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1 欢迎同学们参加 组织学与胚胎学的学习 北京大学基础医学院 人体解剖学与组织胚胎学系

2 欢迎同学们来学习组织学与胚胎学 教材 实习图谱 实习安排 实习作业 ( 实习时间从 11 月 12 号开始 ), 国庆节放假期间没课 网址 : 北医主页 - 相关链接 - 医学部课程中心 - 课程网站名称 --- 组织学与胚胎学

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11 第一章 绪论

12 第一章绪论 一 组织学与胚胎学的研究内容 二 组织学与胚胎学的研究方法 三 组织学与胚胎学学习方法

13 一 组织学与胚胎学的研究内容 组织学 (histology) 与胚胎学 (embryology) 是医学课程中一门基础学科 组织学 : 是借助于显微镜重点研究人体微细结构与功能 胚胎学 : 是重点研究人体结构发育分化程序和生长变化的规律性

14 研究对象包括 : 细胞 (cell) 是人体形态结构的基本单位 是一切生物新陈代谢 生长发育 繁殖分化的形态学基础组织 (tissue) 一些形态相似 功能相近的细胞和细胞外基质构成 人体有四种基本组织 : 上皮组织 结缔组织 肌组织 神经组织 器官和系统 (organ and system) 四种基本组织以不同的种类 数量和方式组合形成器官 若干功能相关的器官构成系统

15 二 组织学与胚胎学的研究方法 组织学与胚胎学的研究主要涉及两方面 : 显微镜和标本 显微镜包括 : 光学显微镜 (light microscope,lm): 简称光镜最高分辨率为 0.2µm, 放大倍数约为几十倍 - 一千倍 电子显微镜 (electron microscope,em): 简称电镜最高分辨率为 0.2nm, 放大倍数几千倍 - 百万倍 计量单位 : 1µm( 微米 )=10-3 mm( 毫米 ) 1nm( 纳米 )=10-3 µm( 微米 )

16 光学显微镜技术 电子显微镜技术 其他技术

17 ( 一 ) 光学显微镜技术 应用普通光学显微镜观察组织标本 ( 切片 ) 是最常用的方法

18 光学显微镜最高分辨率为 0.2µm, 放大倍数约为 1000 倍 ;

19 共聚焦激光扫描显微镜 (confocal laser scanning microscope,clsm) 是 20 世纪 80 年代初研制成功的一种高光敏度 高分辨率的新型生物学仪器 功能 : 可以检测 识别组织或细胞内微细结构及其变化 细胞的受体移动 膜电位变化 酶活性以及物质转运, 并以激光对细胞及染色体进行切割 分离 筛选等

20 标本的制作 : 包括取材 固定 脱水 包埋 切片 染色等几步骤 取材 固定 : 为使所获材料的形态结构接近活体状态, 故取材要迅速, 得到的材料应及时用固定液 (fixative) 固定 (fixation) 常用固定液为甲醛 乙醇等, 它们可以使蛋白质迅速凝固, 防止其分解和变性 脱水 包埋 切片 : 为使组织与包埋剂相融合, 所获材料需经乙醇或丙酮脱水 ; 为便于将材料切成薄片, 需将其包埋在石蜡或火棉胶内, 然后再用切片机将其切成厚 5~ 10µm 的薄片

21 染色 : 切片需经染色后方可在显微镜下观察 苏木精 (hematoxylin) 伊红 (eosin) 染色 ( 简称 HE): 苏木精 : 是蓝色的碱性染料, 可将细胞核和细胞内的某些 物质染成蓝紫色 ; 伊红 : 是红色的酸性染料, 可将细胞质染成粉红色 基本概念 : 对碱性染料亲和力强的称为嗜碱性 (basophilia); 对酸性染料亲和力强的称为嗜酸性 (acidophilia); 对两种染料亲和力都不强称中性 (neutrophilia)

22 甲苯胺蓝 (toluidine) 染色技术 甲苯胺蓝 : 是蓝色的碱性染料 将细胞内 外的某些物质染成紫红色 这种染色现象称异染性 (metachromasia, 通常染料将组织或细胞染成染料自身的颜色, 如果被染结构呈现出与染料颜色不同的颜色, 这种改变染料本身颜色的现象称为异染性 )

23 硝酸银 氯化金 : 硝酸银 氯化金染色技术 硝酸银 氯化金颗粒可附着在细胞结构的表面而呈棕黑色或棕黄色 银染中, 有些组织结构可直接使硝酸银还原而显色, 称为亲银性 (argentaffin) 银染中, 有些组织结构不能直接使硝酸银还原, 必须加入还原剂方能显色, 称为嗜银性 (argyrophilia)

24 ( 二 ) 电子显微镜技术 根据分辨率 放大倍数以及功能等不同可分为两种 : 透射电子显微镜, 又称透射电镜或电镜 ; 扫描电子显微镜, 又称扫描电镜

25 透射电子显微镜 (transmission electron microscope ) 最高分辨率为 0.2nm, 放大倍数几万倍到几十万倍 比光镜高 1000 倍 因此, 电镜能观察到细胞的更微细结构 透射电镜观察的组织须用戍二醛或锇酸固定, 树脂包埋, 切厚 50~80nm 超薄切片, 经铅盐等重金属盐染色后镜下观察 电镜下所见结构称超微结构 (ultrastructure) 超微结构被金属所染部位, 在荧光屏上显得暗, 图象较黑, 称为电子密度高 ; 反之则称为电子密度低

26 扫描电子显微镜技术 (scanning electron microscope) 扫描电子显微镜技术要观察的组织不需制成切片 固定后的标本, 在其表面喷镀金, 在荧光屏上即可显示细胞或组织表面的立体结构, 如细胞表面的突起 微绒毛 纤毛等

27 ( 三 ) 其他技术 冷冻切片技术 免疫组织化学技术 原位杂交技术 体外培养技术 其他标本制作技术

28 冷冻切片技术 为避免细胞 组织内的某些物质不被固定液所破坏, 又要使组织变硬, 便于将其切成薄片, 同时又要快速得到切片, 可将获取的新鲜组织立即投入液氮 (-196 ) 内快速冻结, 然后用恒冷箱切片机 (cryostat) 制成冷冻切片 (frozen section) 冷冻切片技术 (frozen section method) 制片迅速, 细胞内酶活性保存较好, 常用于酶组织化学染色

29 免疫组织化学技术 免疫组织化学 (immunohistochemistry) 是利用抗原 抗体特异性结合, 检测组织中多肽 蛋白质等物质 该方法先将蛋白质或多肽作为抗原, 注入动物体内, 使其产生相应的抗体 从血清中提取该抗体, 并用荧光染料 铁蛋白或辣根过氧化物酶等标记 用标记抗体处理切片 ; 标记抗体与切片上相应抗原特异性结合 切片中有标记物呈现的部位, 即显示该物质在组织中的分布

30 原位杂交技术 原位杂交术 (in situ hybridization) 即核酸分子杂交组织化学技术 应用 : 用于检测基因片段及转录水平基因活性 (mrna) 原理 : 使用带有标记物的已知碱基顺序的核酸探针 ( 标记的 RNA 和 DNA 探针 ), 与细胞内待测的 DNA 和 RNA 形成特定的双链分子, 即杂交 通过对标记物的显示和检测获知待测核酸及相对量 常用标记物 : 放射性核素 ( 35 S 32 P 3 H), 经放射自显影术处理后观察 ; 非放射性地高辛等, 经免疫组织化学处理后观察

31 体外培养细胞, 可人为的给以各种不同条件, 研究它们对细胞的分裂 分化 结构和功能等的影响, 并可用显微电影等记录细胞的动态变化 体外培养技术 将人体或动物的活细胞 活组织在体外培养, 称细胞或组织培养 (cell or tissue culture) 细胞在体外生存, 必需具备适宜的条件, 包括营养 O 2 和 CO 2 比例 渗透压 ph 值 温度和湿度

32 其他组织制片技术 涂片 (smear): 血细胞 分离细胞或脱落细胞可直接涂在玻片上 ; 铺片 : 机体内的疏松结缔组织可撕成薄片铺在玻片上 ; 磨片 : 牙和骨等坚硬组织可磨成薄片 ; 涂片 铺片 磨片

33 三 组织学与胚胎学学习方法 理论和实验密切联系 形态与机能的结合 断面和立体的关系 动态变化的概念

34 理论和实验密切联系 组织学与胚胎学是一门以形态结构为主的学科, 在实习课中通过观察 分析 比较, 然后再记忆 所以学习时要重视实习课这个重要环节

35 形态与机能的结合 形态结构总是与一定的机能密切相关 神经细胞有细长突起的结构特点, 以传递神经冲动 ; 红细胞含丰富的血红蛋白, 则具有结合和携带氧的功能 ; 腺细胞具有丰富的内质网和发达的高尔基复合体, 能合成分泌物 总之, 结构与功能有着密切的联系

36 断面和立体的关系 在显微镜下观察的组织切片, 所观察到的形态都是结构断面的形态 一个细胞由于所切的部位不同, 在有的断面可见细胞核, 在有的断面没有细胞核 又如身体内许多管状的器官, 由于所切方位不同, 往往呈完全不同的形态, 因此在观察切片上的形态结构时, 要考虑断面和立体的关系

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40 动态变化的概念 从受精卵到胎儿娩出, 胚胎经过一系列的变化, 这种变化是个连续过程 在学习人体胚胎学时一定要把握住每一过程的变化, 包括时间 地点 相互关系, 从而建立起动态的概念

41 绪论小结 : 1.HE 染色 2. 异染性

42 第二章细胞 (cell) 形态各异 大小不等 共同结构特点 : 均由细胞膜 细胞质 细胞核三部分组成

43 ( 一 ) 细胞膜的结构与功能 1 细胞膜 (cell membrane) 的结构 : 是包在细胞表面的一层薄膜, 它是细胞质的一部分, 因而又称质膜 (plasma membrane), 细胞膜的分子结构 : 对于细胞膜的分子结构, 有许多学说, 但目前较为公认的是 液态镶嵌模型 (fluid-mosaic model) 学说 此学说认为细胞膜是由脂双层和膜蛋白构成 细胞膜的外表面有细胞衣

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45 脂双层 : 由磷脂 糖脂和胆固醇组成 磷脂 : 为兼性分子, 具有极性头和尾 极性头朝向膜表面, 为 ( 亲水性 ) 水溶性 ; 尾朝向膜中央, 为疏水性 磷脂分子尾尾相对形成弱键, 使脂双层相互粘附 糖脂 : 位于单位膜外层, 其极性碳氢残基从脂双层外层伸向细胞外间隙形成细胞衣的一部分 胆固醇 : 位于脂双层之间, 可调节膜的流动性和稳定性

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47 膜蛋白 : 具有整合蛋白和外周蛋白两种类型 整合蛋白 : 位于质膜内 外表面, 不同程度地嵌入磷脂双层内 有的整合蛋白跨过膜, 称跨膜蛋白, 又称内在蛋白 其表面具有亲水性和疏水性的氨基酸基团 亲水性氨基酸位于质膜内 外表面 疏水性氨基酸嵌入磷脂双层内 外周蛋白 : 又称外在蛋白 分布于质膜内 外表面, 但多位于细胞质一侧, 不插入两层磷脂之间 仅为亲水性的氨基酸

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49 细胞衣 (cell coat): 或称糖衣 (glycucalyx) 主要为寡糖链 只位于细胞膜外表面 寡糖链与磷脂双层分子和蛋白质结合形成糖脂或糖蛋白 具有使细胞粘附于细胞外基质等功能

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51 2 细胞膜的功能 : 是细胞的界膜, 可维持细胞的一定形态, 对细胞起保护作用 若膜被严重损坏, 可导致细胞死亡 被动扩散 : 通过细胞膜, 细胞可以从其周围环境中摄取营养物质和氧, 排出代谢产物, 进行细胞内 外的物质交换等 主动转运 : 能选择性使某些小分子物质透过, 而限制另一些物质通过, 有的物质需通过膜内嵌入的整合蛋白进行主动转运, 以保持细胞内物质的稳定 胞吞作用与胞吐作用 : 这是大分子物质通过细胞膜的方式

52 胞吞作用 (endocytosis): 外界的大分子物质进入细胞时, 首先附着在细胞膜外表面, 此处的细胞膜凹陷入细胞内, 将该物质包围形成小泡, 最后小泡与细胞膜断离而进入细胞内 如果是固态物质, 则称为吞噬作用 (phagocytosis), 吞入的小泡称吞噬体 ; 如果是液态物质, 则称为吞饮作用 (pinocytosis), 其吞入的小泡称吞饮小泡 胞吐作用 (exocytosis): 大分子物质由细胞内排到细胞外时, 被排出的物质首先在细胞内被单位膜包裹, 形成小泡 ; 小泡渐与细胞膜相接触, 并在接触处出现小孔, 该物质经小孔排到细胞外

53 ( 二 ) 细胞质 是细胞新陈代谢与物质合成的重要场所 包括细胞液 细胞器 细胞骨架和包涵物

54 细胞器 (organelles) 定义 : 分布在细胞质内 具有特定形态与功能的结构称为细胞器 组成 : 包括线粒体 核糖体 内质网 高尔基复合体 溶酶体 微体 中心体

55 线粒体 (mitochondria) 双层单位膜形成的椭圆形小体 功能 : 形成高能磷酸化合物 为细胞活动提供能量 三磷酸腺苷 (ATP)

56 核糖体 (ribosome), 又称核蛋白体 化学组成 : 核糖核酸 (rrna) 蛋白质 染色特性 : 嗜碱性 存在形式 : 游离核糖体 : 游离于细胞基质中 附着核糖体 : 附着于内质网表面 功能 : 合成蛋白质

57 内质网 (endoplasmic reticulum) 分类 : 根据外表面有无核糖体附着, 可将内质网分为粗面内质网与滑面内质网

58 粗面内质网 (rough endoplasmic reticulum,rer) 功能 : 合成蛋白质 染色特性 : 嗜碱性

59 高尔基复合体 (Golgi complex) 功能 : 对粗面内质网合成的蛋白质进行加工

60 溶酶体 (lysosome) 细胞内起消化作用的细胞器 内含有多种水解酶 分类 : 初级溶酶体次级溶酶体残余体

61 ( 三 ) 细胞核 (cell nucleus) 细胞核的一般特点 : 数目 : 除成熟红细胞外, 人体所有的细胞都有细胞核 ; 多数细胞只有一个细胞核, 但也有 2~ 多个, 如骨骼肌细胞可有数百个 位置 : 一般位于细胞中央或基底部 ; 也有位于周边的, 如骨骼肌细胞和脂肪细胞 形态 : 形态大小一般与细胞的形态大小相适应 圆形 立方形和星形细胞的细胞核, 多为圆形 ; 柱状 梭形细胞的细胞核, 多为椭圆形或长杆状等

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