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礼耿吕
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1 第 22 卷第 8 期 2010 年 8 月生命科学 Chinese Bulletin of Life Sciences Vol. 22, No. 8 Aug., 2010 文章编号 : (2010) 抗凝血蛋白的抗凝溶栓机制顾峰, 胡宗利 *, 陈国平, 胡功铃, 解巧利 ( 重庆大学生物工程学院, 重庆 ) 摘要 : 自然界中存在着大量具有抗凝溶栓活性的生物大分子, 如水蛭素蚓激酶等这些生物大分子主要是通过抑制凝血酶及凝血因子活性, 水解纤维蛋白或纤溶酶原, 或是抑制血小板聚集来达到抗凝溶栓的作用该文对这些活性物质的抗凝溶栓机制进行综述关键词 : 凝血机制 ; 抗凝血蛋白 ; 抗凝溶栓机制中图分类号 :Q553; R973 文献标识码 :A Anticoagulant protein: anticoagulant and thrombolysis mechanism GU Feng, HU Zong-li*, CHEN Guo-ping, HU Gong-ling, XIE Qiao-li (College of Bioengineering, Chongqing University, Chongqing , China) Abstract: Many bioactive substances were obtained from natural sources, such as Hirudin and Lumbrokinase. These bioactive substances have anti-thrombin activities, anti-platelet aggregative activities and fibrinolytic activities. This paper reviews the anticoagulant and thrombolysis mechanism of these anticoagulant proteins. Key words: blood clotting mechanism; anticoagulant protein; anticoagulant and thrombolysis mechanism 1 凝血抗凝和纤溶机理 1.1 凝血机理当体内抗凝纤溶系统功能逐渐降低, 血液中凝血与抗凝血功能失去平衡时则出现凝血, 即血栓 ( 图 1) 凝血是一系列凝血因子相继被酶解激活, 最终形成血凝块的过程整个过程涉及许多凝血因子, 迄今为止, 共发现有 1 2 个经典的凝血因子 (coagulation factor, F)(FI~FV, FVII~X III) 和 2 个激肽系统因子, 即激肽释放酶原 (prekallikrein,pk) 与高相对分子质量激肽原 (high molecular weight kininogen,hmwk) 直接参与凝血过程的级联反应 ( 表 1) 凝血过程的激活有三条途径 : 第一是内源性途径当血管壁损伤时, 内皮下组织成分 ( 胶原等 ) 暴露, 使 XII 因子 (FXII) 激活成 XIIa 因子 (FXIIa), 进而激活激肽释放酶原使其转变为激肽释放酶 (Kallikrein,K), 后者与 HMWK 又可反馈激活 FXII, 同时, 激活 Ⅺ 因子 (FXI), 经过一系列级联反应激活 X 因子 (FX), 使之变成 Xa 因子 (FXa) 现研究图 1 人体凝血与抚凝溶栓平衡系统注 : 实线为凝血途径, 虚线为抗凝纤溶途径认为, 起始凝血酶也可直接激活 FXI, 使其变成 FXIa 第二是外源性途径当组织和血管损伤后, 收稿日期 : ; 修回日期 : 基金项目 : 重庆市攻关项目 (CSTC, 2009AB5174); 教育部春晖计划 (Z ); 重庆大学研究生创新团队建设项目 (200909B1007) * 通讯作者 : huzongli@cqu.edu.cn

酶等这些生物大分子主要是通过抑制凝血酶及凝血因子活性, 水解纤维蛋白或纤溶酶原, 或是抑制血小板聚集来达到抗凝溶栓的作用该文对这些活性物质的抗凝溶栓机制进行综述关键词 : 凝血机制 ; 抗凝血蛋白 ; 抗凝溶栓机制中图

2 756 生命科学第 22 卷表 1 凝血因子种类及功能因子同义名功能 FI 纤维蛋白原最终底物 FII 凝血酶原蛋白酶原 FIII 组织因子辅因子 FIV Ca 2+ 辅因子 F V 前加速素辅因子 FVII 前转变素蛋白酶原 FVIII 抗血友病因子辅因子 FIX 血浆凝血激酶蛋白酶原 F X Stuart-Prower 因子蛋白酶原 FXI 血浆凝血激酶前质蛋白酶原 FXII 接触因子蛋白酶原 FXIII 纤维蛋白稳定因子转谷氨酰胺酶原 P K 激肽释放酶原蛋白酶原 H M W K 高相对分子质量激肽原辅因子释出组织因子 (tissue factor,tf) 与 VII 因子 (F VII) 或激活的 VIIa(F VIIa) 形成复合物, 从而激活 FX 和 FIX 第三是凝血共同途径激活的 FXa 与 PF3 Ca 2+ Va 因子 (FVa) 形成凝血酶原酶凝血酶原酶使凝血酶原转变为凝血酶凝血酶使纤维蛋白原转变为可溶性纤维蛋白单体, 同时, 激活 X Ⅲ 因子 (FX III) 从而使可溶性纤维蛋白单体发生分子交联, [3] 形成不溶性稳定的纤维蛋白 (fibrin,fb), 即凝血此外, 血小板的黏附释放聚集收缩和吸附凝血因子也是凝血过程的起始和促进因素, 当血管局部受损伤时, 血小板促进血栓形成 ( 图 2 ) [4,5] 1.2 抗凝机理为确保机体内的凝血作用保持适度, 血浆及血管内皮和其他组织中存在着许多抗凝物质, 它们通过抑制或灭活凝血因子的活性达到抵御血液凝固的目的关键的抑制物包括 :(1) 抗凝血酶, 也叫抗凝血酶 Ⅲ(antithrombin Ⅲ,AT-III) 和肝素抗凝血酶能抑制凝血酶 FXa 和其他活化的凝血因子, 在血管内壁受损时, 肝素与抗凝血酶能改变抗凝血酶的空间构象, 使得其更易于接近靶酶此外, 肝素辅因子 Ⅱ 也能灭活凝血酶和 FXa (2) 蛋白 C 系统, 包括蛋白 C 蛋白 S 凝血酶调节蛋白 (thrombomodulin) 活化蛋白 C 抑制物 (activated protein c inhibitor,apci) 蛋白 Z 在凝血酶与凝血酶调节蛋白所形成的复合物作用下, 蛋白 C 被激活并与蛋白 S 协同, 降解和灭活 FVa FVIIIa 并且活化蛋白 C 能促使内皮细胞释放纤溶酶原激活物, 激活纤溶系统, 从而发挥抗凝血和促纤溶作用同时, 活化蛋白 C 也受活化蛋白 C 抑制物的抑制 (3) 组织因子途径抑制物 (tissue factor pathway inhibitor,tfpi) TFPI 是组织因子 (TF) 的生理抑制剂, 有两种同族异形体即 TFPI-1 和 TFPI-2 前者有抑制 TF-FVIIa 复合物和 FXa 的作用, 后者有抑图 2 人体凝血激活系统

因子 (tissue factor,tf) 与 VII 因子 (F VII) 或激活的 VIIa(F VIIa) 形成复合物, 从而激活 FX 和 FIX 第三是凝血共同途径激活的 FXa 与 PF3 Ca 2+ Va 因子 (FVa) 形成凝血酶原酶凝血酶原酶使凝血酶原转变为凝血酶凝血酶使纤

3 第 8 期顾峰, 等 : 抗凝血蛋白的抗凝溶栓机制 757 [6-8] 制其他丝氨酸蛋白酶和胰蛋白酶等的作用 1.3 纤溶机理血液中除了有抗凝系统之外还存在纤溶系统所谓纤溶系统, 是指能将血液凝固产生的纤维蛋白重新溶解的系统, 主要由下列成分组成 :(1) 纤溶酶原激活剂 (plasminogen activator,pa); (2) 纤溶酶原 (plasminogen,plg) 和纤溶酶 (plasmin,pl); (3) 纤溶抑制剂 (fibrinolytic inhibitor); (4) 纤维蛋白 ( 原 ) 降解产物纤维蛋白溶解过程分为两个基本过程, 即 [9,10] 纤维蛋白酶原激活和纤维蛋白溶解 2 抗凝溶栓蛋白的种类和作用机理除了血浆中的抗凝溶栓物质以外, 自然界中还存在大量具有抗凝溶栓功能的活性物质近年来, 随着基因工程技术和单克隆抗体技术的发展, 对这些活性物质的基因重组生物表达等成为研究的热点, 部分已经成为临床用药尽管这些抗凝溶栓物质的来源分子性质和结构差别很大, 但它们的抗凝溶栓作用都集中表现为以下三个方面 : 抑制凝血酶和凝血因子活性溶解纤维蛋白 ( 原 ) 以及抑制血小板的凝聚 2.1 凝血酶和凝血因子抑制剂凝血酶在凝血过程中起着中心作用, 主要体现在 :(1) 将纤维蛋白原转变成纤维蛋白 ;(2) 激活因子 V VIII 及 XI;(3) 刺激血小板反应 ;(4) 激活血管内皮细胞因此, 凝血酶抑制剂是调节凝血过程的有效工具凝血酶有 4 个结合位点 : 纤维蛋白结合位点非活性底物识别位点酶活性中心和肝素 [11,12] 结合位点水蛭素 (hirudin) 及其衍生物水蛭素是从医用水蛭中提取的一种抗凝蛋白肽类物质 1884 年, 欧洲的 John Haycraft 博士发现欧洲医用水蛭会分泌出某种阻止血液凝结的物质以利于水蛭吸食血液消化 1955 年 Markwardt 首先从水蛭唾液腺中分离出这种蛋白物质, 并命名为水蛭素水蛭素是一条含 65 个氨基酸的单链多肽, 相对分子质量为 7 k 水蛭素分子的 N 末端有三对二硫键 (Cys6-Cys14 Cys16-Cys28 Cys32-Cys39), 使 N 末端肽链绕迭成密集的环肽结构, 对蛋白结构起稳定作用其 N 末端含活性中心, 能识别底物即凝血酶碱性氨基酸富集位点, 并与之结合 C 末端有 6 个为酸性氨基酸水蛭素肽链中部还有一个由 Pro-Lys-Pro 组成的特殊序列, 不被一般蛋白酶降解, 从而维持水蛭素分子的稳定性, 并引导水蛭素分 [13,14] 子以正确的方向与凝血酶分子结合水蛭素是一种凝血酶特异性抑制剂, 它作用于凝血酶中非活性底物识别位点和酶活性中心两个位点, 与凝血酶 1 1 结合形成复合物这种特异性的结合是一个二相的过程, 水蛭素 C 末端的酸性氨基酸与凝血酶的碱性部位结合, 封闭凝血酶的非活性底物识别位点, 使凝血酶构型发生轻微改变, 进而水蛭素 N 末端与凝血酶的酶活性中心结合, 从而抑制了凝血酶 [15] 的催化活性由此对凝血酶产生机制起负反馈作用, 阻断凝血过程的级联反应, 抑制凝血酶诱导的血小板活性水蛭素除了与血浆中游离的凝血酶结合外, 还能中和与纤维蛋白结合的凝血酶因此, 水蛭素能高效抗凝血, 并防止凝血酶催化的凝血因子活化及血小板反应等比伐卢定 (bivalirudin) 是一种半合成的含 20 个氨基酸的凝血酶二价抑制剂, 它对凝血酶的抑制是直接的特异的和可逆的比伐卢定的结构为 : 四肽 D-Phe-Pro-Arg-Pro( 凝血酶活性中心结合区 )+ 四个甘氨酸 ( 连接区 )+ 水蛭素 C 端十二肽类似物 ( 凝血酶纤维蛋白结合位点结合区 ) 比伐卢定与水蛭素一样, 也能同凝血酶结合形成 1 1 复合物, 但它抑制凝血酶活性的作用较为短暂, 因为一旦结合, 凝血酶就劈开比伐卢定 N 端的 Pro-Arg 键, 从而大大降低了其对凝血酶的抑制比伐卢定比水蛭素更安全有效, 应用范围更广泛, 这可能就与它只能短暂抑制凝血酶的活性有关临床研究证实, 采用同样导管插入术, 比伐卢定与肝素相比, 降低了局部缺血和出血并发症的风险, 该风险的降 [16,17] 低即使在高危患者中仍然显著线虫抗凝肽 (nematode anticoagulant peptide, NAP) 线虫抗凝肽是一系列小分子非酶性多肽类物质, 分离自犬钩口线虫 (Ancylostoma caninum) 成虫体内 20 世纪 80 年代初期,Hotez 等就发现钩口线虫的头腺分泌的蛋白水解酶能将纤维蛋白原降解为 5 个小的多肽片断, 抑制人体血浆凝固, 促进纤 [18] 维蛋白凝块的溶解 1993 年从犬钩虫中分离出首个抗凝血肽, 其后证实该抗凝血肽可显著延长凝血酶原时间 ( P T ) 和活化部分凝血酶原激酶时间 (APTT), 其延长 PT 比重组蜱抗凝肽 rtap 和重组水蛭素 rhir 更有效, 由此被认为是最有效的天然抗凝 [19] 血分子之一研究表明, 犬钩口线虫分离的抗凝

(plasminogen,plg) 和纤溶酶 (plasmin,pl); (3) 纤溶抑制剂 (fibrinolytic inhibitor); (4) 纤维蛋白 ( 原 ) 降解产物纤维蛋白溶解过程分为两个基本过程, 即 [9,10] 纤维蛋白酶原激活和纤维蛋白溶解 2 抗凝溶栓蛋白的种类和

4 758 生命科学第 22 卷物质包括一系列小分子多肽, 约为 75~85 个氨基酸, 拥有 2 2 % 的共同序列, 将其命名为钩虫抗凝肽 (ancylostoma caninum anticoagulant peptide,acap) 或线虫抗凝肽 (nematode anticoagulant peptide,nap) [20] 目前已发现的 NAP 家族成员主要包括 NAP1 NAPc2 NAPc3 NAPc4 NAP5 NAP6 NAP7 等其中 NAP1 NAP5 NAP6 为直接凝血酶抑制剂 ( D T I ),N A P c 2 为组织因子途径抑制剂 (TFPI), 对 NAPc3 NAPc4 和 NAP7 的研究较少, [21,22] 其抗凝机制尚不清楚线虫抗凝肽及其重组产物具有明显的抗凝血作用, 其抗凝效应已引起人们的重视并探讨应用于临床实践,rNAPc2 和 rnap5 的临床或临床前试验表明它们具有广阔的应用前景在欧洲和美国,rNAPc2 作为一种凝血因子 Xa [23-26] 的间接抑制剂已进入临床试验阶段 NAP5 已经通过 Beagle 犬动静脉血栓症模型证实其抗凝效果具有剂量依赖性, 部分凝血酶原时间和活化凝血 [27-28] 时间随 NAP5 剂量的增加而延长 NAP5 由 77 个氨基酸组成, 相对分子质量为 8.7 k, 含 10 个半胱氨酸, 形成 5 对二硫键 (C6-C50 C15-C42 C21- C37 C25-C69 C50-C63), 二硫键决定其二级结构, 从而决定其生物活性 NAP5 是 Xa 因子的高效特异性抑制剂, 与 Xa 的反应区域在 37~42 位氨基酸 ( 即 -C-R-S-R-G-C-), 作用位点在第 40 和 41 位 [23,29] 氨基酸之间可选择性地直接与凝血因子 X/Xa 的活性位点结合来抑制其活性, 具有丝氨酸蛋白酶抑制剂作用, 可 100% 抑制 Xa 的活性, 最终抑制 [24,27] 凝血酶原酶的形成, 具有良好的临床应用前景 ; 但是线虫抗凝肽只能作用于凝血过程中凝血酶原激活过程的某些因子或途径, 而对已经存在的凝血酶的凝血作用无能为力 2.2 纤溶酶原和纤维蛋白为底物的抗凝剂蚓激酶 (lumbrokinase,lk) 蚓激酶是从蚯蚓体内分离出的一组具有溶解纤维蛋白及激活纤溶酶原作用的丝氨酸蛋白酶, 也称蚯蚓纤溶酶 (earthworm fibrinolytic enzymes,efe) 1983 年由日本 Mihara 等首次从粉正蚓中提取出, 至今已从不同种类蚯蚓体内提纯出多种具有此活性的 [30] 蛋白组分蚓激酶与纤维蛋白具有特殊亲和力, 不仅水解富含纤溶酶原的纤维蛋白, 还可以水解不含纤溶酶原的纤维蛋白, 使纤维蛋白迅速降解 ; 还可以水解纤维蛋白原而且能间接激活纤溶酶原形成纤溶酶, 同时刺激血管内皮细胞释放 t-pa, 增 [31] 强 t-pa 活性, 并水解凝血因子 I, 抑制血小板聚集有研究认为蚓激酶对凝血过程的影响仅表现为对内外源性凝血系统的后期阶段起作用, 其对凝血因子 II V VII VIII IX XI XII 无明显影响, 但对纤维蛋白原 ( 凝血因子 I) 的水平有显著 [32] 影响药理学研究证实蚓激酶是一类具有强烈溶栓抑制血栓形成的蛋白酶, 毒副作用很小, 极具开发价值 1995 年, 蚓激酶经国家卫生部批准生产, 以其降低血液黏稠度减少血小板聚集改善微循环体内外良好的溶栓抗凝作用且不良反应小的优势, 已大量应用于临床, 治疗多种血栓性疾病, 并取得较好的疗效纳豆激酶 (nattokinase, NK) 纳豆激酶是由纳豆菌产生的一种具有强烈溶栓功能的蛋白酶, 是一种枯草杆菌蛋白酶年, 日本学者须见洋行等首先发现纳豆中有一种具有强纤溶作用的蛋白酶, 后定名为纳豆激酶纳豆激酶是一种碱性丝氨酸蛋白酶, 由 275 个氨基酸残基组成, 呈单链结构, 无二硫键活性部位在 Asp32 His64 和 Ser221 处, 与底物的结合部位在 Ser125 Leu126 和 Gly127 处具有底物专一性, 最敏感的底物是血浆纤溶酶的底物, 对凝血酶底物和激肽释放酶底物也有一定作用, 说明纳豆激酶有 [33-35] 其特异的蛋白水解作用和识别位点纳豆激酶对纤维蛋白尤其是交联形式的纤维蛋白很敏感, 作为一种丝氨酸蛋白酶, 可将交联纤维蛋白直接水解成小肽和氨基酸发挥溶栓作用研究表明纳豆激酶 [36,37] 的纤溶活性是纤维蛋白溶酶的 4 倍体外实验中, 把酶提取液滴加到纤维蛋白平板上, 短时间内即可出现透明的溶解圈, 溶栓效果显著 ; 体内实验中, 纳豆激酶对兔血液凝固系统的影响, 显示纳豆激酶显著降低兔血液中纤维蛋白原含量, 表明其有直接降解血栓的作用纳豆激酶同时还可促进血管内皮细胞产生组织型纤溶酶原激活剂 (t-pa),t-pa 催化纤溶酶原转变成纤溶酶, 以使积累的纤维蛋白 [38] 或血栓溶解 2.3 血小板聚集抑制剂在血液凝固过程中, 血小板提供的富含丝氨酸磷脂蛋白, 使得凝血过程中的一系列反应得以进行它对凝血因子和 Ca 2+ 有较强的亲和力, 为凝血酶原的激活提供了极为有利的条件, 促进血液进一步凝固

究较少, [21,22] 其抗凝机制尚不清楚线虫抗凝肽及其重组产物具有明显的抗凝血作用, 其抗凝效应已引起人们的重视并探讨应用于临床实践,rNAPc2 和 rnap5 的临床或临床前试验表明它们具有广阔的应用前景在欧洲和美国,rNAPc2

5 第 8 期顾峰, 等 : 抗凝血蛋白的抗凝溶栓机制 759 RGD 肽是一种血小板膜糖蛋白 GP Ⅱ b/iiia 受体拮抗剂, 是含有精氨酸 - 甘氨酸 - 天冬氨酸 (Arg- Gly-Asp) 序列的短肽, 是细胞外基质和血液中多种 [39] 粘附蛋白所共有的细胞粘附识别位点血小板膜糖蛋白 GP IIb/IIIa 复合物在血小板活化后形成黏附分子受体, 其能识别纤维蛋白原配体上的 RGD 序列而与纤维蛋白原结合, 是血小板聚集和血栓形成的最后共同通路利用 RGD 肽竞争性地阻断 GP IIb/ IIIa 与纤维蛋白原的结合, 从而抑制血小板的聚集, 是防治血栓性疾病的一种有效手段 R G D 肽临床上显示了良好的抗血小板活性 RGD 肽只有三个氨基酸, 非常容易在体内降解, 所以一般人们都将其与其他多肽相互融合以发挥其强大功能国内通过基因工程合成的含 RGD 多肽也具有显著的抗血 [40,41] [40] 小板聚集作用 1991 年,Church 等用化学合成的方法将 RGD 序列与 hirudin53-64 进行连接, 得到嵌合肽 RGD-hirudin53-64, 其中 hirudin53-64 即水蛭素 C 末 12 肽 (hirugen), 为水蛭素最小的活性单 [42] 位结果表明, 嵌合肽具有抗凝和血小板功能 3 展望传统止血中药的研究已经有了几千年的历史, 但抗凝溶栓蛋白的临床应用才几十年大自然中存在着大量的抗凝溶栓活性物质, 但提取的工艺复杂, 成本高昂, 原料来源有限, 所以通过分子生物学与基因工程技术的手段来获得这些活性物质显得尤为重要目前为止, 蛋白药物研究者已经从水蛭蚯蚓毒蛇等生物体内克隆出很多抗凝溶栓蛋白的 cdna, 进行了生物表达和活性检测, 并且很多重组多功能蛋白也被成功的表达理想的抗凝溶栓药物应该具有安全有效特异性强半衰期长复发率低无出血等副反应价格合理等特点, 相信随着分子生物学与基因工程技术的不断完善, 会有更多安全有效的抗凝溶栓重组蛋白, 新型抗凝溶栓蛋白药物的开发和研制有着很大的空间和潜力 [ 参考文献 ] [1] Verstraete M. Third-generation thrombolytic drugs. Am J Med, 2000, 109(1): 52-8 [2] Zavalova LL, Basanova AV, Baskova IP. Fibrinogen-fibrin system regulators from bloodsuckers. Biochemistry: Mosc, 2002, 67(1): [3] Harker LA, Hanson SR, Kelley AB. Antithrombotic strategies targeting thrombin activities, thrombin receptor sand thrombin generation. Thromb Haemost, 1997, 78(1): [4] Madan M, Berkowitz SD, Tcheng JE. Glycoprotein IIb/IIIa integrin blockade. Circulation, 1998, 98(23): [5] Zokai K, Piazolo L, Harenberg J. Effect of thrombin inhibitors and a glycoprotein IIb/IIIa receptor antagonist in an ex vivo human experimental thrombosis model. Semin Thromb Hemost, 2001, 27(5): [6] Abildgaard U. Antithrombin early prophecies and present challenges. Thromb Haemost, 2007, 98(1): [7] Gale AJ, Griffin JH. Characterization of a thrombomodulin binding site on protein C and its comparison to an activated protein C binding site for factor Va. Proteins, 2004, 54(3): [8] Chand HS, Foster DC, Kisiel W. Structure, function and biology of tissue factor pathway inhibitor-2. Thromb Haemost, 2005, 94(6): [9] Sidelmann JJ, Gram J, Jespersen J, et al. Fibrin clot formation and lysis: basic mechanisms. Semin Thromb Hemost, 2000, 26(6): [10] Samson AL, Medcalf RL. Tissue-type plasminogen activator: a multifaceted modulator of neurotransmission and synaptic plasticity. Neuron, 2006, 50 (5): [11] Kikelj D. Peptidomimetic thrombin inhibitors. Pathophysiol Haemost Thromb, 2003/2004, 33(5-6): [12] Bode W. Structure and interaction modes of thrombin. Blood Cells Mol Dis, 2006, 36(2): [13] Wallis RB. Hirudins: from leeches to man. Semin Thromb Hemost, 1996, 22(2): [14] Koh CY, Kini RM. Molecular diversity of anticoagulants from haematophagous animals. Thromb Haemost, 2009, 102 (3): [15] Agnelli G, Pascucci C, Cosmi B, et al. The comparative effects of recombinant hirudin and standard heparin on thrombus growth in rabbits. Thromb Haemost, 1990, 63(2): [16] Bittl JA, Feit F. A randomized comparison of bivalirudin and heparin in patients undergoing coronary angioplasty for postinfarction angina. Hirulog Angioplasty Study Investigators. Am J Cardiol, 1998, 82(8B): 43-9 [17] Simsir SA, Schwarz ER, Czer LS, et al. Heart transplantation using bivalirudin as anticoagulant. Interact Cardiovasc Thorac Surg, 2010, 10(1): [18] Cappello M, Clyne LP, McPhedran P, et al. Ancylostoma factor Xa inhibitor: partial purification and its identification as a major hookworm-derived anticoagulant in vitro. J Infect Dis, 1993, 167(6): [19] Cappello M, Vlasuk GP, Bergum PW, et al. Ancylostoma caninum anticoagulant peptide: a hookworm-derived inhibitor of human coagulation factor Xa. Proc Natl Acad Sci USA, 1995, 92(13): [20] de Pont AC, Moons AH, de Jonge E, et al. Recombinant nematode anticoagulant protein c2, an inhibitor of tissue factor/factor VIIa, attenuates coagulation and the interleukin- 10 response in human endotoxemia. J Thromb Haemost, 2004, 2(1): [21] de Jonge E, Friederich PW, Vlasuk GP, et al. Activation of coagulation by administration of recombinant factor VIIa elicits interleukin 6 (IL-6) and IL-8 release in healthy human subjects. Clin Diagn Lab Immunol, 2003, 10(3): 495-7

纤维蛋白原的结合, 从而抑制血小板的聚集, 是防治血栓性疾病的一种有效手段 R G D 肽临床上显示了良好的抗血小板活性 RGD 肽只有三个氨基酸, 非常容易在体内降解, 所以一般人们都将其与其他多肽相互融合以发挥其强大功能国

6 760 生命科学第 22 卷 [22] Stassens P, Bergum PW, Gansemans Y, et al. Anticoagulant repertoire of the hookworm Ancylostoma caninum. Proc Natl Acad Sci USA, 1996, 93(5): [23] Harrison LM, Nerlinger A, Bungiro RD, et al. Molecular characterization of Ancylostoma inhibitors of coagulation factor Xa. Hookworm anticoagulant activity in vitro predicts parasite bloodfeeding in vivo. J Biol Chem, 2002, 277(8): [24] Mieszczanek J, Harrison LM, Vlasuk GP, et al. Anticoagulant peptides from Ancylostoma caninum are immunologically distinct and localize to separate structures within the adult hookworm. Mol Biochem Parasitol, 2004, 133(2): [25] Lee A, Agnelli G, Büller H, et al. Dose-response study of recombinant factor VIIa/tissue factor inhibitor recombinant nematode anticoagulant protein c2 in prevention of postoperative venous thromboembolism in patients undergoing total knee replacement. Circulation, 2001,104(1): 74-8 [26] Weltermann A, Kyrle PA, Eichinger S. Novel anticoagulants for the prevention and treatment of venous thromboembolism. Wien Med Wochenschr, 2003, 153(19-20): [27] Rebello SS, Blank HS, Lucchesi BR. Antithrombotic efficacy of single subcutaneous administration of a recombinant nematode anticoagulant peptide (rnap5) in a canine model of coronary artery thrombolysis. Thromb Res, 2000, 98(6): [28] Duggan BM, Dyson HJ, Wright PE. Inherent flexibility in a potent inhibitor of blood coagulation, recombinant nematode anticoagulant protein c2. Eur J Biochem, 1999, 265(2): [29] Théroux P. Inhibition of the platelet glycoprotein IIb/IIIa receptor with tirofiban in unstable angina and non-q-wave myocardial infarction. Platelet Receptor Inhibition in Ischemic Syndrome Management in Patients Limited by Unstable Signs and Symptoms (PRISM-PLUS) Study Investigators. N Engl J Med, 1998, 338(21): [30] Mihara H, Sumi H, Yoneta T, et al. A novel fibrinolytic enzyme extracted from the earthworm, Lumbricus rubellus. Jpn J Physiol, 1991, 41(3): [31] Ryu GH, Park S, Kim M, et al. Antithrombogenicity of lumbrokinase-immobilized polyurethane. J Biomed Mater Res, 1994, 28(9): [32] Chen H, Takahashi S, Imamura M, et al. Earthworm fibrinolytic enzyme: anti-tumor activity on human hepatoma cells in vitro and in vivo. Chin Med J: Engl, 2007, 120(10): [33] Sumi H, Hamada H, Tsushima H, et al. A novel fibrinolytic enzyme (nattokinase) in the vegetable cheese Natto; a typical and popular soybean food in the Japanese diet. Experientia, 1987, 43(10): [34] Fujita M, Hong K, Ito Y, et al. Transport of nattokinase across the rat intestinal tract. Biol Pharm Bull, 1995, 18(9): [35] Fujita M, Nomura K, Hong K, et al. Purification and characterization of a strong fibrinolytic enzyme (nattokinase) in the vegetable cheese natto, a popular soybean fermented food in Japan. Biochem Biophys Res Commun, 1993, 197 (3): [36] Suzuki Y, Kondo K, Matsumoto Y, et al. Dietary supplementation of fermented soybean, natto, suppresses intimal thickening and modulates the lysis of mural thrombi after endothelial injury in rat femoral artery. Life Sci, 2003, 73(10): [37] Suzuki Y, Kondo K, Ichise H, et al. Dietary supplementation with fermented soybeans suppresses intimal thickening. Nutrition, 2003, 19(3): [38] Gong M, Lin HB, Wang Q, et al. Effect of nattokinase on restenosis after percutaneous transluminal angioplasty of the abdominal artery in rabbits. Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao, 2008, 28(9): [39] Schrör K. Anti-integrins new platelet function inhibitors for therapy and prevention of acute coronary syndrome. Wien Klin Wochenschr, 1999, 111(3): 90-7 [40] Church FC, Phillips JE, Woods JL. Chimeric antithrombin peptide. Characterization of an Arg-Gly-Asp(RGD)-and hirudin carboxyl terminus-containing synthetic peptides. J Biol Chem, 1991, 266(18): [41] Mo W, Zhang YL, Chen HS, et al. A novel hirudin derivative characterized with anti-platelet aggregations and thrombin inhibition. J Thromb Thrombolysis, 2009, 28(2): [42] Mann KG. The coagulation explosion. Ann N Y Acad Sci, 1994, 714: 265-9

Hookworm anticoagulant activity in vitro predicts parasite bloodfeeding in vivo. J Biol Chem, 2002, 277(8): 6223-9 [24] Mieszczanek J, Harrison LM, Vlasuk GP, et al.

1600 1000 40 50 2030 2000 采取行动的机会 90% 开拓成功的道路 2

1600 1000 40 50 2030 2000 采取行动的机会 90% 开拓成功的道路 2 简略版本 :2015 3 10 2016 2021 全球卫生部门病毒性肝炎战略 2016 2021 2015 3 12 2012 2010 2014 2015 2016 2021 140 55% 35% 5 15% 5 20% 2.4 1.3 1.5 1 1600 1000 40 50 2030 2000 采取行动的机会 90% 开拓成功的道路