仪器概述 珀金埃尔默 (PerkinElmer) 是世界上最大的分析仪器生产制造商, 是一家全球领先的专注于提高人类健康和环境安全的公司 PerkinElmer 是分析仪器行业无可争议的技术领先和主导者, 常年保持全球顶尖仪器公司排名前五位,2014 年公司销售额超 22 亿美元 PerkinElm

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1 为为您提供 您 提 供多模式检测 多模式检测 完 整完整解决方案 解 决 方 案 HUMAN HEALTH ENVIRONMENTAL 从多标记到无标记检测 从分子评价到细胞成像 从多标记到无标记检测 从靶点研究到表型分析 从分子评价到细胞成像 多方法学正交相互验证 从靶点研究到表型分析 多方法学正交相互验证

2 仪器概述 珀金埃尔默 (PerkinElmer) 是世界上最大的分析仪器生产制造商, 是一家全球领先的专注于提高人类健康和环境安全的公司 PerkinElmer 是分析仪器行业无可争议的技术领先和主导者, 常年保持全球顶尖仪器公司排名前五位,2014 年公司销售额超 22 亿美元 PerkinElmer 主要提供与光学技术相关各种检测仪器和解决方案 全球超过 7700 名员工的团队为客户提供无与伦比的体验 1996 年 PerkinElmer 推出了全球第一台多功能酶标仪 VICTOR, 奠定了 PerkinElmer 在多模式检测领域的领导者地位 本世纪初, 全球药物研发进入高通量筛选时代,PerkinElmer 又推出两款适合高通量药物筛选的检测利器 : 一款是高灵敏度 高速度 高通量 且集灵活性为一体的微孔板检测仪 EnVision, 另一款是基于超低温 超高灵敏度 CCD 相机整板成像检测的 ViewLux uhts 微孔板成像仪,EnVision 至今仍是药物研发领域的金标准 在多模式检测领域,PerkinElmer 从来没有停止研发和创新的脚步,2008 推出稳定更高 灵活易用的升级版 VICTOR X 多标记微孔板检测仪 ;2009 年推出高精度四光栅系统的多模式检测仪器 EnSpire;2011 年将非标记检测技术整合到 EnSpire 多模式检测系统中 ; 同年成功收购 Caliper Life Sciences 公司, 并将其基于毛细管电泳和微流控技术的酶学研究利器 EZ Reader 纳入多模式检测产品线, 并推出第二代升级版 EZ Reader II ; 2014 年底将细胞成像技术整合到了多模式检测系统中, 推出 EnSight 微孔板检测平台, 从多标记到无标记, 从分子检测到细胞成像, 从功能研究到生物学评价, 提供多方法学正交相互验证的解决方案 除了多模式检测仪器,PerkinElmer 还拥有专利的多标记技术 (DELFIA LANCE 和 ALPHA), 以及配套的检测试剂和配套耗材, 为用户提供最完整的解决方案 DELFIA(TRF) 技术为目前非放射性标记中灵敏度最高的检测方法, 目前该技术已广泛用于临床诊断, 如产前诊断 新生儿筛查等 LANCE(TR-FRET) 是在 TRF 的基础上发展的一种集高灵敏度 免洗 高特异性及高稳定性与一体的检测方法 ALPHA 技术拥有 LANCE 的所有优势, 且其抗干扰能更强 更适合复杂样品检测及生物大分子相互作用研究 国内部分用户名单 清华大学中山大学湖南大学武汉大学中科院理化所中国生物制品检定所扬子江药业阿斯利康 北京大学浙江大学华中农业大学福州大学中科院微生物所中国医学科学院诺和诺德康龙化成 复旦大学南开大学华南农业大学四川大学中科院上海生化细胞所药明康德罗氏研发中国疾控中心 上海交通大学山东大学华东理工大学中南大学中科院上海药物所睿智化学葛兰索史克上海疾控中心 南京大学南方医科大学暨南大学吉林大学中科院动物研究所辉源生物科技礼来中国江苏疾控中心 厦门大学首都医科大学中国药科大学军事医学科学院中科院计算生物学研究所康弘药业诺华制药浙江疾控中心 截止 2015 年,PerkinElmer 多模式检测系统在国内装机已有超过 600 台装机量

3 功能汇总 多模式检测方法中包括 :1) 基本功能 : 光吸收 (Abs) 荧光强度(FI) 和化学发光 (Lumi);2) 高端功能 : 时间分辨荧光 (TRF/TR-FRET) 荧光偏振(FP) 和 Alpha;3) 独特功能 : 无标记检测 (LF) 细胞成像(Cell Imaging) 和微流控酶动力学检测 (MSA) 这些功能应用于众多领域中: 如检测核酸 / 蛋白检测 ELISA 酶活动力学 GPCR 激酶检测 离子通道 线粒体膜电位 表观遗传学分析 分子相互作用 凝集反应 报告基因检测 BRET 细胞增殖 细胞凋亡 细胞毒性 细菌粘附 食品毒素及激素检测等 Absorbance (Abs) Fluorescence Intensity (FI) Luminescence (Lumi) Time Resolved Fluorescence(TRF) FluorescencePolarization (FP) Alpha LabelFree (LF) Cell Imaging Mobility-Shift Assay (MSA) 主要性能 高精度四光栅系统高灵敏优化滤光片系统双 PMT 双通道实时检测超灵敏化学发光检测模式高灵敏 TRF 优化光路设计超灵敏 HTS ALPHA 模块 CCD 整板成像多标记检测生化无标记检测 ( 分子相互作用 ) 细胞无标记检测 ( 信号通路研究 ) 微流控酶动力学检测 (MSA) 多色整孔细胞显微成像功能标记技术 试剂及耗材完整解决方案 1

4 仪器型号 VICTOR X 功能 :Lumi/FI/Abs/ TRF/FP 特点 : 高灵敏度 模块化 易更换滤光片光路 ; 紫外波段内置三组激发滤片, 可见波段具有八位激发 + 八位发射可更换滤片位 ; 专利高灵敏 TRF 优化光路设计 ; 可配蓝敏和红敏 PMT; 独立温控 ; 三种振荡模式 ; 孔内多点扫描 ; 四通道自动进样器 ; 全自动载板架 ; 微孔板条形码识别 EnSpire 功能 :Abs/Lumi/FI/TRF/Alpha/LF 特点 : 截止滤光片 + 高精度四光栅优化光路 ; 全波长光谱扫描 ;TRF 采用专用滤光片 + 二向色镜 + 光栅优化混合光路 ; 独立超灵敏化学发光 ; 超灵敏 HTS Alpha; 无标记检测 ( 生化 & 细胞 ); 独立温控 ; 三种振荡模式 ; 孔内多点扫描 ; 双通道自动进样器 ; 全自动载板架 ; 微孔板条形码识别 EnVision 功能 :Abs/FI/Lumi/ TRF/FP/Alpha 特点 : 优化滤光片模块 + 四光栅 ; 滤光片模块包括八位激发滤片 + 五位二向色镜 + 八位发射滤片 ; 独立超灵敏化学发光 ; 高灵敏 TRF 激光模块 ; 超灵敏 HTS Alpha; 双 PMT 双通道同时检测 ; 独立温控 ; 三种振荡模式 ; 孔内多点扫描 ; 双通道自动进样器 ; 全自动载板架 ; 微孔板条形码识别 EnSight 功能 :Abs/Lumi/FI/TRF/Alpha/LF/Cell Imaging 特点 : 截止滤光片 + 高精度四光栅优化光路 ; 全波长光谱扫描 ;TRF 采用专用滤光片 + 二向色镜 + 光栅优化混合光路 ; 独立超灵敏化学发光 ; 超灵敏 HTS Alpha; 无标记检测 ( 生化 & 细胞 ); 多色整孔快速细胞成像 ; 独立温控 ; 三种振荡模式 ; 孔内多点扫描 ; 微孔板条形码识别 EZ Reader 功能 : 微流控酶动力学检测 (MSA) 特点 : 基于毛细管电泳和微流控两种技术, 通过酶促反应后底物和产物移动迁移率不同 (Mobility-Shift Assay), 直接分离并实时动态检测底物和产物的含量和比例, 体系中不需要其他特殊组分, 同时可以排除化合物自发荧光干扰 ; 独立可制冷及加热温控系统 ViewLux uhts 功能 :CCD 整板成像多标记检测特点 : 基于超低温 背照式 高灵敏 低噪音 CCD 相机检测的整板成像系统 ; 高灵敏度专用广角滤光片优化光路 ; 每小时检测超过 200,000 个样品 ; 包括放射同位素标记在内的超高通量多标记检测系统 ; 超大容量全自动载板架 ; 微孔板条形码识别 2

5 高精度四光栅 vs 优化滤光片组合 高精度四光栅 vs 优化滤光片组合 高精度四光栅 vs 优化滤光片组合 多模式检测系统中使用的主要有高精度四光栅和优化滤光片组合两种分光系统 两中分光系统各有特点 多模式检测系统中使用的主要有高精度四光栅和优化滤光片组合两种分光系统 两中分光系统各有特点 在不同 在不同的应用领域中各有所长 的应用领域中各有所长 多模式检测系统中使用的主要有高精度四光栅和优化滤光片组合两种分光系统 在不同的应用领域中各有所长 四光栅分光系统中 在激发光和发射光分别经过两道光栅的分光 因此光信号的纯度及杂光率得到很大的改善 四光栅分光系统中 在激发光和发射光分别经过两道光栅的分光 因此光信号的纯度及杂光率得到很大 四光栅系统波长连续 可以通过光谱扫描确认未知染料的最佳光谱峰 针对不同的染料 可以灵活选择其检测波长 的改善 四光栅系统波长连续 可以通过光谱扫描确认未知染料的最佳光谱峰 针对不同的染料 可以灵活选 四光栅分光系统中 在激发光和发射光分别经过两道光栅的分光 因此光信号 且对于stokes位移狭窄的荧光染料 也可以准确区分其激发和发射峰 以达到更好的信号比 择其检测波长 且对于 stokes 位移狭窄的荧光染料 也可以准确区分其激发和发射峰 以达到更好的信号比 的改善 四光栅系统波长连续 可以通过光谱扫描确认未知染料的最佳光谱峰 针 择其检测波长 且对于 stokes 位移狭窄的荧光染料 也可以准确区分其激发和发 激发端双光栅分光示意图 激发端双光栅分光示意图 原始光信号经过双道光栅后 虽然光纯度和杂光率得到显著改善 但大部分信号会在两次分光的过程中 损失掉 最终仅能收集到~15%的信号 因此对于光信号比较弱或灵敏度要求比较高的检测 如 FP TRF 原始光信号经过双道光栅后 虽然光纯度和杂光率得到显著改善 但大部分信 原始光信号经过双道光栅后 虽然光纯度和杂光率得到显著改善 但大部分信号会在两次分光的过程中损失掉 TR-FRET 和 BRET 等 需要透光率更高的滤片分光系统才能达到更好的检测效果 最终仅能收集到~15%的信号 因此对于光信号比较弱或灵敏度要求比较高的检测 如FP TRF TR-FRET和BRET等 损失掉 最终仅能收集到~15%的信号 因此对于光信号比较弱或灵敏度要求比较 需要透光率更高的滤片分光系统才能达到更好的检测效果 TR-FRET 和 BRET 等 需要透光率更高的滤片分光系统才能达到更好的检测效果 优化滤光片组包括激发滤光片 二 优化滤光片组包括激发滤光片 二向色镜和发 射滤光片 其表面的特殊涂层在保证分光纯度的同 时 最大程度的保证了光信号的透过率 可达90% 以上 向色镜和发射滤光片 其表面的特殊涂层 优化滤光片 在保证分光纯度的同时 最大程度的保证 向色镜和发射滤 了光信号的透过率 可达 90%以上 在保证分光纯度 了光信号的透过 专用二向色镜采用长波长通过 短波长反射 专用二向色镜采用长波长通过 短波长反射的方式将激发 的方式将激发光和发射光分开 进一步降低杂信 光和发射光分开 进一步降低杂信号干扰 提高信噪比 且专用 专用二向色镜采用长波长通过 短 号干扰 提高信噪比 且专用双通道二向色镜可 双通道二向色镜可以将双发射光分开 只需经过一次激发 就可 光和发射光分开 进一步降低杂信号干 以将双发射光分开 只需经过一次激发 就可通 通过双 PMT 对双发射光信号进行同时快速检测 如 FRET FP 过双PMT对双发射光信号进行同时快速检测 如 双通道二向色镜可以将双发射光分开 FRET FP TR-FRET BRET和Alphaplex等 TR-FRET BRET 和 Alphaplex 等 通过双 PMT 对双发射光信号进行同时快 TR-FRET BRET 和 Alphaplex 等 5 3

6 超灵敏化学发光模块 超灵敏化学发光模块 目前常用的化学放光主要是萤火虫萤光素酶 Firefly Luciferase 和 海肾萤光素酶 Renilla Luciferase 两种报 告基因系统 目前常用的化学放光主要是萤火虫萤光素酶 Firefly Luciferase 和 海肾萤光素酶 Renilla Luciferase 两种报告基因系统 化学发光的检测信号是酶促反应过程中释放的光子 检测时不需要外界激发光激发 也因此不会触发环 境中的自发背景荧光 所以化学发光检测背景干净 信噪比很高 但由于化学发光自身的发光特点 在同等条 化学发光的检测信号是酶促反应过程中释放的光子 检测时不需要外界激发光激发 也因此不会触发环境中的自 件下 化学发光的原始光子强度远低于荧光强度检测 所以化学发光需要独立于荧光之外的超敏感检测模式 发背景荧光 所以化学发光检测背景干净 信噪比很高 但由于化学发光自身的发光特点 在同等条件下 化学发光 放大检测光子信号 减少空间串扰 才能在实验中得到更好的检测窗口和信噪比 的原始光子强度远低于荧光强度检测 所以化学发光需要独立于荧光之外的超敏感检测模式 放大检测光子信号 减 少空间串扰 才能在实验中得到更好的检测窗口和信噪比 超敏感化学发光模块 超敏感化学发光模块 超敏感化学发光模块 超敏感化学发光模块 化学发光分为闪光型 Flash 和辉光型 Glow 两种 闪光型化学发光信号持续时间非常短 几秒钟几分钟 辉光型化学发光信号比较稳定 几十分钟化学发光分为闪光型 Flash 和辉光型 Glow 两种 闪 光型化学发光信号持续时间非常短 几秒钟-几分钟 辉光型 几小时 闪光型化学发光检测 需要配置自动进样装 化学发光信号比较稳定 几十分钟-几小时 闪光型化学发光 置 在加样的时候同时检测化学发光发出的光信号 检测 需要配置自动进样装置 在加样的时候同时检测化学发光 自动加样器 自动加样器 自动加样器 4 发出的光信号 6

7 高灵敏 TRF 检测 高灵敏 TRF 检测 时间分辨荧光 Time Resolved Fluorescence, TRF 是一种使用镧系元素标记的非放射性检测方法 镧系元素荧 光信号衰减周期可达ms级 普通荧光仅为ns级 且Stokes位移宽 时间分辨荧光 Time Resolved Fluorescence, TRF 是一种使用镧系元素标记的非放射性检测方法 高灵敏TRF检测 高灵敏 TRF 检测 时间分辨荧光 Time 高灵敏 TRF 检测 Resolved Fluorescence, TRF 是一种使用镧系元素标记的非放射性检测方法 镧系元素荧光信号衰减周期可达 ms 级 普通荧光仅为 ns 级 且 Stokes 位移宽 镧系元素荧光信号衰减周期可达 ms 级 普通荧光仅为 ns 级 且 Stokes 位移宽 高灵敏 TRF 检测 时间分辨荧光 Time Resolved Fluorescence, TRF 是一种使用镧系元素标记的非放射性检测方法 时间分辨荧光 Time Resolved Fluorescence, TRF 是一种使用镧系元素标记的非放射性检测方法 高灵敏 TRF 检测 镧系元素荧光信号衰减周期可达 ms 级 普通荧光仅为 ns 级 且 StokesStokes 位移宽 镧系元素荧光信号衰减周期可达 ms 级 普通荧光仅为 ns 级 且 位移宽 时间分辨荧光 Time Resolved Fluorescence, TRF 是一种使用镧系元素标记的非放射性检测方法 时间分辨荧光 Time 镧系元素荧光信号衰减周期可达 ms 级 普通荧光仅为 ns 级 且 Stokes 位移宽 Resolved Fluorescence, TRF 是一种使用镧系元素 镧系元素荧光信号衰减周期可达 ms 级 普通荧光仅为 ns 级 且 Stokes 位移 根据镧系元素螯合物的发光特点 同时对发射波长和信号持续时间两个参数进行信号分辨 激发照射后 根据镧系元素螯合物的发光特点 同时对发射波长和信号持续时间两个参数进行信号分辨 激发照射后 延迟检测特定发射光信号 可有效地排除非特异背景荧光的干扰 极大地提高了检测的灵敏度和信噪比 延迟检测特定发射光信号 可有效地排除非特异背景荧光的干扰 极大地提高了检测的灵敏度和信噪比 根据镧系元素螯合物的发光特点 同时对发射波长和信号持续时间两个参数进行信号分辨 激发照射后 延迟检 根据镧系元素螯合物的发光特点 同时对发射波长和信号持续时间两个参数进行信号分辨 激发照射后 根据镧系元素螯合物的发光特点 同时对发射波长和信号持续时间两个参数进行信号分辨 激发照射后 测特定发射光信号 可有效地排除非特异背景荧光的干扰 极大地提高了检测的灵敏度和信噪比 延迟检测特定发射光信号 可有效地排除非特异背景荧光的干扰 极大地提高了检测的灵敏度和信噪比 延迟检测特定发射光信号 可有效地排除非特异背景荧光的干扰 极大地提高了检测的灵敏度和信噪比 根据镧系元素螯合物的发光特点 同时对发射波长和信号持续时间两个参数进行信号分辨 激发照射后 根据镧系元素螯合物的发光特点 同时对发射波长和信号持续时间两个参 延迟检测特定发射光信号 可有效地排除非特异背景荧光的干扰 极大地提高了检测的灵敏度和信噪比 延迟检测特定发射光信号 可有效地排除非特异背景荧光的干扰 极大地提高了 低信噪比 低信噪比 TRF 检测步骤与常规 ELISAELISA 相同 但灵敏 TRF 检测步骤与常规 相同 但灵敏 低信噪比 Delay 低信噪比 Delay Delay 高信噪比 高信噪比 Delay 高信噪比 高信噪比 度和检测范围远高于 ELISA 最低检测下限可达 度和检测范围远高于 ELISA 最低检测下限可达 Delay 低信噪比 高信噪比 TRF 检测步骤与常规 ELISA ELISA 相同 但灵敏 M TRF 检测是目前所有非放射性 非均 TRF 检测步骤与常规 相同 但灵敏 -18 M TRF 检测是目前所有非放射性 非均 度和检测范围远高于 ELISA 最低检测下限可达 相检测方法中灵敏度最高的检测方法 TRF 检测 检测 度和检测范围远高于 TRF 检测步骤与常规 ELISAELISA 最低检测下限可达 相同 但灵敏 相检测方法中灵敏度最高的检测方法 TRF TRF检测步骤与常规ELISA相同 但灵敏度和检测范围 -18 M TRF 检测是目前所有非放射性 非均 试剂 DELFIA 已广泛用于临床诊断 如产前 检测是目前所有非放射性 非均 M TRF TRF 检测步骤与常规 ELISA 相同 但灵敏 度和检测范围远高于 ELISA 最低检测下限可达 M TRF检测是目 远高于ELISA 最低检测下限可达10 试剂 DELFIA 已广泛用于临床诊断 如产前 检测 检测 -18相检测方法中灵敏度最高的检测方法 TRF 诊断 新生儿筛查等 前所有非放射性 非均相检测方法中灵敏度最高的检测方 相检测方法中灵敏度最高的检测方法 TRF 度和检测范围远高于 ELISA 最低检测下限可达 M TRF 检测是目前所有非放射性 非均 10 诊断 新生儿筛查等 试剂 DELFIA 已广泛用于临床诊断 如产前 法 TRF检测试剂 DELFIA 已广泛用于临床诊断 如产 试剂 DELFIA 已广泛用于临床诊断 如产前 M TRF 检测是目前所有非放射性 非均 相检测方法中灵敏度最高的检测方法 TRF 检测 TR-FRET 检测是在 TRF 基础上发展起来 前诊断 新生儿筛查等 诊断 新生儿筛查等 TR-FRET 检测是在 TRF 基础上发展起来 诊断 新生儿筛查等 相检测方法中灵敏度最高的检测方法 TRF 检测 试剂 DELFIA 已广泛用于临床诊断 如产前 的一种 高 灵 敏 度 免 洗 的 均 相 检 测 方 法 的一种高灵敏度 免洗的均相检测方法 试剂 DELFIA 已广泛用于临床诊断 如产前 诊断 新生儿筛查等 TR-FRET 检测是在 TRF 基础上发展起来 LANCE 是基于 TR-FRET 的检测试剂 LANCE TR-FRET 检测是在 TRF 基础上发展起来 LANCE 是基于 TR-FRET 的检测试剂 LANCE 诊断 新生儿筛查等 的 一 种的高一灵种敏高度灵 敏免度洗 的免均洗相的检均测相方检法测 方 法 以镧系元素的供体和受体别藻蓝蛋白 APC TR-FRET 检测是在 TRF 基础上发展起来 以镧系元素的供体和受体别藻蓝蛋白 APC LANCE 是基于 TR-FRET 的检测试剂 LANCE LANCE TR-FRET 的检测试剂 LANCE 的之间在发生相互作用后会发生 一 种之间在发生相互作用后会发生 高灵 敏 度 是基于 免洗的 均 相FRET 通过检 检测 方法 FRET 通过检 TR-FRET检测是在TRF基础上发展起来的一种高灵敏 以镧系元素的供体和受体别藻蓝蛋白 APC 测发射波长 665nm 和 的检测试剂 LANCE 615nm 信号的改变 以镧系元素的供体和受体别藻蓝蛋白 APC 是基于 TR-FRET 665nm 和 615nm 信号的改变 度 免洗的均相检测方法 LANCE是基于TR-FRET的检测试 LANCE测发射波长 之间在发生相互作用后会发生 FRET 通过检 反应待检测对象的生物学特性 之间在发生相互作用后会发生 FRET 通过检 反应待检测对象的生物学特性 剂 LANCE以镧系元素的供体和受体别藻蓝蛋白 APC 以镧系元素的供体和受体别藻蓝蛋白 APC 测发射波长 665nm665nm 和 615nm 信号的改变 测发射波长 和 615nm 信号的改变 之间在发生相互作用后会发生FRET 通过检测发射波长 之间在发生相互作用后会发生 FRET 通过检 反应待检测对象的生物学特性 665nm 和615nm信号的改变 反应待检测对象的生物学 测发射波长反应待检测对象的生物学特性 665nm 和 615nm 信号的改变 特性 7 反应待检测对象的生物学特性 7 Dela 低信噪比 TR-FRET 检测 的一种高灵敏度 LANCE 是基于 TR 以镧系元素的供体 之间在发生相互作 测发射波长 665nm 反应待检测对象的生

8 对于TRF及TR-FRET检测 由于镧系元素的激发/发射 对于 TRF对于 及 TR-FRET 检测 由于镧系元素的激发 TRF 及 TR-FRET 检测 由于镧系元素的激发 对于 TRF 及 TR-FRET 检测 由于镧系元素的激发 /发射波长及延迟检测的特点 需要配置高频脉冲的紫 /发射波长及延迟检测的特点 需要配置高频脉冲的紫 的光源 红敏检测器和高透光率 特异性光路系统 TRF 外波段的光源 红敏检测器和高透光率 特异性光路系 外波段的光源 红敏检测器和高透光率 特异性光路系 外波段的光源 红敏检测器和高透光率 特异性光路系 光信号比普通荧光信号较弱 需要专用高透光率的滤光 对于 TRF 及 TR-FRET 检测 由于镧系元素的激发 统 TRF统 TRF 光信号比普通荧光信号较弱 需要专用高透光 光信号比普通荧光信号较弱 需要专用高透光 片及专用优化二向色镜光路 以尽量保证激发光强度 统 TRF 光信号比普通荧光信号较弱 需要专用高透光 /发射波长及延迟检测的特点 需要配置高频脉冲的紫 率的滤光片及专用优化二向色镜光路 以尽量保证激发 率的滤光片及专用优化二向色镜光路 以尽量保证激发 光透过率及杂信号干扰 达到更好的检测灵敏度和信噪 率的滤光片及专用优化二向色镜光路 以尽量保证激发 外波段的光源 红敏检测器和高透光率 特异性光路系 光强度 光透过率及杂信号干扰 达到更好的检测灵敏 比 在发射端采用光栅分光系统 在保证系统检测灵敏 光强度 光透过率及杂信号干扰 达到更好的检测灵敏 光强度 光透过率及杂信号干扰 达到更好的检测灵敏 统 TRF 光信号比普通荧光信号较弱 需要专用高透光 度的同时 对不同镧系元素标记的试剂盒具有更好兼容 度和信噪比 在发射端采用光栅分光系统 在保证系统 度和信噪比 在发射端采用光栅分光系统 在保证系统 度和信噪比 在发射端采用光栅分光系统 在保证系统 率的滤光片及专用优化二向色镜光路 以尽量保证激发 性 检测灵敏度的同时 对不同镧系元素标记的试剂盒具有 检测灵敏度的同时 对不同镧系元素标记的试剂盒具有 检测灵敏度的同时 对不同镧系元素标记的试剂盒具有 光强度 光透过率及杂信号干扰 达到更好的检测灵敏 更好兼容性 更好兼容性 更好兼容性 度和信噪比 在发射端采用光栅分光系统 在保证系统 波长及延迟检测的特点 需要配置高频脉冲的紫外波段 /发射波长及延迟检测的特点 需要配置高频脉冲的紫 TRF&TR-FRET 优化混合光路优化混合光路 优化混合光路 TRF&TR-FRET TRF&TR-FRET TRF&TR-FRET 优化混合光路 TRF&TR-FRET 优化混合光路 检测灵敏度的同时 对不同镧系元素标记的试剂盒具有 TRF 及 TR-FRET 检测可配置光强更高 单色性 TRF 及 TR-FRET 检测可配置光强更高 单色性 TRFTRF及TR-FRET检测可配置光强更高 单色性更 及 TR-FRET 检测可配置光强更高 单色性 更好兼容性 更好 脉冲频率更高的激光光源 激光器提供更高 更好 脉冲频率更高的激光光源 激光器提供更高 好 脉冲频率更高的激光光源 激光器提供更高激 更好 脉冲频率更高的激光光源 激光器提供更高 TRF激光光源模式 激光光源模式 TRF 激发能量和脉冲频率 使得长衰减周期镧系元素的 TRF 激光光源模式 激发能量和脉冲频率 使得长衰减周期镧系元素的 发能量和脉冲频率 使得长衰减周期镧系元素的信 TRF 激光光源模式 激发能量和脉冲频率 使得长衰减周期镧系元素的 TRF 及 TR-FRET 检测可配置光强更高 单色性 信号更强 短寿命背景杂信号更弱 比氙灯模式具 号更强 短寿命背景杂信号更弱 比氙灯模式具有 信号更强 短寿命背景杂信号更弱 比氙灯模式具 信号更强 短寿命背景杂信号更弱 比氙灯模式具 更好 脉冲频率更高的激光光源 激光器提供更高 更高的信噪比和检测速度 有更高的信噪比和检测速度 有更高的信噪比和检测速度 TRF 激光光源模式 有更高的信噪比和检测速度 激发能量和脉冲频率 使得长衰减周期镧系元素的 信号更强 短寿命背景杂信号更弱 比氙灯模式具 有更高的信噪比和检测速度 超灵敏超灵敏 HTS Alpha 模块 HTS 超灵敏HTS 超灵敏Alpha模块 HTS Alpha Alpha 模块 模块 Alpha Alpha Amplified Luminescent Proximity Amplified Luminescent Proximity Alpha Amplified Luminescent Proximity Alpha Amplified Luminescent Proximity Homogenous Homogenous Assay 技术 是基于一对微珠的均相 Homogenous Assay 技术 是基于一对微珠的均相 超灵敏 HTS Alpha 模块 Assay 技术 是基于一对微珠的均相亲和检测方法 供体 Homogenous Assay 技术 是基于一对微珠的均相 亲和检测方法 供体微珠 Donor Beads 在 680 亲和检测方法 供体微珠 Donor Beads 在 680 微珠 Donor Beads 在680nm激光的照射下 可以产生高 亲和检测方法 供体微珠 Donor Beads 在 680 Alpha Amplified Luminescent Proximity nm 激 光 的照 能活跃的单体氧 Singlet Oxygen 在4μs的半衰期内 nm 激射 光下 的 照可 射以 下产 生 可高 以能 产活 生跃 高的 能单 活体 跃氧 的单体氧 nm 激 光 的 照 射 下 可以产生高能活跃的单体氧 Homogenous Assay 技术 是基于一对微珠的均相 单体氧可在溶液中扩散约200nm的距离 如果受体微珠和 Singlet Oxygen 在 4 s 的半衰期内 单体氧 Singlet Oxygen 在 4 s 的半衰期内 单体氧 Singlet Oxygen 在 4 s 的半衰期内 单体氧 亲和检测方法 供体微珠 Donor Beads 在 680 可在溶液中扩散约 200 nm 的距离 如果受体微珠和 可在溶液中扩散约 的距离 如果受体微珠和 nm 激 光 的 照 射 下200 可nm 以产 生高能活跃的单体氧 生级联化学反应 最终产生光信号 供体微珠能发生相互作用 单体氧就会触发受体微珠 供体微珠能发生相互作用 单体氧就会触发受体微珠 供体微珠能发生相互作用 单体氧就会触发受体微珠 Singlet Oxygen 在 4 s 的半衰期内 单体氧 上发生级联化学反应 最终产生光信号 上发生级联化学反应 最终产生光信号 上发生级联化学反应 最终产生光信号 可在溶液中扩散约 200 nm 的距离 如果受体微珠和 供体微珠能发生相互作用 单体氧就会触发受体微珠上发 可在溶液中扩散约 200 nm 的距离 如果受体微珠和 Alpha 检测技术特点 供体微珠能发生相互作用 单体氧就会触发受体微珠 Alpha Alpha 检测技术特点 检测技术特点 Alpha 检测技术特点 上发生级联化学反应 最终产生光信号 高灵敏度 均相 免洗 高灵敏度 均相 免洗 高灵敏度 均相 免洗 高灵敏度 均相 免洗 重复性好 线性范围宽 Alpha 检测技术特点 重复性好 线性范围宽 重复性好 线性范围宽 重复性好 线性范围宽 长波长激发 短波长发射 长波长激发 短波长发射 长波长激发 短波长发射 长波长激发 短波长发射 高灵敏度 均相 免洗 抗干扰能力强 信噪比高 抗干扰能力强 信噪比高 抗干扰能力强 信噪比高 抗干扰能力强 信噪比高 重复性好 线性范围宽 适合大分子研究 应用范围广 适合大分子研究 应用范围广 适合大分子研究 应用范围广 适合大分子研究 应用范围广 长波长激发 短波长发射 节约成本 易于自动化及小型化 节约成本 易于自动化及小型化 节约成本 易于自动化及小型化 节约成本 易于自动化及小型化 抗干扰能力强 信噪比高 6 适合大分子研究 应用范围广 节约成本 易于自动化及小型化

9 Alpha 技术的工作原理 加入待测样品 加入生物素化抗待测物抗体及偶联了抗待测物抗体的受体微珠, 孵育 60 分钟 加入链霉亲和素包被的供体微珠, 孵育 30 到 60 分钟 偶联了生物分子的微珠与待测物问的相互作用可以将两个微珠间的距离拉近 用红光来激发供体微珠 供体微珠被激发后产生的单线氧会激发受体微珠, 发出的光强与相互作用的水平成正比 操作简单 节省时间 数据重复性好 Alpha 技术检测步骤 加入受体微珠和生物素化的抗分析物抗体 加入分析物, 孵温育 加入供体微珠 读数 ELISA 免疫检测步骤 加入 lgg 捕获抗体, 孵并温育 4 小时 加入封闭液, 孵并温育 1 小时 洗涤多达 3 次 加入样品和抗体检测溶液 封闭, 并孵温育 1 小时 洗涤多达 3 次 加入检测 lgg, 孵温育 2 小时 洗涤多达 3 次 加入读取缓冲液或底物 读物 超灵敏 HTS Alpha 模块设计原理 Alpha 检测须配置高强度的激光光源, 以激发出供体微珠上足量的单体氧分子 单体氧分子和受体微珠发生级联化学反应释放出光子 该检测光信号为化学发光, 虽背景低, 但源信号强度较荧光弱, 因此需要配置超灵敏 PMT 以达到更好的检测效果 超灵敏 HTS Alpha 模块在配置激光光源和超灵敏 PMT 的基础上, 又对光源和 PMT 进行了优化, 因此其信噪比更高 检测速度更快 7

10 无标记检测 无标记检测 无标记检测 无标记检测模块具有专利独特设计光路 采用共振波导光栅技术 Resonant Waveguide Waveguide Grating, RWG 通过 无标记检测模块具有专利独特设计光路 采用共振波导光栅技术 Resonant 无标记检测模块具有专利独特设计光路 采用共振波导光栅技术 Resonant Waveguide Grating, 光学生物传感器 检测分子相互作用及细胞动态质量重分配 Dynamic Mass Redistribution, DMR 造成的反射光信 RWG 通过光学生物传感器 检测分子相互作用及细胞动态质量重分配 Dynamic RWG 通过光学生物传感器 检测分子相互作用及细胞动态质量重分配 Dynamic Mass Redistribution Mass Redistribution 号的波长变化 实时反映分子生化样本或活细胞样本的生物/生理活性 无标记检测 DMR 造成的反射光信号的波长变化 实时反映分子生化样本或活细胞样本的生物/生理活性 DMR 造成的反射光信号的波长变化 实时反映分子生化样本或活细胞样本的生物/生理活性 无标记检测模块具有专利独特设计光路 采用共振波导光栅技术 Resonant Waveguide Grating, Biochemical Assays Cell-Based Assays RWG 通过光学生物传感器 检测分子相互作用及细胞动态质量重分配 Dynamic Mass Redistribution DMR 造成的反射光信号的波长变化 实时反映分子生化样本或活细胞样本的生物/生理活性 生化无标记检测 BCA 应用 生化无标记检测 BCA 应用 生化无标记检测 BCA 应用 细胞无标记检测 CBA 应用 细胞无标记检测 CBA 应用 生化无标记检测 BCA 应用 GPCRsGPCRs信号通路 信号通路 GPCRs 信号通路 蛋白相互作用 包括受体 配体结合 蛋白相互作用 包括受体 配体结合 离子通道 离子通道 蛋白相互作用 包括受体-配体结合 抗体-抗体结合 离子通道 抗体 抗体结合 抗体 抗体结合 受体酪氨酸激酶 受体酪氨酸激酶 蛋白-核酸相互作用 受体酪氨酸激酶 生化无标记检测 BCA 应用 蛋白 核酸相互作用 蛋白 核酸相互作用 细胞无标记检测 CBA 应用 细胞粘连 细胞粘连 小分子相互作用 细胞粘连 小分子相互作用 小分子相互作用 细胞核激素受体 细胞核激素受体 抗体 多肽片段筛选 GPCRs 信号通路 功能性酶筛选 细胞核激素受体 功能性酶筛选 功能性酶筛选 细胞增殖 凋亡 细胞毒性 细胞增殖 凋亡 细胞毒性 蛋白相互作用 包括受体 配体结合 离子通道 激酶和蛋白酶活性 激酶和蛋白酶活性 细胞趋药性 细胞趋药性 激酶和蛋白酶活性 细胞增殖 凋亡 细胞毒性 抗体 抗体结合 受体酪氨酸激酶 表观遗传学检测 表观遗传学检测 吞噬作用 吞噬作用 表观遗传学检测 细胞趋药性 蛋白 核酸相互作用 细胞粘连 核受体结合检测 核受体结合检测 病毒感染宿主细胞 病毒感染宿主细胞 核受体结合检测 吞噬作用 小分子相互作用 细胞核激素受体 病毒感染宿主细胞 功能性酶筛选 细胞增殖 凋亡 细胞毒性 高灵敏无标记检测微孔板 高灵敏无标记检测微孔板 激酶和蛋白酶活性 细胞趋药性 表观遗传学检测 吞噬作用 核受体结合检测 病毒感染宿主细胞 抗体 多肽片段筛选 抗体 多肽片段筛选 抗体 多肽片段筛选 高灵敏无标记检测微孔板 高灵敏无标记检测微孔板 高性能光学微孔板 其每个微孔底部都有一个生物学传感器 高性能光学微孔板 其每个微孔底部都有一个生物学传感器 高性能光学微孔板 其每个微孔底部都有一个生物学传感器

11 整孔细胞成像 整孔细胞成像 搭建从高通量分子检测到高内涵细胞检测的桥梁 搭建从高通量分子检测到高内涵细胞检测的桥梁 多色荧光成像 可同时四色 多色荧光成像 可同时四色 多色荧光成像 可同时四色 高对比度数字相差成像 高对比度数字相差成像 斑马鱼整孔成像 小型模式动物 斑马鱼整孔成像 小型模式动物 11 9

12 图像分析及应用 专业图像分析软件 灵活应用扩展 细胞计数 /归一化 肿瘤细胞迁移 融合度分析 肿瘤细胞浸润 细胞生长曲线 肿瘤干细胞分析 细胞培养状态 Plate type 细胞存活率 表型分析 细胞凋亡 生物标物检测 细胞周期 干细胞分化 细胞毒性 原代细胞培养 克隆集落分析 信号通路研究 干细胞克隆鉴定 报告基因系统 细胞转染率 线粒体功能 蛋白表达或降解 受体结合 1 Channel 2 Channels 3 Channels 4 Channels 5 Channels ViewPlate-96(Glass) 1:17 1:33 1:50 2:07 3:23 ViewPlate-384 4:20 5:30 6:37 7:43 12:07 细胞成像模块采用高速激光自动聚焦 多带通分光系统和高灵敏 大靶面sCMOS 具有超快速多通道整孔整板成像功能 10

13 微流控酶动力学检测 Mobility-Shift-Assay MSA 微流控酶动力学检测 Mobility-Shift-Assay MSA 酶催化底物反应在微孔板中进行 每次检测仅 酶催化底物反应在微孔板中进 需从孔内吸取nL级溶液进入微流体芯片 底物和产 行 每次检测仅需从孔内吸取 nl 级 物荷质比不同导致其迁移率有别 因此将会在不同 溶液进入微流体芯片 底物和产物荷 的时间到达检测窗口 根据检测到的底物/产物的荧 质比不同导致其迁移率有别 因此将 光强度 可以计算出反应体系中底物和产物的绝对 会在不同的时间到达检测窗口 根据 含量及其转化产率 该方法可以支持多时间点动态 实时检测 非常适用于酶动力学研究 检测到的底物/产物的荧光强度 可 以计算出反应体系中底物和产物的绝 对含量及其转化产率 该方法可以支 持多时间点动态实时检测 非常适用 于酶动力学研究 唯一可实时测量底物消耗和产物生成量 得到酶动力学数据的检测方法 唯一可实时测量底物消耗和产物生成量 得到酶动力学数据的检测方法 唯一可实时测量底物消耗和产物生成量 得到酶动力学数据的检测方法 专利微流控芯片 几百种已验证的酶和底物体系 专利微流控芯片 几百种已验证的酶和底物体系 13 11

14 应用汇总 多模式检测的应用可以扩展到成千上万种, 涉及从分子到细胞学研究的众多领域 每种标记 ( 包括非标记 ) 方法都有其专业特长及优势应用领域, 但也会因其标记及检测原理, 在某些领域具有局限性 随着标记及检测技术的发展, 多模式检测提供了从多标记到无标记检测 从分子评价到细胞成像 从靶点研究到表型分析的多方法学正交相互验证平台, 运用多维度和多方法学的正交验证方式, 帮助我们在研究过程中, 挖掘生物学的重要有效信息, 尽量 减少假阴性, 避免假阳性 光吸收 (Abs) 荧光 (FI) 化学发光 (Lumi) 核酸 & 蛋白检测 ELISA 酶动力学 ( 显色 ) 细胞增殖 细菌 / 真菌生长 天然产物分析 核酸 & 蛋白定量 酶动力学 ( 荧光 ) 荧光蛋白报告基因系统 受体 - 配体结合 FRET 钙离子检测 化学发光报告基因系统 酶活性检测 细胞存活 & 毒性检测 ATPlite P450 BRET 荧光偏振 (FP) 时间分辨荧光 (TRF) LANCE/ALPHA 小分子 - 大分子相互作用 药物受体研究 激酶活性检测 SNP 分析 结合分析 药物研究 农药残留 酶活性检测 (TRF) 细胞因子检测 免疫分析 结合分析 激酶活性 杂交分析 黏附能力分析 分子相互作用 GPCR 激酶活性检测 HDAC 内源微量蛋白检测 细胞因子检测 多标记检测 Label Free Cell imaging MSA 分子相互作用 药物受体研究 抗体 - 配体研究 受体或抗体筛选 信号通路研究 病毒感染 ADME/ 毒性研究 细胞计数 融合度分析 病毒转染效率 细胞毒性 细胞迁移 细胞实验质控 形态分析 酶的终点法 & 实时动力学的检测 激酶 蛋白酶 磷酸酶及乙酰化酶的活性检测 酶学和化合物作用机制 核酸 & 蛋白相互作用 多标记检测技术目前已广泛应用于分子生物学 生物化学 细胞生物学 药理学 药物化学 医学 农林水产以及环境科学各个研究领域, 具体包括 : 核酸 / 蛋白定量 ELISA 酶活动力学 报告基因检测 生物标记物检测 激酶检测 GPCR 第二信使检测 表观遗传学分析 分子相互作用 结合分析 凝集反应 信号通路研究 细胞活力 细胞增殖 细胞凋亡 细胞毒性 细胞膜完整性 线粒体功能 细胞代谢 残留检测 环境内干扰物 激素检测等 12

15 应用实例 应用实例 应用实例 激酶检测 激酶的磷酸化过程是真核生物中最重要 也是被研究最广泛的信号传导机制之一 磷酸化能调节蛋白本身的各种 特性和功能 广泛参与到细胞的各项生理学过程中 如糖代谢 细胞生长发育 基因表达 神经递质的合成与释放 甚至癌变等 根据激酶催化磷酸化过程特点 可以从该过程中几个重要信号的变化来检测激酶活性 激酶催化磷酸化原理 激酶催化磷酸化原理 1 底物的减少 1 底物的减少 1 底物的减少 2 磷酸化产物的增加 2 磷酸化产物的增加 substrate 2 磷酸化产物的增加 3 ATP的消耗 3 ATP 的消耗 4 ADP的产生 Kinase 3 ATP 的消耗 4 ADP 的产生 4 ADP 的产生 Phospho-substrate 激酶活性检测的方法众多 如传统的质谱分析 放射性同位素标记 免疫印迹等方法 但随着标记及检测技术的 快速发展 目前可以用灵敏度更高 检测速度更快 数据更可靠 操作更简单的非放射标记方法来检测激酶的活性 如TR-FRET/LANCE Alpha和基于微流控技术的MSA方法 激酶活性检测方法 激酶活性检测方法 激酶活性检测方法

16 应用实例 激酶检测 TR-FRET/LANCE 技术进行 MAPKAP 激酶检测 : 当多肽底物被 MAPKAP 磷酸化后, 用时间分辨荧光探针 Eu 标记的磷酸化抗体特异识别磷酸化位点并结合 用 320nm 激发光激发样品,Eu 产生的发射光信号可以传递给多肽末端的 ULight TM 分子产生荧光共振能量转移 最终通过检测 665/615nm 两个发射波长信号的改变, 来反应底物磷酸化的情况, 从而判断激酶的活性 酶学性质或抑制剂 / 激活剂的作用效果 LANCE 是一种双组分均相检测, 将激酶底物直接标记 ULight, 可缩减操作步骤和检测准备时间, 整个过程均相 免洗, 为您提供更可靠的研发数据 : 检测条件 : 快速的检测设置, 可直接优化检测性能 信噪比数据 : 对特定底物中的激酶性能经过验证 磷酸化 motif: 提供特异底物序列 Assay 选择 : 已测试多种底物, 提供最佳的肽序列和信噪比 Experiment 1: Enzymatic Titration and Time Course Experiment 2: ATP Titration 实验 1: 优化 MAPKAP 酶浓度及反应时间, 确定酶浓度 5 nm, 反应时间 30 min 实验 2: 研究 MAPKAP 针对底物 ATP 的 Km 值, 确定反应体系 ATP 浓度 1 μm Experiment 3: Enzymatic Inhibition Course Experiment 4: Z' -factor Determination 实验 3: 检测阳性药物星形孢菌素 Staurosporine 的 IC 50, 验证体系可靠性 实验 4: 确定阳性药物的浓度 10 μm, 优化筛选条件, 确定 Z factor = 0.81 > 0.5, 可进行后续高通量筛选 14

17 应用实例 应用实例 激酶检测 Alpha 技术进行内源蛋白磷酸化水平检测 Alpha 检测方法比传统方法具有更高的灵敏度和动态检测范 Alpha技术进行内源蛋白磷酸化水平检测 Alpha检测方法比传统方法具有更高的灵敏度和动态检测范围 抗 围 抗干扰能力更好 具有最佳的信噪比 更适合低丰富蛋白及复杂样品的检测 如内源性蛋白磷酸化 干扰能力更好 具有最佳的信噪比 更适合低丰富蛋白及复杂样品的检测 如内源性蛋白磷酸化PI3K/Akt JAK/ PI3K/Akt JAK/STAT Erk AMPK 等信号通路研究 与 WesternBlot 方法相比 Alpha 检测能节省样品 STAT Erk AMPK等信号通路研究 与WesternBlot方法相比 Alpha检测能节省样品 5μL细胞裂解液 缩短检测 5时间 2-3小时 并可以对信号通路的复杂变化及时间效应进行准确定量 L 细胞裂解液 缩短检测时间 2-3 小时 并可以对信号通路的复杂变化及时间效应进行准确定量 PI3K/Akt 信号通路 IGF-1 刺激后 PK3K/Akt 信号通路 磷酸化水平的改变 p-akt Ser 473 p-pdk1 Ser 241 p-gsk3α Ser 21 15

18 应用实例 应用实例 与液相芯片 Luminex 的方法操作流程相比 Alpha Surefire 方法的操作流程不需要反复洗涤 震荡 操作更简单 数据更稳定 可以评价不同化合物对 JAK/STAT5 信号通路的影响 研究其在不用刺激因子 EPO 作用下的时间效应 浓度效应及协同关系 激酶检测 Luminex pstat5 assay workflow Alpha Surefire assay workflow 与液相芯片 Luminex 的方法操作流程相比 Alpha Surefire方法的操作流程不需要反复洗涤 震荡 操作更 简单 数据更稳定 可以评价不同化合物对JAK/STAT5信号通路的影响 研究其在不用刺激因子 EPO 作用下的时 间效应 浓度效应及协同关系 Luminex pstat5 assay workflow Alpha Surefire assay QC Alpha Surefire assay workflow JAK inhibitor on Alpha Surefire assay QC [Reference Binder, C. et al. Optimization and utilization of the Alpha SureFire phospho-stat5 assay for a cell-based screening campaign.] [Reference Binder, C. et al. Optimization and utilization of the Alpha SureFire phospho-stat5 assay for a cell-based screening campaign.] 我们开发了在线激酶选择工具 具有上 我们开发了在线激酶选择工具 具有上百种基于 百种基于 LANCE 和 Alpha 技术且已验证优化过的试剂盒 帮助您进行靶点选择和实验设计 LANCE和Alpha技术且已验证优化过的试剂盒 帮助您进行靶点选择和实验设计 16 18

19 应用实例 激酶检测微流控 MSA 技术检测激酶活性 :MSA 技术可动态实时检测底物与磷酸化产物的含量及动态转化率 与其他方法相比,MSA 不需要识别磷酸化位点的特异性抗体, 反应体系中无需终止激酶反应, 是研究激酶活性的金标准方法 在研究小分子化合物和激酶作用机制过程中, 需要动力学检测方法来实时检测小分子的结合类型 : 可逆性结合 不可逆快结合和不可逆慢结合 [Xie et al (2011). PloS one, 6, e21487] 无标记 (Epic Label Free) 方法研究激酶分子相互作用 : 将激酶 MAP Kinase 偶联到包被有高灵敏生物传感器的微孔板内, 优化不同的结合体系 (ph 值 ) 和酶浓度, 后将小分子化合物加入体系内, 检测不同浓度下小分子和激酶的结合能力 用 Epic 检测数据计算反应其亲和力的平衡解离常数 KD 值, 与已报道用 Biacore SPR 方法的检测数据结果一致 且 Epic 无标记的检测方法与 SPR 的检测方法相比, 其检测速度更快 成本更低 17

20 应用实例 GPCR 信号通路 G 蛋白偶联受体 (G Protein Coupled Receptors, GPCRs) 是一大类膜蛋白受体, 具有七个跨膜 α 螺旋, 其肽链的 C 端和连接第 5&6 个跨膜螺旋的胞内环上都有 G 蛋白结合位点 GPCR 能结合细胞周围环境中的化学物质并激活细胞内的一系列信号通路, 最终引起细胞状态的改变 GPCR 广泛参与感知 生殖 发育 生长 神经和精神等生命活动以及内分泌和代谢等多种生理过程 ; 同时, 与糖尿病 心脏病 肿瘤 免疫和感染性疾病 神经与精神疾病等重要疾病的发生 发展及治疗密切相关 GPCR 在生理病理过程中的重要生物作用, 这一蛋白家族也是目前最重要的药物作用靶标库, 超过 50% 的临床用药物以及正在研发中的药物都以 G 蛋白偶联受体作为靶点 目前全球 20 种最畅销药物中的 12 种药物的作用靶标为 GPCR GPCR 信号通路研究主要集中在 : 报告基因系统检测转录应答 信号通路第二信使 (Ca 2 +/camp/cgmp/ip3) 改变 无标记 Gq/Gs/Gi 信号通路检测和 GPCR 与配体 / 蛋白结合研究等 Luciferase 报告基因系统检测 5-HT 受体信号通路应答 5-HT( 五羟色胺, 又名血清素 ) 受体属于配体门控离子通道受体的 GPCR 家族成员 5-HT 受体有三种主要亚型 :5-HT2AR 5-HT1AR 和 5-HT7AR 三种亚型同源性低于 25%, 分别属于 Gq Gi 和 Gs 三种类型, 介导不同的信号通路 现已发现,5-HT 受体激活以后, 会有不同的响应原件被激活, 如 NFAT(Nuclear Factor of Activated T cells) SRE(Serum Response Element) 和 CRE(cAMP Response Element) 等 华东理工大学黄瑾教授课题组新发现的一种能对三种信号通路都响应转录水平响应原件, 并通过高灵敏度 高信噪比的 Luciferase 报告基因系统, 检测 5-HT 受体三种亚型的信号通路应答 [Ref: J Huang et al (2015). SCIENTIFIC REPORTS 5: 8060] 18

21 应用实例 GPCR信号通路 GPCR信号通路第二信使Ca2+离子检测 主要有钙敏结合蛋白Aequorin系统 化学发光检测 和钙敏感荧光指 示剂 荧光强度检测 钙敏结合蛋白 Aequorin 系统 免洗钙敏感荧光指示剂检测 钙敏结合蛋白 Aequorin 系统 免洗钙敏感荧光指示剂检测 TR-FRET/LANCE检测GPCR信号通路第二信使cAMP 标记Eu的cAMP与携带ULight的抗体结合形成共振能量转移 对 当内源性的cAMP释放后可以竞争结合其抗体 从而破坏荧光信号的传递 通过检测665/615信号的改变 检测内 源cAMP的含量 LANCE检测方法与传统ELISA方法相比 均相免洗 操作步骤简单 具有更高的检测灵敏度和信噪比 LANCE camp 检测原理 Rank Order of Potencies of camp Response 19

22 应用实例 应用实例 应用实例 GPCR信号通路 无标记Gq/Gs/Gi信号通路检测 Epic无标记 Label Free 技术 通过微孔板上包被的高灵敏生物感受器来检测 细胞内信号通路的实时动态变化 2011年Schröder R. 等人 在Nature Protocol上发表的文章中 详细阐述了Epic无标记 技术应用到GPCR信号通路检测的原理 特点及操作步骤 与传统标记方法相比 无标记检测对细胞无任何损伤和人 工干预 可实现对贴壁或悬浮的原代细胞及工程细胞株的 进行高灵敏 高特异性的实时检测 [Ref: Schröder, R. et al. (2011) Nature Protocol. 6, ] Gq/Gs/Gi通路具有特异性细胞响应曲线 通过实验所得的响应曲线与标准曲线进行比较 即可知道效应分子是哪 几 条通路的调控剂 BRET 生物发光共振能量转移 检测GPCR与蛋白动态结合 GPCR受体分子偶联Rluc发光蛋白 β-arrestin蛋白 偶联GFP荧光蛋白 当GPCR受体被效应分子激活后 能捕获β-arrestin相互作用 形成蛋白复合物 从而发生BRET 实现Rluc 供体 到GFP 受体 的发光能量转移 通过检测BRET发射光信号的改变 研究GPCR与其他蛋白的动态 相互作用 非结合态 仅存在海肾萤光素酶催化产生的蓝光 非结合态 仅存在海肾萤光素酶催化产生的蓝光 20 结合态 可产生来自 GPF 荧光蛋白的绿光 结合态 可产生来自 GPF 荧光蛋白的绿光

23 应用实例 表观遗传学表观遗传学研究的是在细胞核 DNA 序列没有改变的情况下, 基因表达的可逆的 可遗传的改变 这些改变包括 DNA 的修饰 ( 如甲基化修饰 ) 和组蛋白的修饰 ( 如甲基化 乙酰化及泛素化修饰等 ) 基于 TR-FRET/LANCE 方法的表观遗传学分子检测 : 主要以生物素化的组蛋白肽段或天然核小体多聚体为底物而开发 检测原理是铕标记抗体 (Ab) 可特异性识别并结合生物素化的底物, 链霉亲和素 (SA) 标记的 Ulight 也同时结合生物素化底物, 使铕供体和 ULight 受体染料分子相互趋近 经过 320nm 波长光的照射后, 铕供体的能量将转移到 ULight 受体染料中, 并生成波长为 665nm 的发射光 发射光的信号强度与底物修饰的水平成比例 LANCE Ultra 甲基化检测原理 AlphaLISA 甲基化检测原理图 基于 Alpha 方法的表观遗传学检测 : 可检测甲基化 乙酰化 泛素化 RNA 干扰 核酸功能和染色质分析 检测 底物种类从小分子肽端 到全长蛋白 到核小体 (nucleosome), 是一种可高效模仿的生理学水平的检测方法, 具有高灵敏度 操作简单 抗干扰能力强 高信噪比等特点 与 EpiCypher 公司合作,PerkinElmer 提供独特的差异化 bromodomain 结合检测试剂盒用于寻找, 表征和分析 bromodomain 和外结构域 (BET) 抑制剂 这些试剂盒基于无需洗涤的 AlphaLISA 技术来检测 BRD4 p300 bromodomain 与各种乙酰化组蛋白 H2A,H3 或 H4 肽尾结合, 这种强大的技术使研究者可在相关药理浓度范围内分析一系列不同的化合物和 bromodomain 结构域以及组蛋白乙酰化肽尾的相互作用 不但能产生更多的生物相关性数据, 并且能更有效地通过高度敏感的, 可重复的实验来识别选择性药物 AlphaLISA bromodomain 结合检测原理 AlphaLISA 检测使用谷胱甘肽 (GSH) 受体珠捕获 GST 标记的 bromodomain 结构域, 链霉亲和素包被供体珠捕获生物素化的多肽 供体微珠和受体微珠通过 BRD4 与乙酰化组蛋白 H4 肽的结合而接近 供体微珠在 680 纳米被激发引发单线态氧, 其触发一些列在受体微珠上能量级联反应的, 致使在 615 纳米释放尖锐的发射光 JQ1 抑制 BRD4(BD1) 和 H4K5Ac 结合 :JQ1 浓度范围从 3pM 滴定至 10μM BRD4(BD1) 和 H4K5Ac 浓度分别是 25nM 最后通过 GraphPad Prism 5 非线性回归拟合计算后得到 IC50 值为 149.8nM 21

24 应用实例 细胞毒性&药物安全性评价 细胞毒性是化学物质 药物 作用于细胞基本结构及生 理过程中 如细胞膜或细胞骨架结构 细胞新陈代谢 细胞 组分或产物合成 降解或释放 离子调控及细胞分裂等过程改 变 导致细胞存活 增殖及功能紊乱 所引发的不良反应等 在多标记检测平台上可以使用光吸收 比色法 荧光 化学 发光 时间分辨荧光 Alpha及细胞成像等多种检测方法 对 不同类型及机理引起的细胞毒性 进行多参数 全方位检测及 评价 常用的细胞毒性检测方法如下表所示 检测技术 主要实验方法 灵敏度 背景噪声 特异性 实验周期 光吸收 MTT类检测 490 nm CCK8 WST-8 检测 450 nm LDH检测 500 nm SRB检测 540 nm 低 中 中等 1-2小时 荧光强度 阿尔玛蓝 Alamar Blue (530/590 nm) Calcein-AM 活细胞荧光染料 中等 高 中等 >2小时 化学发光法 ATP检测法ATPLite 细胞色素P450酶活检测 高 低 高 < 20分钟 时间分辨荧光 DNA片段化检测 DELFIA DNA fragmentation DNA复制检测 DELFIA BrdU Proliferation 细胞膜通透性检测 DELFIA BATDA Cytotoxicity 高 低 高 1-2小时 Alpha检测 Caspase 等特异性凋亡Marker 高 低 高 1-2 小时 细胞荧光成像 Annexin V等特异性凋亡Marker 高 中 高 >2小时 ATPLite原理 ATP 三磷酸腺苷 是细胞活性的标志物 其仅存在于具有代谢活性的细胞内 因为细胞经历坏死或凋亡时 ATP浓度 会迅速下降 所以ATP是监测细胞毒性 杀伤 抑制和增殖的一种很好的指示剂 ATPlite方法检测的是萤光素酶和其底物D-luciferin反 应所产生的光信号 在反应过程中需要消耗ATP 其产生的化学发光信号同ATP含量成正比 ATPLite检测方法灵敏度更高 最低5个细 胞/孔 线性范围可达5个数量级 操作步骤简单 且信号更加稳定 22

25 应用实例 细胞毒性&药物安全性评价 DNA片段化检测 DELFIA DNA fragmentation 该方法与TUNEL法类似 利用细胞中TdT酶的作用 对凋亡 细胞中片断化DNA的3 -OH游离末端进行高效特异性标记 Bio-dUTP 生物素偶联的dUTP 随后加入StreptavidinEu 镧系元素标记的链霉亲和素 识别被标记的BiodUTP 最后加入Eu解离增强液 通过时间分辨荧光方法检 测Eu镧系元素的发射信号 来评价凋亡细胞中DNA片段化 引起的细胞毒性 DNA 片段化检测 DELFIA DNA fra gmentation 原理 DNA DNA DNA片段化检测 DELFIA 片段化检测 DELFIA DNA frafragmentation 原理 gmentation 原理 DNA 片段化检测 DELFIA DNA fra gmentation 原理 DNA复制检测 DELFIA BrdU Proliferation BrdU是胸腺嘧啶的衍生物 常用于标记活细胞中新合成的 DNA 可代替胸腺嘧啶选择性整合到复制细胞内新合成的DNA中 细胞周期S期 这种掺入可以稳定存在 并可随着DNA复制进入子细胞中 使用Eu标记的BrdU特异性抗体可检测BrdU的掺入 从而判断细胞的增殖能 力 如下图所示 Eu标记的BrdU特异性抗体检测法与传统的同位素 3H-Thymidine 标记掺入法相比 在检测 灵敏度 信噪比 时间相关性及数据稳定上具有相同的优势 且安全性更高 DNA 复制检测原理 DNA DNA 复制检测原理 复制检测原理 细胞膜完整性检测 BATDA能温和穿透细胞膜 对 细胞无毒副作用 BATDA进入细胞后 被细胞内酯酶快 速水解为亲水性的TDA TDA不能在穿透细胞膜而滞留 在细胞质内 当靶细胞被效应细胞 如NK细胞 识别 或受到其他外界条件刺激后 造成细胞膜破损或细胞裂 解 TDA就会释放到溶液中 被Eu标记物识别 最终通 过检测Eu时间分辨荧光的信号 来评价细胞膜的完整性 和通透性 细胞膜完整性检测 DELFIA BATDA Cytotoxicity 原理 细胞膜完整性检测 DELFIA BATDA Cytotoxicity 原理 细胞膜完整性检测 DELFIA BATDA Cytotoxicity 原理 23

26 应用实例 细胞代谢 & 线粒体功能研究 细胞的耗氧速率 (OCR) 和细胞外酸化率 (ECAR) 是细胞能量代谢的主要参数 OCR 代表线粒体中呼吸链活动强弱,ECAR 代表细胞内糖酵解的速率 目前常规方法测定这两项指标均需要特定的仪器及耗材, 但检测方法封闭, 且初期投入及耗材成本昂贵 随着特异性探针技术的不断进步, 现已有新型特异性 TRF 探针可用于细胞代谢分析与线粒体功能性检测, 如细胞外氧消耗测定 细胞内氧消耗测定和细胞外产酸率糖酵解检测 Luxcel Bioscience 该种 TRF 类型的探针稳定性高, 具有良好的水溶性, 且能透过细胞膜, 可特异性感应 O 2 分子和 H + 离子的浓度变化 样品制备在普通细胞培养板中进行, 操作简单方便, 加入试剂混合后即检测, 对样品制备和耗材无特殊性要求 进行信号实时检测时, 基于探针的物理特性, 采用时间分辨荧光 TRF 检测模式, 检测探针受到 O 2 分子或 H + 离子触发后荧光寿命的淬灭速度, 更能精确 实时反应体系内 O 2 分子或 H + 离子的浓度改变 24

27 应用实例 细胞代谢&线粒体功能研究 线粒体膜电位检测 Mitochondrial Membrane Potential, MMP JC-1/JC-10是一种用于检测线粒体膜电位 Ψm的理想荧光探针 可实时检测活细胞和组织内的线粒体膜电位 在线粒体膜电位较高时 探针聚集在线粒体基 质 matrix 中 形成聚合物 J-aggregates 产生红色荧光 EX 585 nm/ EM 590 nm 在线粒体膜电位较低 时 探针不能聚集在线粒体的基质中 此时为单体 monomer 产生绿色荧光 EX 514 nm/ EM 529 nm 通过 探针发射出的红绿荧光的相对比例 来实时检测线粒体完整性 评价由于线粒体去极化引起的细胞早期凋亡 A:聚合体红色通道成像 B:单体绿色通道成像 A:聚合体红色通道成像 B:单体绿色通道成像 [Ref: Paulina Marzec et. al. Cell (2015) 160, , 26. ] 活性氧 Reactive Oxygen Species, ROS 是指生物体内与氧代谢有关的含氧自由基和易形成自由基的过氧化物 的总称 一旦细胞内产生活性氧自由基 就会损伤一系列的细胞组分包括蛋白 脂质和DNA等 活性氧与机体氧化损 伤密切相关 人体的许多生理和病理发生过程中活性氧都参与并扮演重要角色 包括信号传导 衰老 肿瘤发生 动 脉硬化症 黄斑变性 败血症 各种神经衰退性疾病 如阿尔茨海默氏病 帕金森病 和糖尿病等 细胞内ROS检测 Reactive 特异性荧光探针检测细胞内 ROS 改变 Oxygen Species, ROS ROS特异性荧光探针可以自由穿过细胞膜 进入 细胞内后 可以被细胞内的酯酶切掉疏水基而不能再穿 特异性荧光探针检测细胞内 ROS 改变 回细胞外 因此很容易被积聚在细胞内 细胞内的活性 氧能够氧化本身无荧光的ROS探针 而生成有特异性荧光 的物质 其荧光强度与细胞内的ROS含量成正比 可以使 用多模式检测系统里的荧光强度 FI 或细胞成像 cell Imaging 方法 进行ROS的检测分析 [Andrey K et. al. Ana Bio Chem. (2011) 400:8, ] 25

28 应用实例 分子相互作用 抗体药物 研究 自然界中存在各种类型的分子-分子相互作用 不同种 类的相互作用其亲和力大小也不尽相同 分子相互作用的 亲和力范围 KD值 可横跨mM-fM 将近12个数量级 数 值越小 亲和力越高 目前常用的分子相互作用方法有 ELISA显色法 FP TR-FRET和Alpha等方法 Alpha比其他 研究方法 具有更高灵敏度 低噪声 均相免洗及适用范 围广的特点 特别是对于蛋白-蛋白相互作用和低亲和力的 抗体类药物研究 Alpha比其他研究方法更具有不可替代的 技术优势 多标记分子相互作用研究方法对比 单克隆抗体药物是目前药物研发的新热点 与小分 子药物相比 抗体类药物具有高效 低毒 半衰期长等特 Binding of Fc variant Abs to FcγRs measured by competition Alpha 点 但是抗体介导细胞毒性 Antibody-dependent cellmediated cytotoxicity ADCC 是引起抗体类药物不良反 应的一个关键限制因素 Lazar G. A. 等人在2006年PNAS杂 志上发表的文章中 建立了以Alpha技术竞争性验证抗体Fc 片段突变体与FcɤRs亲和力检测的体系 对计算机模拟设计 出的上百种突变体 进行快速 高效的特异性检测 以发 现特异性更高 副作用更小的单克隆抗体药物 [Ref: Lazar G.A et.al. PNAS. (2006) 103, ] 基于共振波导光栅(RWG)技术的无标记分子相互作用检测原理及流程 无标记方法可直接检测分子间相互作用 包括困难靶 点或亲和力较弱的相互作用 ＲＷＧ无标记检测已被业内 使用 RWG 方法评价抗登革热病毒单抗的亲和力(KD 值) 行业领先者广泛接受 与传统无标记检测方法 BioCore SPR 相比 特别是对低亲和力的相互作用 ＲＷＧ具有更 高的灵敏度 同时RWG检测体系具有更好的稳定性 更高 的检测速度和更实用的性价比 [Ref: Dongmei Huet.al. Biosensors (2013) 3, ] 26

29 应用实例 生物标记物 多标 检测 生物标记物是生物体内发生的与发病机制相关的关键事件的指示物 是机体由于接触各种环境因子所引起的机 体器官 细胞 亚细胞的生理 生化免疫和遗传等可检测的改变 基于Alpha技术的检测平台 是一种非放射性 均 相 可代替传统繁琐ELISA技术的高效检测方法 并可直接检测血清 血浆或细胞裂解液等复杂生物样品 Alpha技术 在生物标记物和细胞因子研究领域有着非常广发的应用 其生物标记物检测试剂盒覆盖血管生成 癌症 心血管 炎 症 代谢 中枢神经系统 自噬 病毒类 转基因检测及动物健康等各种应用领域 Emission 615 nm Excitation 680 nm hpd-1 Biotinylated anti-hpd-1 Streptavidin Donor beads Anti-hPD-1 AlphaLISA Acceptor beads PD-1 AlphaLISA 检测原理 PD-1PD-1 AlphaLISA AlphaLISA 检测原理 检测原理 PD-1(Programmed cell death protein-1) 做为细胞免疫治疗的一个热门靶点 是免疫系统的一个checkpoint 可以阻止T细胞激活 从而降 低自身免疫反应 提高个体耐受性 因此是免疫系统的反向调节指标 PD-1 AlphaLISA Biomarker试剂盒可用于血清 血浆及细胞上清 中低丰度的人源 PD-1 (hpd-1, AL343) 的定量检测 AlphaPlex多标记检测 AlphaPlex具 有Alpha技术的所有优点 除了已开发使 用的AlphaLISA Eu 微珠 我们又开发了 AlphaPlex545 Tb 和AlphaPlex645 Sm 微 珠 通过AlphaPlex检测方法 可以在很低的样品 量 <5μL 情况下 在同一孔样品中实现多种 标记物同时检测 更快的得到更准确检测结果 利用AlphaPlex方法 在同一孔内同时对IL6和IL8这样一对生物标记物进行高灵敏度检测 与传统ELISA试剂和相比 数据的稳定性及可 重复性更高 且操作简单 节约时间 27

30 应用实例 农业研究&动物健康 农作物转基因蛋白的定量检测 Cry蛋白是一类苏云金芽胞杆菌表达的抗虫的内毒素 对哺乳动物无毒 因此非 常适合用于农作物抗虫转基因表达 传统的Cry蛋白检测主要是ELISA或试纸法 需经过多次洗涤 费时费事 且定量 不准 基于AlphaLISA技术Cry蛋白检测 可以用于种子提取物的转基因蛋白高灵敏检测 无需洗涤 定量精确 动物健康检测 布鲁士菌是一种会感染牛及其他动物的传染性疾病 会大范围对动物健康产生影响 布鲁士菌 感染性极强 一旦检出 就需要对畜群进行恰当的监测及对病菌进行彻底根除 因此对检测方法要求具有高灵敏度 和高准确性 2008年McGiven J. A. 等人采用AlphaLISA抗体竞争法 用于检测牛 绵羊以及猪的血清布鲁氏菌抗 体 AlphaLISA方法做出的结果与之前的ELISA完全一致 且其检测灵敏度更高 数据重复性非常好 CV值在3%左 右 并省去了很多板子包被及洗涤的过程 该Alpha检测方法已获得世界动物卫生组织OIE (Office International des Epizooties) 及欧盟标准认证 28

31 PerkinElmer 多模式检测系试剂 & 耗材完全解决方案 AlphaLISA 生物标记物检测试剂盒 血管生成 (Angiogenesis) 自体吞噬 (Autophagy) 生物药物相关 (Biologics/ Bioprocess) 癌症 (Cancer) 心血管 (Cardiovascular) 中枢神经 (Central Nervous System) 炎症 (Inflammation) 代谢 (Metabolic) 第二信使 (Second Messenger) 病毒 (Virology) 激素 (Hormones) 农业及种植科学 (Agriculture & Plant science) 动物健康 (Animal Health) 细胞免疫治疗 (Cell Immunotherapy) 其他 (Others) EPO TNFα** TNFα (mouse)** TNFa (mouse, biotin-free) VEGFA (mouse) VEGFB VEGFC VEGFD VEGF (human) TGFβ1 TGFβ1 (biotin-free) EGF/EGFR binding E-Cadherin p62 LC3B Serum Albumin (human) Albumin (mouse) CHO Host Cell Proteins** CHO Host Cell Proteins (broad reactivity)** PER.C6 Host Cell Proteins Residual Protein A** Host Cell DNA residual Anti-Peg IgM Kit IgA (human) IgG (human)** IgM (human) IgG2 (human) IgG3 (human) IgG4 (human) IgE (mouse) IgG (mouse)** IgM (mouse) IgG1 (mouse) IgG2a (mouse) IgG2b (mouse) IgG3 (mouse) Albumin (biotin-free) FCGR3A/CD16a AFP CA125 Caspase-3 active CXCL11/I-TAC EPO ERBB2/HER2 (human)** HGFR/c-MET IFN-β MMP1 MMP2 MMP3 (human)** MMP8 MMP9 MMP9 (mouse) MMP13 PSA TNFα TFF3 Transferrin (human)** Neprilysin VCAM-1 Factor VIII (human, biotin-free) Nidogen-1 PIP collagen (human) β-ngf TGF-β1 (human, biotin-free) Fibrinogen TDP-43 Alpha-2 macroglobulin Cardiac Troponin I D-dimer EPO ICAM-1 Myeloperoxidase Myoglobin PAI-1 PCSK9 (human)** Plasminogen Renin/Prorenin tpa (human)** Transferrin Fibrinogen Laminin Perlecan Amyloid β 1-15 Amyloid β 1-40 Amyloid β 1-40 Amyloid ß 1-40 (high specificity) (mouse/rat) Amyloid β 1-42 Amyloid β 1-42 Amyloid β 1-42 Amyloid β 1-x (high specificity) (mouse/rat) Amyloid β oligomers sappα (C-term specific) Tau BDNF GDNF Frataxin (human)** CXCL1/GRO-α (human)** CCL2/MCP1 (human) ** CCL2/MCP1 (mouse/rat)** CCL3/MIP-1α (human)** CCL4/MIP-1β CCL5 / RANTES (human)** CCL5 / RANTES (mouse) CRP** CXCL9/MIG (human)** CXCL10/IP-10 G-CSF GM-CSF GM-CSF (mouse) IFN-α (human)** IFN-γ (human)** IFN-γ (biotin-free) IFN-γ (mouse)** IL1α (human)** IL1β (human)** IL1β (rat) IL1β (mouse)** IL2 (human)** IL2 (biotin-free) IL2 (mouse) IL3 IL4 (human)** IL5 (human)** IL6 (human)** IL6 (mouse)** IL7 IL7 (mouse) IL8 (human)** IL8 (biotin-free) IL10 IL10 (mouse) IL11 (human)** IL12 (p70) IL13 IL15 IL15 (mouse) IL17A (human)** IL17A (mouse/rat)** IL17 homodimer IL18 TNFα (human)** TNFα (mouse)** TNFa (mouse, biotin-free) IL22(human/rat) IP10 IL-1RA (human) IL 15 (biotin-free) IL28B Adiponectin (human)** Adiponectin (mouse) Albumin (human) Albumin (mouse) C-peptide (mouse/rat) BMP-7 GLP-1 (7-36) (human)** Growth Hormone IGF1 IGF2 Insulin Insulin (high sensitivity) Leptin (human)** Leptin (mouse)** Prolactin Glucagon Testosterone Somatostatin Cortisol camp cgmp HIV p24 (high sensitivity) HIV p24 HIV p24 (biotin-free) Progesterone Leptin (human)** Leptin (mouse)** Cry1F Cry2A IL1β (Bovine) IL6 (Bovine) IL1α (Bovine) TNFα (Bovine) IFNγ (Bovine) IgM (Bovine) IgA (Bovine) IgG1 (Bovine) IgG2 (Bovine) Total IgG (Bovine) IL2 (Bovine) IL4 (Bovine) PD 1 (human) PD-L1 (human) PD-1/PD-L1 binding (human) Hyaluronic acid COL1A1 ** 同时提供 LANCE Ultra (TR-FRET) 生物标记物检测试剂盒 29

32 PerkinElmer 多模式检测系试剂 & 耗材完全解决方案 ALPHA 工具箱试剂 Fusion Tag Detection Antibody Capture Alpha Donor Beads AlphaLISA Acceptor Beads AlphaScreen Acceptor Beads AlphaScreen Fusion Tag Detection Kits FITC Streptavidin Anti-FITC Anti-Myc Nickel Chelate FLAG GST Streptavidin Strep Tactin Anti-6*His Anti-GST Anti-GST HA Strep Tactin Nickel Chelate Anti-V5 Anti-DIG Anti-c-myc Hisditin (Nickel Nickel Chelate Glutathione (GSH) Anti-HA Anti-FITC Anti-DIG Chelate) Glutathione (GSH) Anti-FLAG Anti-Maltose Binding Protein (MBP) Anti-FLAG Anti-FITC Biotinylated-GST Anti-FLAG Anti-GST LCA (Lens Culinaris Agglutinin) Anti-HA Anti-FLAG Biotinylated-HIS Anti-c-myc Anti-DIG c-myc DIG Alpha Donor Beads AlphaLISA Acceptor Beads AlphaScreen Acceptor Beads Protein A Anti-rabbit IgG (Fc specific) Anti-mouse IgG (Fc specific) Protein A Protein G Protein L Anti-human IgG1 Anti-human IgG2 Anti-human IgG3 Anti-human IgG4 Anti-mouse IgG1 Anti-mouse IgG2a Anti-mouse IgG2b Anti-mouse IgG3 Anti-mouse IgE Anti-mouse IgA Anti-rabbit IgG (Fc specific) Anti-mouse IgG (Fc specific) Anti-rat IgG (Fc specific) Anti-goat IgG (Fc specific) Anti-sheep IgG (Fc specific) Anti-mouse IgM Anti-chicken IgY Anti-Bovine IgG Anti-Bovine IgG1 Anti-Bovine IgG2 Anti-Bovine IgM Anti-Bovine IgA Anti-PEG IgM Protein A Anti-rabbit IgG (Fc specific) Anti-mouse IgG (Fc specific) Control Beads Omnibeads TruHits Kit AlphaPlex 多标记生物标记物检测试剂盒 AlphaPlex 多标记工具箱试剂 描述产品编号 Assay Points 描述产品编号产品规格 (384 孔 /96 孔 for HV) AP204TB-C mg AlphaPlex human Insulin AP204TB-F 5000 AlphaPlex 545 (Tb) raw beads mg Tb kit AP204TB-HV mg AP204SM-C mg AlphaPlex human Insulin AlphaPlex 645 (Sm) raw AP204SM-F mg Sm kit beads AP204SM-HV mg AP208TB-C 500 AP101TB-C 250ug AlphaPlex human TNF alpha Protein A AlphaPlex Tb AP208TB-F 5000 AP101TB-M 5mg Tb kit Acceptor beads AP208TB-HV 100 AP101TB-R 25mg AP208SM-C 500 AP101SM-C 250ug AlphaPlex human TNF alpha Protein A AlphaPlex Sm AP208SM-F 5000 AP101SM-M 5mg Sm kit Acceptor beads AP208SM-HV 100 AP101SM-R 25mg AP217TB-C 500 AP103TB-C 250ug AlphaPlex human Interferon Anti-human IgG AlphaPlex Tb AP217TB-F 5000 AP103TB-M 5mg gamma Tb kit Acceptor beads AP217TB-HV 100 AP103TB-R 25mg AP217SM-C 500 AP103SM-C 250ug AlphaPlex human Interferon Anti-human IgG AlphaPlex AP217SM-F 5000 AP103SM-M 5mg gamma Sm kit Sm Acceptor beads AP217SM-HV 100 AP103SM-R 25mg AP219TB-C 500 AP105TB-C 250ug AlphaPlex human Anti-mouse IgG AlphaPlex Tb AP219TB-F 5000 AP105TB-M 5mg Interleukin 17 Tb kit Acceptor beads AP219TB-HV 100 AP105TB-R 25mg AP219SM-C 500 AP105SM-C 250ug AlphaPlex human Anti-mouse IgG AlphaPlex Sm AP219SM-F 5000 AP105SM-M 5mg Interleukin 17 Sm kit Acceptor beads AP219SM-HV 100 AP105SM-R 25mg AP220TB-C 500 AP109TB-C 250ug AlphaPlex human Glutathione AlphaPlex Tb AP220TB-F 5000 AP109TB-M 5mg Interleukin 1 beta Tb kit Acceptor beads AP220TB-HV 100 AP109TB-R 25mg AP220SM-C 500 AP119TB-C 250ug AlphaPlex human AlphaPlex anti-unmodified P220SM-F 5000 AP119TB-M 5mg Interleukin 1 beta Sm kit H3K4 Tb Acceptor beads AP220SM-HV 100 AP119TB-R 25mg AP221TB-C 500 AP125TB-C 250ug AlphaPlex human Streptavidin AlphaPlex Tb AP221TB-F 5000 AP125TB-M 5mg Interleukin 2 Tb kit Acceptor beds AP221TB-HV 100 AP125TB-R 25mg AP221SM-C 500 AP128TB-C 250ug AlphaPlex human Anti-6 His AlphaPlex Tb AP221SM-F 5000 AP128TB-M 5mg Interleukin 2 Sm kit Acceptor beads AP221SM-HV 100 AP128TB-R 25mg AP223TB-C 500 AP128SM-C 250ug AlphaPlex human Anti-6 His AlphaPlex Sm AP223TB-F 5000 AP128SM-M 5mg Interleukin 6 Tb kit Acceptor beads AP223TB-HV 100 AP128SM-R 25mg AP900TB-D 1000 AP170TB-C 250ug AlphaPlex TruHits Tb kit Anti-HA AlphaPlex Tb AP900TB-M AP170TB-M 5mg Acceptor beads AP900SM-D 1000 AP1R70TB-R 25mg AlphaPlex TruHits Sm kit AP900SM-M

33 PerkinElmer 多模式检测系试剂 & 耗材完全解决方案应用 PerkinElmer 小动物活体成像试剂汇总 ALPHA 及 LANCE Ultra(TR-FRET) 表观遗传学分子学水平检测试剂 乙酰化相关修饰检测 Validated Assays Alpha Technology LANCE Ultra (TR-FRET) 检测靶点 乙酰化转移酶 去乙酰化酶 AlphaLISA anti-mark Acceptor Beads ( 需配合 Alpha Streptavidin Donor beads 使用 ) LANCE Ultra Europium-labeled anti-mark Antibody ( 需配合 LANCE Ultra ULight-Streptavidin 使用 ) 产品编号 规格 Assay Points 产品编号 规格 Assay Points AL119C 250 µg 500 H3K4 TRF0404-D 10 µg 1500 SIRT1 AL119M 5 mg unmodified TRF0404-M 100 µg AL119R 25 mg H3K9/K27 unmodified H3K9ac p300 H3K27ac p300 HDAC1 H4Kac (pan) TIP60 p53 K382ac p300 SIRT1 AL138C AL138M AL138R AL114C AL114M AL114R AL120C AL120M AL120R AL143C AL143M AL143R AL124C AL124M AL124R 250 μg 5 mg 25 mg 250 µg 5 mg 25 mg 250 µg 5 mg 25 mg 250 µg 5 mg 25 mg 非组蛋白靶点 250 µg 5 mg 25 mg TRF0411-D TRF0411-M TRF0400-D TRF0400-M TRF0405-D TRF0405-M TRF0412-D TRF0412-M TRF0409-D TRF0409-M 10 µg 100 µg 10 µg 100 µg 10 µg 100 µg 10 µg 100 µg 10 µg 100 µg 甲基化相关修饰检测 Validated Assays Alpha Technology LANCE Ultra (TR-FRET) 检测靶点 甲基化转移酶 去甲基化酶 AlphaLISA anti-mark Acceptor Beads ( 需配合 Alpha Streptavidin Donor beads 使用 ) LANCE Ultra Europium-labeled anti-mark Antibody ( 需配合 LANCE Ultra ULight-Streptavidin 使用 ) 产品编号 规格 Assay Points 产品编号 规格 Assay Points H3R2me2 AL139C 250 µg 500 PRMT6 AL139M 5 mg PRMT1 AL139R 25 mg H3K4 unmodified H3K4me1-2 H3K9/K27 unmodified H3K9me2 SET7/9 G9a LSD1 JMJD1A JMJD3 JMJD2A JMJD2C H3K27me2-1 EZH2 JMJD3 H3K27me3 EZH2 H3K36me2 NSD2 JMJD2A H3K79me2* H3R2me H3Rme and H4Rme (pan) H4K20me1 H4R3me1 DOT1L PRMT6 PRMT4 SET8 PRMT1 AL119C AL119M AL119R AL116C AL116M AL116R AL138C AL138M AL138R AL117C AL117M AL117R AL121C AL121M AL121R AL122C AL122M AL122R AL123C AL123M AL123R AL147C AL147M AL147R AL139C AL139M AL139R AL151C AL151M AL151R AL145C AL145M AL145R AL150C AL150M AL150R *DOT1L 检测还需配合 biotinylated anti-h3k79me2 antibody (AL148) 使用 250 µg 5 mg 25 mg 250 µg 5 mg 25 mg 250 µg 5 mg 25 mg 250 µg 5 mg 25 mg 250 µg 5 mg 25 mg 250 µg 5 mg 25 mg 250 µg 5 mg 25 mg 250 µg 5 mg 25 mg 250 µg 5 mg 25 mg 250 µg 5 mg 25 mg 250 µg 5 mg 25 mg 250 µg 5 mg 25 mg TRF0404-D TRF0404-M TRF0402-D TRF0402-M TRF0411-D TRF0411-M TRF0403-D TRF0403-M TRF0406-D TRF0406-M TRF0407-D TRF0407-M TRF0408-D TRF0408-M TRF0415-D TRF0415-M TRF0414-D TRF0414-M 10 µg 100 µg 10 µg 100 µg 10 µg 100 µg 10 µg 100 µg 10 µg 100 µg 10 µg 100 µg 10 µg 100 µg 10 µg 100 µg 10 µg 100 µg

34 PerkinElmer 多模式检测系试剂 & 耗材完全解决方案 AlphaLISA 表观遗传学细胞学水平检测试剂盒 检测靶点 产品编号 Assay Points (384 孔 ) ALPHA 酪氨酸磷酸化检测试剂盒 描述 AlphaScreen PY20 (Phosphotyrosine) Assay kit AlphaScreen PT66 (Phosphotyrosine) Assay kit AlphaScreen P-Tyr-100 (Phosphotyrosine) Assay kit AlphaScreen PhosphoSensor (Phosphotyrosine) kit AlphaLISA Bromodomain 结合检测试剂盒 描述 产品编号 Assay Points (384 孔 ) Methyl Modifications( 甲基化修饰 ) AL601C 500 AlphaLISA BRD4_BD1 / H4 K5Ac AL716HV 100 AL601F 5000 H3K4me2 AL716C 500 AL603C 500 AlphaLISA BRD4_BD1 / H4 K8Ac AL716F 5000 AL603F 5000 AL722HV 100 AL605C 500 AlphaLISA BRD4_BD1 / H4 K12Ac H3K27me3 AL722C 500 AL605F 5000 AL722F 5000 AL607C 500 AlphaLISA BRD4_BD1 / H4 K16Ac AL717HV 100 AL607F 5000 H3K9me2 AL717C 500 AL609C 500 AlphaLISA BRD4_BD1 / H4 K5,8,12,16Ac AL717F 5000 AL609F 5000 AL721HV 100 AL611C 500 AlphaLISA BRD4_BD1 / H4 K5,8,12Ac H3K27me2-1 AL721C 500 AL611F 5000 AL721F 5000 AL613C 500 AlphaLISA BRD4_BD1 / H4 K5,12Ac AL723HV 100 AL613F 5000 H3K36me2 AL723C 500 AL615C 500 AlphaLISA BRD4_BD1 / H4 K8,16Ac AL723F 5000 AL615F 5000 AL748HV 100 AL602C 500 AlphaLISA BRD4_BD2 / H4 K5Ac H3K79me2 AL748C 500 AL602F 5000 AL748F 5000 AL604C 500 AlphaLISA BRD4_BD2 / H4 K8Ac Acetyl Modifications( 乙酰化修饰 ) AL604F 5000 AL714HV 100 AL606C 500 AlphaLISA BRD4_BD2 / H4 K12Ac H3K9ac AL714C 500 AL606F 5000 AL714F 5000 AL608C 500 AlphaLISA BRD4_BD2 / H4 K16Ac AL720HV 100 AL608F 5000 H3K27ac AL720C 500 AL610C 500 AlphaLISA BRD4_BD2 / H4 K5,8,12,16Ac AL720F 5000 AL610F 5000 Phospho Modifications( 磷酸化修饰 ) AL612C 500 AlphaLISA BRD4_BD2 / H4 K5,8,12Ac TGRH3S AL612F 5000 H3Ser10p** TGRH3S10K 500 AL614C 500 AlphaLISA BRD4_BD2 / H4 K5,12Ac TGRH3S50K 5000 AL614F 5000 Normalization Assay AL616C 500 AlphaLISA BRD4_BD2 / H4 K8,16Ac AL719HV 100 AL616F 5000 H3K4 unmodified AL719C 500 AL719F 5000 ** 需要配合 AlphaScreen General IgG (Protein A) 检测试剂盒使用 G 蛋白偶联受体激活第二信使检测试剂盒 产品编号 Assay Points Assay Points 描述产品编号 (384 孔 ) (384 孔 ) C 500 AD M AD0262E 1000 LANCE camp Kit R AD C 500 AD M TRF R LANCE Ultra camp Kit TRF C 500 TRF M D R AlphaScreen camp Kit M D R M AL315HV 100 AlphaLISA camp Kit AL315C 500 AL315F 5000 AL316HV 100 AlphaLISA cgmp Kit AL316C 500 AL316F 报告基因化学发光检测系统 细胞毒与细胞增殖检测试剂盒 Assay Points Assay Points 描述规格产品编号描述规格产品编号 (96 孔 ) (96 孔 ) 10ml ml Britelite plus Reporter Gene Assay 100ml ATPlite 1step Luminescence Assay 100ml System 报告基因检测系统 System 一步法 ATP 检测试剂盒 1000ml ml ml Neolite Reporter Gene Assay System 100ml ATPlite Luminescence Assay System 报告基因检测系统 1000ml 二步法 ATP 检测试剂盒 ml DELFIA Steadylite plus Reporter Gene Assay 100ml Cell proliferation kit 10 x 96 AD 细胞增殖试剂盒孔板 System 报告基因检测系统 DELFIA 1000ml EuTDA Cytotoxicity Reagents 10 x 96 AD 细胞毒性试剂盒孔板

35 PerkinElmer 多模式检测系试剂 & 耗材完全解决方案应用 PerkinElmer 小动物活体成像试剂汇总 根据不同信号通路划分的 Alpha Surefire 系列试剂盒 PI3K/Akt/ mtor Pathway JAK/STAT Pathway NFκB Pathway MAPK Pathway Receptors TGFß/BMP/SMAD Others Pathway 4E-BP1 STAT1 IκBα ATF-1 ALK SMAD1 Beta catenin Akt STAT3 IKKα ATF-2 c-met SMAD2 Chk1 BAD STAT5 IKKß c-jun EGF Receptor SMAD3 Chk2 Caspase-9 NFkB p65 p-creb ErbB2 Cofilin eif4e ELK1 IGF-1 Receptor ß eif2α GSK-3α ERK 1/2 Insulin Receptor ß GAPDH GSK-3ß HSP27 VEGF Receptor 2 Histone H3 mtor JNK1/2/3 P53 p70s6k MEK1 Topoisomerase IIα PDK1 MKK3/6 S6RP MKK4 P38 MAPK AlphaScreen Surefire 细胞磷酸化蛋白检测试剂盒 描述 Phospho-Akt 1 (Thr308) Phospho-Akt 1 (Ser473) Phospho-Akt1/2(3) (Ser473) Phospho-Akt 1/2/3 (Ser473) Phospho-Akt 1/2/3 (Thr308) Total Akt 1 Total Akt 1/2/3 Phospho-BAD (Ser112) Phospho-BAD (Ser136) Phospho-Caspase 9 (Ser196) Phospho-GSK-3a (Ser21) Phospho-GSK-3b (Ser9) Phospho-PDK1 (Ser241) Phospho-STAT1 (Tyr701) Phospho-STAT3 (Tyr705) Total STAT3 Phospho-STAT5 (Tyr694/699) Phospho-IkBa (Ser32/36) AlphaLISA Surefire Ultra 细胞磷酸化蛋白检测试剂盒 Assay Points Assay Points Assay Points 产品编号 (384 孔 /96 孔 for HV) 描述 产品编号 (384 孔 /96 孔 for HV) 描述 产品编号 (384 孔 /96 孔 for HV) TGRA2S TGRJS ALSU-PAKT-A Phospho-JNK 1/3 TGRA2S10k TGRJS10k Phospho-Akt 1/2/3 ALSU-PAKT-A10k (Thr183/Tyr185) TGRA2S50k TGRJS50k (Thr308) ALSU-PAKT-A50k TGRA5S TGRJPS ALSU-PAKT-A-HV 100 Phospho-JNK 1/2/3 TGRA5S10k TGRJPS10k ALSU-PAKT-B (Thr183/Tyr185) TGRA5S50k TGRJPS50k Phospho-Akt 1/2/3 ALSU-PAKT-B10k TGRAS TGRTJS (Ser473) ALSU-PAKT-B50k TGRAS10k Total JNK 1/2/3 TGRTJS10k ALSU-PAKT-B-HV 100 TGRAS50k TGRTJS50k ALSU-TAKT-A TGRA4S TGRCJS ALSU-TAKT-A10k Phospho-c-Jun Total AKT 1 TGRA4S10k TGRCJS10k ALSU-TAKT-A50k (Ser63) TGRA4S50k TGRCJS50k ALSU-TAKT-A-HV 100 TGRA3S TGRCJ2S ALSU-PCREB-A Phospho-c-Jun TGRA3S10k TGRCJ2S10k Phospho-CREB ALSU-PCREB-A10k (Ser73) TGRA3S50k TGRCJ2S50k (Ser133) ALSU-PCREB-A50k TGRTA1S TGRMS ALSU-PCREB-A-HV 100 Phospho-MEK1 TGRTA1S10k TGRMS10k ALSU-PEIF2-A (Ser 218/222) TGRTA1S50k TGRMS50k Phospho-eIF2a ALSU-PEIF2-A10k TGRTAPS TGRMK3S (Ser51) ALSU-PEIF2-A50k Phospho-MKK3/6 TGRTAPS10k TGRMK3S10k ALSU-PEIF2-A-HV 100 (Ser189/207) TGRTAPS50k TGRMK3S50k ALSU-PEIF4-A TGRBS TGRMK4S Phospho-EIF4E ALSU-PEIF4-A10k Phospho-MKK4 TGRBS10k TGRMK4S10k (Ser209) ALSU-PEIF4-A50k (Ser257/Thr261) TGRBS50k TGRMK4S50k ALSU-PEIF4-A-HV 100 TGRB2S TGR38S ALSU-PERK-A Phospho-p38 MAPK TGRB2S10k TGR38S10k Phospho-ERK 1/2 ALSU-PERK-A10k (Thr180/Tyr182) TGRB2S50k TGR38S50k (Thr202/Tyr204) ALSU-PERK-A50k TGRC9S TGRT38S ALSU-PERK-A-HV 100 TGRC9S10k Total p38 MAPK TGRT38S10k ALSU-TERK-A TGRC9S50k TGRT38S50k ALSU-TERK-A10k Total ERK ½ TGRGAS TGRALS ALSU-TERK-A50k Phospho-ALK TGRGAS10k TGRALS10k ALSU-TERK-A-HV 100 (Tyr1586) TGRGAS50k TGRALS50k ALSU-PIKKA-A TGRGBS TGRAL2S Phospho-IKKa ALSU-PIKKA-A10k Phospho-ALK TGRGBS10k TGRAL2S10k (Ser176/Ser180) ALSU-PIKKA-A50k (Tyr1604) TGRGBS50k TGRAL2S50k ALSU-PIKKA-A-HV 100 TGRPS TGRTALS ALSU-PNFKB-A TGRPS10k Total ALK TGRTALS10k Phospho-NFkB ALSU-PNFKB-A10k TGRPS50k TGRTALS50k (Ser536) ALSU-PNFKB-A50k TGRS1S TGRCMS ALSU-PNFKB-A-HV 100 Phospho-c-Met TGRS1S10k TGRCMS10k ALSU-PP38-A (Tyr1234/1235) Phospho-p38 TGRS1S50k TGRCMS50k ALSU-PP38-A10k MAPK TGRS3S Phospho-EGF TGRERS ALSU-PP38-kA50k (Thr180/Tyr182) TGRS3S10k Receptor TGRERS10k ALSU-PP38-A-HV 100 TGRS3S50k (Tyr1068) TGRERS50k ALSU-TP38-A TGRTS3S TGREB2S ALSU-TP38-A10k Phospho-ErbB2 Total p38 MAPK TGRTS3S10k TGREB2S10k ALSU-TP38-A50k (Tyr1221/1222) TGRTS3S50k TGREB2S50k ALSU-TP38-A-HV 100 TGRS5S Phospho-IGF-1 TGRIGFS ALSU-PP70-A TGRS5S10k Receptor TGRIGFS10k Phospho-p70 S6K ALSU-PP70-A10k TGRS5S50k (Tyr1135/1136) TGRIGFS50k (Thr389) ALSU-PP70-A50k TGRIKS Phospho-Insulin TGRIRS ALSU-PP70-A-HV 100 TGRIKS10k Receptor TGRIRS10k Phospho-SMAD1 ALSU-PSM1-A TGRIKS50k (Tyr1150/1151) TGRIRS50k (Ser463/Ser465) ALSU-PSM1-A10k

36 PerkinElmer 多模式检测系试剂 & 耗材完全解决方案 AlphaScreen Surefire 细胞磷酸化蛋白检测试剂盒 Total IkBa 描述 Phospho-IKKa (Ser176/180) Phospho-IKKb (Ser177/181) Phospho-NFkB p65 (Ser536) Total NFkb p65 Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) Phospho-4E-BP1 (Thr70) Phospho-eIF4E (Ser209) Phospho-mTOR (Ser2448) Phospho-p70S6K (Thr229) Phospho-p70S6K (Thr389) Phospho-p70S6K (Thr421/Ser424) Total p70s6k Phospho-S6RP (Ser235/236) Phospho-S6RP (Ser240/244) Phospho-ATF1 (Ser63) Phospho-ATF2 (Thr71) Phopho-ELK1 (Ser383) Phospho-ERK 1/2 (Thr202/Tyr204) Total ERK 1/2 Phospho-HSP27 (Ser82) AlphaLISA Surefire Ultra 细胞磷酸化蛋白检测试剂盒 Assay Points Assay Points Assay Points 产品编号 (384 孔 /96 孔 for HV) 描述 产品编号 (384 孔 /96 孔 for HV) 描述 产品编号 (384 孔 /96 孔 for HV) TGRTIKS Phospho-VEGF TGRVRS Phospho-SMAD1 ALSU-PSM1-A50k TGRTIKS10k Receptor2 TGRVRS10k (Ser463/Ser465) ALSU-PSM1-A-HV 100 TGRTIKS50k (Tyr1175) TGRVRS50k ALSU-PSM3-A TGRKAS TGRSM1S Phospho-SMAD3 ALSU-PSM3-A10k Phospho-Smad1 TGRKAS10k TGRSM1S10k (Ser423/Ser425) ALSU-PSM3-A50k (Ser463/465) TGRKAS50k TGRSM1S50k ALSU-PSM3-A-HV 100 TGRKBS TGRSM2S ALSU-PST3-A Phospho-Smad2 TGRKBS10k TGRSM2S10k Phospho-STAT3 ALSU-PST3-A10k (Ser465/467) TGRKBS50k TGRSM2S50k (Tyr705) ALSU-PST3-A50k TGRNFS TGRSM3S ALSU-PST3-A-HV 100 Phospho-Smad3 TGRNFS10k TGRSM3S10k ALSU-PST5-A (Ser423/425) TGRNFS50k TGRSM3S50k Phospho-STAT5 ALSU-PST5-A10k TGRTNFS TGRBCS (Tyr694/Tyr699) ALSU-PST5-A50k Phospho-beta catenin TGRTNFS10k TGRBCS10k ALSU-PST5-A-HV 100 (Ser45) TGRTNFS50k TGRBCS50k ALSU-TGAPD-A TGR4ES TGRCHK1S ALSU-TGAPD-A10k Phospho-Chk1 Total GAPDH TGR4ES10k TGRCHK1S10k ALSU-TGAPD-A50k (Ser345) TGR4ES50k TGRCHK1S50k ALSU-TGAPD-A-HV 100 TGR4E2S TGRCHK2S ALSU-P4EBP-A Phospho-Chk2 TGR4E2S10k TGRCHK2S10k Phospho-4E-BP1 ALSU-P4EBP-A10k (Thr68) TGR4E2S50k TGRCHK2S50k (Thr37/46) ALSU-P4EBP-A50k TGREIF4S TGRCOFS ALSU-P4EBP-A-HV 100 Phospho-cofilin TGREIF4S10k TGRCOFS10k ALSU-PEGFR-A (Ser3) TGREIF4S50k TGRCOFS50k Phospho-EGFR ALSU-PEGFR-A10k TGRMTS TGRCBS (Tyr1068) ALSU-PEGFR-A50k Phospho-CREB1 TGRMTS10k TGRCBS10k ALSU-PEGFR-A-HV 100 (Ser133) TGRMTS50k TGRCBS50k ALSU-PIGFR-A Phospho-IGF-1 TGR703S TGRGDS ALSU-PIGFR-A10k Receptor β TGR703S10k Total GAPDH TGRGDS10k ALSU-PIGFR-A50k (Tyr1135/1136) TGR703S50k TGRGDS50k ALSU-PIGFR-A-HV 100 TGR70S TGRH3S ALSU-PVGFR-A Phospho-Histone H3 Phospho-VEGF TGR70S10k TGRH3S10k ALSU-PVGFR-A10k (Ser10) Receptor 2 TGR70S50k TGRH3S50k ALSU-PVGFR-A50k (Tyr1175) TGR702S TGRP53S ALSU-PVGFR-A-HV 100 Phospho-p53 TGR702S10k TGRP53S10k ALSU-PINR-A (Ser15) Phospho-Insulin TGR702S50k TGRP53S50k ALSU-PINR-A10k Receptor β TGRT70S TGRP532S ALSU-PINR-A50k Phospho-p53 (Tyr1150/1151) TGRT70S10k TGRP532S10k ALSU-PINR-A-HV 100 (Ser392) TGRT70S50k TGRP532S50k TGRS6PS TGRT53S TGRS6PS10k Total p53 TGRT53S10k TGRS6PS50k TGRT53S50k TGRS6P2S Phospho- TGRT2A2S TGRS6P2S10k Topoisomerase IIa TGRT2A2S10k TGRS6P2S50k (Ser1106) TGRT2A2S50k TGRAF1S Phospho- TGRT2AS TGRAF1S10k Topoisomerase IIa TGRT2AS10k TGRAF1S50k (Thr1343) TGRT2AS50k TGRAF2S TGRTT2AS Total Topoisomerase TGRAF2S10k TGRTT2AS10k IIa TGRAF2S50k TGRTT2AS50k TGRELKS Phospho-Akt 1/2/3 (Ser473) TGRA4SHV TGRELKS10k Total Akt 1/2/3 TGRTAPSHV TGRELKS50k Phospho-ERK 1/2 (Thr202/Tyr204) TGRESHV TGRES Total ERK 1/2 TGRTESHV TGRES10k Phospho-NFkB p65 (Ser536) TGRNFSHV TGRES50k Total NFkB p65 TGRTNFSHV TGRTES Phospho-p53 (Ser15) TGRP53SHV TGRTES10k Total p53 TGRT53SHV TGRTES50k Phospho-STAT3 (Tyr705) TGRS3SHV TGRHS27S Total STAT3 TGRTS3SHV TGRHS27S10k TGRHS27S50k

37 PerkinElmer 多模式检测系试剂 & 耗材完全解决方案 LANCE Ultra ULight 标记丝氨酸 / 苏氨酸激酶底物及与其配对 Eu 标记抗体 : 激酶 底物 + 与底物配对的抗体 规格 产品编号 Assay Points (384 孔 ) AKT1/2/3; AMPKα2/β1/γ1(PRKAA2/B1/G1); AurB / 0.5 nmol TRF0107-D 1000 ULight-CREBtide (Ser133) INCENP; CaMK42; CGK2; CHK1; CLK2/3; DAPK1; 5 nmol TRF0107-M DCAMKL1/2; DLK (MAP3K12); MNK1 (MKNK1); PKCα 10 ug TRF0200-D 1500 Europium-anti-phospho-CREB (Ser133) (PRKCA); SGK 100 ug TRF0200-M CDK1/2/3/4/5; CLK1; DYRK2; ERK1/2; JNK1;ICK ULight-Myelin Basic Protein Peptide 0.5 nmol TRF0109-D nmol TRF0109-M Europium-anti-phospho-Myelin Basic Protein 10 ug TRF0201-D ug TRF0201-M nmol TRF0106-D 1000 ULight-Crosstide (GSK-3α Ser21) AKT1/2/3; CAMK1/2; CHK1; MSK1/2; NEK2; PASK; 5 nmol TRF0106-M PKACα (PRKACA); RSK2/3/4; SGK2/3 Europium-anti-phospho-Crosstide (GSK-3α 10 ug TRF0202-D 1500 Ser21) 100 ug TRF0202-M nmol TRF0110-D 1000 ULight-PLK (Ser137) Peptide AKT1/2/3; AurA; DAPK1; LRRK2; MARK1/2/4; MSK1/2; 5 nmol TRF0110-M PAK1/2/3/5; PKA; PKC; PKD1/2; RSK1/23/4; SGK1/2/3; 10 ug TRF0203-D 1500 Europium-anti-phospho-PLK (Ser137) 100 ug TRF0203-M nmol TRF0108-D 1000 ULight-PKC Substrate (Ala25Ser) AKT1/2/3; CHK1;DLK; IKK; NEK1/2; PKC; PKN1/3; 5 nmol TRF0108-M SGK2/3; Europium anti-phospho-pkc Peptide 10 ug TRF0207-D 1500 (Ala25Ser) 100 ug TRF0207-M nmol TRF0111-D 1000 ULight-Tyrosine Hydroxylase (Ser40) Peptide 5 nmol TRF0111-M Aurora A; PAK2; MSK1; PKA; PKC Europium-anti-phospho-Tyrosine hydroxylase 10 ug TRF0204-D 1500 (Ser40) 100 ug TRF0204-M nmol TRF0113-D 1000 ULight-IκBα (Ser32/36) Peptide 5 nmol TRF0113-M CK2a1/b; GRK5; IKKα/β; PLK3; Europium-anti-phospho-IkappaB-alpha 10 ug TRF0206-D 1500 (Ser32/36) 100 ug TRF0206-M ULight-Histone H3 (Thr3/Ser10) Peptide 0.5 nmol TRF0125-D nmol TRF0125-M MSK1/2; PAK2/3; RSK1/2/3/4; CDK8; CK1/2; GPRK4/6/7; 10 ug TRF0210-D 1500 Europium-anti-phospho-Histone H3 (Ser10) IKK; IRAK4;PEK; PGK; PLK; TLK1/2; 100 ug TRF0210-M Europium-anti-phospho-Histone H3 (Thr3) 10 ug TRF0211-D ug TRF0211-M nmol TRF0119-D 1000 ULight-mTOR (Ser2448) Peptide AKT1/2/3; AurA/B; CHK1; IKKα/β; MSK1/2; S6K; P70S6; 5 nmol TRF0119-M PASK; PIM1/2/3; PKA; RSK2/3/4; SGK2/3; TBK1; 10 ug TRF0209-D 1500 Europium-anti phospho-mtor (Ser2448) 100 ug TRF0209-M CAMKK1; COT; GPRK4; HGK; IKKβ; IRAK4; MAP4K5; 0.5 nmol TRF0126-D 1000 ULight-p70S6K (Thr389) Peptide 5 nmol TRF0126-M MINK; MST1/2; mtor; NEK1/2/3/4/6/9/11; PEK; PLK1; 10 ug TRF0214-D 1500 TBK1; ZAK; Europium-anti-phospho-p70S6K (Thr389) 100 ug TRF0214-M ULight-Acetyl-CoA Carboxylase (Ser79) SAMS 0.5 nmol TRF0118-D 1000 AMPKα1/β1/γ1; IKKα/β; IRAK4; MAP4K5; MARK1/2/4; Peptide 5 nmol TRF0118-M NEK1/9; TBK1; TSK2; TSSK1/2/3; Europium-anti-phospho-Acetyl-CoA 10 ug TRF0208-D 1500 Carboxylase (Ser79) 100 ug TRF0208-M nmol TRF0123-D 1000 ULight-Cdc25C (Ser216) Peptide AMPKα2/β1/γ1; BRSK2; MARK3; MAPKAPK3; TSSK1/2; 5 nmol TRF0123-M PKA; Europium-anti-phospho-(Ser) binding motif, mab 4E2 10 ug AD ULight-eIF4E-binding protein 1 (Thr37/46) 0.5 nmol TRF0128-D 1000 mtor Peptide 5 nmol TRF0128-M Europium-anti-phospho-eIF4E-binding protein 10 ug TRF0216-D (Thr37/46) 100 ug TRF0216-M ULight-40S Ribosomal Protein S6 (pser235/ 0.5 nmol TRF0129-D 1000 RSK2 Ser236) Peptide 5 nmol TRF0129-M Europium-anti-phospho-40S Ribosomal 10 ug TRF0217-D 1500 Protein S6 (Ser235/236) 100 ug TRF0217-M ULight-DNA Topoisomerase 2-alpha 0.5 nmol TRF0130-D 1000 PLK3 (Thr1342) Peptide 5 nmol TRF0130-M Europium-anti-phospho DNA Topoisomerase 10 ug TRF0218-D alpha (Thr1342) 100 ug TRF0218-M ULight-Glycogen Synthase (Ser641/pSer657) 0.5 nmol TRF0131-D 1000 GSK3α/GSK3β Peptide 5 nmol TRF0131-M Europium-anti-phospho-Glycogen Synthase 10 ug TRF0220-D 1500 (Ser641) 100 ug TRF0220-M

38 PerkinElmer 多模式检测系试剂 & 耗材完全解决方案 LANCE Ultra ULight 标记酪氨酸激酶底物及与其配对 Eu 标记抗体 抗体描述 规格 产品编号 Assay Points Assay Points 底物描述规格产品编号 (384 孔 ) (384 孔 ) Eu-anti-phospho-p38α (Thr180/ 10ug TRF0219-D 1500 LANCE Ultra ULight- 0.5nmol TRF0122-D 1000 Tyr182) 100ug TRF0219-M CDK1(Tyr15) Peptide 5 nmol TRF0122-M Eu-W1024 Anti-phosphotyrosine 50 ug AD LANCE Ultra ULight-IRS-1 1 nmol TRF0120-D 1000 PY20 1 mg AD (Tyr983)Peptide 10 nmol TRF0120-M Eu-W1024 Anti-phosphotyrosine 50 ug AD LANCE Ultra ULight-JAK nmol TRF0121-D 1000 (PT66) 1 mg AD (Tyr1023) Peptide 5 nmol TRF0121-M ug AD nmol TRF0101-D 1000 Eu-W1024 Anti-phosphotyrosine LANCE Ultra ULight-poly GAT 50ug AD nmol TRF0101-M (P-Tyr-100) 1mg AD nmol TRF0100-D 1000 LANCE Ultra KinaSelect TM Kits 规格产品编号 Assay Points LANCE Ultra ULight-poly GT (384 孔 ) 10 nmol TRF0100-M LANCE Ultra KinaSelect Ser/Thr Kit 5x250 TRF0300-C nmol TRF0127-D 1000 LANCE Ultra - KinaSelect -TK Kit 1000 TRF0301-D 1000 LANCE Ultra ULight-TK peptide 5 nmol TRF0127-M Label Free 非标记微孔板 描述 产品编号 规格 EnSpire-LFC, 96 well (Cell assay microplate uncoated) 平底, 表面细胞培养处理 / x96 / 8x96 EnSpire-LFC, 96 well (Cell assay microplate fibronectin) 平底, 表面纤维连接蛋白包被处理 / x96 / 8x96 EnSpire-LFC, 384 well (Cell assay microplate uncoated) 平底, 表面细胞培养处理 / x96 / 8x96 EnSpire-LFC, 384 well (Cell assay microplate fibronectin) 平底, 表面纤维连接蛋白包被处理 / x96 / 8x96 EnSpire-LFB, 384 well (amine coated, pre-activated) 在微孔板内部的传感器上包被了一层基于 polymeric maleic anhydride group 预处理表面化学, 可使目标蛋白质通过一级胺基共价结合 / x96 / 8x96 EnSpire-LFB, 384 well (high sensitivity, user-activated) 在微孔板内部的传感器上包被了一层基于 polymeric maleic anhydride group 预处理表面化学, 可使目标蛋白质通过一级胺基共价结合 ( 需使用者自行包被 ) / x96 / 8x96 适合不同检测方法的微孔板分类 : 检测方法 应用 实验种类 PerkinElmer 检测仪器 推荐使用微孔板 FRET LANCE, LANCE Ultra VICTOR, EnVision, EnSpire and OptiPlate, ProxiPlate, ½Area EnSight, ViewLux Plate, CulturPlate TRF DELFIA VICTOR, EnVision, EnSpire and DELFIA (Yellow or Strip-well EnSight, ViewLux plate), OptiPlate (HB) Polarization N/A VICTOR, EnVision, ViewLux OptiPlate (Black), ProxiPlate (Black) Fluorescence ( 荧光 ) Label-Free ( 非标记 ) Luminescence ( 化学发光 ) Colorimetric ( 吸收光比色法 ) High Content Confocal Imaging Cytometry Microfluidic MSAs Assays Assays Absorbance ICC with Tyramide Signal Amplification (TSA); In Vivo Reagents for HCS Operetta and Opera Phenix CellCarrier, ViewPlate Brightfield and Fluorescence Cell Counting & Viability, Cell EnSight CellCarrier, ViewPlate confluency, etc. Enzyme activity assays & binding reactions-sipped, separated & LabChip EZ Reader II 384-well StorPlate detected on a microfluidic chip Cellular Label-Free Assays EnSpire & EnSight with Label Free EnSpire-LFC Biochemical Label-Free Assays EnSpire & EnSight with Label Free EnSpire-LFB AlphaLISA, AlphaScreen & AlphaScreen SureFire Report Gene Assay (Steadylite plus, Britelite Plus, Neolite), Cell Viability Assay (ATPlite and ATPlite 1Step) AequoZen and AequoScreen (Aequorin) ELISA EnVision, EnSpire, EnSight EnVision, EnSpire, EnSight, VICTOR, ViewLux, TopCount, MicroBeta VICTOR, MicroBeta JET, EnVision, EnSpire, EnSight EnVision, EnSpire, EnSight, VICTOR, ViewLux AlphaPlate, OptiPlate, ProxiPlate, ½Area Plate, CulturPlate OptiPlate, CulturPlate, ViewPlate (TC) OptiPlate, CulturPlate, ViewPlate SpectraPlate, ViewPlate, (clear-bottom) Isoplate 36

39 PerkinElmer 多模式检测系统代表性文献列表 1. Silverman, J. et al. Multivalent avimer proteins evolved by exon shuffling of a family of human receptor domains. Nat Biotechnol (2005)23, [ALPHA/Protein Ineraction/Exon Shuffling] 2. Filippakopoulos, P. et al. Selective inhibition of BET bromodomains. Nature (2010)468, [ALPHA/Competitive Inhibition of HistonH4-BRD4 Interaction] 3. Hornung, V. et al. AIM2 recognizes cytosolic dsdna and forms a caspase-1-activating inflammasome with ASC. Nature (2009)458, [ALPHA/ AIM2-DNA Interaction] 4. Kruidenier, L. et al. A selective jumonji H3K27 demethylase inhibitor modulates the proinflammatory macrophage response. Nature (2012)488, [ALPHA/Epigenetics/H3K27 demethylase Inhibitor] 5. Soon, F. F. et al. Molecular Mimicry Regulates ABA Signaling by SnRK2 Kinases and PP2C Phosphatases. Science (2012)335, [ALPHA/HAB1- SnRK2.6 Interaction/Binding Site Screening] 6. Motola, D. L. et al. 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40 结束语 PerkinElmer始终致力于为您提供最新 最成熟的技术 和最合适的应用解决方案 我们不仅提供多模式检测 仪器 我们还有相应的试剂耗材完全解决方案 我们 有强大的仪器&试剂技术支持服务团队 将与您并肩 合作 克服科学研究中遇到的各种挑战 珀金埃尔默企业管理 上海 有限公司 上海总公司 成都分公司 西安分公司 地址 上海浦东新区张江高科 技园区张衡路1670号 电话 传真 邮编 地址 成都市高新西区西芯大道5号 汇都总部园6栋3楼 电话 传真 邮编 地址 陕西省西安市高新区锦业路69号 创业研发园A座1009室 电话 传真 邮编 北京分公司 武汉分公司 广州分公司 地址 北京朝阳区酒仙桥路14号院 兆维工业园甲2号楼1层东侧单元 电话 传真 邮编 地址 武汉市武昌区临江大道96号 武汉万达中心写字楼 室 电话 传真 邮编 地址 广州市荔湾区芳村大道 下市直街1号信义会馆12号 电话 传真 邮编 要获取全球办事处的完整列表 请访问 版权所有 2016 PerkinElmer, Inc. 保留所有权利 PerkinElmer 是 PerkinElmer, Inc. 的注册商标 所有其它商标均为其各自所有者的财产 所有数据仅供参考 Perkinelmer 拥有最终解释权