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1 第 35 卷 第 5 期 206 年 9 月 华 中 农 业 大 学 学 报 JournalofHuazhongAgriculturalUniversity Vol.35 No.5 Sep.206,63~67 杜 泊 羊 体 外 胚 胎 生 产 效 率 的 影 响 因 素 陈 大 勇 汪 立 芹 2 范 利 宏 仇 春 娟 李 俊 龙 黄 俊 成 2. 内 蒙 古 赛 诺 草 原 羊 业 有 限 公 司, 呼 和 浩 特 ; 2. 农 业 部 草 食 家 畜 繁 育 生 物 技 术 重 点 开 放 实 验 室, 乌 鲁 木 齐 摘 要 为 了 将 绵 羊 体 外 胚 胎 发 育 技 术 应 用 于 生 产, 采 用 活 体 采 卵 - 体 外 受 精 的 方 法, 对 准 备 淘 汰 的 杜 泊 羊 进 行 外 源 激 素 处 理, 并 对 可 能 影 响 体 外 胚 胎 发 育 及 移 植 后 受 胎 效 率 如 FSH 剂 量 公 羊 个 体 获 取 卵 母 细 胞 方 式 等 因 素 进 行 研 究, 结 果 发 现 :() 每 只 供 体 注 射 FSH240IU 或 420IU 剂 量 对 获 得 胚 胎 数 及 体 外 受 精 卵 裂 率 没 有 明 显 影 响 (P>0.05);(2) 不 同 公 羊 个 体 对 卵 母 细 胞 体 外 受 精 效 率 有 显 著 影 响, 但 胚 胎 移 植 后 受 胎 率 没 有 明 显 影 响 (P>0.05);(3) 活 体 采 卵 与 屠 宰 场 采 卵 方 式 相 比, 对 卵 母 细 胞 的 回 收 没 有 影 响 (2.24vs3.84, P>0.05), 但 活 体 采 集 卵 母 细 胞 受 精 后 的 平 均 胚 胎 数 显 著 低 于 后 者 (7.50vs.7,P<0.05), 卵 裂 率 极 显 著 低 于 屠 宰 场 采 卵 方 式 (60.92% vs8.75%,p<0.0);(4) 上 述 几 组 试 验 对 受 胎 率 都 没 有 影 响 (P>0.05). 由 此 可 见, 供 体 使 用 240IU 的 FSH, 选 择 受 精 效 率 好 的 公 羊, 能 显 著 提 高 杜 泊 羊 体 外 胚 胎 生 产 效 率 ; 离 体 采 集 卵 母 细 胞 体 外 发 育 效 率 高 于 活 体 采 卵. 关 键 词 杜 泊 羊 ; 体 外 胚 胎 生 产 ; 卵 母 细 胞 ; 卵 裂 率 ; 受 胎 率 中 图 分 类 号 S826.9;Q83.7 文 献 标 识 码 A 文 章 编 号 000G242(206)05G0063G05 超 数 排 卵 及 胚 胎 移 植 技 术 (multipleovulation andembryotransfer,moet) 为 世 界 各 地 绵 羊 品 种 的 改 良 作 出 了 巨 大 的 贡 献 [G2]. 经 多 次 超 排 处 理 的 供 体 母 羊, 虽 仍 处 于 壮 年 时 期, 身 体 各 项 机 能 都 处 于 最 好 阶 段, 但 由 于 卵 巢 子 宫 输 卵 管 之 间 相 互 粘 连, 导 致 无 法 再 进 行 超 排 处 理, 甚 至 无 法 自 然 繁 殖, 造 成 了 极 大 的 浪 费. 体 外 胚 胎 生 产 (invitro embryo production,ivep) 技 术, 指 对 母 体 进 行 激 素 处 理, 通 过 活 体 或 屠 宰 场 采 集 卵 母 细 胞, 在 体 外 条 件 下 对 卵 母 细 胞 进 行 成 熟 培 养 体 外 受 精 体 外 培 养, 获 得 可 移 植 的 胚 胎, 并 将 胚 胎 移 植 至 合 适 受 体, 获 得 后 代 的 过 程, 也 即 人 们 常 说 的 试 管 婴 儿. 虽 然 已 有 大 量 [3] [4] [5G6] [7] [7G8] [9] 人 奶 牛 水 牛 山 羊 绵 羊 猪 等 试 管 婴 儿 的 诞 生, 但 在 我 国, 由 于 绵 羊 品 种 不 纯, 无 法 从 屠 宰 场 获 得 可 用 于 体 外 胚 胎 生 产 的 纯 种 绵 羊 卵 巢, 而 绵 羊 活 体 采 卵 技 术, 通 常 通 过 手 术 方 式 采 集 卵 母 细 胞, 由 于 在 抽 吸 卵 泡 时 出 血 较 多, 容 易 导 致 卵 巢 粘 连, 从 而 影 响 了 该 技 术 在 绵 羊 生 产 中 的 应 用. 本 研 究 即 以 此 为 切 入 点, 将 IVEP 技 术 应 用 于 因 粘 连 无 法 再 用 的 超 排 供 体 母 羊, 以 最 大 限 度 地 发 挥 优 良 种 畜 的 繁 殖 性 能. 材 料 与 方 法. 供 受 体 羊 的 选 择 和 处 理 供 体 羊 为 经 多 次 超 排 处 理 后, 因 输 卵 管 子 宫 角 腹 膜 等 相 互 粘 连 而 无 法 再 使 用 的 纯 种 杜 泊 母 羊. 每 次 试 验 精 液 采 自 体 格 健 壮 已 用 于 配 种 的 杜 泊 种 公 羊. 供 体 母 羊 处 理 与 超 数 排 卵 方 案 略 有 不 同, 受 体 同 期 发 情 方 法 相 同. 将 海 绵 栓 放 置 于 供 体 母 羊 阴 道 内, 设 为 第 0 天, 在 放 栓 第 0 天 时 供 体 肌 肉 注 射 促 卵 泡 激 素 (FSH), 共 注 射 6 针, 每 次 注 射 间 隔 2 h, 剂 量 逐 渐 递 减, 注 射 第 5 针 时 禁 饮 禁 食. 受 体 羊 放 栓 日 期 与 供 体 羊 相 同, 在 第 2 天 即 供 体 手 术 前 2 h 撤 栓, 同 时 肌 肉 注 射 孕 马 血 清 (PMSG)330IU, 不 需 要 试 情, 撤 栓 后 第 4 天 开 始 移 植, 手 术 前 24h 禁 饮 禁 食. 采 精 公 羊 每 天 喂 胡 萝 卜 00g, 鸡 蛋 个, 精 料 250g, 适 量 地 运 动. 收 稿 日 期 :205GG07 基 金 项 目 : 国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 (U20338,U40384); 国 家 转 基 因 重 大 专 项 (204ZX08008G003); 内 蒙 古 自 治 区 科 技 创 新 引 导 项 目 ; 自 治 区 公 益 性 科 研 院 所 基 本 科 研 业 务 经 费 ; 自 治 区 科 技 人 才 培 养 项 目 陈 大 勇, 兽 医 师. 研 究 方 向 : 绵 羊 繁 殖 技 术.EGmail:chendayong8@26.com 通 信 作 者 : 汪 立 芹, 副 研 究 员. 研 究 方 向 : 动 物 繁 殖 与 胚 胎 生 物 技 术.EGmail:wlq6304@26.com
2 64 华 中 农 业 大 学 学 报 第 35 卷.2 卵 母 细 胞 的 采 集 注 射 最 后 一 针 FSH 间 隔 2h 后, 将 供 体 羊 于 保 定 架 上 保 定, 通 过 手 术 方 式 将 绵 羊 卵 巢 暴 露 于 体 外, 用 装 有 抽 卵 液 的 0 ml 注 射 器 抽 吸 卵 泡, 将 吸 取 的 卵 泡 液 置 于 离 心 管 中 沉 淀 5 min, 在 体 视 镜 下 捡 出 卵 母 细 胞 ; 若 子 宫 与 腹 膜 粘 连 严 重 而 无 法 将 卵 巢 暴 露 出 体 外 的 供 体, 送 至 屠 宰 场 屠 宰, 摘 取 卵 巢, 放 入 装 有 35 生 理 盐 水 的 保 温 杯 内 运 回 实 验 室, 相 同 方 法 回 收 卵 母 细 胞..3 卵 母 细 胞 的 体 外 成 熟 回 收 的 卵 母 细 胞 经 抽 卵 液 洗 涤 3 次 后, 用 体 外 成 熟 液 洗 涤 3 次, 按 50 枚 / 孔 的 密 度 放 入 装 有 500 μl 成 熟 液 的 4 孔 板 内, 在 38.6 的 含 有 5% CO2 饱 和 湿 度 的 二 氧 化 碳 培 养 箱 内 培 养 22~24h. 成 熟 液 的 主 要 成 分 为 :TCM99-HCO3+0% 胎 牛 血 清 (GIBCO)+0.05IU/mL 促 卵 泡 素 (FSH)+0.05 IU/mL 促 黄 体 素 (LH)+μg/mL 雌 二 醇 mg/l 丙 酮 酸 钠 +00IU/mL 双 抗..4 卵 母 细 胞 的 体 外 受 精 用 0.% 的 透 明 质 酸 酶 对 成 熟 后 的 卵 母 细 胞 进 行 处 理, 除 去 部 分 卵 丘 细 胞, 并 用 体 外 受 精 液 洗 涤 3 次 后 置 于 装 有 500μL 受 精 液 的 4 孔 板 内. 采 集 公 羊 精 液, 选 取 活 力 在 0.7 以 上 的 公 羊 用 于 试 验, 提 前 2h 将 装 有 2 ml 受 精 液 的 圆 底 试 管 置 于 二 氧 化 碳 培 养 箱 内 平 衡, 用 移 液 器 吸 取 200μL 精 液 置 于 圆 底 试 管 底 部, 待 精 子 上 游 30 min 后, 取 上 层 约 ml, 个 /ml 的 密 度 加 入 4 孔 板 内, 与 卵 母 细 胞 共 同 孵 育 8h. 受 精 液 的 成 分 为 :SOF+20% 发 情 羊 血 清 + 6IU/mL 肝 素 钠 +00IU/mL 庆 大 霉 素..5 胚 胎 移 植 将 与 精 子 共 孵 育 过 的 卵 母 细 胞 用 培 养 液 洗 涤 3 遍, 洗 去 粘 附 于 透 明 带 上 的 全 部 卵 丘 细 胞 和 精 子, 将 其 置 于 装 有 培 养 液 的 4 孔 板 内 培 养 30h, 统 计 卵 裂 率, 弃 去 未 卵 裂 的 卵 母 细 胞. 用 移 植 液 洗 涤 次 胚 胎, 移 植 至 同 期 发 情 的 受 体 输 卵 管 内, 每 只 受 体 移 植 2 枚 2~8 细 胞 期 胚 胎..6 数 据 统 计 所 有 数 据 使 用 SPSS3.0 统 计 软 件 的 t 检 验 方 法, 以 平 均 数 ± 标 准 误 表 示. 2 结 果 与 分 析 2. 供 体 激 素 处 理 方 案 对 卵 母 细 胞 体 外 受 精 效 率 的 影 响 将 每 批 供 体 分 成 2 组, 一 组 FSH 总 剂 量 为 240 IU, 一 组 FSH 剂 量 为 420IU, 用 活 体 采 卵 的 方 式 获 取 卵 母 细 胞. 结 果 表 明,2 种 处 理 方 案 平 均 获 得 卵 母 细 胞 数 没 有 差 异 (.86vs2.75,P>0.05), 体 外 受 精 后 的 卵 裂 率 也 没 有 差 异 (57.66% vs59.93%, P>0.05), 移 植 受 胎 率 差 异 不 显 著 (59.56% vs 6.39%,P>0.05). 2.2 公 羊 精 液 对 胚 胎 体 外 生 产 效 率 的 影 响 每 组 试 验 供 体 采 用 活 体 采 卵 方 式 获 取 卵 母 细 经 500r/min 转 速 离 心 4 min, 弃 去 上 清, 加 入 ml 受 精 液, 轻 轻 混 匀 精 子, 再 次 离 心, 留 约 00μL 胞, 每 次 采 集 2~3 只 公 羊 精 液, 分 组 受 精, 重 复 3 次, 受 精 和 受 胎 效 率 如 表 2 所 示 : 公 羊 365 和 858 精 子 混 悬 液, 计 算 精 子 密 度, 按 0 6 ~2 0 6 FSH/ IU 母 羊 只 数 EwesNo. 体 外 受 精 卵 裂 率 (78.7% 77.%) 显 著 高 于 6736 表 FSH 剂 量 对 活 体 采 卵 卵 母 细 胞 体 外 受 精 效 率 和 胚 胎 移 植 受 胎 率 的 影 响 Table EfectofFSHdoseonoocytesinvitrofertilizationeficiencyandpregnancyrate 移 植 受 体 数 怀 孕 数 受 胎 率 /% ReceptorsNo. PregnantewesNo. Conceptionrate ±0.95(074/9) 7.38±0.94(663/9) 57.66± ± ±.49(709/57) 7.66±.03(506/38) 59.93± ±2.48 表 2 公 羊 个 体 对 卵 母 细 胞 体 外 受 精 和 受 胎 效 果 的 影 响 公 羊 号 RamsNo. Table2 Efectoftheramonoocytesinvitrofertilizationandpregnancy 受 胎 率 /% Conceptionrate ±5.68a 5.93±7.5(52/98) ±3.65a 65.56±8.68(55/85) ±5.04ab 45.4±8.87(7/62) ±4.36b 6.45±4.07(34/20) ±5.35b 60.27±2.9(256/48) 注 : 同 列 标 注 不 同 小 写 字 母 表 示 差 异 显 著 (P<0.05).Note:ValuesinthesamecolumnwithdiferentlowercaseletersaresignifiG cantlydiferent(p<0.05).
3 第 5 期 陈 大 勇 等 : 杜 泊 羊 体 外 胚 胎 生 产 效 率 的 影 响 因 素 65 和 6726 号 公 羊 (52.9% 55.7%), 最 大 差 距 达 25%; 每 只 受 体 移 植 2 枚 胚 胎 的 受 胎 率 没 有 差 异, 但 最 大 差 距 也 达 20%. 异, 分 别 为 3.84 枚 / 只 和 2.24 枚 / 只 ; 而 离 体 采 集 卵 母 细 胞 体 外 受 精 后 的 卵 裂 率 极 显 著 高 于 活 体 采 集 方 式 (8.75% vs60.92%,p<0.0), 每 只 供 体 获 得 的 2.3 获 卵 方 式 对 卵 母 细 胞 体 外 受 精 效 率 的 影 响 离 体 采 集 和 活 体 采 集 卵 母 细 胞 回 收 率 间 没 有 差 胚 胎 数 差 异 显 著 (.7vs7.5,P<0.05); 但 胚 胎 移 植 后 的 受 胎 率 没 有 差 异 (62.54% vs60.39%,p>0.05). 表 3 获 卵 方 式 对 卵 母 细 胞 体 外 受 精 效 率 的 影 响 Table3 Efectofoocyteaccesmethodontheeficiencyofinvitrofertilization 采 集 方 式 Oocyteaccess method 母 羊 数 EwesNo. 移 植 受 体 数 ReceptorsNo. 怀 孕 数 Pregnant ewesno. 受 胎 率 /% Conception rate 活 体 OPU ±0.78 (783/48) 7.50±0.64 (096/48)a 60.92±2.06A ±2.37 离 体 Invitro ±2.77 (554/06).7±.97 (267/06)b 8.75±3.40B ±4.5 注 : 同 列 标 注 不 同 大 写 字 母 表 示 差 异 极 显 著 (P<0.0), 不 同 小 写 字 母 表 示 差 异 显 著 (P<0.05).Note:Valuesinthesamecolumn withdiferentuppercaseletersaresignificantlydiferent(p<0.0)andthosewithdiferentlowercaseletersaresignificantlydifg ferent(p<0.05). 3 讨 论 活 体 采 卵 技 术 (ovum pickgup,opu) 的 出 现 为 IVEP 技 术 提 供 了 更 为 广 泛 的 应 用 前 景. 由 于 超 声 波 引 导 法 简 单 可 重 复 性 好 采 卵 效 率 高, 对 于 大 动 物 采 卵 是 最 好 的 选 择, 目 前 OPUGIVEP 商 业 化 的 生 [0G] 产 主 要 是 用 在 牛 上. 小 型 动 物 可 采 用 较 为 复 杂 的 内 窥 镜 或 剖 腹 术 的 方 法 来 收 集 卵 母 细 胞. 绵 羊 胚 胎 移 植 技 术 是 依 靠 手 术 方 式 回 收 胚 胎 的, 因 此, 供 体 经 过 3~5 次 手 术, 通 常 都 会 发 生 粘 连 或 输 卵 管 堵 塞, 此 时 的 供 体 羊 体 况 良 好, 卵 巢 功 能 正 常, 粘 连 不 会 影 响 卵 母 细 胞 的 生 长 发 育, 只 是 影 响 输 卵 管 伞 对 卵 母 细 胞 的 收 纳 卵 母 细 胞 的 受 精 及 胚 胎 的 发 育 和 回 收. 因 此, 将 粘 连 拟 淘 汰 的 母 羊 作 为 供 体, 应 用 OPU 和 IVEP 技 术, 能 最 大 限 度 地 挖 掘 供 体 母 羊 的 价 值. 卵 泡 刺 激 素 (FSH) 是 由 动 物 脑 垂 体 前 叶 嗜 碱 性 细 胞 合 成 与 分 泌 的 一 种 糖 蛋 白 类 促 性 腺 激 素, 在 下 丘 脑 垂 体 性 腺 生 殖 轴 中 起 重 要 的 作 用, 可 以 促 进 卵 巢 卵 泡 的 生 长 卵 泡 颗 粒 细 胞 的 增 生 以 及 雌 [2] 激 素 的 合 成 与 分 泌. 激 素 处 理 方 案 是 关 系 超 排 [3G5] 效 果 的 关 键 因 素 之 一, 目 前 绵 羊 常 用 的 超 排 方 案 有 CIDR+FSH+PG/PMSG [6] ECG+FSH [7] 等. 超 数 排 卵 技 术 是 为 了 获 得 尽 可 能 多 的 可 用 胚 胎,FSH 剂 量 太 大, 容 易 出 现 不 排 卵 的 大 卵 泡, 而 IVEP 技 术 不 需 要 排 卵, 只 要 得 到 发 育 起 来 的 卵 泡 即 可, 因 此 激 素 方 案 与 超 排 方 案 相 比 较 为 简 单, 仅 用 FSH 一 种 激 素 即 可. 本 研 究 在 比 较 FSH 总 剂 量 为 240IU 或 420IU 对 OPU 回 收 体 外 受 精 后 可 移 植 胚 胎 数 卵 裂 率 及 胚 胎 移 植 受 胎 率 的 影 响 时 发 现, 加 大 FSH 剂 量 并 不 能 增 加 卵 母 细 胞 的 数 量 以 及 IVEP 效 率, 每 只 供 体 使 用 240IU 国 产 FSH, 即 能 获 得 卵 母 细 胞.86 枚, 远 高 于 单 独 注 射 PMSG 的.6 枚 [8], 并 且 每 只 供 体 的 卵 母 细 胞 体 外 受 精 后 可 得 到 早 期 胚 胎 7.38 枚, 移 植 受 胎 率 达 59.56%, 与 常 规 胚 胎 移 植 受 胎 率 结 果 相 近 [9]. 精 子 是 影 响 体 外 受 精 效 率 的 主 要 因 素 之 一. 精 子 质 量 与 公 羊 遗 传 性 营 养 条 件 健 康 状 况 等 息 息 相 关. 前 期 在 进 行 牛 绵 羊 卵 母 细 胞 体 外 受 精 试 验 时 发 现, 不 同 个 体 公 牛 冷 冻 精 液 对 受 精 效 果 有 显 著 影 响, 尤 其 是 影 响 了 体 外 胚 胎 的 后 期 发 育 能 力 [20], 公 羊 个 体 冷 冻 精 液 对 体 外 受 精 效 果 也 有 显 著 影 响 [2], 本 试 验 研 究 了 公 羊 个 体 对 绵 羊 活 体 采 集 卵 母 细 胞 体 外 受 精 效 率 的 影 响, 结 果 发 现, 个 别 公 羊 个 体 体 外 受 精 后 的 卵 裂 率 显 著 低 于 其 他 公 羊, 与 前 期 研 究 结 果 相 似. 本 研 究 选 择 的 是 饲 养 条 件 一 致 健 康 状 况 良 好 精 子 活 力 0.7 以 上 人 工 授 精 后 母 羊 怀 孕 率 正 常 的 公 羊, 但 其 对 卵 母 细 胞 体 外 受 精 效 果 仍 有 影 响, 究 其 原 因, 可 能 与 受 精 过 程 中 精 子 卵 子 以 及 相 互 间 发 生 一 系 列 反 应 有 关, 确 切 原 因 有 待 进 一 步 研 究. [0] 在 王 芬 露 等 看 来, 活 体 采 集 牛 卵 母 细 胞 发 育 [22] 能 力 要 高 于 屠 宰 场 采 集 卵 母 细 胞. 而 刘 长 彬 对 比 了 屠 宰 场 采 集 离 体 卵 巢 获 取 的 卵 母 细 胞 和 活 体 采 集 卵 母 细 胞 体 外 受 精 效 率, 发 现 卵 母 细 胞 来 源 对
4 66 华 中 农 业 大 学 学 报 第 35 卷 [23] IVF 的 影 响 不 显 著.SouzaGFabjan 等 详 细 研 究 了 山 羊 不 同 来 源 卵 母 细 胞 对 体 外 成 熟 率 体 外 受 精 卵 裂 率 囊 胚 率 及 囊 胚 孵 化 率 的 影 响, 得 出 屠 宰 场 采 集 卵 母 细 胞 成 熟 率 和 受 精 卵 都 显 著 好 于 活 体 采 集 的 卵 母 细 胞, 证 实 了 活 体 采 集 卵 母 细 胞 比 离 体 采 集 卵 母 细 胞 需 要 更 长 体 外 成 熟 培 养 时 间 的 结 论. 本 试 验 通 过 对 绵 羊 不 同 来 源 卵 母 细 胞 体 外 发 育 能 力 研 究 得 出, 离 体 采 集 卵 母 细 胞 体 外 受 精 后 获 得 的 胚 胎 数 和 卵 裂 率 皆 显 著 高 于 活 体 采 集 卵 母 细 胞, 但 2 种 条 件 下 早 期 胚 胎 移 植 后 受 胎 率 没 有 差 异, 与 SouzaGFabG [23] jan 等 的 研 究 结 果 相 似. 因 此, 虽 然 在 现 有 的 绵 羊 卵 母 细 胞 体 外 成 熟 体 外 受 精 体 外 培 养 条 件 下, 离 体 采 集 卵 母 细 胞 的 体 外 胚 胎 生 产 技 术 已 达 到 应 用 水 平, 但 仍 需 进 一 步 研 究 活 体 采 集 卵 母 细 胞 体 外 培 养 系 统. Invitroproductionofsmalruminantembryos:lateimproveG mentsandfurtherresearch[j].theriogenology,204,8(9): 49G62. [9] GRUPENCG.TheevolutionofporcineembryoinvitroproG duction[j].theriogenology,204,8():24g37. [0] 王 芬 露, 王 世 表. 通 过 活 体 采 卵 (OPU) 的 方 法 来 进 行 牛 体 外 胚 胎 生 产 的 研 究 [J]. 现 代 畜 牧 兽 医,2005(2):44G46. []CEBRIANGSERRANO A,SILVESTRE M A,RUIZS,etal. EfectofsexGsortedsperm ondevelopmentandqualityofin vitrogproducedbovineembryosderivedfromovumpickupoog cytes[j].animalsciencepapersandreports,203,3(2):g 22. [2] 华 荣 茂, 曾 斌.FSH 研 究 进 展 [J]. 江 西 科 技 师 范 大 学 学 报, 204(6):7G2. [3]TOOSIB M,TRIBULO A,LESSARD C,etal.Superovulation andembryotransferin woodbison (Bisonbisonathabascae) [J].Theriogenology,203,80(5):542G45. [4]RUTIGLIANO H M,ADAMSB M,JABLONKAGSHARIFF A,etal.EfectoftimeanddoseofrecombinantfoliclestimuG 参 考 文 献 [] BOUQUET A,SØRENSEN AC,JUGAJ.Genomicselection strategiestooptimizetheuseofmultipleovulationandembryo transferschemesindairycatlebreedingprograms[j].liveg stockscience,205,74:8g25. [2] VIEIRA L M,RODRIGUESC A,MENDANHA M F,etal. Donorcategoryandseasonalclimateassociated withembryo production and survivalin multiple ovulation and embryo transferprogramsin Holstein catle[j].theriogenology, 204,82(2):204G22. [3] STEPTOEPC,EDWARDSR G.BirthafterthereimplantaG tionofahumanembryo[j].lancet,978,2(8085):366. [4] PINTO TL,LOPESBC,FERREIRA MB,etal.245efectsof gyr(bostaurusindicus)donormitochondrialdnaandovum pickuporderoninvitroembryoproduction[j].reproduction fertility & development,205,27():22. [5] QIN GS,CHEN M T,YANG BZ,etal.Ovum pickgupgin vitro embryoproductiongembryotransfertechnologyinthe applicationofwaterbufaloproduction[j].journalofanimal andplantsciences,202,22(3):32g34. [6] AQUINOF,ATABAYE,OCAMPO M,etal.InvitroembryG oproductionandtransferofbubalineembryosusingoocytes derivedfromtransvaginalultrasoundgguidefolicularaspiration (TUFA)[J].Bufalobuletin,203,32(2):545G548. [7] PARAMIO M T,IZQUIERDO D.Currentstatusofinvitro embryoproductioninsheepandgoats[j].reproductionindog mesticanimals,204,49(4):37g48. [8] SOUZAGFABJANJM G,PANNEAU B,DUFFARD N,etal. lating hormone agonist on the superovulatory response of sheep[j].theriogenology,204,82(3):455g460. [5]RATTO M H,SILVA M E,HUANCA W,etal.Inductionof superovulationinsouthamericancamelids[j].animalreprog ductionscience,203,36(3):64g69. [6] 张 帆, 李 晓 丽, 王 俊, 等. 杜 泊 绵 羊 超 数 排 卵 及 胚 胎 移 植 影 响 因 素 分 析 [J]. 黑 龙 江 动 物 繁 殖,204,22(3):40G44. [7]FORCADAF,AIT AMERGMEZIANE M,ABECIAJA,etal. Repeatedsuperovulation usingasimplified FSH/eCG treatg mentforinvivoembryoproductioninsheep[j].theriogenolog gy,20,75(4):769g776. [8]WIECZOREKJ,KOSENYUKY,CEGLA M,etal.AnewconG ceptinlaparoscopicovumpickgup (opu)insheepgeficiencyof methodand morphologyofrecoveredoocytes[j].ann Anim Sci,200,0():39G48. [9]SATTERFIELD M C,SPENCER T E.Asynchronousembryo transferinsheep:lackofsurvivalinprogestinizedrecipienteg wes[j].journalofanimalscience,20,2():8g9. [20] 汪 立 芹, 杨 梅, 陈 童, 等. 不 同 因 素 对 牛 体 外 受 精 效 果 的 影 响 [J]. 畜 牧 与 兽 医,2009,4():38G40. [2] 汪 立 芹, 赵 云 程, 陈 童, 等. 不 同 因 素 对 绵 羊 卵 母 细 胞 体 外 受 精 效 果 的 影 响 [J]. 中 国 畜 牧 兽 医,200,37(8):84G87. [22] 刘 长 彬. 奶 牛 活 体 采 卵 及 体 外 受 精 的 研 究 [D]. 石 河 子 : 石 河 子 大 学,2008. [23]SOUZAGFABJANJM G,LOCATELLIY,DUFFARDN,etal. Invitroembryoproductioningoats:slaughterhouseandlapaG roscopicovum pickupgderivedoocyteshavediferentkinetics andrequirementsregardingmaturationmedia[j].theriogenolg ogy,204,8(8):02g03.
5 第 5 期 陈 大 勇 等 : 杜 泊 羊 体 外 胚 胎 生 产 效 率 的 影 响 因 素 67 Factorsafectingeficiencyofinvitroembryo productionindorpersheep CHEN Dayong WANGLiqin 2 FAN Lihong QIU Chunjuan LIJunlong HUANGJuncheng 2.InnerMongoliaSINOSheepBreedingCo.Ltd,Hohhot00000,China; 2.KeyLaboratoryofGrassLivestockReproduction & BreedBiotechnology, MinistryofAgriculture,Urumqi830000,China Abstract Inordertoapplythetechnologyofinvitrolambembryodevelopmenttoproduction,we studiedthepossibleefectsoffactorssuchasdoseoffsh,individualrams,oocyteobtainmethodsonin vitroembryodevelopmentandtheconceptioneficiencyaftertransplantation.theresultsshowedthat injectiondoseoffsh240iuor420iuperdonorhadnoefectonthenumberofobtainedoocytes,the numberofembryos,andinvitrofertilizationandcleavagerate(p>0.05).ramhadsignificantefectson invitrooocytefertilizationeficiency(p < 0.05),butdidnotafectthepregnancyrateofembryotransG plantation(p>0.05).whencompareoocyteharvestingmethodofovumpickup(opu)withslaughterg house,therewasnoefectontherecoveryofoocyte (2.24vs.3.84,P >0.05).However,theaverage numberofembryosobtainedbyopu wassignificantlylowerthanthatobtainedbyslaughterhouse(7.50 vs.7,p<0.05),andthecleavageratewasextremelysignificantlylowerthanthelater(60.92% vs 8.75%,P<0.0).Aloftheabovetestshadnoefectonthepregnancyrate(P>0.05).Using240IU donorfshandselectingthefertilizationeficiencyram,cansignificantlyimprovetheinvitro embryo production.theinvitrodevelopmentalabilityoftheoocyteharvestedbytheslaughterhousewashigher thanthatbyopu. Keywords dorpersheep;invitroembryoproduction;oocytes;cleavagerate;conceptionrate ( 责 任 编 辑 : 边 书 京 )
第十一章 颈部疾病病人的护理
第 十 一 章 颈 部 疾 病 病 人 的 护 理 学 习 目 标 1. 了 解 颈 部 常 见 肿 块 病 人 的 身 体 状 况 及 处 理 原 则 ; 能 提 出 甲 状 腺 肿 瘤 甲 状 腺 功 能 亢 进 病 人 的 护 理 诊 断 并 制 定 出 护 理 措 施 2. 熟 悉 甲 状 腺 肿 瘤 甲 状 腺 功 能 亢 进 病 人 的 身 体 状 况 手 术 适 应 证 3. 掌 握
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