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枉别
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仅供科研使用全 DNA 萃取试剂盒说明书厂商 : 瑞基海洋生物科技股份有限公司电话 : 886-4-2463-9869 邮箱 :

1 仅供科研使用全 DNA 萃取试剂盒说明书厂商 : 瑞基海洋生物科技股份有限公司电话 : 邮箱 : sales@genereach.com 地址 :407 台湾台中中部科学园区科园二路 19 号网址 : /10

2 目录标识... 1 试剂盒组分... 2 A. 试剂... 2 B. 样品盘 & 套管 ( 一次性 )... 3 存储和运输... 3 需自备材料及设备... 3 简述... 4 预期用途... 4 注意事项... 5 核酸萃取步骤... 6 A. taco TM 标签的使用... 6 B. 操作程序... 7 产品局限故障排除附录 I A. 样本制备 i

3 B. 白细胞层的制备附录 II A. DNA 的储存 B. DNA 的定量 C. DNA 的纯度 ii

4 标识生产日期厂商批号产品编码请勿重复使用 1

5 试剂盒组分 A. 试剂 taco TM 全 DNA 萃取试剂产品编码 : atc-dna 反应数 : 320 试剂名称体积数量磁珠液 20 ml 1 瓶裂解液 180 ml 1 瓶清洗液 A 270 ml 2 瓶清洗液 B 1 40 ml 2 瓶洗脱液 55 ml 1 瓶说明书 1 份 * 试剂可能有刺激性 1 清洗液 B 在使用之前需加 230ml 95% 的乙醇加完乙醇之后要作上标记 B. 样品盘 & 套管 ( 一次性 ) 产品名称数量 (pcs) 产品编码 96 孔萃取样品盘 20 搅拌套管 40 atcp taco TM 标签 1 * 样品盘和套管请勿重复使用 2

6 储存和运输所有的试剂应该室温密封保存, 置于阴凉干燥处, 尽量在室温下运输有效期标注在试剂的盒子上和各种单一组分的的标签上, 请勿使用任何过期的试剂任何偏离说明书的操作都可能会影响试剂的效能, 因此实验人员必须对其进行验证需自备材料及设备 taco TM 自动核酸萃取系统 (taco TM ) 一步式移液管 ( 选配 ) 一次性手套离心管移液枪和带滤芯枪头 (p1000, p200) 95% 乙醇 3

7 简述 taco TM 全 DNA 萃取试剂盒适用于 taco TM 自动核酸萃取系统基于磁珠分离技术, 均质的样品细胞被裂解, 再通过包覆二氧化硅的磁珠来吸附核酸然后利用清洗液去除杂质, 利用洗脱液将核酸从磁珠上洗脱下来, 接着是一系列的清洗步骤此试剂可萃取全血和白细胞中的全 DNA, 其他的样本类型必须经过使用者的验证注 : 仅供科研使用 ; 本试剂不能用于任何动物或人的治疗或诊断预期用途 taco TM 全 DNA 萃取试剂盒用来萃取全血和白细胞层中的全 DNA taco TM 全 DNA 萃取试剂仅适用于 taco TM 自动核酸萃取系统本产品仅供专业人员使用, 例如熟悉分子生物技术的训练有素的实验员 4

8 注意事项拿到试剂之后, 请检查试剂组分是否有损坏若有损坏, 请联系瑞基海洋生物科技股份有限公司或当地经销商请不要使用已损坏的试剂, 以免对实验结果的准确性造成影响枪头请一次性使用, 重复使用会导致交叉污染处理化学药品时, 请穿戴实验服, 佩戴一次性手套及护目镜若手套已污染, 请丢弃不同批次的组分请勿混合使用避免试剂遭受微生物污染为了使感染的风险最小化, 我们建议在生物安全操作台下操作, 直至样本溶解本试剂只供专业人员使用废物处置请遵守当地法律 5

9 核酸萃取试剂操作步骤 taco TM 标签的使用方便起见, 您可以将 taco TM 标签贴在试剂瓶顶上和 96 孔萃取反应盘的边缘, 以避免人为的失误 a. taco TM 标签反应盘标签 : 将标签贴在 96 孔萃取反应盘的边缘试剂瓶标签 : 将标签贴在试剂瓶顶上 b. 缩写定义 LB 裂解缓冲液 (Lysis Buffer) M 磁珠 (Magnetic Bead) WA 清洗液 A(Washing Buffer A) WAM 清洗液 A+ 磁珠 (Washing Buffer A + Magnetic Bead) WB 清洗液 B(Washing Buffer B) E 洗脱液 (Eluting Buffer) 6

10 B. 操作程序 a. 根据表 1 在室温下 (16-30 C) 往 96 孔萃取反应盘添加试剂 Table 1. 试剂添加 Step 试剂 1 添加 400 l 裂解液到列 #1 (#7) 2 添加 750 l 清洗液 A 到列 #2 (#8) 3 添加 750 l 清洗液 A 到列 #3 (#9) 4 添加 750 l 清洗液 B 1 到列 #4 (#10) 5 添加 750 l 清洗液 B 到列 #5 (#11) 6 添加 50 l 洗脱液到列 #6 (#12) 2 7 添加 50 l 磁珠液到列 #2 (#8) 1 清洗液 B 在第一次使用前需加入 230ml 95% 乙醇 2 磁珠液在制备前需重悬 b. 用移液枪 (p1000) 吸取匀质的样本到列 #1(#7) ( 见样本制备, 附录 I) 7

11 c. 开启 taco TM 的进样门并安装已添加了试剂和样本的 96 孔萃取反应盘将 96 孔萃取反应盘完全推入托盘的底部, 确保切点在右上角切点 8

12 d. 安装搅拌套管, 抬起搅拌套管的钩子, 扣住卯眼 ( 见以下示意图 ). 钩子卯眼 e. 按下 taco TM 的 Door 按钮, 关闭进样门, 然后按下 Start 按钮 f. 萃取完成后, 第一时间丢弃搅拌套管 g. 取出 96 孔萃取反应盘, 接着按下 Reset 按钮 h. 将全 DNA 从列 #6 或 #12 转移到新的离心管以供进一步使用 9

13 ( 见 DNA 的纯度, 附录 II ) i. 强烈建议使用新鲜提取的核酸来作为下游的应用, 例如核酸扩增若要长期储存核酸, 则必须保存在 -80 C ( 见核酸的储存, 附录 II). * 请勿重复使用萃取反应盘和套管注 : 任何偏离说明书的操作都可能降低核酸萃取的回收率 10

14 产品局限通过分离全血和白细胞层中的基因组 DNA, 验证了系统性能对于骨髓培养的细胞血浆和血清中的全 DNA, 还有全 RNA 的分离, 都没有经过验证如果要利用 taco TM 全 DNA 萃取试剂来萃取其他特殊样本, 使用者必须进行验证本试剂和塑料部件不能用于任何动物或人的治疗或诊断 11

15 故障排除解释与建议 DNA 低产出率 (a) 磁珠液没有充分重悬程序启动前确保磁珠液充分重悬首次使用前涡旋震动至少 5 秒, 随后使用之前应该轻微搅动 (b) 清洗液 B 没有添加酒精确保清洗液 B 加入了准确量的酒精 ; 密封试剂瓶以防酒精蒸发使用清洗液 B 需加入 230ml 95% 的酒精 ; 利用正确的试剂重复萃取的过程 (c) 试剂添加顺序错误换一个新的 96 孔萃取反应盘重新添加试剂确保试剂添加在正确的孔位, 换取新的样本重复萃取过程 12

16 解释与建议 (d) 全血样品白细胞含量低增加全血的量并保持获取的白细胞层的体积恒定 (e) 样品质量差建议使用新鲜样品, 质量低下的样品可能会影响实验结果 (f) 没有安装搅拌套管联系瑞基海洋生物科技股份有限公司或当地经销商以获得帮助 (g) 不合适的操作环境操作温度会影响回收率, 请确保操作温度在室温以下 (16-30 C ) (h) 使用非推荐的萃取设备使用非推荐萃取设备会影响试剂的萃取效能, 强烈建议使用 taco TM 萃取系统 13

17 解释与建议下游应用时 DNA 的效能低 (a) 萃取后 DNA 的体积量小使用 100 l 的洗脱液重新萃取新的样本 (b) DNA 含量不足利用分光光度计测定 DNA 在 260nm 处的吸光度, 从而进行定量 ( 见 DNA 的定量, 附录 II ) (c) DNA 含量过高过量的 DNA 会抑制一些酶的反应利用分光光度计测定 DNA 在 260nm 处的吸光度, 从而进行定量 ( 见核酸的定量, 附录 II ) 解释与建议 A260/A280 比率低 14

18 (a) 260nm 和 280nm 处的吸光值没有减去 320nm 处的吸光值 taco TM DNA/RNA 萃取试剂为了纠正洗脱液中残余磁珠的影响, 260nm 和 280nm 处的吸光值需减去 320nm 处的吸光值 15

19 附录 I A. 样品制备 ( 全血和白细胞层 ) 往 96 孔萃取反应盘的列 #1(#7) 加入 200 l 全血或 150 l 白细胞层和 400 l 的裂解液 B. 白细胞层的制备一次性采血管中装有约 10ml 全血, 室温下 3000 x g 离心 10 分钟离心后, 容易看到全血分成了三层 : 最上面一层是血浆 ; 中间一层是白细胞层 ; 最底下一层包含浓缩的红细胞小心地将中间一层转移到新的离心管, 它可能会含有少量的血浆和红细胞, 先吸走最上面的血浆层有助于获取白细胞层 16

20 附录 II A. DNA 的储存萃取后的 DNA 在 2-8 C 可以保存 24 小时,-20 C 可长期保存 B. DNA 的定量 DNA 的浓度由分光光度计在 260nm 处的吸光度 (A 260) 来确定使用洗脱液作为空白品来校正分光光度计如果纯化的 DNA 在定量前需要稀释, 那么洗脱液也应该稀释, 并且相同的稀释系数必须应用到计算当中收集纯化的 DNA 在 260nm 和 280nm 处的吸光值, 吸光值应该在 0.1 到 1.0 之间每单位的 260nm 吸光值代表 50 g/ml 的 DNA, 260nm 和 280nm 吸光值的比值近似为 DNA 的纯度 ( 见 DNA 的纯度 ) 磁珠因素的移除可能会影响 A 260 的读值, 但是不会影响后续 DNA 应用的效能 *DNA 样品的浓度 = 50 g/ ml (A 260 -A 320) 稀释系数 * 核酸总量 = 浓度样品体积 (ml) 17

21 C. 核酸的纯度纯度由修正后的 A 260 和 A 280 的比值决定, 即 (A 260-A 320) / (A 280-A 320) 扣除 A 320 是为了消除洗脱液中残留磁珠的影响若比值在 1.6 到 2.0 之间, 则表明 DNA 纯度比较高 C 2010 GeneReach Biotechnology Corporation. All rights reserved. 仅供科研使用不适用于任何人或动物的诊断或治疗 18

Qubit-DNA RNA 总浓度测定 dsdna BR Assay Kits 各试剂加样量 : Buffer 标准 1 标准 2 样品试剂 ( 荧光染色 ) 总量 ( 溶液体积 ) 50 或 250ml 1 或 5ml 1 或 5ml 待测 250µl 或 1.25ml 原始浓度未知 0 ng

Qubit-DNA RNA 总浓度测定 dsdna BR Assay Kits 各试剂加样量 : 总量 ( 溶液体积 ) 50 或 250ml 1 或 5ml 1 或 5ml 待测 250µl 或 1.25ml 原始浓度未知 0 ng/μl 100 ng/μl 待测 200 测定时要求浓度未知 0 ng/μl 5000ng/ml 0~5000 ng/ml 1 备注 -Buffer:Qubit dsdna