468 江苏大学学报 ( 医学版 ) 第 28 卷 noactivityoftlymphocytesthroughpd L1/PD 1pathwayduringsepsis. [Keywords] sepsis;neutrophil;tlymphocyte;programmeddeath ligan

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1 第 28 卷第 6 期 2018 年 11 月 江苏大学学报 ( 医学版 ) JournalofJiangsuUniversity(MedicineEdition) Vol.28 No.6 Nov.2018 抑制中性粒细胞 PD L1 表达对脓毒症 T 淋巴细胞功能的影响 于篧 1, 孙辉 1, 柳益书 1, 戚欣欣 1, 刘璐 1 2, 孙炳伟 (1. 江苏大学医学院, 江苏镇江 ;2. 南京医科大学附属苏州医院烧伤与整形外科, 江苏苏州 ) [ 摘要 ] 目的 : 探讨脓毒症状态下中性粒细胞对 T 淋巴细胞功能的影响及相关机制 方法 : 采用脂多糖 (lipopo lysaccharide,lps) 刺激中性粒细胞, 模拟脓毒症状态下的体外模型 分离人外周血中性粒细胞并分离出淋巴细胞, 分为对照组 LPS 组 中性粒细胞组和 LPS+ 中性粒细胞组 4 个组 采用流式细胞术检测淋巴细胞凋亡 增殖 活性和炎症细胞因子浓度, 以及中性粒细胞表面程序性死亡配体 1(PD L1) 的表达 ; 流式细胞术检测使用不同浓度 PD L1 抗体后的淋巴细胞活性 结果 : 与对照组相比, 中性粒细胞组和 LPS+ 中性粒细胞组淋巴活性明显降低, 凋亡明显增加, 细胞增殖明显降低,CD69 和 CD71 表达百分比 平均荧光强度 γ 干扰素和 IL 2 的释放显著降低 (P 均 < 0.01); 与 LPS 组相比,LPS+ 中性粒细胞组能显著抑制淋巴细胞增殖 活化和细胞因子的释放 (P 均 <0.05); 与对照组相比,LPS 组 PD L1 表达明显增加 (P<0.05); 与对照组相比, 中 高浓度组淋巴细胞存活百分比明显增加 (P 均 <0.05), 且呈浓度依赖性 结论 : 脓毒症状态下中性粒细胞通过 PD L1/PD 1 通路途径抑制 T 淋巴细胞的功能 [ 关键词 ] 脓毒症 ; 中性粒细胞 ;T 淋巴细胞 ; 程序性死亡配体 1 [ 中图分类号 ] R393;R631 [ 文献标志码 ] A [ 文章编号 ] (2018) DOI: /j.isn y [ 引用格式 ] 于篧, 孙辉, 柳益书, 等. 抑制中性粒细胞 PD L1 表达对脓毒症 T 淋巴细胞功能的影响 [J]. 江苏大学学报 ( 医学版 ),2018,28(6): TheefectofsuppresingPD L1expresionofneutrophilson immunoactivityoftlymphocytesduringsepsis YUYao 1,SUNHui 1,LIUYi shu 1,QIXin xin 1,LIULu 1,SUNBing wei 2 (1.SchoolofMedicine,JiangsuUniversity,ZhenjiangJiangsu212013;2.DepartmentofBurnsandPlasticSurgery,SuzhouHospitalAfil iatedtonanjingmedicaluniversity,suzhoujiangsu215008,china) [Abstract] Objective:ToinvestigatetheefectofneutrophilsonTlymphocytesduringsepsisandits potentialmechanism.methods:sepsismodelinvitrowasestablishedbyco culturingtlymphocyteswith lipopolysaccharide(lps).neutrophilswereisolatedbydensitygradientcentrifugationandtlymphocytes wereisolatedbyanti CD3magneticbeadsfromhumanperipheralblood.Tlymphocytesweredividedinto 4groups,includingcontrolgroup,LPSgroup,neutrophilgroupandLPS+neutrophilgroup.Theapop tosis,proliferation,activationandsecretionoftlymphocyteswereasesedbyflowcytometry.phenotype programmeddeath ligand1(pd L1)onneutrophilwasdetectedincontrolgroupandLPSgroup.Anti PD L1antibodywasaddedintomixedcultureofneutrophilswithTcelsandtheapoptosisofTcelswere asesed.results:comparedwiththecontrolgroup,neutrophilgroupandlps + neutrophilgroup showedsignificantlylowerimmunoactivityoftlymphocytes,higherproportionofapoptosis,lowerexpres sionlevelsofcd69andcd71,aswelassecretionofinterferon γ(ifn γ)andil 2(alP<0.05). ComparedwithLPSgroup,theproliferationofTcels,secretionofIFN γandil 2weredecreasedin LPS+neutrophilgroup(alP<0.05).TheratioofPD L1inLPSgroupwassignificantlyhigherthan thatofthecontrolgroup(p<0.05).theproportionofviablelymphocytesincreasedwithhigherconcen trationsofpd L1monoclonalantibody(alP<0.05).Conclusion:Neutrophilssuppresedtheimmu [ 基金项目 ] 国家自然科学基金资助项目 ( ; ) [ 作者简介 ] 于篧 (1993 ), 女, 硕士研究生 ; 孙炳伟 ( 通讯作者 ), 主任医师, 教授, 博士生导师,E mail:sunbinwe@ hotmail.com

2 468 江苏大学学报 ( 医学版 ) 第 28 卷 noactivityoftlymphocytesthroughpd L1/PD 1pathwayduringsepsis. [Keywords] sepsis;neutrophil;tlymphocyte;programmeddeath ligand1 近期研究表明, 中性粒细胞不但可以诱导机体的先天性免疫应答, 还具有免疫抑制功能, 引发免疫耐受, 调节适应性免疫 [1] 在脓毒症的发展中, 部分感染状态下的中性粒细胞发挥免疫抑制功能, 通过抑制 T 淋巴细胞的增殖和活化, 减少淋巴细胞对病原菌的杀伤作用, 导致脓毒症死亡率增高 [2] 程序性死亡配体 1(programmeddeath ligand1, PD L1) 是一种免疫系统跨膜蛋白, 在肿瘤细胞中高表达, 并且与受体 PD 1 结合传递免疫抑制信号, 使得淋巴细胞处于 免疫失能 状态, 帮助肿瘤细胞逃逸 [3-4] 在脓毒症中中性粒细胞如何发挥免疫抑制功能, 其是否高表达 PD L1 以及是否通过 PD L1 途径调节获得性免疫尚不完全清楚 本研究通过建立模拟脓毒症的体外培养系统, 旨在了解和阐明中性粒细胞如何利用 PD L1 发挥免疫抑制, 并探讨中性粒细胞和淋巴细胞相互作用的机制 1 材料与方法 1.1 材料脂多糖 (lipopolysaccharide,lps, 美国 Sigma 公司 ), 使用前用 D Hank 平衡盐溶解 ( 美国 Gibco 公司 ), 母液浓度为 1mg/mL; 高糖 RPMI1640 培养基 小牛血清 ( 美国 Gibco 公司 );Ficol PaquePLUS( 美国 GE 公司 ); 红细胞裂解液,CD3e/CD28 功能抗体,PE 标记鼠抗人 CD274 抗体,PE 标记鼠抗人 CD69,PE cy7 标记鼠抗人 CD71,APC 标记鼠抗人 CD3 流式抗体,IFN γ 和 IL 2CBA 试剂盒, 细胞凋亡试剂盒均为美国 BD 公司产品 ;CelTrace TM CFSE 细胞增殖试剂盒, 抗 PD L1 功能阻断性单克隆抗体均为近岸科技有限公司产品 ;CO 2 培养箱 ( 美国 Thermo 公司 );FACSCantoⅡ 流式细胞仪 ( 美国 BD 公司 ); 其他试剂如果无特殊说明均为美国 Sigma 公司产品 1.2 人外周血中性粒细胞的分离招募健康成年男性志愿者, 采血前 2 周未服用任何药物 ; 采集其空腹肘部静脉血 8mL, 置于 4 个乙二胺四乙酸二钾抗凝管中, 每管加入 2mL3% 葡聚糖沉降红细胞 ;20min 后取上清液,500 g 于 15 离心 5min; 用 6mL 不含 Ca 2+ Mg 2+ 的 HBSS 溶液重悬 ; 将等体积的 Ficol PaquePLUS 溶液加入细胞悬液底部,500 g 于 15 离心 35min; 收集 PB MC 层用于淋巴细胞分离, 弃去多余上清液 ; 剩余细胞用红细胞裂解液孵育 1min 后离心 (500 g,15,5min), 即得中性粒细胞 1.3 人外周血淋巴细胞的分离将密度梯度离心后收集的 PBMC 层离心 (500 g,15,5min) 后计数 每 /L 个细胞加入 100μL 小鼠淋巴细胞阴选抗体包被孵育 20min; 加入 5mL 缓冲液,300 g,15, 离心 7min; 沉淀的细胞用与阴选抗体等体积的磁珠抗体重悬, 孵育 30 min 后转入无菌流式管并置于 BDIMagant 磁力架, 静置 6~8min 使磁珠完全吸附 淋巴细胞为阴性分选, 收集未被吸附的细胞, 并用 1mL 缓冲液清洗 3 次 ; 将收集的液体,500 g,15, 离心 5min 1.4 实验分组与细胞培养提前 12h 用 CD3e 功能抗体包被 96 孔 U 型培养板, 用 PBS 稀释抗体至 5μg/mL, 每孔 60μL; 接种细胞前, 将包板的液体吸出 将淋巴细胞分为 4 组, 对照组,LPS 组, 中性粒细胞组,LPS+ 中性粒细胞组 对照组 : 在未干预过的培养基中培养 ;LPS 组 : 用脂多糖 (1μg/mL) 与细胞共培养模拟体外脓毒症状态模型 ; 中性粒细胞组 : 按淋巴细胞 中性粒细胞为 1 2 比例共培养 ;LPS+ 中性粒细胞组 : 将 LPS 刺激过的中性粒细胞按淋巴细胞 中性粒细胞为 1 2 比例与淋巴细胞共培养 保持每孔细胞数量为 (1~5) 10 5 个, 每孔细胞体系为 200μL, 培养基中加入 CD28 功能抗体, 浓度为 2μg/mL, 放入孵箱中培养 1.5 检测指标 淋巴细胞凋亡的检测用 PBS 将 96 孔 U 型培养板中的细胞洗出, 离心 (300 g,15,7 min); 弃上清液, 加入 100μLPBS 溶液重悬 ; 加入 4 μlly 6G 荧光抗体避光室温孵育 20min; 加入 1mL PBS 重悬后离心 (300 g,15,7min), 弃上清液 按照细胞凋亡检测试剂盒说明书进行操作, 用流式细胞仪检测淋巴细胞凋亡率 每组至少重复 3 次 淋巴细胞增殖的检测操作同 1.5.1, 重悬 Ly 6G 荧光抗体染色后的细胞, 按照细胞增殖检测试剂盒说明书进行操作, 用流式细胞仪检测淋巴细胞的增殖代数 淋巴细胞活力的检测用 PBS 将板中的细胞洗出, 离心 (300 g,15,7min), 弃上清液 ; 加

3 第 6期 于篧 等 抑制中性粒细胞 PD L表达对脓毒症 T淋巴细胞功能的影响 469 入 μlpbs溶液重悬沉淀 分别加入 4μLCD3 培养体系中分别加入 5 5μg ml的 PD L单 CD6 9 CD7 荧光抗体避光室温孵育 2mi n 加入 抗 培养 2 4h PBS洗涤 离心后 3 g 5 7 mlpbs重悬后离心 3 g 5 7mi n 弃上清 mi n 弃上清液 加 μlpbs溶液重悬沉淀 加入 液 用 μlpbs重悬 用流式细胞仪检测淋巴细 胞活化比例和平均荧光强度 MFI 每组至少重复 4μLCD3荧光抗体避光室温孵育 2 mi n 加入 ml PBS重悬后离心 3 g 5 7mi n 弃上清液 3次 用 μlpbs重悬沉淀 重悬后的细胞按照细胞 4 淋巴细胞炎症因子浓度的检测 按照 CBA 凋亡检测试剂盒说明书进行操作 用流式细胞仪检 试剂盒操作说明书建立 I 2的标准品曲 γ和 I 测淋巴细胞凋亡率 每组实验至少重复 3次 线 吸取 2 4 4 8h96孔板中的上清液 按照 CBA操 6 统计学分析 作说明书进行操作 测量各组样品中淋巴细胞 I 2的浓度 每组至少重复 3次 γ和 I 5 中性粒细胞表面 PD L表达的检测 实验结果以均数 ±标准差 x 表示 数据采 珋±s 用S PS S 9 软件进行统计学分析 组间比较采用 将中 性粒细胞分为对照组和 LPS组 LPS组用 μg ml LPS模拟体外脓毒症状态 将中性粒细胞按 L密度接种至 24孔板 培养 2h 用 PBS将 2 6 组细 胞 从 培 养 板 中 洗 出 离 心 3 g 5 7 mi n 弃上清液 加入 μlpbs溶液重悬沉淀 加 单因素方差分析 进一步两两比较采用 LDS t检验 P 5为差异有统计学意义 2 结果 淋巴细胞凋亡比例变化 结果显示 4组淋巴细胞凋亡比例的差异有统 入 4μLCD27 4 荧光抗体避光室温孵育 2mi n 加 计学意义 F 6 P 5 与对照组相比 入 mlpbs重悬后离心 3 g 5 7mi n 弃 LPS组细胞凋亡无明显改变 t 6 3 P 5 中 上清液 用 μlpbs重悬沉淀 流式细胞仪检测 性粒细胞组 t 2 8 9 P 和中性粒细胞 表达 CD2 74的 中 性 粒 细 胞 比 例 每 组 至 少 重 复 LPS组 t 3 3 P 细胞凋亡比例显著增 3次 高 与 LPS组相比 中性粒细胞 LPS组细胞凋亡比 6 PD L单抗对于淋巴细胞活性影响的检测 例明显增加 t 3 4 2 P 由此说明 中性 淋巴细胞按照干预的 PD L单抗浓度的不同分 粒细胞可促进淋巴细胞的凋亡 减弱细胞活性 在脂 为低 中 高浓度 3组 在中性粒细胞与淋巴细胞的 多糖刺激作用下抑制作用更为显著 见图 P 对照组比较 b P 与 LPS组比较 图 各组淋巴细胞的凋亡率 2 淋巴细胞增殖变化 3 淋巴细胞活化指标变化 4组淋巴细胞增殖的差异具有统计学意义 F 结果显示 各组淋巴细胞的阳性率差异均具有 2 4 P 5 与对照组相比 LPS组淋巴细胞 统计学意义 CD6 9阳性率 F 5 4 6 CD6 9MFIF 增殖明显增加 t 4 24 P 5 中性粒细胞组 5 9 6 6 CD7 阳 性 率 F 5 6 6 CD7 MFIF 和 LPS 中性粒细胞组淋巴细胞增殖明显降低 t 4 2 P均 5 与对照组相比 LPS组淋巴细 8 3 P 5 与 LPS组和中性粒细胞组相比 胞活化指标 CD6 9 CD7 阳性率和 MFI明显升高 LPS 中 性 粒 细 胞 组 淋 巴 细 胞 增 殖 明 显 减 少 t 中性粒细胞组和 LPS 中性粒细胞组 CD6 9 CD7 8 48 4 23 P 5 由此说明 中性粒细胞能够 表达百分比明显降低 MFI明显下降 P均 5 抑制淋巴细胞增殖 阻止感染状态下的淋巴细胞活 与 LPS组相比 LPS 中性粒细胞组淋巴细胞活化 化 见图 2 比例明显降低 P均 5 由此说明 中性粒细

4 江苏大学学报 医学版 47 胞能抑制淋巴细胞的活化 在脂多糖刺激作用下抑 第2 8卷 制作用更加明显 见图 3 P 5 对照组比较 b P 5 与 LPS组比较 图 2 各组淋巴细胞增殖代数的改变 P 5 对照组比较 b P 5 与 LPS组比较 图 3 各组淋巴细胞活化程度的改变 4 淋巴细胞炎症因子浓度的比较 5 其中 LPS 中 因子浓度则明显降低 P均 结果显示 各组淋巴细胞炎症因子的浓度差异 性粒细胞组降低最明显 与 LPS组相比 LPS 中 4 7 F48h 均具有统计学意义 I γ F24h 28 性粒细胞组淋巴细胞细胞因子浓度明显减少 P均 89 6 I 2 F24h 2 6 3 F48h 29 6 P均 5 由此说明 脂多糖刺激状态下 中性粒细 5 与对照组相比 LPS组 I 2明显增 γ和 I 胞能明显抑制淋巴细胞炎症因子的释放 见图 4 加 中性粒细胞组和 LPS 中性粒细胞组淋巴细胞 P 5 对照组比较 b P 5 与 LPS组比较 图 4 各组淋巴细胞炎症因子释放的改变 5 中性粒细胞表面 PD L表达的比较 流式细胞术检测结果显示 LPS组中性粒细胞 CD27 4 PD L 的表达明显高于对照组 t 7 67 4 P 5 由此说明 在脂多 糖 刺 激 的 感 染 状 态 下 中性粒细胞 PD L表达升高 见图 5 阻断 PD L能恢复部分由中性粒细胞导致的淋巴 细胞活性抑制 PD L通路可能为中性粒细胞介导 的免疫抑制的关键通路之一 见图 6 3 讨论 中性粒细胞是人体固有免疫中最重要的免疫细 6 PD L单抗对淋巴细胞活性的恢复 与对照组相比 低浓度组淋巴细胞存活率差异 胞 5 生理情况下 未被激活的中性粒细胞在外周 无统计学意义 t 4 2 P 5 而中 高浓度组 血中巡逻 一旦细菌侵入发生感染 第一时间趋化到 淋巴细胞存活率均明显升高 t 6 4 6 4 6 P 感染部位 发挥抗菌抗感染作用 6 中性粒细胞具 5或 呈一定的浓度依赖性 由此说明 有异质性 可塑性 长期生存的同时具有调节获得性

5 第 6 期 于篧, 等. 抑制中性粒细胞 PD L1 表达对脓毒症 T 淋巴细胞功能的影响 471 图 5 流式细胞术检测各组中性粒细胞表面 CD274 的表达 a:p<0.05,b:p<0.01, 与对照组比较 图 6 各组淋巴细胞存活率 免疫的作用 [7-9] 已证实中性粒细胞与淋巴细胞间的相互作用包括免疫促进和免疫抑制, 前者涉及直接和间接的抗原递呈, 后者主要涉及抑制淋巴细胞激活和促进淋巴细胞凋亡两个方面 [10], 具体的机制尚未完全明确 本研究结果表明, 在脓毒症严重感染状态下中性粒细胞对淋巴细胞有免疫抑制的作用, 且发现阻断 PD L1 通路可以逆转免疫抑制状态 研究发现, 先天性免疫和获得性免疫系统影响着脓毒症的发生 发展和转归 [11] 脓毒症时的免疫 [12] 抑制状态致病情不断恶化, 目前研究表明脓毒症的严重程度与免疫细胞息息相关 本研究发现, 中性粒细胞有免疫抑制作用, 成为一个可能的脓毒症时免疫调节的靶点, 通过分析淋巴细胞凋亡 增殖 活化和细胞因子释放 4 个方面, 发现脓毒症状态下的中性粒细胞能促进淋巴细胞凋亡, 抑制淋巴细胞增殖 活化以及 IFN γ 和 IL 2 两种炎症因子的释放, 发挥免疫抑制作用, 调节脓毒症时的免疫微环境, 为脓毒症的免疫治疗提供可能 与其他调控脓毒症时淋巴细胞的研究相比, 本研究调控中性粒细胞所引起的对免疫稳态的改变远小于对淋巴细胞的调控, 因为中性粒细胞是一种终末细胞, 受到调节的中性粒细胞在外周血中存活时间短, 免疫治疗的不良反应少 近来研究发现,PD L1 和 PD 1 的抗体可以提高脓毒症小鼠的生存率, 阻断 PD L1 和 PD 1 信号通 路可增强淋巴细胞活性 减少淋巴细胞凋亡 促进淋巴细胞增殖, 同时增加淋巴细胞因子的释放, 使淋巴细胞的功能增强 [3] 所以阻断 PD L1 和 PD 1 信号通路可能成为改善脓毒症患者生存率的有效治疗措施 本研究发现, 与淋巴细胞相互作用时, 中性粒细胞发挥免疫抑制作用, 且在脂多糖刺激后免疫抑制 [13] 作用更加明显, 与其他研究相一致 此外还发现, 脂多糖刺激后的中性粒细胞高表达 PD L1, 且加入 PD L1 单克隆抗体阻断部分 PD L1/PD 1 信号通路可使淋巴细胞活性增加, 并且效果随着单抗的浓度增加而增强, 与他人研究结果相一致 [14], 因此中性粒细胞很有可能在脓毒症中通过 PD L1/PD 1 信号抑制淋巴细胞作用 本实验中尝试使用 PD L1 的抗体来阻断该信号通路, 发现淋巴细胞的活性得到恢复, 凋亡数量减少, 由此推断, 脓毒症晚期导致的中性粒细胞耐受性因素中涉及 PD L1 和 PD 1 的相互作用, 但验证仅涉及凋亡这一方面且淋巴细胞活性仅得到部分恢复, 完全恢复可能还涉及其他机制, 此外关于淋巴细胞其他功能的恢复, 还有待后续研究 综上所述, 脓毒症状态下中性粒细胞抑制淋巴细胞的活性, 包括增加凋亡 抑制增殖 减少活化和抑制炎症因子释放 ; 感染状态下的中性粒细胞高表达 PD L1 分子,PD L1 抗体通过阻断 PD L1/PD 1 信号通路, 可以恢复中性粒细胞导致的淋巴细胞免疫抑制 [ 参考文献 ] [1] S negof,alves FilhoJC,CunhaFQ.Targetingneutro philsinsepsis[j].expertrevclinimmunol,2014,10 (8): [2] ZhangF,LiuAL,GaoS,etal.Neutrophildysfunction insepsis[j].chinmedj(engl),2016,129(22): [3] LiuQ,LiCS.Programmedceldeath 1/Programmed

6 472 江苏大学学报 ( 医学版 ) 第 28 卷 death ligand1pathway:anew targetforsepsis[j]. ChinMedJ(Engl),2017,130(8): [4] PatilNK,GuoY,LuanL,etal.Targetingimmunecel checkpointsduringsepsis[j].intjmolsci,2017,18 (11).pi:E2413. [5] ScotDA,KrausJ.Neutrophilsinperiodontalinflam mation[j].frontoralbiol,2012,15: [6] LeliefeldPH,WeselsCM,LeenenLP,etal.Therole ofneutrophilsinimmunedysfunctionduringseverein flammation[j].critcare,2016,20:73. [7] deoliveiras,rosowskiee,hutenlochera.neutro philmigrationininfectionandwoundrepair:goingfor wardinreverse[j].natrevimmunol,2016,16(6): [8] ChuD,DongX,ShiX,etal.Neutrophil baseddrug deliverysystem[j]. AdvMater, 2018, 30(22): e [9] AmulicB,CazaletC,HayesGL,etal.Neutrophil function:from mechanismstodisease[j].annurev Immunol,2012,30: [10] LeliefeldPH,KoendermanL,PilayJ.Howneutrophils shapeadaptiveimmuneresponses[j].frontimmunol, 2015,6:471. [11] DelanoMJ,WardPA.Sepsis inducedimmunedysfunc tion:canimmunetherapiesreducemortality?[j].j ClinInvest,2016,126(1): [12] HutchinsNA,UnsingerJ,HotchkisRS,etal.The new normal: immunomodulatoryagentsagainstsepsis immunesuppresion[j].trendsmolmed,2014,20 (4): [13] KarunarathneDS,Horne DebetsJM,HuangJX,etal. Programmeddeath 1ligand2 mediatedregulationofthe PD L1toPD 1axisisesentialforestablishingCD4 + T celimmunity[j].immunity,2016,45(2): [14] LuoQ,HuangZ,YeJ,etal.PD L1 expresingneu trophilsasanovelindicatortoasesdiseaseactivityand severityofsystemiclupuserythematosus[j].arthritis ResTher,2016,18:47. [ 收稿日期 ] [ 编辑 ] 刘星星 ( 上接第 466 页 ) activeresponseandhealingpotential[j].biochemphar macol,2010,79(2): [17] BenowitzLI,RoutenbergA.GAP 43:anintrinsicde terminantofneuronaldevelopmentandplasticity[j]. TrendsNeurosci,1997,20(2): [18] CaoS,DuJ,LvY,etal.PAX3inhibitsβ Tubulin Ⅲ expresionandneuronaldiferentiationofneuralstemcel [J].Biochem BiophysResCommun,2017,485(2): [19] DeberCM,ReynoldsSJ.Centralnervoussystem mye lin:structure,function,andpathology[j].clinbio chem,1991,24(2): [20] TakizawaT,GudlaPR,GuoL,etal.Alele specific nuclearpositioningofthemonoalelicalyexpresedastro cytemarkergfap[j].genesdev,2008,22(4): [21] RauckBM,NovosatTL,OudegaM,etal.Biocompati bilityofacoacervate basedcontroledreleasesystem for proteindeliverytotheinjuredspinalcord[j].actabio materialia,2015,11(1): [22] JungHY,JinJ,LeeKB,etal.Sonichedgehog(SHH) andglioblastoma 2(Gli 2) expresionsareasociated withpoorjaundice freesurvivalinbiliaryatresia[j].j PediatrSurg,2015,50(3): [23] HuangZ,ZhenY,WeiY,etal.Shhpromotessweat glandcelmaturationinthree dimensionalculture[j]. CelTisueBank,2016,17(2): [ 收稿日期 ] [ 编辑 ] 何承志

第一章 图 1 1 传染病的特征 9 T h1 T h2 细胞调节机制简图 正调节 负调节 细胞因子与细菌的相互作用机制目前尚未完全明了 有实验表明 细胞因子与细菌之间 存在有互利和互抑双重效应 例如 T N Fα 和 IFNγ 可抑制放线菌的生长而 IL 6 的作用则 反之 IL 1 2 和 GM CSF 可促进某些致病性大肠杆菌生长而 IL 1ra 可抑制之 研究表 明 某些致病性大肠杆菌有与

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