择您的检测方法01 更快更精更准的 qpcr 技术 qpcr (Real-time PCR Real-time quantitative PCR 实时荧光定量) 技术, 是指在反应体系中加入荧光染料, 利用荧光信号积累, 实时监测整个 PCR 进程, 最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法

Size: px

Start display at page:

Download "择您的检测方法01 更快更精更准的 qpcr 技术 qpcr (Real-time PCR Real-time quantitative PCR 实时荧光定量) 技术, 是指在反应体系中加入荧光染料, 利用荧光信号积累, 实时监测整个 PCR 进程, 最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法"

侃蓝
5 years ago
Views:

1 GenStar qpcr 产品技术手册 1

2 择您的检测方法01 更快更精更准的 qpcr 技术 qpcr (Real-time PCR Real-time quantitative PCR 实时荧光定量) 技术, 是指在反应体系中加入荧光染料, 利用荧光信号积累, 实时监测整个 PCR 进程, 最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法传统的 PCR 方法, 是对 PCR 反应的终产物进行的分析而许多情况下, 科研人员所感兴趣的是未经 PCR 信号放大之前的起始模板量在这种需求下,qPCR 技术应运而生 qpcr 技术与传统的终点 PCR 方法相比有许多非常重要的优点 : qpcr 使用的是灵敏度更高的荧光化合物, 可以更为快速的获得结果, 差异性更小 ; qpcr 可不开盖测定核酸, 闭管化的方法可大大降低实验室污染的风险目前 qpcr 在基因表达研究和临床疾病检测等领域已得到广泛应用, 如转基因动植物检测 RNAi 基因失活率检测病原微生物或病毒含量检测癌症检测以及药物反应个体差异的遗传基础检测基因差异表达基因分型等 qpcr 以其特异性强灵敏度高重复性好反应速度快定量准确全封闭反应自动化程度高等特点, 成为国际公认的核酸分子定量的标准方法, 受到越来越多科研工作者的青睐 GenStar 多年以来在 qpcr 产品的研发和生产上投入了大量的人力物力, 为了让昔日价格昂贵的 qpcr 系统对每个科学家来说都触手可及, 让 qpcr 这个生命科学的重要工具, 更为广泛的应用于日常的实验中增强型增强型防污染 *GenStar 产品每种 qpcr Mixture 都提供 3 种剂型, 分别为单独提供 ROX 已混有 ROX 和已混有 ROX II 选染料法探针法抗体型抗体型防污染两步法 RT-qPCR 增强型增强型防污染抗体型抗体型防污染 2

3 02 GenStar qpcr 产品选择指南作为中国自主研发的生命科学品牌,GenStar 对于满足中国科研人员的诉求等方面有着根深蒂固的执着在进行了广泛的调研之后, 我们在产品质量上比照国际一线品牌产品, 产品设计上针对中国生命科学领域科研人员的实验需求, 使我们的 qpcr 产品线拥有了鲜明的特点 : 扩增效率更高, 特异性更强灵敏度更高, 易于检测重复性好, 产品性能稳定使用方便, 操作简单性价比高, 降低实验成本兼容性高, 适用于多种机型 2X RealStar Power SYBR Mixture(A311/A313/A314)* 2X RealStar Power SYBR Mixture UNG(A312/A315/A316)* 2X RealStar SYBR Mixture(A301/A303/A304)* 2X RealStar SYBR Mixture UNG(A302/A305/A306)* StarScript II SYBR Two-Step qrt-pcr Synthesis Kit(A310/A308/A309)* 2X RealStar Power Probe Mixture(A361/A363/A364)* 2X RealStar Power Probe Mixture UNG(A362/A365/A366)* 2X RealStar Probe Mixture(A351/A353/A354)* 2X RealStar Probe Mixture UNG(A352/A355/A356)* 3

4 如果您实验室已有荧光定量设备, 请参照下表进行试剂选择染料法探针法检测方法产品名称试剂类型货号参比荧光常规 RT 常规 2 x RealStar SYBR Mixture 抗体型 2 x RealStar SYBR Mixture UNG 2 x RealStar Power SYBR Mixture 2 x RealStar Power SYBR Mixture UNG StarScript II SYBR Two-Step RT-qPCR Synthesis Kit 抗体型防污染增强型增强型防污染两步法 2 x RealStar Probe Mixture 抗体型 2 x RealStar Probe Mixture UNG 2 x RealStar Power Probe Mixture 2 x RealStar Power Probe Mixture UNG * 如果需要 ROX 请致电单独赠送抗体型防污染增强型增强型防污染 7300,7900, StepOne TM, StepOne Plus TM GenStar qpcr Life Technologies 7500,ViiA7 A301 ROX Free* A303 ROX A304 ROX II A302 ROX Free* A305 ROX A306 ROX II A311 ROX Free* A313 ROX A314 ROX II A312 ROX Free* A315 ROX A316 ROX II A310 ROX Free* A308 ROX A309 ROX II A351 ROX Free* A353 ROX A354 ROX II A352 ROX Free* A355 ROX A356 ROX II A361 ROX Free* A363 ROX A364 ROX II A362 ROX Free* A365 ROX A366 ROX II 4

5 系列产品仪器兼容性表格 Bio-Rad ROCHE Eppendorf Qiagen Stratagene CFX96TMCFX384 TM LightCycler 480 Mastercycler ep realplex Rotor-Gene Mx3000P Mx4000P 5

03 优化的 GenStar qpcr 产品一个漂亮的 qpcr 实验由于 qpcr 实验的高精确性, 实验中任何失误都有可能被累积, 最终影响到您的实验结果一般来说, 精心优化过的 qpcr 实验结果都有以下特点 : 线性的标准曲线 (R2 > 0.980 或 r > - 0.

6 03 优化的 GenStar qpcr 产品一个漂亮的 qpcr 实验由于 qpcr 实验的高精确性, 实验中任何失误都有可能被累积, 最终影响到您的实验结果一般来说, 精心优化过的 qpcr 实验结果都有以下特点 : 线性的标准曲线 (R2 > 或 r > ) 扩增效率高 (90-105%) 反应复孔重复性好 GenStar qpcr 系列产品, 将您对完美数据的追求作为我们的使命, 从每一种原料的精选到每一个组分的精细摸索, 只为满足追求完美的您 A B C D 通过标准曲线评定反应条件的优化 GenStar qpcr 产品与 Q 公司产品同时扩增不同浓度的管家基因 GAPDH A&B:A 为 GenStar 产品,B 为 Q 公司产品,GenStar 产品 CT 值更早出现, 信号强度更强 ; C&D: C 为 GenStar 产品,D 为 Q 公司产品,GenStar 产品扩增效率更高, 且线性关系更好 6

GenStar 高品质的热启动酶为您提供更好的特异性 GenStar qpcr 系列产品的核心是我们精选的热启动聚合酶, 其中化学修饰的热启动酶 (Power 系列 ) 对聚合酶的本底活性抑制效果更好 ; 同时我们保证了化学修饰的热启动酶的高纯度和活性使其扩增能力更强而抗体型热启动酶因为无需

成功解决引物二聚体 / 杂扩增为其实验带来的困扰的案例 : A: 客户使用抗体型热启动酶, 特异性不好 B: 客户改用化学修饰型热启动酶, 特异性良好化学修饰热启动酶和抗体修饰热启动酶的比较抗体修饰热启动酶变性时间短,30sec-2min 10min 修饰物在常温或低温下对酶活的抑制不完全完全

7 GenStar 高品质的热启动酶为您提供更好的特异性 GenStar qpcr 系列产品的核心是我们精选的热启动聚合酶, 其中化学修饰的热启动酶 (Power 系列 ) 对聚合酶的本底活性抑制效果更好 ; 同时我们保证了化学修饰的热启动酶的高纯度和活性使其扩增能力更强而抗体型热启动酶因为无需 5~15 分钟的激活过程, 所以更加节省您宝贵的时间在针对优化过的引物进行的测试过程中 GenStar 的化学修饰型热启动酶和抗体型热启动酶均有良好的表现但考虑到科研实验的复杂性和不确定性, 我们推荐您使用化学修饰热启动酶以下是一个客户使用我们的化学修饰的热启动酶产品 (A311) 成功解决引物二聚体 / 杂扩增为其实验带来的困扰的案例 : A: 客户使用抗体型热启动酶, 特异性不好 B: 客户改用化学修饰型热启动酶, 特异性良好化学修饰热启动酶和抗体修饰热启动酶的比较抗体修饰热启动酶变性时间短,30sec-2min 10min 修饰物在常温或低温下对酶活的抑制不完全完全灵敏度和特异性低高化学修饰热启动酶重复性差, 批间差异较高好, 批间差异很低操作简单加样需保持 4 可以室温高通量实验不适合适合抑制剂的稳定性低高多重扩增效果差好外源污染可能存在来源于宿主细胞的 DNA 污染, 并且对污染的核酸酶或蛋白酶无法失活无 DNA 污染, 能够使污染的核酸酶或蛋白酶的失活 7

8 GenStar 独到的 Buffer 体系为您提供更好的稳定性优化的 Buffer 体系是聚合酶能力发挥的重要保证,Genstar qpcr 系列产品的生产全部采用高品质的化学品, 并且在染料浓度稳定剂保护剂增强剂等多个方面进行了广泛且细致的摸索, 相对于其他的产品 GenStar qpcr 系列产品具有以下优势 : 扩增效率更高, 特异性更强灵敏度更高重复性好, 跨度均一, 产品性能稳定 GenStar 产品与 T 公司产品比对图 : Amplification Plot Genstar T 公司 Standard Curve Genstar T 公司使用高品质的 GenStar qpcr 预混体系可以使您的实验结果更上层楼 Genstar 为您提供防污染的 qpcr 预混体系由于实验室条件所限, 实验操作中带来的气溶胶污染往往无法避免目前被广大诊断厂商采用的有效的防止污染的方法是尿嘧啶糖苷酶 (UNG) 法该方法的原理是 : 在 PCR 产物中用 du 代替 dt 这种 du 化的 PCR 产物 (qpcr 的主要污染物 ) 与 UNG 一起孵育时可被降解, 进而消除污染注 :GenStar qpcr 产品 ( 防污染型 ) 中, 提供预混的 UNG 和 dutp 8

9 04 qpcr 实验快速入手指南实验方法的选择设计实时 PCR 实验的第一步是根据目的确定实验方法, 采用绝对定量或者相对定量? 采用染料法或者探针法? 目前绝大多数科研工作者出于实验需要和成本的原因会优先考虑染料法而针对于病毒检测以及需要对低拷贝特异基因进行检测时才会考虑较为昂贵的探针法, 两种方法比较如下表 : 方法性质特异性通用性探针优 / 缺点适用性荧光染料法可逆荧光引物 ( 非特异性扩增或引物二聚体有影响 ) 通用实验设计简单 ( 仅需 2 个引物, 无需非特异性检测设计探针 ), 初始成本低, 能够进行 ( 专一性要求不不需要熔点曲线分析检验扩增反应的特异性, 高或高通量检灵敏度高但特异性不高测 ) 荧光探针法积累荧光引物 + 探针专用需要高特异性, 高信噪比, 能进行多重反应扩增序列专一检但成本高, 实验设计繁琐测引物的设计引物设计是 qpcr 实验成败的关键因素之一目前有很多的软件和在线工具可以帮助科研工作者们进行设计, 但对于初次测试的基因最好设计两对或以上的引物, 在便在预实验中对引物进行筛选, 以确保得到最佳扩增效果对于染料法实验应注意以下几点 : 引物长度 bp, 扩增长度 bp; GC 含量 40-60%; 避免引物内的互补序列, 尤其是 3, 端 ; 避免 3, 端的错配 ; 3, 端避免出现三个连续的 G 或 C; 避免 3, 端出现 T; 设计跨内含子的引物 9

10 探针法, 由于实验对特异性的高要求, 在设计时有更高的要求探针序列的选择要保守, 务必找到一段 bp 相对保守的片段来设计探针即 qpcr 的扩增片段是 50 bp-150 bp 当找不到 150 bp 的保守片段时, 务必确保探针的片段是保守的 ; 在探针设计时, 要考虑到两条链中的一条上的设计探针但要注意的是 : 在哪条链上设计探针时, 就应靠近在同一条链上设计的引物这样, 可以保证在扩增时, 即便没有完全扩增, 也有荧光信号报告出来两者的距离最好是探针的 5' 端离上游引物的 3' 有一个碱基 ; 探针的位置尽可能的靠近上游引物探针的长度通常在 bp,tm 值为 65-70, 通常比引物高 5-10,GC 含量为 40%-70% 整条探针中, 碱基 C 的含量要明显高于 G 的含量 ; 探针的 5' 端应避免使用碱基 G( 因为 5' 端有 G 可能会淬灭荧光剂 ) 为确保引物探针的特异性, 最好将设计好的序列在 Blast 中核实一次, 如果发现非特异性互补区, 建议重新设计探针 ; 合成好的探针, 最好用双蒸水稀释成 25 pmol/μl 的浓度, 然后于 -20 避光保存内参的选取和条件摸索建议选取 2-3 种内参基因, 每种内参基因有 2 对引物进行上机实测选优 ; 内参的反应条件要尽量向目的基因看齐, 以确保目的基因的扩增效率 ; 内参基因和目的基因拷贝数相差过大 ( 内参的拷贝数较高, 而目的基因拷贝数较低时 ), 如果通过调整阈值仍然不能得到好的结果, 则需要考虑更换一个拷贝数相对较低的内参基因实验体系的建立使用 Mix 产品以减少配制体系带来的系统误差 ; 每一个样品至少需要设立 3 个平行的反应 ; 明确使用的机型是否需要添加参比荧光 (ROX/ROX II) ; 正确设定预变性时间, 确保酶被完全激活 ; 正确设定荧光采集步骤 ; 如有必要, 可对阈值进行手动调节 10

11 05 qpcr 常见问题分析我们精选了一些实验中常见的问题整理如下, 希望对您的实验能有所帮助 Q:qPCR 实验中都有哪些对照, 作用是什么? A: 我们可以按照下面的表格设计对照实验, 从而更好的分析相关数据对照 Negative control: No template (NTC) No reverse transcriptase (NRT) No amplification control (NAC) No probe control (NPC) Buffer: Only contains buffer 目的检验是否有模板污染检验 RNA 样品中是否有 DNA 污染检验是否有聚合酶污染检验荧光污染检验背景荧光 Q: 正常的扩增曲线应该是什么样子的? A: 曲线平滑 ; 起峰时间正常 ;NTC 和 NRC 无扩增 ( 起峰晚 );Ct 值一般为之间 Q: 样品 Ct 值大于 30, 该如何对待? A: 对于 Ct 值的样品可以通过 NTC 的情况来判读结果是否有效, 一般来说 NTC 无扩增或者 Ct(NTC)-Ct(simple)>5; 而大于 35 的 Ct 值可以认为是无扩增 Q: 扩增效率过高或者过低意味着什么? 该如何优化扩增效率? A: 扩增效率低于 90% 说明体系中存在抑制子, 反应条件不佳或者反应体系中荧光组分出现降解扩增效率高于 110% 说明可能存在人为稀释或者加样的误差或者存在引物二聚体及杂扩增优化扩增效率可以通过以下几个步骤进行 : 多对引物备选, 对于同一个基因最好设计 2 对或以上引物, 实测中选择扩增效率好的进行实验 ; 避免试剂反复冻融, 条件允许的情况下尽量避光操作, 避免强光的直接照射 ; 如果使用抗体型热启动酶进行实验, 加样时应置于冰上 ; 提高退火温度, 减少杂扩增的产生 ; 对于未经优化的引物使用三步法扩增的效果往往好于两步法 Q: 溶解曲线结果该如何判读, 不同试剂同样的产物解链温度不同是否有影响? A: 成功的 qpcr 实验, 溶解曲线应该是单峰 ; 解链温度和产物的大小组成以及环境中盐离子浓度相关 ; 不同品牌的试剂由于组分上有差异, 解链温度不同并不影响实验结果的判读 ; 一般解链温度小于 75 的吸收峰可以认定为是引物二聚体 11

12 更多 qpcr FAQ 内容详见下表问题可能原因推荐解决方案热启动酶激活不完全引物不理想 RT 步骤太短化学修饰的热启动酶需要 10min 的激活时间推荐一个基因至少设计 2 对引物, 上机测试选优以 5 分钟为单位延长 RT 步骤, 该步骤的时间最长可达到 60 分钟无扩增或 Ct 值过大非特异性扩增和 / 引物二聚体 cdna 添加过多延伸时间过短目标片段过长模板质量不好目标拷贝数过低模板中含有抑制剂使用了错误的染料 / 通道循环设置错误反应体系设计有误反应体系混合不均匀引物降解探针上的荧光报告基团没有被释放探针失效退火温度过低引物不理想 RNA 模板被基因组 DNA 污染使用抗体型试剂, 室温下配制反应体系引物降解模板量太低引物浓度太高反应体系被引物二聚体或之前的 PCR 产品污染延伸时间过长添加到 qpcr 反应中的 RT 反应液的体积不应超过总 qpcr 反应体积的 10% 以 5 秒为单位增加延伸时间, 对于长度低于 500 bp 的扩增子, 延伸时间最长可增加到 30 秒理想情况下, 扩增子长度应该为 bp, 不应超过 400 bp 使用分光光度计和电泳确定模板质量增加模板的用量以确保反应体系内含有足量目标片段将模板稀释 10 倍后观察是否正常检查仪器的设置与荧光染料 ( 如 SYBR Green) 或结合在荧光探针上的荧光染料是否相对应, 并确认 ROX 荧光素水平是否正确确保仪器的设置对于该实验是正确的, 尤其是荧光采集的步骤检查反应中各个组分的浓度和储存条件, 然后重复实验重复检测, 配制体系完成后使用离心机快甩保证混匀通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳来检查 PCR 引物的完整性使用 SYBR Green 验证 PCR 引物的性能如果引物表现良好, 建议重新设计探针重新合成探针, 分装冻存, 使用后应立即将探针放回产品包装中以 2-3 为单位升高退火温度可以尝试利用渐进法确定退火温度推荐一个基因至少设计 2 对引物, 上机测试选优用 DNase I 去除 RNA 模板中基因组 DNA 污染抗体型试剂, 建议在冰上配制反应体系通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检查 PCR 引物完整性增加模板用量优化引物浓度, 按照反应试剂的相应使用说明进行实验在 PCR 循环以前进行 UNG 处理缩短延伸时间 12

13 问题可能原因推荐解决方案试剂污染使用新鲜反应组分重新进行定量检测阴性样本中检测到荧光信号配制反应体系时引入污染使用带滤芯枪头, 实验分区引物二聚体重新设计引物 ( 探针 ) RT 阴性对照中检测到荧光信号标准曲线线性差 PCR 效率过高 (> 110%) 气溶胶污染 RNA 模板被基因组 DNA 污染拷贝数过高或过低, 超过线性范围热启动 DNA 聚合酶的激活不充分引物二聚体退火温度太低反应体系混合不均匀模板质量不好 cdna 添加过多引物二聚体 / 杂扩增梯度稀释计算错误反应重复性差选用带 UNG 的防污染型试剂用 DNase I 去除 RNA 模板中基因组 DNA 污染, 引物设计应跨越外显子 / 外显子边界加大模板量或者提高稀释范围, 确定最终梯度使用化学修饰的增强型热启动酶, 请确保 10min 的激活时间提高退火温度或者重新设计引物适当提高退火温度重复检测, 配制体系完成后使用离心机快甩保证混匀使用分光光度计和电泳确定模板质量添加到 qpcr 反应中的 RT 反应液的体积不应超过总 qpcr 反应体积的 10% 优化反应条件, 重新设计引物使用新鲜原料重新进行梯度稀释, 并准确计算稀释浓度通过改进技术 / 优化热循环方案 / 重新设计引物提高可重复性 PCR 效率过低 (90%) 荧光信号上升后急剧下降扩增曲线上下变化扩增曲线没有达到阈值非指数型扩增曲线引物不理想模板中含有抑制子梯度稀释计算错误扩增子长度过长荧光信号增加过快, 使得基线校正曲线向前倾斜已设定固定基线, 当用软件校正数据时, 曲线扭曲基线荧光值在高模板量反应中非常高模板含有抑制剂推荐一个基因至少设计 2 对引物, 上机测试选优对模板进行纯化或稀释后测定使用新鲜原料重新进行梯度稀释, 并准确计算稀释浓度扩增子的理想长度应该为 bp, 最长不应超过 400bp 调整基线校正 ( 例如, 从 3-15 次循环调整到 3-10 次循环, 或者将模板进行 1:100 倍至 1:1000 倍稀释并重复定量检测 ) 调整基线校正 ( 例如, 将循环次数从 3-15 次调整到 3-10 次, 或者将模板进行 1:100 至 1:1000 稀释并重复定量检测 ) 手动调节阈值, 从而使阈值跨越扩增曲线的对数线性区间, 或者将模板进行 1:100 至 1:1000 稀释并重复定量检测纯化模板或使用 1:10 或 1:100 稀释后的模板重复定量检测数据曲线凹凸不平在循环仪的最低探测下限进行数据采集通用移动平均数校正算法来来校正数据或重新设计定量检测方法 13

14 06 GenStar qpcr 产品列表产品货号规格价格 (RMB) A ml RealStar SYBR Mixture A ml x SYBR 预混实时荧光定量 PCR 反应体系 A ml x RealStar SYBR Mixture(with ROX) 2 SYBR 预混实时荧光定量 PCR 反应体系 ( 含 ROX) 2 RealStar SYBR Mixture(with ROX II) 2 SYBR 预混实时荧光定量 PCR 反应体系 ( 含 ROX II) 2 RealStar SYBR Mixture UNG 2 SYBR 防污染预混实时荧光定量 PCR 反应体系 2 RealStar SYBR Mixture UNG(with ROX) 2 SYBR 防污染预混实时荧光定量 PCR 反应体系 ( 含 ROX) 2 RealStar SYBR Mixture UNG(with ROX II) 2 SYBR 防污染预混实时荧光定量 PCR 反应体系 ( 含 ROX II) 2 RealStar Power SYBR Mixture 2 SYBR 预混实时荧光定量 PCR 反应体系 2 RealStar Power SYBR Mixture(with ROX) 2 SYBR 预混实时荧光定量 PCR 反应体系 ( 含 ROX) 2 RealStar Power SYBR Mixture(with ROX II) 2 SYBR 预混实时荧光定量 PCR 反应体系 ( 含 ROXII) 2 RealStar Power SYBR Mixture UNG 2 SYBR 防污染预混实时荧光定量 PCR 反应体系 2 RealStar Power SYBR Mixture UNG(with ROX) 2 SYBR 防污染预混实时荧光定量 PCR 反应体系 ( 含 ROX) 2 RealStar Power SYBR Mixture UNG(with ROX II) 2 SYBR 防污染预混实时荧光定量 PCR 反应体系 ( 含 ROXII) StarScript II SYBR Two-Step qrt-pcr Synthesis Kit StarScript II SYBR 两步法实时荧光定量 RT-PCR 试剂盒 StarScript II SYBR Two-Step qrt-pcr Synthesis Kit (with ROX) StarScript II SYBR 两步法实时荧光定量 RT-PCR 试剂盒 ( 含 ROX) StarScript II SYBR Two-Step qrt-pcr Synthesis Kit (with ROX II) StarScript II SYBR 两步法实时荧光定量 RT-PCR 试剂盒 ( 含 ROXII) ROX Reference Dye ROX 参考荧光染料 A ml 286 A ml x A ml x A ml 286 A ml x A ml x A ml 343 A ml x A ml x A ml 343 A ml x A ml x A ml 343 A ml x A ml x A ml 286 A ml x A ml x A ml 286 A ml x A ml x A ml 286 A ml x A ml x A ml 343 A ml x A ml x A ml 343 A ml x A ml x A ml 343 A ml x A ml x A rxn 610 A rxn 1370 A rxn 610 A rxn 1370 A rxn 610 A rxn 1370 A µl 1ml qpcrmix 选送 A µl 5ml qpcrmix 选送 A µl 10ml qpcrmix 选送 14

15 产品货号规格价格 (RMB) A µl 1ml qpcrmix 选送 ROX Reference Dye II A µl 5ml qpcrmix 选送 ROX 参考荧光染料 II A µl 10ml qpcrmix 选送 2 RealStar Probe Mixture 2 探针法预混实时荧光定量 PCR 反应体系 2 RealStar Probe Mixture(with ROX) 2 探针法预混实时荧光定量 PCR 反应体系 ( 含 ROX) 2 RealStar Probe Mixture(with ROX II) 2 探针法预混实时荧光定量 PCR 反应体系 ( 含 ROX II) 2 RealStar Probe Mixture UNG 2 探针法防污染预混实时荧光定量 PCR 反应体系 2 RealStar Probe Mixture UNG(with ROX) 2 探针法防污染预混实时荧光定量 PCR 反应体系 ( 含 ROX) 2 RealStar Probe Mixture UNG(with ROX II) 2 探针法防污染预混实时荧光定量 PCR 反应体系 ( 含 ROXII) 2 RealStar Power Probe Mixture 2 探针法预混实时荧光定量 PCR 反应体系 2 RealStar Power Probe Mixture(with ROX) 2 探针法预混实时荧光定量 PCR 反应体系 ( 含 ROX) 2 RealStar Power Probe Mixture(with ROX II) 2 探针法预混实时荧光定量 PCR 反应体系 (ROXII) 2 RealStar Power Probe Mixture UNG 2 探针法防污染预混实时荧光定量 PCR 反应体系 2 RealStar Power Probe Mixture UNG(with ROX) 2 探针法防污染预混实时荧光定量 PCR 反应体系 (ROX) 2 RealStar Power Probe Mixture UNG(with ROX II) 2 探针法防污染预混实时荧光定量 PCR 反应体系 (ROXII) A ml 286 A ml x A ml x A ml 286 A ml x A ml x A ml 286 A ml x A ml x A ml 343 A ml x A ml x A ml 343 A ml x A ml x A ml 343 A ml x A ml x A ml 286 A ml x A ml x A ml 286 A ml x A ml x A ml 286 A ml x A ml x A ml 343 A ml x A ml x A ml 343 A ml x A ml x A ml 343 A ml x A ml x

16 GenStar Biosolutions Co., Ltd. 北京市昌平区生命园路 29 号创新大厦 B 座 213 室电话 : 邮箱 :tech.service@gene-star.com 网站 : 16

124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na

124 河南农业科学第 42 卷, (HPS) ;PRRSV PCV2, [4] PRRSV CSFV ;20, PRRSV,CSFV [5-9],, 1.2 主要试剂和仪器 Real-timePCR PRRSV CSFV PCV2, 3 RotorGene, RG-3000; ND-1000 Na 河南农业科学,2013,42(2):123-127 JournalofHenanAgriculturalSciences PCR PRRSV CSFV PCV2,, (, 450011) : 根据 TaqMan 复合荧光探针设计原则, 应用 Primer5.0 和 Oligo6.0 软件设计检测猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV) 猪瘟病毒 (CSFV) 和猪圆环病毒 2 型 (PCV2) 的特异性引物和探针,