重要产品信息树脂的所有离心步骤需在低速 ( 如 g ) 秒条件下操作离心速度大于 5000 g 可能会导致树脂聚集和再悬浮困难离心柱离心时, 使用 2 ml 收集管则流过的液体体积应不超过 600 μl, 使用 1.5 ml 的收集管时则应不超过 300 μl

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愉娄
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1 说明书 Pierce 免疫共沉淀 (Co-IP) 试剂盒货号描述 Pierce 免疫共沉淀 (Co-IP) 试剂盒, 包含足够进行 50 次免疫沉淀反应的试剂 ( 每次使用 25 μl 树脂固相化抗体 ) 试剂盒组分 : 加强型 AminoLink 偶联树脂,2 ml 固相树脂以 50% 的浆液形式提供 ( 例如,100 μl 50% 的浆液含有 50 μl 固相树脂 ) 20 交联缓冲液,25 ml, 使用时稀释至 :0.01M Na 3 PO 4,0.15M NaCl;pH 7.2 氰基硼氢化钠溶液 (5 M),0.5 ml 淬灭缓冲液,50 ml,1m Tris-HCl 洗涤缓冲液,60 ml,1m NaCl IP 裂解 / 洗涤缓冲液,2 50mL,0.025M Tris,0.15M NaCl,0.001M EDTA,1% NP-40, 5% 甘油 ;ph 7.4 改良型杜氏 PBS (20 ),25mL, 使用时稀释至 :0.008M Na 3 PO M K 3 PO M NaCl 0.01M KCl;pH 条件缓冲液,5 ml, 中性 ph 缓冲液洗脱缓冲液,50 ml,ph 2.8, 含有伯胺非还原型泳道标记上样缓冲液,(5 ), 5 ml,0.3m Tris HCl,5% SDS,50% 甘油, 泳道标记示踪染料 ;ph 6.8 Pierce 离心柱 - 带螺帽,100 个柱子, 包含相应配件微量离心收集管,2 ml,100 个微量离心样品管,1.5 ml,50 个 Pierce 对照用琼脂糖树脂 (4% 琼脂糖珠交联 ),2 ml 固相树脂以 50% 的浆液形式提供 ( 例如,100 μl 50% 的浆液含有 50 μl 固相树脂 ) 储存 : 收到试剂盒后将其储存于 4 C 将 DSS 于 4 C 干燥保存常温运输产品简介 Thermo Scientific Pierce 免疫共沉淀 (Co-IP) 试剂盒通过将纯化的抗体直接固定在琼脂糖基质上, 从细胞裂解液或其它复杂混合物中分离天然蛋白复合体免疫共沉淀是研究蛋白 : 蛋白相互作用的一种常用方法, 即用抗体去免疫沉淀特定抗原 ( 诱饵蛋白 ) 并且共沉淀任何与该抗原相互作用的蛋白 ( 目标蛋白 ) 传统的免疫共沉淀使用蛋白 A 或蛋白 G 来固定抗体, 因此最终洗脱液中会含有抗体的重链和轻链, 二者迁移形成的条带可能和目标蛋白的条带重合从而掩盖重要的实验结果 Pierce 免疫共沉淀试剂盒通过共价偶联抗体至胺基活化树脂, 从而解决这一问题试剂盒包含了用于优化蛋白结合和回收的缓冲液用于对照实验的试剂以及高效的离心柱系统, 进一步地简化了实验操作, 缩短了实验时间

2 重要产品信息树脂的所有离心步骤需在低速 ( 如 g ) 秒条件下操作离心速度大于 5000 g 可能会导致树脂聚集和再悬浮困难离心柱离心时, 使用 2 ml 收集管则流过的液体体积应不超过 600 μl, 使用 1.5 ml 的收集管时则应不超过 300 μl 体积超出可能会导致柱子内产生回压及洗涤和洗脱不完全抗体溶液中的伯胺 ( 如,Tris, 甘氨酸 ), 会竞争性的结合树脂上的位点在交联反应之前, 使用 Thermo Scientific Zaba 脱盐离心柱或 Slide-A-Lyzer 透析卡去除伯胺明胶或抗体溶液中的载体蛋白会竞争性的结合树脂上的位点用 Thermo Scientific Pierce 抗体纯化试剂盒 ( 货号 :44600) 去除明胶和载体蛋白, 或者使用蛋白 A / G 进行纯化 ( 货号 : 20423) 及透析用对照琼脂糖树脂预洗细胞裂解液或向改良型杜氏 PBS 中加入 0.1-1% 的赛默飞 Surfact-Amps X-100 (10% Triton X-100, 产品编号 :28314), 去除免疫沉淀沉淀过程中非特异性结合的蛋白注意 : Surfact-Amps X-100 没有随试剂盒提供 IP 裂解 / 洗涤缓冲液已进行过代表性细胞类型的检测, 包括但不限于下列细胞系 :HeLa,JURKAT, A431,A549,MOPC,NIH 3T3 和 U2OS 通常情况下,10 6 的 HeLa 细胞可以产生约 10mg 的细胞团块, 按照 ~3μg/μL 的配比使用 IP 裂解 / 洗涤缓冲液 ( 即 100μL IP 裂解 / 洗涤缓冲液可以裂解 ~300μg 细胞团块 ) 为了获得最佳结果, 可添加 Thermo Scientific Halt 蛋白酶 ( 货号 :78429 ) 和磷酸酶 ( 货号 :78420 ) 抑制剂混合物, 以尽量减少细胞裂解液中蛋白质的降解和去磷酸化 IP 裂解 / 洗涤缓冲液可兼容 Thermo Scientific Pierce BCA 蛋白定量分析试剂盒 ( 货号 :23225) 设置合理的对照对于鉴定相关的相互作用至关重要试剂盒提供的 Pierce 对照用琼脂糖树脂是用作 Pierce 蛋白 A / G 琼脂糖树脂的相似载体材料, 可以作为阴性对照 Pierce 离心柱包含有离心柱, 螺旋盖, 底盖, 带有 Luer-Lok 接头的螺旋帽, 大的垫片和一个大垫片工具标准的 IP 不需要大垫片当等比例扩大体积 ( 例如, 树脂 > 200μL) 时, 可以插入大垫片以方便洗涤带有 Luer-Lok 接头的螺旋帽有可翻盖的顶部, 可以在洗涤步骤中使用储存过程中可用螺旋盖密封离心柱 ( 见补充信息部分 ) Pierce 免疫共沉淀 (Co-IP) 试剂盒的使用可以根据需要按比例放大为了获得理想的结果, 在进行免疫共沉淀反应时按照表 1 的推荐量加入树脂抗体洗脱及洗涤缓冲液在这些条件下, 通过 2 小时的反应, 交联效率可以达到 ~95% 交联效率可以通过检测抗体溶液交联前后在 280nm 处的光吸收而被估测

3 抗体量 (µg) 表 1. 抗体交联树脂洗涤液洗脱缓冲液的用量表交联树脂体积 (µl) (50% 浆液的体积 ) 洗涤液体积 (µl) 洗脱缓冲液体积 (µl) (200) (100) (50) (20) 其他所需材料微量离心收集管,2 ml 免疫共沉淀试剂盒的操作流程 A. 抗体固定化注意 : 以下操作流程适用于交联 μg 的亲和纯化抗体, 溶液中不能含有其他胺基分 ( 如 Tris, 甘氨酸 ) 或者载体蛋白 ( 见重要产品信息 ) 本操作流程可以根据需要按比例调整 ; 参见重要产品信息的表 1 中抗体和树脂的建议用量 1. 将加强型 AminoLink 偶联树脂和试剂平衡至室温 2. 用超纯水稀释 20 交联缓冲液至 1, 每个 IP 反应准备 2 毫升 1 交联缓冲液 3. 轻旋加强型 AminoLink 偶联树脂的瓶子, 以获得均一的悬浮液使用大口径或截短枪头将 20 μl 树脂浆液加入 Pierce 离心柱中将柱子置于一个微量离心管中,1000 g 离心 1 分钟, 弃掉流穿液体 4. 用 200 μl 的 1 交联缓冲液洗涤树脂, 离心并且弃掉流穿液体 5. 在纸巾上轻拍离心柱的底部以去除剩余的液体, 插入底盖 6. 用足量的超纯水和 20 交联缓冲液, 将抗体 (10-75 µg) 溶液体积调整至 200 μl, 缓冲液浓度为 1 例如, 对于 10 µl 浓度为 1 µg/µl 的抗体, 添加 10 µl 20 交联缓冲液和 180µL 的超纯水直接将超纯水 20 交联缓冲液和亲和纯化的抗体添加到含有树脂的离心柱中 7. 在通风橱中, 向每 200 µl 的反应体系中加入 3 µl 的氰基硼氢化钠溶液注意 : 氰基硼氢化钠是剧毒使用时要戴上手套小心操作 8. 盖上螺旋盖, 在室温条件下于旋转器或混匀器上孵育分钟, 确保浆液在孵育过程中处于悬浮状态 9. 卸下并保留底塞, 拧松螺旋帽将离心柱放置与收集管中并离心保存流穿液体以验证抗体结合效率 10. 取下螺旋盖, 在柱中加 200 µl 的 1 交联缓冲液, 离心并且弃掉流穿液重复上述操作一次子

4 11. 加 200 µl 淬灭缓冲液至离心柱, 离心并且弃掉流穿液 12. 在纸巾上轻拍离心柱底部以去除剩余的液体, 插入底盖向树脂中加入 200 μl 淬灭缓冲液 13. 在通风橱中, 向离心柱中加入 3 μl 氰基硼氢化钠溶液并盖上螺旋帽轻轻摇动或上下颠倒混匀, 孵育 15 分钟 14. 卸下底塞, 拧松螺旋帽将离心柱放回收集管中, 离心并弃掉流穿液体 15. 取下螺旋盖, 用 200 μl 1 交联缓冲液洗涤树脂两次, 每次洗涤之后均需离心 16. 用 150 μl 洗涤缓冲液洗涤树脂六次, 每次洗涤之后均需离心 17. 或者继续进行免疫沉淀 ; 或者储存树脂, 进行到下一个步骤 18. 用 200 μl 1 交联缓冲液洗涤树脂两次, 每次洗涤之后离心 19. 在纸巾上轻拍离心柱的底部以去除剩余的液体, 插入底盖加入 200 μl 1 交联缓冲液, 盖上螺旋盖, 于 4 储存如需长期存储, 添加叠氮化钠至终浓度为 0.02% B. 哺乳动物细胞裂解方案 I: 裂解单层细胞 ( 贴壁 ) 培养物 1. 小心去除细胞中的培养基 2. 用改良型杜氏 PBS 清洗细胞一次 3. 将冰上预冷的 IP 裂解 / 洗涤缓冲液加入细胞中 ( 表 1) 冰上孵育 5 分钟并定期混匀表 1. 不同标准的细胞培养皿 / 板中 IP 裂解 / 洗涤缓冲液的建议添加量培养皿 / 板的尺寸或表面积 IP 裂解 / 洗涤缓冲液体积 mm µl mm µl 6- 孔板 μl 每孔 24- 孔板 μl 每孔 4. 将细胞裂解液转移到微量离心管中, g 离心 10 分钟以沉淀细胞碎片 5. 将上清转移到一个新的微量离心管中用于进行蛋白浓度测定和后续分析方案 II: 裂解悬浮细胞培养物 1. 将细胞悬浮液在 1000 g 下离心 5 分钟以沉淀细胞弃掉上清 2. 将细胞团块用改良型杜氏 PBS 重悬洗涤一次 1000 g 离心 5 分钟再次沉淀细胞 3. 将冰上预冷的 IP 裂解 / 洗涤缓冲液加到细胞团块中每 50 mg 湿重细胞团块加入 500 μl IP 裂解 / 洗涤缓冲液 ( 即 10:1 体积 / 质量 ) 如果裂解大量细胞, 可首先添加 10% 终体积的 IP 裂解 / 洗涤缓冲液到细胞团块中, 用移液管 / 移液器上下吹打细胞团块以混匀, 然后再向细胞悬浮液中添加剩余

5 的 IP 裂解 / 洗涤缓冲液 4. 将细胞裂解液在冰上孵育 5 分钟并定期混匀 g 离心 10 分钟去除细胞碎片将上清转移到一个新的微量离心管中用于进行蛋白浓度测定和后续分析 C. 使用对照琼脂糖树脂预处理细胞裂解液 1. 对于 1 mg 的细胞裂解液, 添加 80 µl 对照琼脂糖树脂浆液 ( 40 µl 固相树脂 ) 到离心柱中 2. 离心柱子以去除贮存储缓冲液 3. 向柱中加入 100 µl 1 交联缓冲液, 离心并弃掉流穿液 4. 将 1 mg 的细胞裂解液加入含有树脂的离心柱中, 并在 4 下孵育 30 分钟至 1 小时, 同时温和地翻转柱子以混匀 g 离心柱子 1 分钟, 弃掉含有树脂的离心柱, 保留流穿液体, 以备加入到固定的抗体中 D. 免疫共沉淀除非另有说明, 所有免疫共沉淀的操作在 4 C 下进行诱饵 : 目的蛋白复合体的需要量和孵育时间取决于使用的体系抗体的亲和性诱饵 : 目的蛋白的相互作用, 因此应根据每个反应体系进行优化本操作流程使用 IP 裂解 / 洗涤缓冲液进行交联和洗涤免疫复合物试剂盒里提供了 20 的改良型杜氏 PBS 可作为替代的结合 / 洗涤缓冲液当蛋白复合物对去污剂敏感时推荐使用这一缓冲液每个免疫共沉淀反应, 用超纯水准备 1 改良型杜氏 PBS 2 ml 即可 1. 混合诱饵目的蛋白 ( 如二者来源不同 ) 并准备合适的实验对照 2. 离心柱推荐使用的样品体积范围是 µl 诱饵: 目的蛋白混合液和对照样品可以用裂解 / 洗涤缓冲液稀释, 也可以使用其它合适的缓冲液 3. 用 200 µl 的 IP 裂解 / 洗涤缓冲液洗涤树脂两次, 每次离心并且丢弃流穿液 4. 在纸巾上轻拍离心柱的底部以去除剩余的液体, 插入底盖 5. 将诱饵 : 目的蛋白混合物及对照样品加入到适量的树脂中盖上螺旋盖, 室温轻轻振荡或翻转 1-2 小时或者 4 过夜注意 : 对于每个实验优化结合时间是必要的对于大样本体积, 转移抗体交联树脂至含有蛋白复合体的单独管子中孵育结束后, 每次只加 0.5 ml 的样本离心, 直至所有的样本都处理完毕 6. 去掉底盖, 松开螺旋盖, 将离心柱放入收集管中离心并且保存流穿液以用于后续分析 7. 取下螺旋盖, 将离心柱放入到一个新的收集管中, 加 200 µl 的 IP 裂解 / 洗涤缓冲液并离心 8. 再用 200 µl 的 IP 裂解 / 洗涤缓冲液洗样品两次, 每次洗涤之后离心注意 : 检测洗涤后的流穿液 ( 如 A 280, SDS-PAGE 或赛默飞微量 BCA 蛋白定量 ) 以确定在特定反

6 应体系下合适的洗涤次数在最后的洗涤溶液中应该不含有蛋白如果样本中仍包含高浓度的蛋白质, 则应继续进行洗涤可选洗涤 : 为了提高洗脱效率, 可以使用 100 µl 1 条件缓冲液再洗涤样本一次该缓冲液只含有低浓度盐和必须的缓冲成分 ; 因此, 检测流穿液可确保诱饵 : 目的蛋白复合体仍保持完整状态 E. 免疫共沉淀洗脱注意 : 如果蛋白或抗体对低 ph 的缓冲液敏感, 可使用中性 ph 值的洗脱缓冲液 ( 如 : 赛默飞温和洗脱缓冲液, 产品编号 :21027) 如后续需进行酶活或功能性分析, 在收集管中加入 5µL 1M Tris, ph9.5, 以中和离心后溶液的 ph 值 1. 将离心柱置于一个新的收集管中, 加 10 µl 洗脱缓冲液并离心 2. 保持离心柱于收集管中, 加 50 µl 洗脱缓冲液室温下静置 5 分钟不需要盖上离心柱或混匀注意 : 减少洗脱缓冲液的用量, 可获得浓度更高的洗脱液但可能会使总体产量减少 3. 离心并收集流穿液分析洗脱液确定是否含有抗原如需要, 可以再次洗脱 ( 即, 步骤 E1 - E3 ) 单独分析每一份洗脱液, 以确保抗原已被完全洗脱 4. 为了保持抗体偶联树脂的活性, 立即进行 F 部分的操作, 即再生和存储树脂 F. 树脂再生和存储 1. 加 100 µl 1 交联缓冲液至离心柱中, 离心并丢弃流穿液重复此操作一次 2. 插入底塞, 加 200 µl 1 交联缓冲液至离心柱中重新盖上螺旋帽用实验室封口膜包裹管子底部, 防止树脂变干如长期储存 (> 2 周 ), 添加终浓度为 0.02% 的叠氮化钠 G. SDS-PAGE 分析的样品制备 1. 将 5 泳道标记上样缓冲液平衡至室温通过颠倒 5-10 次轻轻混合样品缓冲液对于还原型凝胶, 在 5 上样缓冲液中添加 1M DTT, 至终浓度为 100 mm 2. 向样品中加入 5 上样缓冲液至终浓度为 1 ( 即将 5 μl 5 样品缓冲液加入 20 μl 样品中 ) 3. 在下孵育样品约 5 分钟在进行 SDS-PAGE 电泳之前将样品冷却至室温

7 常见问题问题可能的原因解决方案最终洗脱液中检测到抗体蛋白也在阴性对照树脂实验样品中被检测到交联后的树脂没有被充分洗涤以去除未结合的抗体在步骤中使用了还原剂, 从而洗脱了没有与树脂直接共价结合的抗体片段蛋白与树脂介质非特异性地结合用洗脱缓冲液洗涤抗体交联后的树脂, 直到没有抗体被洗涤下来 ( 用蛋白定量分析或检测 A280 判断 ) 使用不含有还原剂 ( 如, DTT 或 β-me) 的缓冲液增加在洗脱之前的洗涤次数或在免疫共沉淀缓冲液中加入 Triton X-100 以降低非特异性结合在进行免疫共沉淀之前用对照树脂对样本进行预吸附处理 * 检查流穿液和洗涤液中的抗体, 以确保足够的抗体已经与树脂结合样本中诱饵蛋白没有被捕获与树脂结合的抗体量不足, 导致诱饵蛋白结合能力低下对树脂做一个上样缓冲液的洗脱, 以估测抗体是否交联 ( 见补充信息部分 ) 增加抗体的用量, 以确保有足够的抗体与树脂交联选择一个更灵敏的方法来检测最终结果样本中诱饵蛋白没有被捕获诱饵蛋白被捕获了, 但是与被检测的目的蛋白没有相互作用抗体不能识别天然诱饵蛋白 ( 常见于用肽段制备的抗体 ) 抗体对胺基交联敏感酸性条件下, 诱饵蛋白没有被从与抗体结合的复合物中洗脱下来蛋白 : 蛋白之间的相互作用过于脆弱, 以至于不能经受洗涤步骤抗体与诱饵蛋白质结合, 可能会占用其结合位点或导致其构象发生改变用不同的抗体尝试增加抗体用量减少交联时间或不同的抗体优化洗脱条件 ( 见我们的网站上的技术提示 #27) 使用不同的洗涤缓冲液或者降低离心转速使用交联剂, 以加强弱的暂时的相互作用使用一个识别诱饵蛋白上另一表位的抗体免疫共沉淀缓冲液不能稳定蛋白 : 也许需要特定的离子辅因子来促进蛋白之蛋白之间的相互作用间的相互作用诱饵蛋白不能形成任何蛋白复合物无

8 树脂从离心柱中渗漏离心柱底部的垫片移开加入底盖之前, 在纸巾上轻拍离心柱的底部以去除多余的液体垫片下的液体可能产生回压, 在插入底盖时可能推开垫片 * 与树脂非特异性结合的蛋白可能在凝胶分析时干扰目标蛋白条带的信号为此, 在进行免疫共沉淀之前, 将对照树脂与样本一起孵育以捕获那些能与树脂结合的蛋白, 可以消除这种干扰补充信息 A. 对照实验当用 SDS-PAGE 分析免疫共沉淀的结果时, 可能会出现多条蛋白条带, 这可能意味着存在蛋白相互作用 ; 然而, 这些条带的出现也可能是由于与树脂介质的非特异性相互作用这时恰当的对照实验对于正确判断实验结果非常关键本试剂盒提供了进行几种类型的对照实验所需的必要组份下面的任何一个对照都可以和免疫共沉淀实验同时平行进行在 SDS-PAGE 分析结果时, 应该舍弃免疫共沉淀和对照中都出现的条带, 因为这些条带是非特异性相互作用的结果使用对照树脂 : 试剂盒提供的对照树脂与免疫共沉淀树脂的支持材料相同, 但是没有被活化这一树脂与抗体交联树脂一样操作, 可作为免疫共沉淀很好的阴性对照使用淬灭抗体交联树脂 : 淬灭抗体交联树脂可以通过用 200 µl 淬灭缓冲液替换抗体对抗体交联树脂进行淬灭而得到, 然后继续按标准流程进行操作使用不相关的抗体 : 将一个不相关的抗体与抗体交联树脂结合, 然后继续按标准流程进行操作 B. 上样缓冲液洗脱在实验问题排查时, 可用上样缓冲液做洗脱以判断抗体是否已与介质结合 Western 检测时, 在抗体片段与目的蛋白信号不发生干扰的情况下, 也可使用这一洗脱方法 1. 准备 50µL 2X 非还原性泳道标记物上样缓冲液 ( 即, 用超纯水稀释 5 X 缓冲液至 2X), 并添加终浓度为 20mM 的 DTT 将内有树脂的离心柱置于新的收集管中, 并在柱中加入 2X 还原性上样缓冲液 2. 保持未塞住的离心柱于收集管中, 在 100 ºC 下孵育 5-10 分钟离心并收集洗脱液冷却样品至室温再进行 SDS-PAGE 分析注意 : 与 SDS 上样缓冲液一起加热后的树脂, 不能被重复使用, 必须丢弃 C. 其它应用使用来自不同样品来源的目的和诱饵蛋白 : 除研究天然蛋白质复合物之外, 该试剂盒可用于研究分别来自不同样品的诱饵蛋白和目的蛋白的免疫共沉淀在这种情况下, 可以选择先让诱饵和目的蛋白在溶液中形成相互作用然后进行纯化, 或者选择先将诱饵蛋白与树脂上的抗体结合然后用于捕获目的蛋白当诱饵和目的蛋白分别来自不同的样品时, 可能需要增加一个对照实验 : 将目的蛋白与交联了抗体的树脂 ( 没有诱饵蛋白 ) 共同孵育这个对照实验中如果出现目的蛋白条带, 那么可以认为目的蛋白和交联了抗体的树脂之间存在非特异性的相互作用, 因为目的蛋白在没有诱饵蛋白的情况下不应与抗体交联树脂结合任何在这个对照实验中出现的蛋白条带均可被认为是非特异性相互作用, 因而不能被采信破坏蛋白 : 蛋白相互作用 : 破坏蛋白 : 蛋白相互作用的实验, 被用来评估蛋白之间作用的特异

9 性程度, 并且可以提供两种蛋白相互作用模式的线索可以通过下列方式破坏蛋白复合体 : 增加缓冲液的离子强度, 向缓冲液中添加去污剂, 或者除去蛋白相互作用必需的辅因子 D. Pierce 离心柱 Pierce 离心柱可容纳多达 900 μl 的液体柱子可置于 1.5 ml 的或 2 ml 微量离心管中, 或与 Luer-Lok 接头 ( 见图 1) 连用, 使用注射器处理样品当使用注射器时, 样品大小和洗涤量只受限于注射器的容积对于小体积树脂, 使用小的预先插入的垫片即可 ( 图 2A) 需要使用超过 100 μl 的树脂时, 使用大垫片, 可以放在柱子的顶部或底部 ( 图 2B 和 2C) 当树脂的用量介于大小两种垫片之间时 ( 图 2B), 树脂可能可以被重复使用要从柱子中移除垫片, 可用拉直的曲别针, 从柱子底部插入, 将垫片推出要插入垫片, 先将其置于柱内, 然后使用垫片推入工具将其推到相应的位置要从顶端和底部都装了垫片的柱子中移除顶端的垫片, 可用拉直的曲别针挑起顶端的垫片, 然后可用镊子将其移出图 1. Pierce 离心柱组件图图 2. 垫片放置的三种形式 E. 网站的技术信息 : 技术提示 #27: 优化免疫亲和纯化的洗脱条件技术提示 #43: 蛋白质稳定性和储存技术提示 #40: 单位转换 : 重力次数 ( g) 和离心转子速度 (RPM) 相关赛默飞产品 Halt 磷酸酶抑制剂混合物 (100 ), 100 µl 24 管 Halt 蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物 (100 ), 1 ml Halt 蛋白酶抑制剂混合物 (100 ), µl 离心柱带有 Luer-Lok 接头的螺旋盖,25 个 / 包装微量离心管,2 ml,72 个 / 包装微量离心管,1.5 ml,72 个 / 包装微型离心柱,50 个 / 包装 Surfact-Amps X-100 (10%, Triton X-100 溶液 ), 6 10 ml 免称量装二硫苏糖醇 (DTT), 7.7 mg DTT/ 管 48 管非还原性泳道标记物上样缓冲液 (5 ), 5 ml Gentle Ag/Ab 洗脱缓冲液, ph 6.6,500 ml BupH 改良型杜氏 PBS 干粉包,40 包, 每包可配成 500 ml 缓冲液 IgG 洗脱缓冲液,1 L 对照琼脂糖树脂,10 ml

10 Triton is a trademark of Rohm & Haas. Luer-Lok is a trademark of Becton, Dickinson and Company. This product ( Product ) is warranted to operate or perform substantially in conformance with published Product specifications in effect at the time of sale, as set forth in the Product documentation, specifications and/or accompanying package inserts ( Documentation ) and to be free from defects in material and workmanship. Unless otherwise expressly authorized in writing, Products are supplied for research use only. No claim of suitability for use in applications regulated by FDA is made. The warranty provided herein is valid only when used by properly trained individuals. Unless otherwise stated in the Documentation, this warranty is limited to one year from date of shipment when the Product is subjected to normal, proper and intended usage. This warranty does not extend to anyone other than the original purchaser of the Product ( Buyer ). No other warranties, express or implied, are granted, including without limitation, implied warranties of merchantability, fitness for any particular purpose, or non infringement. Buyer s exclusive remedy for non-conforming Products during the warranty period is limited to replacement of or refund for the non-conforming Product(s). There is no obligation to replace Products as the result of (i) accident, disaster or event of force majeure, (ii) misuse, fault or negligence of or by Buyer, (iii) use of the Products in a manner for which they were not designed, or (iv) improper storage and handling of the Products. Current product instructions are available at For a faxed copy, call or contact your local distributor Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. Unless otherwise indicated, all trademarks are property of Thermo Fisher Scientific Inc. and its subsidiaries.

Western blot 时至少产生三个蛋白条带 : 抗体重链 ( 50 kda 的 ) 轻链 ( 25 kda ) 和抗原如果抗体条带掩盖了免疫沉淀的抗原, 则可用 Thermo Scientific Clean-Blot IP 检测试剂 ( 货号和 21233) 或使用 Ther

Western blot 时至少产生三个蛋白条带 : 抗体重链 ( 50 kda 的 ) 轻链 ( 25 kda ) 和抗原如果抗体条带掩盖了免疫沉淀的抗原, 则可用 Thermo Scientific Clean-Blot IP 检测试剂 ( 货号和 21233) 或使用 Ther 说明书 Pierce 经典 IP( 免疫沉淀 ) 试剂盒 26146 2137.6 货号描述 26146 Pierce 经典 IP 试剂盒, 包含足够进行 50 次免疫沉淀反应的试剂 ( 每次使用 10 μl 树脂固相化抗体 ) 试剂盒组分 : Pierce 蛋白 A/G 加强型琼脂糖树脂,0.55 ml 固相树脂以 50% 的浆液形式提供 ( 例如, 100 μl 50% 的浆液含有 50 μl