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1 分子生物学 第七章基因的表达与调控 ( 上 ) 原核基因表达调控模式 夏玉琼

2 2 目录 半乳糖操纵子阿拉伯糖操纵子阻遏蛋白 LexA 的降解与细菌中的 SOS 应答二组分调控系统和信息传导多启动子调控的操纵子

3 3 半乳糖操纵子概述 控制不同营养条件下是否利用半乳糖 通常情况下, 不利用半乳糖, 半乳糖操纵子的结构基因不表达半乳糖多, 无葡萄糖时, 半乳糖操纵子的结构基因表达, 负责将半乳糖降解成葡萄糖

4 4 半乳糖的代谢途径 ( 降解 ) 半乳糖 激酶 K 半乳糖 -1- 磷酸 UDP- 半乳糖 UDP- 葡萄糖 UDP 转移酶 差向异构酶 乳糖 半乳糖 + 葡萄糖 葡萄糖

5 5 半乳糖操纵子 P2 P1 E T K R O 双启动子 半乳糖激酶 阻遏子 操控区 异构酶 半乳糖转移酶 阻遏蛋白 双启动子 R 区和 ETK 区以及 O 区都相距很远 R 区产生的阻遏蛋白与操控区结合, 抑制结构基因的表达存在半乳糖时, 它与阻遏蛋白结合, 使之不能与操控区结合, 从而结构基因表达 负控诱导

6 6 半乳糖操纵子类似乳糖操纵子的证据 galr - 和 galo c 突变体中,ETK 得到永久性表达 说明阻遏蛋白确实与操控区作用, 抑制半乳糖操纵子的结构基因表达

7 7 半乳糖操纵子的特点 两个启动子,mRNA 可以从两个不同的起始点开始转录两个 O 区, 一个在 P 区上游 -73~-67, 另一个在结构基因 E 内部

8 8 camp-crp 对 gal 启动子的作用 葡萄糖存在时,gal 操纵子仍可被诱导 一类突变株, 在不含葡萄糖的培养基中, 高水平合成半乳糖代谢酶类另一类突变株,gal 基因的表达完全依赖于葡萄糖

9 9 葡萄糖效应 葡萄糖存在时, 即使在细菌培养基中加入乳糖 半乳糖 阿拉伯糖 麦芽糖等诱导物, 与之相对应的操纵子也不能表达无葡萄糖时,cAMP 合成量增加, 形成 camp-crp 复合物, 该复合物作为 激活蛋白 激活对应糖的操纵子的结构基因表达正控诱导系统

10 10 半乳糖操纵子的葡萄糖效应较为特殊 半乳糖操纵子的结构基因表达与葡萄糖的关系有两种可能这与双启动子有关每个启动子拥有各自的 RNA 聚合酶结合位点 S 1 和 S 2 camp-crp 对从 S 1 和 S 2 起始的转录有不同的作用

11 11 半乳糖操纵子的双启动子结构 P2 P1 E T K R O S 2 S 1 mrna 1 mrna 2 双启动子的序列 Met-Arg-Leu 有两个相互重叠的 Pribnow 区

12 12 S1 起始的转录 S 2 S 1 mrna 1 Met-Arg-Leu mrna 2 有两个相互重叠的 Pribnow 区 S1 起始的转录只能在无葡萄糖时进行 RNA 聚合酶与 S1 的结合需要半乳糖 camp-crp 复合物 cya-,crp- 突变体 ( 即不能产生 camp-crp 复合物 ) 不能从 S1 起始转录

13 13 S2 起始的转录 S 2 S 1 mrna 1 Met-Arg-Leu mrna 2 有两个相互重叠的 Pribnow 区 S2 起始的转录依赖于葡萄糖 高水平的 camp-crp 抑制 S2 起始的转录 cya-,crp- 突变体能从 S2 起始转录, 不能利用乳糖, 但能利用半乳糖

14 14 双启动子调控的例子 一突变株, 不能利用培养基中的半乳糖, 将此突变株再行突变为 cya- 或 crp-, 就能恢复利用半乳糖的能力 原因 : 第一次突变失去了从 S1 起始转录的能力, 却不影响从 S2 起始转录的能力 ; 细胞中 camp- CRP 的存在抑制了从 S2 转录的能力 ; 双重突变后, 能移去 camp-crp 对 S2 的阻遏作用

15 15 双启动子的生理功能 与半乳糖在细胞代谢中的双重功能有关 功能一 : 作为唯一碳源提供细胞生长 功能二 :UDP- 半乳糖是大肠杆菌细胞壁合成的前体, 细胞通过半乳糖差向异构酶由 UDP- 葡萄糖合成 UDP- 半乳糖 若只有 S1, 有葡萄糖存在时, 不能合成异构酶若只有 S2, 在葡萄糖存在时也充分诱导半乳糖操纵子, 过于浪费 S2 不依赖于 camp-crp, 负责本底水平的永久型合成 S1 依赖于 camp-crp, 负责对高水平合成进行调节 : 只有 S2 活性被 camp-crp 抑制, 才调控

16 16 目录 半乳糖操纵子阿拉伯糖操纵子阻遏蛋白 LexA 的降解与细菌中的 SOS 应答二组分调控系统和信息传导多启动子调控的操纵子

17 17 阿拉伯糖操纵子的结构 E F 膜蛋白结合蛋白 调节基因操纵区 (2 个 ) 差向异构酶 阻遏蛋白 Pr 阿拉伯糖激活蛋白 Pi 异构酶核酮糖激酶 作用时按 A B D 的顺序 将阿拉伯糖运入细胞

18 18 阿拉伯糖操纵子的结构 : 双向转录 ara C mrna CRP 结合位点 调节基因 Pc 操控区 P BAD ara BAD mrna 核酮糖激酶异构酶差向异构酶 运送系统阿拉伯糖 ( 胞外 ) 阿拉伯糖 ( 胞内 ) 核酮糖 -5- 磷酸 木酮糖 -5- 磷酸

19 19 阿拉伯糖操纵子的调控方式 阿拉伯糖能够使阻遏蛋白变成激活蛋白但是, 葡萄糖存在 阿拉伯糖存在时, 阿拉伯糖操纵子无法启动说明葡萄糖的存在抑制了阿拉伯糖操纵子的表达说明 camp-crp 复合物的存在时阿拉伯糖操纵子表达所必须

20 20 阿拉伯糖操纵子的调控方式 存在阿拉伯糖, 阻遏蛋白 调控 激活蛋白, 正 不存在葡萄糖,cAMP-CRP 复合物, 正调控以上二者都具备, 阿拉伯糖操纵子才启动开始利用阿拉伯糖

21 21 阿拉伯糖操纵子的调控方式 无葡萄糖 有阿拉伯糖, 两种正控都作用, 操纵子表达 有葡萄糖 无阿拉伯糖, 存在 arac 的负控, 操纵子被阻遏

22 22 arac 蛋白的两种形式 Pr + 阿拉伯糖 - 阿拉伯糖 Pi

23 23 营养状况对 ara 操纵子的影响 a) 有葡萄糖, 无阿拉伯糖, arac 蛋白处于 Pr 形式, 结合操控区, 使 RNA 聚合酶不能与 Pc 结合, 只有少量 arac 蛋白 b) 无葡萄糖, 无阿拉伯糖, 虽有 camp-crp( 激活蛋白 ) 结合操控区, 但 AraC 蛋白处于 Pr 形式, 起阻遏作用 c) 无葡萄糖, 有阿拉伯糖, 两种正控因子都起作用, 操纵子表达

24 24 目录 半乳糖操纵子阿拉伯糖操纵子阻遏蛋白 LexA 的降解与细菌中的 SOS 应答二组分调控系统和信息传导多启动子调控的操纵子

25 25 阻遏蛋白 LexA 的降解与细菌中的 SOS 应答 平时 LexA 蛋白分散细胞各处, 抑制 SOS 修复系统中的许多基因但一种修复系统中的基因 reca 基因并未被完全阻遏, 能产生少量的 reca 蛋白

26 26 阻遏蛋白 LexA 的降解与细菌中的 SOS 应答 紧急情况 :DNA 严重受损 出现单链 DNA 缺口, 这是信号 reca 蛋白与单链 DNA 缺口结合, 自己被激活成蛋白酶, 此蛋白酶能降解 LexA 蛋白, 使其去阻遏 SOS 修复系统高效表达,DNA 得到修复

27 27 阻遏蛋白 LexA 的降解与细菌中的 SOS 应答 恢复正常 修复完成后,recA 蛋白恢复非蛋白酶形式 LexA 蛋白积累, 重新建立阻遏作用

28 28

29 29 目录 半乳糖操纵子阿拉伯糖操纵子阻遏蛋白 LexA 的降解与细菌中的 SOS 应答二组分调控系统和信息传导多启动子调控的操纵子

30 30 二组分调控系统存在的必要性 较多情况下, 细胞膜外部信号不能直接传 递给调节蛋白 外部信号 传感器 调节蛋白 传感蛋白 / 传感激酶 应答调节蛋白

31 31 二组分调控系统和信号转导 传感蛋白磷酸化 磷酸化转给应答调节蛋白 应答调节蛋白成为阻遏或激活蛋白 CN&newwindow=1&safe=strict&biw=1024&bih=597&tbs=isz:l&tbm=isch&tbni d=ualmo8lz8meurm:&imgrefurl= xpansion.html&docid=jb8ofruq6ydv7m&imgurl= 75/4/566/F4.large.jpg&w=1280&h=729&ei=qyUjUP3CC4rNmAX9x4Eg&zoom =1&iact=rc&dur=365&sig= &page=2&tbnh=96&tbnw =169&start=12&ndsp=24&ved=1t:429,r:15,s:12,i:168&tx=81&ty=37

32 32 大肠杆菌中存在的二组分调控系统 刺激信号 / 功能 传感蛋白 应答调节蛋白 氧气缺乏 ArcB ArcA 渗透压, 包被蛋白 EnvZ OmpR 渗透压, 钾离子运输 KdpD KdpE 磷酸盐清除 PhoR PhoB 氮代谢 NtrB NtrC 硝酸盐呼吸作用 NarX NarL 硝酸盐和亚硝酸盐呼吸作用 NarQ NarP

33 33 目录 半乳糖操纵子阿拉伯糖操纵子阻遏蛋白 LexA 的降解与细菌中的 SOS 应答二组分调控系统和信息传导多启动子调控的操纵子

34 34 多启动子调控的操纵子 rrna 操纵子 核糖体蛋白 SI 操纵子 DnaQ 蛋白操纵子

35 35 大肠杆菌 rrna 操纵子 (rrne) 含有两个启动子 P1 和 P2 对数生长期细菌中,P1 起始的转录产物比 P2 多 3-5 倍,P1 是强启动子细菌处于紧急状态时, 细胞中 ppgpp 浓度增加,ppGpp 抑制 P1 的作用, 此时 P2 起始的转录仍可进行, 是主要的启动子

36 36 核糖体蛋白 SI 操纵子 四个启动子 P1,P2,P3,P4 P1,P2 是强启动子 P3,P4 是弱启动子平时, 靠 P1P2 启动操纵子的表达, 合成 SI 蛋白紧急情况,P1 和 P2 受 ppgpp 抑制, 靠 P3, P4 合成的 SI 蛋白维持生命最低需要

37 37 DnaQ 蛋白操纵子 DnaQ 蛋白是 DNA 聚合酶全酶的亚基之一, 负责校正 DNA 复制错误 DnaQ 蛋白操纵子含有两个启动子 :P1 P2 它受 RNA 聚合酶活性调节 RNA 聚合酶活性低, 由弱启动子 P2 控制 RNA 聚合酶活性高, 由强启动子 P1 控制

38 38 DnaQ 蛋白操纵子 细胞内 RNA 聚合酶活性与细胞的增殖速度有关 细胞染色体复制比较缓慢时,RNA 聚合酶的活性低, 此时 DnaQ 蛋白的合成靠弱启动子 P2 维持细胞增殖速度加快,RNA 聚合酶的活性升高, P1 被激活,DnaQ 蛋白的合成就大大增加

39 39 结语 操纵子中有不同的启动子, 它们有不同的强度, 其启动作用又受不同因子的调控 许多因素相互作用, 才使基因表达更加有效, 更加协调 不同的生活环境中, 不同的启动子精密地调节基因的表达量, 这对维持细菌的生存起着非常重要的作用

40 40 小结 半乳糖操纵子的结构 调控 : 双启动子阿拉伯糖操纵子的结构 调控 :arac 蛋白的正负调节 SOS 对阻遏蛋白 LexA 的调节二组分调控系统和信息传导 : 传感器 ( 传感激酶和应答调节蛋白 ) 磷酸化多启动子调控的操纵子 : 强弱启动子组合

41 41 作业十七 说明乳糖 半乳糖和阿拉伯糖操纵子在对应糖存在, 同时葡萄糖也存在时的调控情况 ( 包括对应的阻遏 / 激活蛋白是否结合操控区, 最后对应操纵子的结构基因是否表达 ) 说明二组分调控体系的组成和调控原理

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