第 37 卷 第 19 期 1961 directlygivenpairedtrainingwithcentralorperipheralcsandpairedwithus.results (1)Afterthein advancepseudopairedtrainingwithmpfccsorto

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1 1960 第 37 卷 第 19 期 论 著 DOI: /j CSUS 非 配 对 刺 激 易 化 豚 鼠 经 典 瞬 目 条 件 反 射 的 建 立 王 晓 1,2, 吴 广 延 1, 吴 冰 1, 杨 艺 1, 李 轩 1, 隋 建 峰 1 1, 姚 娟 ( 重 庆, 第 三 军 医 大 学 基 础 医 学 部 基 础 医 学 教 学 实 验 中 心 1 ; 山 东, 济 南 军 区 第 89 中 心 医 院 神 经 外 科 2 ) [ 摘 要 ] 目 的 探 讨 在 豚 鼠 经 典 瞬 目 条 件 反 射 (eyeblinkconditioning,ebc) 中, 条 件 刺 激 (conditionedstimulus,cs) 与 非 条 件 刺 激 (unconditionedstimulus,us) 先 期 的 非 配 对 训 练 对 后 续 的 CSUS 配 对 训 练 结 果 是 否 存 在 易 化 效 应, 并 分 析 其 可 能 的 神 经 机 制 方 法 采 用 96 只 (4~5 月 龄, 体 质 量 500~550g) 健 康 雄 性 英 国 种 白 化 豚 鼠, 以 内 侧 前 额 叶 或 海 马 的 微 电 流 刺 激 作 为 中 枢 CS(mPFCCS 或 Hip.CS), 以 纯 音 刺 激 作 为 外 周 CS(ToneCS), 以 角 膜 吹 气 作 为 US, 对 实 验 组 (8 组, 每 组 4 只 动 物 ) 和 对 照 组 (8 组, 每 组 8 只 动 物 ) 进 行 延 迟 性 瞬 目 条 件 反 射 (delayebc,debc) 和 痕 迹 性 瞬 目 条 件 反 射 (traceebc,tebc) 行 为 训 练 其 中 实 验 组 首 先 接 受 1 周 的 非 配 对 训 练, 包 括 中 枢 CS(mPFCCS 或 Hip. CS) 及 外 周 听 觉 CS(ToneCS) 分 别 与 角 膜 吹 气 的 非 配 对 训 练, 然 后 转 换 CS 类 型 并 进 行 与 角 膜 吹 气 的 配 对 训 练, 对 照 组 直 接 接 受 中 枢 或 外 周 CS 与 角 膜 吹 气 配 对 训 练 结 果 在 ToneCS 与 mpfccs 转 换 的 情 况 下, 无 论 对 于 DEBC 还 是 TEBC 模 式, 各 实 验 组 条 件 反 应 (conditionedresponses,cr) 的 习 得 速 率 均 快 于 对 照 组 (P<0.05) 在 ToneCS 与 Hip.CS 转 换 的 情 况 下, 只 有 在 TEBC 模 式 下 实 验 组 的 CR 习 得 速 率 快 于 对 照 组 (P<0.01); 而 在 DEBC 模 式 下, 实 验 组 习 得 CR 的 速 率 与 对 照 组 无 显 著 差 异 (P> 005) 结 论 先 期 的 CS US 的 非 配 对 刺 激 对 于 后 续 EBC 建 立 具 有 易 化 效 应 两 类 非 特 异 性 刺 激 可 能 均 不 同 程 度 地 参 与 对 于 EBC 的 易 化 作 用 [ 关 键 词 ] 瞬 目 条 件 反 射 ; 条 件 刺 激 ; 非 条 件 刺 激 ; 豚 鼠 [ 中 图 法 分 类 号 ] R332;R [ 文 献 标 志 码 ] A Pseudopairedconditionedandunconditionedstimulifacilitatesclasicaleyeblink conditioninginguineapigs WangXiao 1,2,WuGuangyan 1,WuBing 1,YangYi 1,LiXuan 1,SuiJianfeng 1,YaoJuan 1 ( 1 ExperimentalCenterofBasic Medicine,ColegeofBasicMedicalSciences,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing,400038; 2 Departmentof Neurosurgery,No.89CentralHospitalofJinanMilitaryCommand,Jinan,ShandongProvince,261021,China) [Abstract] Objective Toinvestigatewhetherpseudopairedpresentationofconditionedstimulus (CS)andunconditionedstimulus(US)canfacilitatethesubsequentCSUSpairedtrainingofclasical eyeblinkconditioning(ebc)inguineapigsandtoanalyzetheposibleneuralmechanismsofthefacilitation efect.methods NinetysixhealthmalealbinoDunkinHartleyguineapigs(4to5monthsold,weighting 500to550g)wererandomlyasignedtoreceivebehavioraltrainingofdelayeyeblinkconditioning(DEBC)or traceeyeblinkconditioning(tebc).microelectricalstimulationofthemedialprefrontalcortex(mpfccs) orhippocampus(hipcs)wasselectedasthecentralcs.apuretonewasusedastheperipheralcs(tone CS)andcornealairpufwasappliedasUS.Theanimalsweredividedinto8experimentalgroups(n=4)and 8controlgroups(n=8).Theanimalsinexperimentalgroupswerefirstlygiven1week spseudopaired trainingwithcentralorperipheralcs,andrandomlypresentationofus,thencswasswitchedfromcentralto peripheralorviceversa,andpairedwithustoestablishdebcortebc.animalsincontrolgroupswere [ 通 信 作 者 ] 姚 娟, 电 话 :(023) , yaojuan @aliyun.com [ 优 先 出 版 ] htp://

2 第 37 卷 第 19 期 1961 directlygivenpairedtrainingwithcentralorperipheralcsandpairedwithus.results (1)Afterthein advancepseudopairedtrainingwithmpfccsortonecsandrandomlypresentationsofus,theacquisition ratesofbothdebcandtebcweregreaterinexperimentalgroupsthancontrolgroupsduringpairedtrainingin whichcswereswitchedfrom mpfcstimulationtotonestimulationorviceversaandpairedwithus(p< 005).(2)AftertheinadvancepseudopairedtrainingwithHipCSortoneCSandrandomlypresentationsof US,theacquisitionratesofTEBCweregreaterinexperimentalgroupsthancontrolgroups(P<0.01),but theacquisitionrateofdebcwassimilarintheexperimentalgroupsandcontrolgroups(p>0.05)whencs wasswitchedfromhipstimulationtotoneorviceversaandpairedwithus.conclusion TheearlyCSUS pseudopairedtraininghasfacilitatingefectonthesubsequentebcestablishmentincsuspairedtraining. TwotypesofnonspecificstimulationsofbothCSandUSmaycontributetothefacilitatingefectforEBCin variousdegrees. [Keywords] eyeblinkconditioning;conditionedstimulus;unconditionedstimulus;guineapigs 经 典 瞬 目 条 件 反 射 (eyeblinkconditioning,ebc) 是 研 究 联 合 型 学 习 神 经 生 物 学 机 制 的 重 要 模 型 [1-2] 经 典 EBC 的 建 立 过 程 需 要 联 合 给 予 条 件 刺 激 (conditionedstimulus,cs) 和 非 条 件 刺 激 (unconditioned stimulus,us), 即 配 对 刺 激 根 据 CS 与 US 出 现 的 时 间 关 系,EBC 可 分 为 延 迟 性 瞬 目 条 件 反 射 (delay eyeblinkconditioning,debc) 和 痕 迹 性 瞬 目 条 件 反 射 (traceeyeblinkconditioning,tebc) 两 类 基 本 模 式 在 两 类 模 式 中 CS 均 先 于 US 出 现, 但 在 DEBC 中,CS 与 US 同 时 结 束, 即 CS 末 段 与 US 重 叠, 而 在 TEBC 中, CS 结 束 一 段 时 间 后 US 才 开 始 出 现, 即 两 者 之 间 存 在 一 个 刺 激 空 白 间 隔 期 长 期 以 来 两 类 EBC 行 为 在 学 习 记 忆 神 经 机 理 研 究 领 域 均 得 到 广 泛 应 用 [3-5] 条 件 反 射 的 迁 移 效 应 是 指 一 种 感 觉 模 式 CS 所 引 导 的 条 件 反 射 学 习 可 以 易 化 后 续 的 由 另 一 种 感 觉 模 式 CS 所 引 导 的 行 为 学 习 [6-8], 由 于 EBC 具 有 简 单 和 易 于 测 控 等 优 点, 已 渐 成 为 条 件 反 射 迁 移 效 应 研 究 的 主 要 行 为 模 型 [9-10] [11] 本 实 验 室 的 近 期 研 究 对 于 由 内 侧 前 额 叶 施 加 微 电 流 刺 激 作 为 中 枢 CS(electrical stimulationofthemedialprefrontalcortexascs,mpfc CS) 及 纯 音 刺 激 作 为 外 周 CS(ToneCS) 所 引 导 的 EBC 行 为 能 否 相 互 迁 移 进 行 了 观 察, 实 验 结 果 肯 定 了 两 类 CS 所 引 导 行 为 之 间 的 迁 移 效 应, 并 比 较 了 DEBC 与 TEBC 迁 移 效 应 的 差 异 最 近 我 们 采 用 微 电 流 刺 激 海 马 作 为 中 枢 CS(electricalstimulationofthehippocampus ascs,hip.cs) 也 有 类 似 结 果 值 得 注 意 的 是 上 述 实 验 中 非 配 对 组 的 结 果 提 示 : 先 期 的 CS 及 US 的 非 配 对 刺 激 似 乎 能 提 高 后 续 的 经 典 EBC 的 CR 百 分 率 这 引 出 一 个 相 关 领 域 过 去 未 曾 重 视 的 问 题 :CSUS 的 非 配 对 刺 激 能 否 易 化 经 典 条 件 反 射 的 建 立 研 究 非 配 对 刺 激 对 于 EBC 的 易 化 效 应 及 其 机 制 有 助 于 最 终 阐 明 简 单 条 件 反 射 甚 至 复 杂 学 习 记 忆 行 为 的 脑 机 制, 因 此, 为 了 系 统 观 察 和 分 析 非 配 对 刺 激 对 于 EBC 的 易 化 效 应 及 其 可 能 机 制, 本 研 究 对 外 周 听 觉 CS 及 中 枢 mpfc CS Hip.CS 引 导 的 非 配 对 训 练 对 于 后 续 TEBC 及 DEBC 建 立 的 影 响 作 了 深 入 探 讨 1 材 料 与 方 法 1.1 实 验 动 物 实 验 选 用 健 康 雄 性 英 国 种 白 化 豚 鼠 96 只 (4~ 5 月 龄 ), 体 质 量 500~550g, 由 重 庆 医 科 大 学 实 验 动 物 中 心 提 供, 所 有 动 物 单 笼 饲 养, 自 由 饮 水 和 进 食, 饲 养 于 温 度 为 (25±1) 的 动 物 室 内,24h 循 环 灯 照 1.2 手 术 方 法 以 1% 戊 巴 比 妥 钠 (0.1mL/100g) 和 速 眠 新 Ⅱ (0.1mL) 混 合 肌 注 麻 醉 豚 鼠, 将 其 头 部 固 定 于 脑 立 体 定 位 仪 上 (SR6N,Narishige,Tokyo,Japan) 在 暴 露 的 颅 骨 上 钻 开 5 个 直 径 约 1.0mm 的 小 孔, 其 坐 标 分 别 为 孔 1 2:AP2mm,RL4mm; 孔 3 4:AP10mm,RL 4mm; 孔 5:AP13.0mm(mPFC) 或 AP6.0mm(Hip.), R1.0mm (mpfc) 或 R5.0mm (Hip.),H2.5mm (mpfc) 或 H4.5mm(Hip.); 分 别 用 4 颗 已 消 毒 的 不 锈 钢 螺 丝 钉 ( 直 径 :1.0mm, 螺 距 :400μm, 质 量 :0.3g) 反 旋 入 1~4 号 小 孔 内 作 为 牙 科 水 泥 固 定 的 支 点 将 不 锈 钢 双 极 刺 激 电 极 植 入 孔 5, 电 极 尖 端 位 置 分 别 是 : mpfc(ap13.0mm,r1.0mm,h2.5mm);hip.(ap 6.0mm,R5.0mm,H4.5mm) 将 矩 形 头 部 固 定 支 架 嵌 合 在 不 锈 钢 螺 钉 之 间, 用 牙 科 水 泥 固 定 螺 钉 和 电 极 术 后 恢 复 1 周, 待 全 身 和 眨 眼 状 况 恢 复 良 好 后 开 始 行 为 训 练 1.3 行 为 训 练 行 为 训 练 在 避 光 隔 音 的 屏 蔽 柜 内 进 行 以 对 内

3 1962 第 37 卷 第 19 期 侧 前 额 叶 或 海 马 的 微 电 流 刺 激 作 为 中 枢 CS(mPFCCS 或 Hip.CS), 以 纯 音 刺 激 (350ms,2kHz 正 弦 波,85~ 90dB) 作 为 外 周 CS(ToneCS), 以 角 膜 吹 气 (100ms 3 psi) 作 为 US, 所 有 豚 鼠 首 先 经 历 3d 的 适 应 期 (30 min/d), 在 此 期 间 不 给 动 物 施 与 任 何 刺 激 随 后, 实 验 组 动 物 (8 组, 每 组 4 只 动 物 ) 首 先 接 受 为 期 1 周 的 中 枢 或 外 周 CSUS 非 配 对 训 练, 然 后 转 换 CS 并 进 行 为 期 6d 的 配 对 训 练, 对 照 组 动 物 (8 组, 每 组 8 只 动 物 ) 直 接 接 受 中 枢 或 外 周 CSUS 配 对 训 练 训 练 时 豚 鼠 被 放 置 于 特 制 的 有 机 玻 璃 盒 中, 以 两 根 耳 杆 顶 住 头 顶 固 定 支 架, 限 制 其 头 部 活 动, 将 气 流 喷 嘴 置 于 豚 鼠 左 眼 前 方, 距 离 角 膜 1.0cm 中 枢 CS 为 200Hz/350ms 的 串 脉 冲 ( 单 个 脉 冲 宽 0.1ms), 双 极 阴 极 刺 激, 由 成 都 仪 器 厂 YC2 刺 激 器 输 出 电 流 电 流 值 取 能 引 起 最 小 眨 眼 反 应 的 电 流 强 度 的 40% [9], 分 别 为 100~350 μa(mpfccs) 及 100~500μA(Hip.CS) 非 配 对 训 练 模 式 :CSUS 之 间 的 间 期 在 1~10s 随 机 取 值, 配 对 训 练 的 间 期 为 35~45s( 平 均 40s)( 图 1A) 配 对 训 练 时,DEBC 训 练 模 式 :CS 开 始 250ms 后 施 与 US, 两 者 同 时 结 束 ( 图 1B);TEBC 训 练 模 式 :CS 结 束 后 间 隔 250ms 施 与 US, 即 CS 终 点 与 US 起 点 之 间 间 隔 250 ms( 图 1C) 配 对 训 练 的 间 期 为 20~40s( 平 均 30s) 所 有 动 物 每 天 接 受 60 次 训 练 &' &' #$% # $% & & ' # $% & & ' A: 非 配 对 训 练 模 式 (CS 为 纯 音 及 mpfc 或 Hip. 电 刺 激 ; US 为 角 膜 气 流 刺 激 CS 和 US 不 呈 现 固 定 的 配 对 关 系, 之 间 的 间 期 在 1~10s 随 机 选 择 );B C: 经 典 瞬 目 条 件 反 射 中 DEBC 和 TEBC 模 式 ( 前 者 CS 与 US 重 叠 100ms, 后 者 CS 与 US 之 间 间 隔 250ms) 图 1 非 配 对 及 配 对 行 为 训 练 模 式 图 1.4 眨 眼 活 动 记 录 训 练 时, 末 端 带 有 尼 龙 细 线 的 蛙 心 夹 夹 住 豚 鼠 左 侧 上 眼 睑 游 离 缘 尼 龙 细 线 另 一 端 连 接 高 灵 敏 度 的 肌 肉 张 力 换 能 器 [12] 眨 眼 活 动 引 起 的 张 力 变 化 转 换 为 电 位 波 动, 可 以 反 映 左 侧 上 眼 睑 的 活 动 情 况 肌 肉 张 力 换 能 器 转 换 的 电 信 号 与 条 件 刺 激 信 号 由 用 RM6280 生 物 信 号 采 集 处 理 系 统 同 步 记 录 信 号 采 集 与 记 录 参 数 : 采 样 频 率 :10kHz, 带 通 :DC~100Hz( 传 感 器 信 号, 张 力 信 号 );16~3kHz(CS 及 US 信 号 ); 灵 敏 度 5mV( 张 力 信 号 ),500mV(CS 及 US 信 号 ) 数 字 信 号 存 储 于 电 脑 中, 并 使 用 VC++ 软 件 编 制 的 专 用 程 序 离 线 分 析 实 验 数 据 显 著 的 眨 眼 活 动 满 足 以 下 2 个 标 准 :1 上 眼 睑 活 动 值 ( 时 刻 t) 眼 睑 活 动 基 线 值 +1mV;2 满 足 条 件 1 的 时 间 总 和 超 过 15ms 条 件 眨 眼 反 应 (conditioned eyeblinkresponse,cr) 定 义 为 US 开 始 出 现 前 200ms 这 一 阶 段 发 生 的 显 著 眨 眼 活 动 1.5 组 织 学 定 位 所 有 行 为 学 测 试 结 束 后, 给 豚 鼠 腹 腔 注 射 致 死 剂 量 的 戊 巴 比 妥 钠 (1%,2.0mL) 先 后 经 心 脏 灌 注 500mL 生 理 盐 水 和 500mL 多 聚 甲 醛 溶 液 取 出 脑 组 织, 并 放 置 于 4% 多 聚 甲 醛 溶 液 中 切 片 前 几 天, 脑 组 织 被 转 移 至 30% 蔗 糖 /4% 多 聚 甲 醛 溶 液 中 脱 水 石 蜡 包 埋 目 标 脑 组 织 ( 含 导 管 埋 置 孔 位 置 ), 脱 蜡 后 用 切 片 机 将 小 脑 叶 片 制 成 连 续 的 10μm 厚 冠 状 位 石 蜡 切 片, 尼 氏 染 色 定 位 电 极 尖 端 位 置 电 极 尖 端 位 置 在 带 照 相 功 能 的 显 微 镜 下 仔 细 确 认, 并 在 豚 鼠 脑 立 体 定 位 图 上 标 出 [13] 只 有 电 极 尖 端 埋 置 位 置 正 确, 豚 鼠 的 眨 眼 行 为 数 据 才 可 被 用 于 后 期 的 数 据 统 计 和 分 析 1.6 统 计 学 分 析 使 用 Excel 软 件 制 作 数 据 图 表, 数 据 以 x±s 珋 表 示, 应 用 SPSS18.0 统 计 软 件, 数 据 采 用 重 复 测 量 数 据 的 方 差 分 析 拆 分 单 因 素 方 差 分 析 拆 分 重 复 测 量 单 因 素 方 差 分 析, 多 重 比 较 用 LSD 2 结 果 2.1 mpfccstonecs 条 件 下, 非 配 对 刺 激 对 后 续 的 DEBC 及 TEBC 学 习 均 具 有 易 化 效 应 图 2 3 分 别 显 示 在 DEBC 或 TEBC 模 式 下,CS 为 mpfccs( 中 枢 ) 或 ToneCS( 外 周 ) 时,CS 转 换 前 的 非 配 对 训 练 过 程 对 CS 转 换 后 配 对 训 练 的 CR 习 得 率 的 影 响

4 第 37 卷 第 19 期 1963 各 实 验 组 前 期 均 接 受 ToneCS 非 配 对 训 练, 各 对 照 组 前 期 均 无 ToneCS 非 配 对 训 练 ;a:p<0.01, 与 mpfccs 对 照 组 比 较 A:DEBC 行 为 模 式 ( 实 验 组 n=4, 对 照 组 n=8);b:tebc 行 为 模 式 ( 实 验 组 n=4, 对 照 组 n=7) 图 2 ToneCSUS 非 配 对 刺 激 对 后 续 由 mpfccs 引 导 的 两 类 EBC 学 习 的 易 化 效 应 各 实 验 组 前 期 均 接 受 mpfccs 非 配 对 训 练, 各 对 照 组 前 期 均 无 mpfccs 非 配 对 训 练 ;a:p<0.05,b:p<001, 与 ToneCS 对 照 组 比 较 A:DEBC 行 为 模 式 ( 实 验 组 n=4, 对 照 组 n=8);b:tebc 行 为 模 式 ( 实 验 组 n=4, 对 照 组 n=7) 图 3 mpfccsus 非 对 刺 激 对 后 续 由 ToneCS 引 导 的 两 类 EBC 学 习 的 易 化 效 应 实 验 组 与 前 期 无 非 配 对 训 练 的 对 照 组 比 较, 前 者 CR 习 得 率 均 高 于 后 者 图 2A 显 示, 两 组 间 整 体 比 较, 具 有 显 著 的 时 间 效 应 (P<001) 交 互 作 用 (P<001) 以 及 组 间 差 异 (P<0.01) 图 2B 显 示, 两 组 间 整 体 比 较, 具 有 显 著 的 时 间 效 应 (P<0.01) 交 互 作 用 (P<001) 以 及 组 间 差 异 (P<0.01) 结 果 提 示, 在 DEBC 或 TEBC 模 式 下, 与 前 期 无 ToneCS 非 配 对 训 练 对 照 组 在 转 换 为 mpfccs 配 对 训 练 习 得 CR 速 率 相 比 较, 前 期 有 ToneCS 非 配 对 训 练 实 验 组 在 转 换 为 mpfc CS 配 对 训 练 习 得 CR 速 率 更 快 实 验 组 与 前 期 无 非 配 对 训 练 的 对 照 组 比 较, 前 者 CR 习 得 率 均 高 于 后 者 统 计 分 析 表 明, 图 3A 显 示, 两 组 间 整 体 比 较, 具 有 显 著 的 时 间 效 应 (P<001) 交 互 作 用 (P<0.05) 以 及 组 间 差 异 (P<0.01) 图 3B 显 示, 两 组 间 整 体 比 较, 具 有 显 著 的 时 间 效 应 (P<001) 和 组 间 差 异 (P<005), 但 无 交 互 作 用 (P>005) 结 果 提 示, 在 DEBC 或 TEBC 模 式 下, 与 前 期 无 mpfccs 非 配 对 训 练 对 照 组 在 转 换 为 ToneCS 配 对 训 练 习 得 CR 速 率 相 比 较, 前 期 有 mpfccs 非 配 对 训 练 实 验 组 在 转 换 为 ToneCS 配 对 训 练 习 得 CR 速 率 更 快 2.2 Hip.CSToneCS 条 件 下, 非 配 对 刺 激 对 后 续 的 DEBC 及 TEBC 学 习 具 有 不 同 影 响 图 4 5 分 别 显 示 在 DEBC 或 TEBC 模 式 下,CS 为 Hip.CS( 中 枢 ) 或 ToneCS( 外 周 ) 时,CS 转 换 前 的 非 配 对 训 练 过 程 对 CS 转 换 后 配 对 训 练 的 CR 习 得 率 的 影 响 各 实 验 组 前 期 均 接 受 ToneCS 非 配 对 训 练, 各 对 照 组 前 期 均 无 mpfccs 非 配 对 训 练 ;a:p<001, 与 Hip.CS 对 照 组 比 较 A:DEBC 行 为 模 式 ( 实 验 组 n=4, 对 照 组 n=6);b:tebc 行 为 模 式 ( 实 验 组 n=4, 对 照 组 n=6) 图 4 ToneCSUS 非 配 对 刺 激 对 后 续 由 Hip.CS 引 导 的 两 类 EBC 学 习 具 有 不 同 影 响

5 1964 第 37 卷 第 19 期 各 实 验 组 前 期 均 接 受 Hip.CS 非 配 对 训 练, 各 对 照 组 前 期 均 无 Hip.CS 非 配 对 训 练 ;a:p<001, 与 ToneCS 对 照 组 比 较 A:DEBC 行 为 模 式 ( 实 验 组 n=4, 对 照 组 n=7);b:tebc 行 为 模 式 ( 实 验 组 n=4, 对 照 组 n=5) 图 5 Hip.CSUS 非 配 对 刺 激 对 后 续 由 ToneCS 引 导 的 两 类 EBC 学 习 具 有 不 同 影 响 实 验 组 与 前 期 无 非 配 对 训 练 的 对 照 组 比 较,DEBC 模 式 中,CR% 在 两 组 间 无 差 异,TEBC 模 式 中, 前 者 习 得 的 CR% 均 高 于 后 者 统 计 分 析 表 明, 图 4A 显 示, 两 组 间 整 体 比 较, 具 有 显 著 的 时 间 效 应 (P<001) 和 交 互 作 用 (P<0.01), 但 无 组 间 差 异 (P>005) 图 4B 显 示, 两 组 间 整 体 比 较, 具 有 显 著 的 时 间 效 应 (P< 001) 交 互 作 用 (P<0.01) 以 及 组 间 差 异 (P< 001) 结 果 提 示, 在 DEBC 模 式 下, 与 前 期 无 ToneCS 非 配 对 训 练 对 照 组 在 转 换 为 Hip.CS 配 对 训 练 习 得 CR 速 率 相 比 较, 前 期 有 ToneCS 非 配 对 训 练 实 验 组 在 转 换 为 Hip.CS 配 对 训 练 习 得 CR 速 率 无 差 异 ; 而 在 TEBC 模 式 下, 实 验 组 CS 转 换 为 Hip.CS 习 得 CR 速 率 更 快 实 验 组 与 前 期 无 非 配 对 训 练 的 对 照 组 比 较,DEBC 模 式 中,CR% 在 两 组 间 无 差 异,TEBC 模 式 中, 前 者 习 得 的 CR% 均 高 于 后 者 统 计 分 析 表 明, 图 5A 显 示, 两 组 间 具 有 显 著 的 时 间 效 应 (P<0.01) 和 交 互 作 用 (P< 0.01), 但 无 组 间 差 异 (P>0.05) 图 5B 显 示, 两 组 间 整 体 比 较, 具 有 显 著 的 时 间 效 应 (P<0.01) 和 组 间 差 异 (P<0.01), 但 无 交 互 作 用 (P>0.05) 结 果 提 示, 在 DEBC 模 式 下, 与 前 期 无 Hip.CS 非 配 对 训 练 对 照 组 在 转 换 为 ToneCS 配 对 训 练 习 得 CR 速 率 相 比 较, 前 期 有 Hip.CS 非 配 对 训 练 实 验 组 在 转 换 为 ToneCS 配 对 训 练 习 得 CR 速 率 无 差 异 ; 而 在 TEBC 模 式 下, 实 验 组 CS 转 换 为 ToneCS 习 得 CR 速 率 更 快 3 讨 论 本 实 验 结 果 显 示, 非 配 对 刺 激 对 于 EBC 的 易 化 效 应 是 肯 定 的 特 别 是 在 以 mpfc 电 刺 激 作 为 非 配 对 的 CS 或 者 配 对 的 CS 时, 无 论 对 于 DEBC 还 是 TEBC 训 练 模 式,CS 转 换 前 的 非 配 对 训 练 对 后 续 的 配 对 训 练 的 CR 习 得 均 有 一 定 易 化 作 用 但 应 注 意 的 是 Hip.CS 的 情 况, 当 ToneCS 变 换 为 Hip.CS, 或 反 之 变 换 时, 后 续 的 由 变 换 后 的 CS 模 式 引 导 的 EBC 两 类 行 为 包 括 DEBC 及 TEBC 模 式 的 建 立 中, 只 有 TEBC 行 为 的 建 立 被 显 著 易 化 似 乎 提 示 易 化 效 应 存 在 通 路 差 异 本 研 究 未 能 完 全 回 答 非 配 对 刺 激 对 于 后 续 EBC 建 立 的 易 化 效 应 的 神 经 机 制, 但 从 现 有 结 果 可 予 以 初 步 分 析 非 配 对 训 练 给 予 的 CS 及 US 两 类 刺 激 虽 然 未 配 对 呈 现, 但 两 类 刺 激 是 客 观 存 在 的, 经 过 多 次 的 非 配 对 刺 激,CS 刺 激 引 起 的 变 化 或 US 通 路 激 活 均 可 能 影 响 后 续 的 配 对 训 练 成 绩 不 过, 以 CS 效 应 还 是 US 通 路 激 活 效 应 为 主 需 根 据 实 验 结 果 加 以 分 析 实 验 中 为 避 免 由 前 期 非 配 对 刺 激 对 CS 通 路 的 激 活 而 直 接 导 致 对 后 续 训 练 的 易 化 效 应, 即 后 续 训 练 从 与 前 期 相 同 的 特 定 CS 类 型 中 受 益, 在 非 配 对 之 后 的 配 对 训 练 时 对 于 CS 类 型 进 行 了 转 换, 但 US 类 型 保 持 不 变, 以 明 确 是 非 特 异 性 的 外 周 或 中 枢 CS 是 否 参 与 了 易 化 效 应 比 较 mpfccs 与 Hip.CS 两 种 情 况 下 的 结 果 发 现, 在 US 固 定 的 前 提 下,Hip.CS 与 mpfccs 分 别 引 导 的 易 化 效 应 存 在 差 异, 提 示 易 化 效 应 可 能 并 非 完 全 由 US 通 路 的 激 活 作 用 所 控 制, 而 可 能 至 少 部 分 来 源 于 CS 的 刺 激 效 应 不 过, 当 以 Hip.CS 引 导 非 配 对 刺 激 时, 不 排 除 现 有 刺 激 强 度 对 于 海 马 而 言 太 弱 ( 虽 然 其 对 于 mpfc 可 能 是 足 够 的 ), 导 致 经 海 马 的 易 化 效 应 太 弱, 继 之 在 后 续 的 DEBC 模 式 中 易 化 效 应 未 表 现 出 来, 而 只 在 TEBC 模 式 中 表 现 出 易 化 效 应 因 为 DEBC 与 TEBC 行 为 相 比 更 加 简 单 和 易 于 建 立, 其 对 微 弱 的 易 化 效 应 的 检 测 可 能 存 在 敏 感 性 太 低 的 问 题 本 实 验 以 角 膜 气 流 刺 激 作 为 US 相 对 于 CS 而 言,US 的 伤 害 性 作 用 很 明 显, 故 US 本 身 能 否 通 过 其 非 特 异 性 应 激 作 用 参 与 非 配 对 刺 激 对 EBC 的 易 化 效 [14] 应 需 关 注 近 期 由 王 琼 等 完 成 的 一 项 关 于 慢 性 应 激 刺 激 诱 导 的 抑 郁 大 鼠 的 前 额 叶 认 知 功 能 损 伤 研 究 表

6 第 37 卷 第 19 期 1965 明 : 持 续 2 周 的 慢 性 不 可 预 期 性 应 激 ( 从 10 种 应 激 刺 激 中 任 选 两 种, 包 括 电 击, 悬 尾, 睡 眠 剥 夺 等 ) 诱 导 了 大 鼠 的 抑 郁, 表 现 为 认 知 灵 活 性 不 同 成 分 的 损 害 另 外, 有 研 究 表 明 轻 度 急 性 应 激 (105dB 噪 音 ) 损 害 猴 空 间 工 作 记 忆, 该 作 用 的 机 制 可 能 通 过 使 前 额 叶 皮 层 发 生 下 线 效 应 (ofline), 从 而 允 许 皮 层 下 结 构 介 导 的 习 惯 性 反 应 控 制 行 为, 这 具 有 保 护 性 生 物 学 意 义, 但 却 增 加 了 许 多 神 经 精 神 障 碍 的 易 感 性 等 [15] 这 些 研 究 结 果 表 明 US 应 激 作 用 导 致 的 是 认 知 功 能 抑 制 或 干 扰 而 非 易 化 效 应 然 而, 在 EBC 研 究 领 域 大 量 研 究 充 分 肯 定 了 杏 仁 核 激 活 对 于 EBC 的 易 化 效 应 [16] 另 外, 本 实 验 所 用 的 US 刺 激 与 前 述 造 模 所 用 的 应 激 刺 激 在 方 式 强 度 及 时 程 上 存 在 较 大 差 异, 行 为 模 型 与 上 述 不 同, 为 简 单 的 反 射 性 学 习, 故 不 排 除 一 定 的 US 应 激 作 用 可 能 通 过 对 杏 仁 核 的 激 活 参 与 了 对 条 件 反 射 学 习 的 易 化 效 应, 相 关 问 题 值 得 进 一 步 研 究 非 特 异 性 预 先 刺 激 对 于 条 件 反 射 的 易 化 效 应 及 其 神 经 机 制 的 研 究 迄 今 尚 未 受 到 足 够 重 视 本 研 究 明 确 了 CS US 的 非 配 对 刺 激 对 于 EBC 建 立 的 易 化 效 应, 结 果 支 持 CS US 两 类 非 特 异 性 预 先 刺 激 均 参 与 对 于 条 件 反 射 的 易 化 效 应 探 讨 非 特 异 性 刺 激 的 易 化 效 应 及 其 神 经 机 制 有 助 于 进 一 步 阐 明 简 单 条 件 反 射 甚 至 复 杂 学 习 记 忆 行 为 的 脑 机 制, 包 括 单 独 CS 单 独 US 的 易 化 效 应, 以 及 外 周 (Tone) 或 中 枢 (mpfc 或 Hip.)CS US 非 配 对 训 练 对 同 一 类 CSUS 配 对 训 练 的 易 化 效 应 参 考 文 献 : [1]FuchsJR,RobinsonGM,DeanAM,etal.Cerebelarse cretinmodulateseyeblinkclasicalconditioning[j].learn Mem,2014,21(12): [2] HalversonH E,PorembaA,FreemanJH.Medialauditory thalamusisnecesaryforacquisitionandretentionofeyeblink conditioningtocochlearnucleusstimulation[j].learnmem, 2015,22(5): [3] HalversonHE,LeeI,FreemanJH.Asociativeplasticityin themedialauditorythalamusandcerebelarinterpositusnu cleusduringeyeblinkconditioning[j].jneurosci,2010,30 (26): [4] HeslowG,JirenhedD A,RasmusenA,etal.Clasical conditioningofmotorresponses:whatisthelearningmecha nism?[j].neuralnetw,2013,47: [5]HeineySA,WohlM P,ChetihSN,etal.Cerebelarde pendentexpresionofmotorlearningduringeyeblinkcondi tioninginheadfixedmice[j].jneurosci,2014,34(45): [6] NahinskyID,LucasBA,EdgelSE,etal.Howlearning onecategoryinfluencesthelearningofanother:intercategory generalizationbasedonanalogyandspecificstimulusinforma tion[j].amjpsychol,2004,117(3): [7]LealCampanarioR,DelgadoGarciaJM,GruartA.Micros timulationofthesomatosensorycortexcansubstituteforvibris sastimulationduringpavlovianconditioning[j].procnatl AcadSciUSA,2006,103(26): [8]CampolataroM M,KashefA,LeeI,etal.Neuronalcore latesofcrosmodaltransferinthecerebelumandpontinenu clei[j].jneurosci,2011,31(11): [9]BrownKL,StantonM E.Crosmodaltransferofthecondi tionedeyeblinkresponseduringinterstimulusintervaldiscrim inationtraininginyoungrats[j].devpsychobiol,2008,50 (7): [10] CampolataroM M,FreemanJH.Cerebelarinactivation impairscrosmodalsavingsofeyeblinkconditioning[j]. BehavNeurosci,2009,123(2): [11]YaoJ,WuGY,LiuGL,etal.Transferofclasicaleye blinkconditioningwithelectricalstimulationofmpfc or toneasconditionedstimulusinguineapigs[j].behav BrainRes,2014,274: [12] 林 曦, 胡 波, 万 子 兵, 等. 一 种 简 易 的 豚 鼠 眨 眼 反 应 测 量 方 法 [J].,2008,30(24): [13] RapisardaC,BaccheliB.Thebrainoftheguineapigin stereotaxiccoordinates[j]. Arch SciBiol(Bologna), 1977,61(1/4):1-37. [14] 王 琼, 罗 晓 敏, 邵 枫, 等. 两 种 慢 性 应 激 诱 导 的 抑 郁 模 型 大 鼠 前 额 叶 认 知 功 能 的 比 较 研 究 [J]. 中 国 神 经 精 神 疾 病 杂 志,2012,38(8): [15]ArnstenAF,GoldmanRakicPS.Noisestresimpairspre frontalcorticalcognitivefunctioninmonkeys:evidencefora hyperdopaminergicmechanism[j].archgenpsychiatry, 1998,55(4): [16]TaubAH,MintzM.Amygdalaconditioningmodulatessen soryinputtothecerebelum[j].neurobiollearnmem, 2010,94(4): ( 收 稿 : ; 修 回 : ) ( 编 辑 栾 嘉 )

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