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1 细胞核的结构与功能 北大医学部基础医学院细胞生物学系邵根泽 2017 年 9 月 19 日

2 概述 细胞核 (nucleus nucleus) 是真核细胞内最大的细胞器 细胞核是细胞生命活动的控制中心 真核生物和原核生物的最大区别 细胞核具有显著的细胞周期时相变化 细胞核主要由核被膜 染色质染色质 核仁及核基质四部分组成

3 Mitochondrion Nuclear pore Nuclear Membrane Cytoskeletal fibers Peroxisome Nucleus Nucleolus Smooth ER Rough ER Golgi complex Lysosome Structure of the animal cell

4 典型的细胞核结构示意图

5 细胞核主要由核被膜 染色质 核仁及核基质四部分组成

6 细胞核具有显著的细胞周期时相变化 interphase cytokinesis prophase telophase prometaphase metaphase anaphase

7 概述 细胞核的数目 : 单核 双核双核 多核 细胞核的大小 : 随生物的种类 细胞的类型及功能状态不同而异 细胞核的形态 : 圆球形 椭球形 多叶形

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11 第一节 核被膜与核孔复合体 一 核被膜二 核孔复合体三 核纤层

12 一 核被膜 (nuclear envelope) 细胞核的界膜, 由内 外两层平行 的单位膜构成 每层膜的厚度为 70~80nm

13 外核膜 核被膜的结构组成 outer nuclear membrane 核周间隙 perinuclear cistea 内核膜 inner nuclear membrane 核孔 nuclear pores 核纤层 nuclear lamina

14 外核膜 (outer nuclear membrane) 外核膜 面向胞质, 表 面附有大量核 糖体, 常与 RER 相延续 实际上, 外核 膜可被看作是 内质网膜的一 个特化区域

15 内核膜 (inner nuclear membrane) 内核膜 面向核质, 表 面光滑, 没有 核糖体, 但有 特异蛋白, 如 核纤层蛋白 B 受体

16 核周间隙 (perinuclear space) 核周间膜 位于内 外核 膜之间, 宽约 20~40nm,, 与 内质网相通, 充满液态不定 形物质

17 核被膜的功能 构成核 质之间的天然选择性屏障 介导细胞核与细胞质之间物质与信息的有序交流

18 二 核孔复合体 (nuclear pore complex,npc) 核的内 外膜在一些位点融合形成环状开 口, 称为核孔 (nuclear pores) ) 核孔不是一个简单的通道, 而是一个复杂 而精细的结构体系, 称为核孔复合体

19 细胞核孔复合体结构电镜图 抽提后的核孔复合体胞质面结构 抽提后的核孔复合体核质面结构

20 核孔复合体的化学组成

21 Cytoplasmic FG Nups and filament: NUP358, NUP214, NLP1 Nuclear Pore Complex Structure Nups:Nucleoporins Transmembrane ring Nups: GP210, NDC1, POM121 Inner ring Nups: NUP133, NUP160 NUP96, NUP75 NUP107 SEH1 SEC13 NUP43 NUP37 Central FG Nups: NUP98, NUP62, Nuclear FG Nups and the basket: Linker Nups: Inner ring Nups: NUP205,NUP188 NUP54, NUP58, NUP45 NUP153, TPR NUP93, NUP88 NUP155, NUP35

22 Nucleoporins (Nups) Classes of NUPs: Transmembrane Core scaffold (inner ring and outer ring) Linker Phe-Gly (FG)

23 核孔复合体的结构模型 1992 年 Goldberg 等提出车轮状模型 胞质环 : 由 8 个环亚单位组成 核质环 : 核篮结构 辐 : 柱状亚单位 腔内亚单位 环带亚单位 中心栓 : 在核质间物质交换中起转运作用

24 核孔复合体结构模型

25 核孔复合体的功能 一种特殊的跨膜运输载体蛋白复合体 构成核质之间双向运输的亲水性通道 运输方式有 : 被动扩散与主动运输 具有双向性 : 核输入与核输出

26 被动扩散 (passive diffusion) NPC 是直径约 9nm, 长约 15nm 的亲水通道 允许离子和水溶性小分子 ( 代谢分子 ) 以自由扩散和协助扩散的方式穿梭于核质之间

27 主动运输 (active transport) 大分子的核质分配主要是通过 NPC 的主 动运输完成的, 具有高度的选择性 通过 NPC 的主动运输是一个信号识别与 载体介导的过程, 需要消耗 ATP 通过 NPC 的主动运输具有双向性, 即核 输入与核输出

28 爪蟾卵母细胞核质蛋白注射实验

29 金颗粒标记的核蛋白穿越核孔

30 核输入 亲核蛋白是指在细胞质内合成, 然后输入 到核内发挥作用的一类蛋白质 亲核蛋白的核输入需要核定位信号 (nuclear localization sequence,nls)

31 核输入 核定位信号 (NLS) 是存在于亲核蛋白 内的一段 4~8 个氨基酸序列, 富含带正 电荷的碱性氨基酸, 进入核后不被剪切 NLS 首先在 SV40 病毒的大 T 抗原上被证 实, 其序列为 Pro-Lys-Lys Lys-Lys-Arg-Lys- Val

32 核输入 亲核蛋白入核过程 结合 : 需 NLS 识别并结合 importin 转运 : 需 GTP 结合蛋白 Ran 的参与, 水解 GTP 提供能量

33 亲核蛋白质从细胞质向细胞核转运的过程

34 核输出 核输出的主要成分有 :RNA 核糖体亚单位 核输出是具有高度选择性的信号引导过程 核输出信号 (Nuclear export signal,nes)

35 核输出 真核细胞的 RNA 要经过加工 修饰成为成 熟的 RNA 分子后, 才能被转运出细胞核 RNA 的输出需要通过与具有 NES 的蛋白质 结合来完成 5 端 帽子 结构对 mrna 的出核是必要 的, 防止 mrna 前体被错误地运输

36 Chromosome maintenance protein 1 (CRM1)

37 Ran GTP 在转运中的作用 Cytoplasm Pi + Ran-GDP RCC1 GEF RanGAP Nucleus Ran-GTP

38 NPC 功能 : 核转运机制 主动运输需要 : 核转运因子 (Nuclear transport factors,ntfs): Karyopherin (Kap, importin) 家族蛋白 转运信号 (Transport signals): Nuclear localization sequences (NLSs; for import); Nuclear export sequences (NESs; for export) NTFs 与被转运分子上的转运信号 NES 或 NLS 结合

39 核质转运和疾病发生及其耐药性 CRM1 在卵巢癌 胰腺癌等高表达, 且与癌症预后密切相关 肿瘤细胞耐药性与核转运相关

40 三 核纤层 (nuclear lamina) 分布于内核膜与染色质之间 紧贴内核膜的一层蛋白网 络结构 由一层特殊的中间纤维组成正交网络, 切面观 呈片层结构, 整体观呈球形网络

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42 核纤层的结构组成 在哺乳动物细胞中, 核纤层由 3 种属于 中等纤维家族的蛋白质组成, 即核纤层 蛋白 A B C (Lamin A B C ) A 型 :Lamin A 和 C; ; 是一个基因的不同 加工产物 B 型 : Lamin B

43 核纤层的功能 为核膜及染色质提供结构支架, 并介导核膜与染色质的相互作用 与细胞有丝分裂过程中核被膜的崩解与重建密切相关

44 细胞质 外核膜 核周腔 膜蛋白 内核膜 核纤层蛋白 染色质 核纤层结构示意图

45 核被膜的崩解与重建 核被膜在细胞有丝分裂时有规律地崩解 与重建 : 在早中期核膜解体为许多小囊 泡, 在末期核被膜小囊泡围绕染色体聚 集, 重新融合成一个完整的核被膜 核被膜的动态变化与核纤层蛋白的磷酸 化与去磷酸化修饰直接相关

46 核膜的崩解 1. 核孔复合体解聚 2. 核膜崩解 3. 核纤层的崩解

47 有丝分裂过程中核被膜的崩解和重新构建

48 有丝分裂过程中核被膜的崩解和重新构建 Inter Pro Prometa Meta Ana Telo Merge DAPI Lamin A/C

49 第二节核仁 (nucleolus( nucleolus) 一 概述二 核仁的超微结构三 核仁的功能四 核仁周期

50 一 概述 核仁是间期核中最明显的 结构 核仁的大小 形状和数目 随生物的种类 细胞类型 和细胞代谢状态的不同而 变化 核仁是高度动态的结构

51 rrna 基因 (rdna) 与核仁形成有关的染色体次缢痕部位称为 核仁组织区 (NOR) rrna 基因定位于染色体的核仁组织区 人类共有 5 对染色体具有核仁组织区, 即 D 组 ( ) 和 G 组 (21 22) 染 色体 在间期上述 10 条染色体的 rdna 以袢环的形式伸入到核仁的纤维中心区

52 核仁组织区 (Nucleolar Organizer Regions, NORs)

53 C: TG cell, after specific AgNOR protein staining, at the electron microscopy level. Only the fibrillar centers and the associated dense fibrillar component are stained. e: Same preparation as in d, but visualized with light microscopy. The silver-stained structures appeared as well-defined, darkly stained dots clustered in the nucleolus. Montanaro L, AJP, 2008

54 二 核仁的超微结构 纤维中心 Fibrillar Center, FC 核仁电镜图 致密纤维组分 Dense Fibrillar Component 颗粒组分 Granular Component 核仁基质 Nucleolar Matrix)

55 纤维中心 (fibrillar center) 是浅染的低 电子密度区 是 rrna 基 因, 即 rdna 存在 区域, 不形 成核小体, 无组蛋白

56 由致密的 高电子密度 的纤维构成, 呈环形或半 月形包围纤 维中心 是 rrna 前 体存在区域 致密纤维组分 (Dense Fibrillar Component)

57 颗粒组分 (Granular Component) 是核仁的主 要结构, 由 直径 15~ 20nm 的致 密颗粒构成 是未成熟的 核糖体亚单 位前体存在 区域

58 核仁基质 (nucleolar matrix) 低电子密度 无定形的蛋白质液体物 质, 为上述三种结构的存在环境 与核基质相连通

59 三 核仁的功能 合成加工 rrna 并组装核糖核蛋白体亚单位 纤维中心 :rdna 的储存 纤维中心与致密纤维组分组分交界处 : rdna 的转录 致密纤维组分 :rrna 前体的加工 颗粒组分 : 核糖体亚单位的装配

60 Model of Ribosome Biogenesis Boisvert, FM. Nature Review, Molecular and Cell Biology, 2007

61 rrna 的合成 rrna 基因由专一性的 RNA 聚合酶 I 进行转录 圣诞树 样结构 首先转录出一段 45S 的 rrna 前体

62 rrna 的合成 rrna rdna 蛋白质颗粒 转录的终点 转录的起点 RNA 聚合酶 I 间隔片段 基质单位转录单位 3nm

63 rrna 加工与成熟 45SrRNA 前体降解加工为 18S rrna 28S rrna 和 5.8S rrna 18S rrna 与核糖体蛋白组装成 40S 的小亚单位 核仁内的 28S rrna 和 5.8S rrna 与来自核仁外的 5S rrna 一起与核糖体蛋白 组装成 60S 的大亚单位

64 rrna 加工与成熟 Nucleus Nucleolus 5-10min 32S 5S snornps Protein 45S pre-rrna 28S 5.8S processing factors 20S Ribosome 18S proteins 20min 5min 28S Cytoplasm 18S 5.8S 5S 40S ribosomal subunit 60S ribosomal subunit

65 细胞分裂过程中 核仁组装与去组装

66 四 核仁周期 核仁随细胞周期的进行而呈现周期性变化 ( 形成和 消失 ) 小核仁迅速生长并彼此融合成一个或几个大的核仁

67 五 核仁与疾病 f and g: Histological sections of two human breast carcinomas, stained for the AgNOR proteins. The nucleoli are specifically stained. Note the small size on the nucleoli in the case reported in f, which was characterized by a good prognosis, and the larger size of nucleoli in the case reported in g, characterized by a fatal outcome.

68 第三节核骨架 (nuclear skeleton) 一 概念二 化学组成三 核骨架的功能

69 一 概念 狭义概念 : 仅指细胞核内以纤维形蛋白质成分为主的纤维网架体系 广义概念 : 除了核中的纤维网络结构外, 还包括核纤层 核孔复合体及核仁等

70 细胞核骨架电镜图

71 二 化学组成 成分比较复杂, 主要成分是蛋白质, 并含有少量 RNA RNA 对保持核骨架三维网络的完整性是必需的 含有少量的 DNA, 是一种功能性结合

72 三 核骨架的功能 核骨架协助 DNA 复制, 是 DNA 复制的基本 位点 核骨架参与基因表达调控, 具有转录活性 的基因结合在核骨架上 核骨架参与染色体的构建,18 个 DNA 复制 环呈放射状排列结合在核骨架上构成微带

73 染色体高级结构的构建 带微 一条染色单体约有 10 6 个微带 DNA 复制环 核骨架

74 小结 核孔复合体的结构 亲核蛋白质的核输入 核纤层的功能 核仁的结构与功能 核骨架的概念与功能

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