸 鹽培養基 Xylose Lysine Deoxyholte Agr, XLD 海克頓腸內菌培養基 Hektoen Enteri Agr, HE 及亞硫酸鉍培養基 Bismuth Sulfte Agr, BS 均購自Beton, Dikinson nd Compny 3. Listeri seletive enrihment supplement Oxford Listeri seletive supplement PALCAM Listeri seletive supplement 亞硒酸胱胺酸培養液 Selenite Cystine Broth, SC 及四硫代硫酸鹽 培養液 Tetrthionte Broth, TT 均購自德國 Merk公司 犵藥品. Ethidium Bromide Agrose和X TBE Buffer均 購自美國 Amreso公司 p DNA ldder購自台灣紫外光公司 3. PUREGENE Genomi DNA Purifition Kit購自 騰達行企業股份有限公司 4. DyNAzymeTM II DNA Polymerse購自美國 Finnzymes公司 5. 厭氧包 無菌礦物油 革蘭氏染色套組及API 50 CHL醣類發酵菌種鑑定套組均購自法國ioMérieux公司 6. 半胱胺酸-鹽酸鹽 L-ysteine-HCl 購自德國 Merk公司 7. BtoTM peptone購自美國difo公司 8. Brillint green dye Bromoresol purple Clium ronte Diloxillin Lithium hloride Mnnitol Phenol red Sodium hydroxide 及Sodium pyruvte均購自sigm公司 玎儀器. 高速冷凍離心機 Kuot 3740 日本Kuot 公司 2. GeneAmp PCR System 9700 美國Applied Biosystems公司 3. 桌 上 型 恆 溫 振 盪 器 T h e r m o m i xe r o m f o r t 5355 美國 Eppendorf公司 4. 電泳膠片影像擷取系統Inspetion entifite DOC-008.XD 英國UVI te公司 5. 顯像系統 Video opy proessor 及厭氧缸 日 本Mitsuishi公司 6. DNA電泳槽 Mupid-2 美國Cosmo Bio公 司 7. 殺菌釜 Tomy utolve SS-325 日本Tomy 公司 二 實驗方法 灱菌種的保存及活化 將冷凍保存之菌株由-80 冷凍庫中取出 於室 溫下進行回溶 接種% v/v 菌量於MRS roth 中 於37 厭氧培養6小時 經兩次繼代培養後 備用 冷凍保存菌株的製備 是將活化菌株之

3 325 MRS roth % v/v -80 牞. CNS 4760/N637 () 2. Bifidoterium 0.% peptone wter 0 ml MRS 00 ml MRS 0.0 diloxillin 0 LiCl 0 ysteine-hcl 0.5 ml ml 0.5 ml 5~ ml 37 (27) 3. Ltoillus 0.% peptone wter 0 0. ml MRS 400 ml 40 surose ml 0.2 Bromoresol purple 40 ml 2 N NOH ph 7.0 L 37 (28) 犴. 2~3 rystl violet Grm's iodine 95 Huker's sfrnin tlse 3 H 2 O 2 3. API 50 CHL Biotest Kit MRS ml 5 ml MFrlnd 2 n 2 n API 50 CHL 犵 6S rdna PCR. DNA D N A PUREGENE Genomi DNA Purifition Kit MRS ml.5 ml 5,000 x g ell suspension solution 0 µl lyti enzyme solution.5 µl ,000 x g ell lysis solution 0 µl 80 protein preipittion solution 00 µl 5,000 x g 3 DNA isopropnol 2-propnol 0 µl.5 ml 50 5,000 x g DNA 70 0 µl DNA 5,000 x g 5 00 µl DNA DNA 4-2. DNA 2.5 mm dntp N=A, T, G, C 2 µl 2 U/µL DNA DyNAzyme TM II 0.5 µl 0X DyNAzyme TM II 2.5 µl DNA µl 2.5 µm Bflt2/Bflt5, BiLON-/ BiLON-2, BiBIF-/BiBIF µl L/L2, LB/LLB, L/L2 4 µl 6 PCR TIB MOLBIOL 25 µl 0.2 ml PCR thermoyler PCR 0 µl /0X 2.0 X TBE uffer 25 ethidium romide UV Box 玎 (29) 甪

4 326 藥物食品檢驗局調查研究年報 Ann. Rept. BFDA 表一 本實驗使用之引子 Speies Primer ode Sequene Trget site Length (p) B.ltis Bflt2 GTGGAGACACGGTTTCCC Bflt5 CACACCACACAATCCAATAC BiLON- TTCCAGTTGATCGCATGGTC 82- BiLON-2 GGGAAGCCGTATCTCTACGA BiBIF- CCACATGATCGCATGTGATTG BiBIF-2 CCGAAGGCTTGCTCCCAAA L GATCGCATGATCAGCTTATA L2 AGTCTCTCAACTCGGCTATG LB AAAAATGAAGTTGTTTAAAGTAGGTA LLB AAGTCTGTCCTCTGGCTGG L GTGCTTGCACTGAGATTCGACTTA L2 TGCGGTTCTTGGATCTATGCG B. longum B. ifidum L. ulgrius Produt Referene size (p) 680 Ventur et l., 0 83 Mtsuki et l., Mtsuki et l., Furet et l., Torrini et l., Furet et l., 04 表二 本實驗使用之PCR 反應條件 PCR Primers Trget strin PCR ondition Denturtion ( ) Bflt2/ Bflt5 BiLON-/ BiLON-2 BiBIF-/ BiBIF-2 L/L2 LB/ LLB L/L2 Totl yles were 35 B.ltis B. longum B. ifidum L. ulgrius (min) Amplifition ( ) (min) Extension ( ) (min) 0

5 >5.7 >5 >5.7 >5.8 >5 4 桂格小學生奶粉 5 桂格敏兒成長奶粉 6 桂格高鐵高鈣脫脂奶粉健康三益菌配方 7 桂格媽媽多力 8 豐力富高鈣低脂奶粉 9 亞培幼兒恩美力~3歲幼兒專用 0 普健金愛兒壯舒暢配方 普健金愛兒比菲-7歲幼童奶粉 2 安佳shpe-up 葡萄子高鐵高鈣脫脂奶粉 3 雀巢特優成長奶粉+ 4 雀巢成長羊奶粉 5 雀巢能恩比菲德氏配方 2重複 未標示 未檢驗 >5 3 桂格高鈣脫脂奶粉 桂格高鈣低脂三益菌全家奶粉 >7 >7 標示值 Ltoillus spp. Ltoillus spp. 5.4,,,,,,, 標示菌株 >5.8 >5 標示值 乳酸桿菌 (Ltoillus) (log CFU/g) 平均 檢測值 雙叉桿菌 (Bifidoterium) (log CFU/g) 平均 標示菌株 檢測值 7. 標示值 >5 品名 活性乳酸菌 (log CFU/g) 桂格成長奶粉健康三益菌配方 號 序 表三 市售含益生菌奶粉標示之乳酸菌種類及菌數含量 平均 檢測值 市售含益生菌奶粉中微生物品質之調查研究 327

6 328 藥物食品檢驗局調查研究年報 Ann. Rept. BFDA 依據行政院衛生署9.0.4衛署藥檢字第 號公告 食品微生物之檢驗方法 沙門氏桿菌之檢驗 ()進行檢驗 癿大腸桿菌及大腸桿菌群之檢測 依據行政院衛生署90.0.衛署食字第 號公告 食品微生物之檢驗方法 大腸桿菌之檢驗 (3)及CNS 0984/N694 食 品微生物之檢驗方法 大腸桿菌群之檢驗 (32) 標準檢驗方法進行檢驗 結果與討論 本計畫以價購方式於超級市場 大賣場及藥局等 地區購得標示含益生菌奶粉共計5項產品 每項各2個 批次 共計件檢體 產品標示之乳酸菌種類及菌數 如表三 針對產品標示之活性乳酸菌 雙叉桿菌 Bifidoterium 及乳酸桿菌 Ltoillus 進行乳酸菌 種類及菌數檢測 鑑別試驗包括革蘭氏染色 菌株型 態觀察 觸酶試驗及API 50 CHL醣類發酵試驗等表現 型鑑別試驗及聚合酶連鎖反應 polymerse hin retion, PCR 並依乳品衛生標準(24)進行包括李斯特菌 沙門氏菌 大腸桿菌及大腸桿菌群之檢驗 灱乳酸菌菌數之檢測結果 活性乳酸菌數之檢測結果如表三 5項產品中 9 項標示其活性乳酸菌數大於5~6 log CFU/g 結果 顯示菌數介於5.9~7.4 log CFU/g 均符合標示值 另6項產品未標示菌數含量 結果顯示其菌數介於 5.9~7.2 log CFU/g 雙叉桿菌菌數之檢測結果如 表三 5項產品中 標示含有雙叉桿菌者4項 項未標示 含有雙叉桿菌產品4項中 8項標示 其雙叉桿菌菌數大於6~7 log CFU/g 結果顯示菌 數介於6.3~7.5 log CFU/g 均符合標示值 另6項 未標示菌數含量 結果顯示其菌數介於5.4~6.6 log CFU/g 乳酸桿菌菌數之檢測結果如表三 5項產 品中 標示含有乳酸桿菌者0項 5項未標示 含 有乳酸桿菌產品0項中 3項標示其乳酸桿菌菌數 大於5~6 log CFU/g 結果顯示菌數介於6.2~7. log CFU/g 均符合標示值 另7項未標示含量 結果 顯示其菌數介於5.4~7.3 log CFU/g 牞乳酸菌之表現型鑑別試驗結果 本研究針對產品標示之乳酸菌種類進行檢測 所 有檢測之乳酸菌株皆呈革蘭氏陽性反應 觸酶 試驗皆為陰性反應 於光學顯微鏡下觀察菌株 型態發現 呈不規則桿狀 Ltoillus spp.呈桿狀 利用API 50 CHL醣類 發酵試驗套組進行檢測 觀察菌株對各種醣類的 利用情形 API 50 CHL套組可同時分析乳酸菌對 49種醣類的代謝利用 經與電腦軟體中資料庫進 行比對 以鑑定出最可能之屬名與種名 檢測結 果如表四 5項產品中 8項產品標示含有 經電腦軟體判讀結果顯示其鑑定百分率 介於98.3~99.2 2項產品標示含有Ltoillus spp. 經電腦軟體判讀結果皆為 其 鑑定百分率分別為98.4 及98.8 其它產品標 示之乳酸菌菌株為資料庫中未記錄之菌種 如L. sei 及 則未進行此 項檢測 犴乳酸菌之聚合酶連鎖反應鑑定結果 已有許多文獻報導利用乳酸菌之6S rdna區域 設計PCR引子組來鑑定乳酸菌種 針對市售產品 中常見之乳酸菌種類 搜尋相關文獻 針對本研 究檢體中乳酸菌種類進行鑑定 產品中乳酸菌菌 株之染色體DNA經萃取後 分別以6對PCR引子組 進行PCR增幅反應 將所得之PCR產物進行電泳 分析 檢測結果如表五 用以鑑定之引子組Bflt2/Bflt5係引 用Ventur等 (33) 報導之方法 其 PCR擴增產物為 680 p 用以鑑定B. longum之引子組bilon-/ BiLON-2係引用Mtsuki等(34)報導之方法 其PCR 擴增產物為83 p 用以鑑定B. ifidum之引子組 BiBIF-/BiBIF-2係引用 Mtsuki等(34)報導之方法 其PCR擴增產物為278 p 結果顯示8項標示含有 之產品以引子組Bflt2/Bflt5進行PCR 反應皆有偵測到一段長約680 p的dna片段如 6項標示含有之產品 分別以引子組Bflt2/Bflt5 引子組BiBIF-/ BiBIF-2及引子組 BiLON-/BiLON-2進行PCR反 應 結果顯示6項產品對引子組Bflt2/Bflt5為 正反應 皆偵測到一段長約680 p的dna片段 對引子組BiLON-/BiLON-2及引子組BiBIF-/ BiBIF-2為負反應 皆未偵測到相對應產物片段 如圖二及圖三 顯示所含菌株為 引子組L/L2係引用Furet等(35)報導之方法 用以 鑑定 其PCR擴增產物為23 p 引 子組LB/LLB係引用Torrini等(36)報導之方法 用 以鑑定L. ulgrius 其PCR擴增產物為065 p 引子組L/L2係引用Furet等(35)報導之方法 用以 鑑定 其PCR擴增產物為24 p 結果顯 示8項標示含有 之產品皆有偵測到一 段長約23 p 的DNA片段如 7項標示含有 之產品皆有偵測到一段長約24 p的dna 片段如 2項標示含有Ltoillus spp.之產 品 分別以引子組L/L2 引子組LB/LLB及 引子組L/L2進行PCR反應 結果顯示2項產品 對引子組L/L2為正反應 皆偵測到一段長約 23 p 的DNA片段 對引子組LB/LLB及引子組 L/L2為負反應 皆未偵測到相對應產物片段如 圖六 顯示所含菌株為 犵 李 斯特菌 沙門氏菌 大腸桿菌及大腸桿菌群之 檢驗結果 乳品類衛生標準規定乳粉中大腸桿菌群為0 MPN/ g以下 大腸桿菌 李斯特菌及沙門氏菌為 不得 檢出 本研究抽購之5項產品均未檢出李斯特 菌 沙門氏菌 大腸桿菌及大腸桿菌群 結 論 市售含益生菌奶粉之產品5項 件 經檢測 其實際乳酸菌含量 結果發現活性乳酸菌 雙叉桿菌 及乳酸桿菌之菌數均與標示相符 在乳酸菌之表現型

7 329 市售含益生菌奶粉中微生物品質之調查研究 表四 市售含益生菌奶粉之API 50 CHL醣類發酵試驗結果 序號 品名 桂格成長奶粉健康三益菌配方 桂格高鈣低脂三益菌全家奶粉 桂格高鈣脫脂奶粉 桂格小學生奶粉 桂格敏兒成長奶粉 桂格高鐵高鈣脫脂奶粉健康三益菌配方 桂格媽媽多力 API 50 CHL檢測結果 ID (%) 豐力富高鈣低脂奶粉 9 亞培幼兒恩美力~3歲幼兒專用 普健金愛兒壯舒暢配方 Ltoillus spp. 普健金愛兒比菲-7歲幼童奶粉 Ltoillus spp 安佳shpe-up葡萄子高鐵高鈣脫脂奶粉 3 雀巢特優成長奶粉+ 4 雀巢成長羊奶粉 5 雀巢能恩比菲德氏配方 ID, ury rte of identifition result in API dtse, 未檢測, 資料庫中未記載 標示乳酸菌種類

8 3 藥物食品檢驗局調查研究年報 Ann. Rept. BFDA 表五 市售含乳酸菌奶粉之聚合酶鏈鎖反應結果 序號 品名 桂格成長奶粉健康三益菌配方 桂格高鈣低脂三益菌全家奶粉 桂格高鈣脫脂奶粉 桂格小學生奶粉 桂格敏兒成長奶粉 桂格高鐵高鈣脫脂奶粉健康三益菌配方 桂格媽媽多力 乳酸菌種類 PCR 結果 備註 8 豐力富高鈣低脂奶粉 9 亞培幼兒恩美力~3歲幼兒專用 圖二 0 普健金愛兒壯舒暢配方 Ltoillus spp. 圖六 普健金愛兒比菲-7歲幼童奶粉 圖二 Ltoillus spp. 圖六 2 安佳shpe-up葡萄子高鐵高鈣脫脂奶粉 圖二 3 雀巢特優成長奶粉+ 圖三 4 雀巢成長羊奶粉 圖三 5 雀巢能恩比菲德氏配方 圖三

9 33 市售含益生菌奶粉中微生物品質之調查研究 d e f g h i j k l m Bflt2/Bflt5 d e BiLON-/ BiLON-2 BiBIF-/ BiBIF-2 f g h i j k l m n o p q 引子組 Bflt2/Bflt5 引子組 Bflt2/Bflt5 000 p-000 p p p-- 以Bflt2/Bflt5引子組檢測含 產品之PCR結 果 Lne : 00 p ldder Lne : BCRC 7394 (Postive Control) Lne : 桂格成長奶粉健康三益菌配方 Lne d : 桂格高鈣低脂三益菌全家奶粉 Lne e : 桂格高鈣脫脂奶粉 Lne f : 桂格小學生奶粉 Lne g : 桂格敏兒成長奶粉 Lne h : 桂格高鐵高鈣脫脂奶粉健康三益菌配方 Lne i : 桂格媽媽多力 Lne j : 豐力富高鈣低脂奶粉 Lne k : B. longum BCRC 847 (Negtive Control) Lne l : B. ifidum BCRC 465 (Negtive Control) Lne m : BCRC 0695 (Negtive Control) 圖二 以Bflt2/Bflt5 BiBIF-/ BiBIF-2及BiLON-/BiLON-2 引子組檢測含產品之PCR結 果 Lne : 00 p ldder Lne : BCRC 7394 (Postive Control) Lne : 亞培幼兒恩美力~3歲幼兒專用 Lne d : 普健金愛兒比菲-7歲幼童奶粉 Lne e : 安佳shpe-up葡萄子高鐵高鈣脫脂奶粉 Lne f : B. longum BCRC 847 (Negtive Control) Lne g : B. ifidum BCRC 465 (Postive Control) Lne h : 亞培幼兒恩美力~3歲幼兒專用 Lne i : 普健金愛兒比菲-7歲幼童奶粉 Lne j : 安佳shpe-up葡萄子高鐵高鈣脫脂奶粉 Lne k : BCRC 7394 (Negtive Control) Lne l : B. longum BCRC 847 (Postive Control) Lne m : 亞培幼兒恩美力~3歲幼兒專用 Lne n : 普健金愛兒比菲-7歲幼童奶粉 鑑別試驗及聚合酶連鎖反應方面 所有產品之檢測結 果皆與所標示菌株相符 檢測結果所含乳酸菌種類包 括有 L. se及 活性乳酸菌數 雙叉桿菌數及乳酸桿菌數介於5.4~7.5 log CFU/g 衛 生品質檢測方面 5項 件 檢體均未檢出李斯特 菌 沙門氏菌 大腸桿菌及大腸桿菌群 參考文獻. 廖啟成 998 乳酸菌之分類及應用 食品工業 (2): 蔡英傑 998 乳酸菌應用綜論 生物產業 9(4): Orl-Jensen, S. 99. The Lti Aid Bteri, Host nd Son, Copenhgen, Denmrk. 4. 李福臨 00 乳酸菌分類之研究近況 食品工 業 32(8): Arunhlm, K. D Role of ifidoteri in nutrition, mediine nd tehnology. Nutr. Res. 9: Helnder, I. M., Wright, A. V. nd Mttil-Sndholm, Lne o : 安佳shpe-up葡萄子高鐵高鈣脫脂奶粉 Lne p : BCRC 7394 (Negtive Control) Lne q : 00 p ldder T.-M Potentil of lti id teri nd novel ntimiroils ginst Grm-negtive teri. Trends Food Si. Tehnol. 8: Gomes, A. M. P. nd Mlt, F. X nd Ltoillus idophilus: iologil, iohemil, tehnologil nd therpeutil properties relevnt for use s proiotis. Trends. Food Si. Tehnol. 0: Hirym, K. nd Rfter, J. 00. The role of proioti teri in ner prevention. Miroes Infet. 2: Hosono, A., Lee, J., Ametni, A., Ntsume, M., Hirtm, M., Adhi, T. nd Kminogw, S Chrteriztion of wter-solule polyshride frtion with immunopotentiting tivity from Bifidoterium

10 332 藥物食品檢驗局調查研究年報 Ann. Rept. BFDA Bflt2/Bflt5 d e f g h i j k BiLON-/ BiLON-2 BiBIF-/ BiBIF-2 l m n o d e f g h i j k l m p q 000 p-500 p p-00 p 以L/L2引子組檢測含 產品之PCR結 果 圖三 以Bflt2/Bflt5 BiBIF-/BiBIF-2及BiLON-/BiLON-2 引子組檢測含產品之PCR結果 續 Lne : 00 p ldder Lne : 00 p ldder Lne d : 桂格高鈣低脂三益菌全家奶粉 Lne : BCRC 7394 (Postive Control) Lne : 雀巢特優成長奶粉+ Lne d : 雀巢成長羊奶粉 Lne e : 雀巢能恩比菲德氏配方 Lne f : B. longum BCRC 847 (Negtive Control) Lne g : B. ifidum BCRC 465 (Postive Control) Lne h : 雀巢特優成長奶粉+ Lne i : 雀巢成長羊奶粉 Lne j : 雀巢能恩比菲德氏配方 Lne k : BCRC 7394 (Negtive Control) Lne l : B. longum BCRC 847 (Postive Control) Lne m : 雀巢特優成長奶粉+ Lne n : 雀巢成長羊奶粉 Lne o : 雀巢能恩比菲德氏配方 Lne p : BCRC 7394 (Negtive Control) Lne q : 00 p ldder dolesentis M0-4. Biosi. Bioteh. Biohem. 6(2): Mttil-Sndholm, T. nd Srel, J. M. M Lti id teri with helth lims-intertions nd interferene with gstrointestinl flor. Int. Diry J. 9: Roos, N. M. nd Ktn, M. B. 00. Effets of proioti teri on dirrhe, lipid metolism, nd rinogenesis: review of ppers pulished etween 988 nd 998. Am. J. Clin. Nutr. 7: Lilly, D. M. nd Stillwell, R. H Proiotis: growth promoting ftors produed y miroorgnisms. Siene 47: Prker, R. B Proiotis, the other hlf of the n- Lne : BCRC 0695 (Postive Control) Lne : 桂格成長奶粉健康三益菌配方 Lne e : 桂格高鈣脫脂奶粉 Lne f : 桂格小學生奶粉 Lne g : 桂格敏兒成長奶粉 Lne h : 桂格高鐵高鈣脫脂奶粉健康三益菌配方 Lne i : 桂格媽媽多力 Lne j : 亞培幼兒恩美力~3歲幼兒專用 Lne k : L. ulgris BCRC 0696 (Negtive Control) Lne l : BCRC 0697 (Negtive Control) Lne m : BCRC 7394 (Negtive Control) tiioti story. Anim. Nutr. Helth 29: Fuller, R Proiotis in mn nd nimls. J. Appl. Bteriol. 66: Kitzw, H., Itoh, T., Tomiok, Y., Mizugki, M. nd Ymguhi, T Indution of IFN-γ nd IL-α prodution in mrophges stimulted with phosphopolyshride produed y Ltoous ltis ssp. remoris. Int. J. Food Mirool. 3: Slminen, S., Isoluri, E. nd Slminen, E Proiotis nd stiliztion of the gut muosl rrier. Asi Pifi J. Clin. Nutr. 5: 楊媛絢 998 原生保健性菌種 proiotis 與益 菌助生質 preiotis 之應用 食品工業 (2): Snders, M. E. nd Veld, J. H Bringing proioti-otnining funtionl food to the mrket: miroiologil, produt regultory nd leling issues. Antonie vn Leeuwenhoek 76: Cngnell, F., Pgnini, S., Ovidi, M., Vettrino, A. M., Benilqu, L., Mss, S. nd Trovtelli, L. D A miroil investigtion on proioti phrmeutil produts used for humn helth. Miroiol. Res. 52: 7-79.

11 333 市售含益生菌奶粉中微生物品質之調查研究 d e f g h i j k l L/L2 d e LB/LLB f g h i j L/L2 k l m n o p q 000 p 500 p p 00 p 00 p Lne : 00 p ldder 圖六 以L/L2 LB/ LLB及L/L2引子組檢測含 Ltoillus spp.產品之pcr結果 Lne : BCRC 0697 (Postive Control) Lne : 00 p ldder Lne : 桂格成長奶粉健康三益菌配方 Lne : BCRC 0695 (Postive Control) Lne d : 桂格高鈣低脂三益菌全家奶粉 Lne : 普健金愛兒壯舒暢配方 Lne e : 桂格高鈣脫脂奶粉 Lne d : 普健金愛兒比菲-7歲幼童奶粉 Lne f : 桂格小學生奶粉 Lne e : L. ulgris BCRC 0696 (Negtive Control) Lne g : 桂格敏兒成長奶粉 Lne f : BCRC 0697 (Negtive Control) Lne h : 桂格高鐵高鈣脫脂奶粉健康三益菌配方 Lne g : L. ulgris BCRC 0696 (Postive Control) Lne i : 桂格媽媽多力 Lne h : 普健金愛兒壯舒暢配方 Lne j : BCRC 0695 (Negtive Control) Lne i : 普健金愛兒比菲-7歲幼童奶粉 Lne k : L. ulgris BCRC 0696 (Negtive Control) Lne j : BCRC 0695 (Negtive Control) Lne l : BCRC 7394 (Negtive Control) Lne k : BCRC 0697 (Negtive Control) 以L/L2引子組檢測含產品之PCR結果 Lne l : BCRC 0697 (Postive Control). Temmermn, R., Huys, G., Pot, B. nd Swings, J. 03. Identifition nd ntiioti suseptiility of isoltes from proioti produts. Int. J. Food Miroiol. 8(): Hmilton-Miller, J. M. T., Shh, S. nd Winkler, J. T Puli helth issues rising form miroiologil nd leling qulity of foods nd supplements ontining proioti orgnisms. Puli Helth Nutr. 2: 王 鳳 英 劉 芳 銘 傅 幼 敏 施 養 志 廖 俊 亨 00 乳品中仙人掌桿菌 金黃色葡萄球菌及沙門 氏桿菌汙染之調查 藥物食品檢驗局調查研究年 報 8: 行 政 院 衛 生 署 衛 署 食 字 第 號公告 乳品類衛生標準 24. 行 政 院 衛 生 署 衛 署 食 字 第 號函說明段四 25. 行 政 院 衛 生 署 衛 署 食 字 第 號公告 26. 經濟部標準檢驗局 03 中國國家標準 CNS 總號4760 類號N637 乳品檢驗法-乳酸菌之檢 驗 27. Lpierre, L., Undelnd, P. nd Cox, L. J Lithium Lne m : 普健金愛兒壯舒暢配方 Lne n : 普健金愛兒比菲-7歲幼童奶粉 Lne o : BCRC 0695 (Negtive Control) Lne p : L. ulgris BCRC 0696 (Negtive Control) Lne q : 00 p ldder hloride-sodium propionte gr for the enumertion of ifidoteri in fermented diry produts. J. Diry Si. 75: Rjendrn, R. nd Oht, Y Binding of heteroyli mines y lti id teri from miso, fermented Jpnese food. Cn. J. Miroiol. 44(2): 行政院衛生署 衛署食字第 88070號公告 食品中微生物之檢驗方法 乳品 中李斯特菌之檢驗 行政院衛生署 衛署藥檢字第 號公告 食品中微生物之檢驗方法 沙 門氏桿菌之檢驗 行政院衛生署 衛署食字第

12 334 Ann. Rept. BFDA CNS 0984 N694 Ventur, M., Reniero, R. nd Zink, R. 0. Speifi identifition nd trgeted hrteriztion of Bifidoterium ltis from different environmentl isoltes y omined multiplex-pcr pproh. Appl. Environ. Miroiol. 67: Mtsuki, T., Wtne, K., Tnk, R., Fukud, M. nd Oyizu, H Distriution of ifidoteril speies in humn intestinl miroflor exmined with 6S rrna-gene-trgeted speies-speifi primers. Appl. Environ. Miroio. 65(0): Furet, J. P., Quenee, P. nd Tilliez, P. 04. Moleulr quntifition of lti id teri in fermented milk produts using rel-time quntittive PCR. Int. J. Food Mirool. 97: Torrini, S., Zpproli, G. nd Dellglio, F Use of PCR-sed methods for rpid differentition of Ltoillus delruekii susp. ulgrius nd L. delruekii susp. Ltis. Appl. Environ. Miroiol. 65: Investigtions on Miroil Qulities of Commeril Proiotis-ontining Milk Powders YA-JIUN SHEU, CHARNG-FENG KAO, YUEH-JONG CHUNG-WANG AND DANIEL YANG-CHIH SHIH Food Miroiology Division ABSTRACT To investigte the miroil qulities of ommeril proiotis-ontining milk powders, smples were smpled nd tested for the enefiil proiotis of ltoillus, ifidoterium nd totl vile lti id teri from My to Deemer, 06. The orrespondene etween teril speies nd those delred on the lels were identified y onventionl iohemil nd physiologil tests nd speies-speifi PCR. The results showed tht the teril speies used in ll milk smples met those delred on the lels nd the numers of lti id teri in smples were ll in ompline with the lel lim. These smples were lso exmined for foodorne pthogens (Listeri monoytogenes, Slmonell spp.) nd snitry inditor teri (Esherihi oli nd oliforms). All the smples met the requirement of snitry stndrd nnouned y the Deprtment of Helth for milk nd milk produts: MPN of oliform teri per ml or per grm, not more thn 0; MPN of E. oli per ml or per grm, negtives; L. monoytogenes nd Slmonell spp. shll not e deteted. Key words: milk powder, lti id teri, Listeri monoytogenes, Esherihi oli, Slmonell spp.