年 1 2 月 第 1 2 卷 第 1 2 期 type, smoking status and metestasis status (P>0.05). 20.3% (38/187) of NSCLC patients had EGFR gene mutation. EGF

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1 中国肺癌杂志2009年12月第12卷第12期 1219 基 础 研 究 187例非小细胞肺癌中EGFR基因突变 和扩增的检测及其临床意义 刘红雨 李颖 陈钢 王竞 李永文 王玉丽 韦森 朱大兴 邱小明 王伟强 宋作庆 陈军* 周清华* 摘要 背景与目的 现有的研究表明表皮生长因子受体 EGFR 相关信号通路在肺癌的发生和发展中起重 要作用 EGFR酪氨酸激酶抑制剂 EGFR-TKIs 是目前针对EGFR治疗非小细胞肺癌 NSCLC 的重要分子靶向药 物 EGFR的不同存在状态 基因突变和基因扩增 与TKIs的疗效相关 本研究旨在探讨非小细胞肺癌患者中EGFR 的存在状态及其临床意义 从而为肺癌病人 个体化分子治疗 提供依据 方法 研究对象为187例NSCLC病例 用 Real-time PCR技术检测EGFR基因19 21外显子的突变状态 用荧光原位杂交 FISH 技术检测EGFR基因的扩增情 况 并进一步分析EGFR基因的突变和扩增与患者临床病理生理特征的关系 结果 FISH结果显示 47.6% 98/187 的肺癌患者存在EGFR基因的扩增 而EGFR基因的扩增与患者的年龄 性别 组织学类型 吸烟状态及是否存在转 移无关 P>0.05 Real-time PCR结果显示 20.3% 38/187 的肺癌患者存在EGFR外显子19 21的突变 EGFR基 因突变率在女性 32.3% vs 14.4%男性 腺癌 35.5% vs 9.9%非腺癌 不吸烟 38.2% vs 10.1%吸烟 患者中明显高 P<0.05 EGFR基因扩增与基因突变之间具有一定的相关性 在早期肺癌 腺癌及非吸烟的女性患者中 EGFR 基因外显子突变常同时伴有EGFR基因的扩增 有EGFR基因突变或/和基因扩增的患者生存期均高于无EGFR基因异 常者 但是没有统计学差异 P>0.05 有EGFR基因突变的患者易对TKIs治疗有效 结论 EGFR基因突变率在不同 的NSCLC患者中不同 其中 在女性 腺癌和不吸烟患者中突变率高 EGFR基因扩增与患者的性别 组织类型 吸烟状态等临床特征无明显关系 与患者预后的相关性有待进一步研究 关键词 肺肿瘤 表皮生长因子受体 基因突变 基因扩增 中图分类号 R734.2 DOI: /j.issn Detection and Its Clinical Significance of EGFR Gene Mutation and Gene Amplification in 187 Patients with Non-small Cell Lung Cancer Hongyu LIU1, Ying LI1, Gang CHEN2, Jing WANG1, Yongwen LI1, Yuli WANG1, Sen WEI2, Daxing ZHU2, Xiaoming QIU2, Weiqiang WANG2, Zuoqing SONG2, Jun CHEN2, Qinghua ZHOU1 1 Tianjin Key Laboratory of Lung Cancer Metastasis and Tumor Microenviroment, Tianjin Lung Cancer Institute, Tianjin Medical University General Hospital, Tianjin , China; 2Thoracic cancer center, Tianjin Medical University General Hospital, Tianjin , China Corresponding author: Jun CHEN, huntercj2004@yahoo.com; Qinghua ZHOU, zhouqh1016@yahoo.com.cn Abstract Background and objective It has been demonstrated that epidermal growth factor receptor (EGFR) signal pathway had an important role in the oncogenesis and development of non-small cell lung cancer (NSCLC). Small-molecule tyrosine kinase inhibitors (TKIs) that target at the kinase domain of EGFR are recently developed target therapy reagents for treatment of NSCLC patients. Previous studies revealed that different patient groups response differently to EGFR-TKI, which is based on the EGFR gene status. The aim of this research was to define the clinicopathologic features associated with the gene amplification and mutation status of the EGFR gene in NSCLC patients and determine the most likely population to benefit from TKI treatment. Methods 187 of NSCLC cases were collected. The mutation status of EGFR exon 19 and 21 were determined by Real-time PCR, as well as the gene amplification status of EGFR gene by FISH. The relationship between EGFR mutation and gene amplification and the clinical pathologic features were analyzed with χ2 test. Results EGFR gene amplifications were identified in 89 of 187 samples (47.6%). EGFR gene amplification was not associated with age, gender, pathological 本研究受国家自然科学基金 No 天津市科技支撑计划中瑞合作重大项目 No.09ZCZDSF04100 天津市自然科学基金 No.09JCYBJC16200 国家 863 项目 No.2006AA02401 以及吴阶平医学基金 No.08-ZH-002 的资助 作者单位 天津 天津医科大学总医院 天津市肺癌研究所 天津市肺癌转移与肿瘤微环境重点实验室 刘红雨 李颖 王竞 李永文 王玉丽 王伟强 周清华 天津医科大学总医院胸部肿瘤中心 陈钢 韦森 朱大兴 邱小明 宋作庆 陈军 通讯作者 陈军 huntercj2004@yahoo.com 周清华 zhouqh1016@yahoo.com.cn 中国肺癌杂志

2 年 1 2 月 第 1 2 卷 第 1 2 期 type, smoking status and metestasis status (P>0.05). 20.3% (38/187) of NSCLC patients had EGFR gene mutation. EGFR gene mutation rates were significantly higher in the female (32.3% vs 14.4% male), non-smoker (38.2% vs 10.1% smoker) and patients with adenocarinoma (35.5% vs 9.9% non-adenocarcinoma) (P<0.05). There was a correlation between EGFR gene mutation and gene amplification (P=0.012), especially in the early stage, adenocarcinoma and never smoking female patients. The patients with EGFR gene mutation and/or gene amplification had longer overall survival than those without, but had no significant difference (P>0.05). The patients with EGFR gene mutation had a better response to TKIs therapy than those without. Conclusion The EGFR gene mutation rate is different in the patients with different lung cancers. EGFR gene mutation occurs more frequently in female, non-smoker and patients with adenocarcinoma. Although there wasn t a significant relationship between EGFR gene amplication and the clinicopathologic features, EGFR gene amplication may correlate with the prognosis of lung cancer patients. Key words Lung neoplasms; Epidermal growth factor receptor; Gene mutation; Gene amplification This study was supported by grants from the national natural science foundation of China (to Jun CHEN)(No ), Tianjin Scientific supporting project, China-Sweden cooperative foundation (to Qinghua ZHOU)(No.09ZCZDSF04100), the national natural science foundation of Tianjin (to Jun CHEN)(No.09JCYBJC16200), the National 863 project (to Qinghua ZHOU)(No.2006AA02401) and Wu Jieping medical foundation (to Jun CHEN)(No.08-ZH-002). 肺 癌 是 目 前 发 病 率 和 死 亡 率 最 高 的 恶 性 肿 瘤, 其 治 疗 也 成 为 人 们 关 注 的 焦 点, 传 统 的 化 疗 和 放 疗 由 于 缺 乏 特 异 性, 取 得 疗 效 的 同 时 也 往 往 给 患 者 带 来 较 大 的 副 作 用 因 此, 选 择 肺 癌 细 胞 特 异 的 分 子 靶 点, 应 用 针 对 该 靶 点 的 药 物 进 行 治 疗, 在 取 得 明 显 疗 效 的 同 时 又 避 免 对 正 常 细 胞 的 伤 害 的 治 疗 模 式, 越 来 越 被 肿 瘤 学 术 界 和 广 大 患 者 所 认 同 肺 癌 分 子 靶 向 治 疗 常 用 的 治 疗 靶 点 有 : 细 胞 受 体 信 号 传 导 和 抗 血 管 生 成 等, 其 中 表 皮 生 长 因 子 受 体 (epidermal growth factor receptor, EGFR) 是 目 前 最 为 主 要 的 靶 点 表 皮 生 长 因 子 受 体 在 细 胞 信 号 传 导 通 路 中 起 重 要 作 用, 一 旦 被 激 活, 可 导 致 肿 瘤 细 胞 内 酪 氨 酸 蛋 白 激 酶 活 化 和 受 体 自 身 磷 酸 化, 从 而 促 使 细 胞 增 生 分 化 转 移 血 管 生 成 及 凋 亡 抑 制 [1] EGFR 受 体 抑 制 剂 包 括 小 分 子 酪 氨 酸 激 酶 抑 制 剂 (tyrosine kinase inhibitor, TKI) 和 单 克 隆 抗 体 EGFR-TKI 通 过 阻 断 细 胞 受 体 的 三 磷 酸 腺 苷 结 合 位 点, 阻 止 下 游 信 号 传 递 而 产 生 抑 制 肿 瘤 作 用 目 前, 有 两 种 EGFR-TKI( 厄 罗 替 尼 和 吉 非 替 尼 ) 成 功 在 中 国 上 市, 其 药 物 特 点 是 口 服 高 效 高 特 异 性, 病 人 耐 受 性 好, 无 骨 髓 抑 制 和 神 经 毒 性, 能 显 著 延 长 敏 感 患 者 生 存 期, 改 善 患 者 生 活 质 量 但 是, 大 规 模 的 临 床 实 验 中 亦 发 现, 在 不 同 的 病 人 中 EGFR-TKI 的 疗 效 差 异 很 大 对 未 经 选 择 的 病 人, 使 用 EGFR-TKI 的 总 有 效 率 为 8%-12%; 而 在 非 吸 烟 女 性 和 亚 洲 人 中, 有 效 率 高 于 20% 2004 年,Lynch [2] 和 Paez [3] 等 首 次 提 出,EGFR-TKI 对 不 同 NSCLC 的 治 疗 效 果 的 差 异 是 由 于 EGFR 外 显 子 的 突 变 状 态 不 同 EGFR 外 显 子 19 或 / 和 21 的 突 变 异 常 将 导 致 EGFR 结 合 ATP 的 能 力 增 加, 从 而 加 强 了 TKI 的 疗 效 在 不 同 种 族 的 人 群 中 EGFR 的 突 变 率 存 在 显 著 差 异, 如 [4] Kosaka 等 报 道, 日 本 的 NSCLC 患 者 EGFR 外 显 子 突 变 率 [5] 明 显 高 于 美 国 人 和 欧 洲 人 此 外,Cappuzzo 等 亦 报 道, 通 过 荧 光 原 位 杂 交 检 测 EGFR 的 扩 增, 发 现 存 在 EGFR 扩 增 的 患 者 对 TKI 的 疗 效 较 好 由 于 EGFR 的 突 变 和 拷 贝 数 扩 增 状 态 与 TKI 的 疗 效 紧 密 相 关, 而 且 在 不 同 种 族 的 人 群 中,EGFR 的 突 变 状 态 存 在 很 大 的 差 异 本 研 究 拟 以 我 院 肺 外 科 收 治 的 187 例 非 小 细 胞 肺 癌 患 者 为 研 究 对 象, 采 用 Real-time PCR 技 术 检 测 EGFR 基 因 外 显 子 的 突 变, 并 采 用 荧 光 原 位 杂 交 (FISH) 技 术 检 测 EGFR 基 因 的 扩 增 情 况, 从 而 分 析 其 与 患 者 临 床 病 理 生 理 特 征 的 关 系, 探 讨 EGFR 存 在 状 态 在 肺 癌 发 生 发 展 中 的 作 用, 为 晚 期 NSCLC 的 个 体 化 治 疗 打 下 基 础 1 材 料 与 方 法 1.1 临 床 资 料 选 取 天 津 医 科 大 学 总 医 院 2006 年 年 8 月 间 手 术 切 除 并 经 病 理 确 诊 的 非 小 细 胞 肺 癌 标 本 187 例 其 中, 男 性 125 例, 女 性 62 例 ; 年 龄 31 岁 -83 岁, 中 位 年 龄 为 62 岁 ; 有 吸 烟 史 的 病 人 119 例 ; 根 据 ICC 1997 年 新 的 修 订 标 准 进 行 TNM 分 期,I 期 53 例,II 期 22 例,III 期 99 例,IV 期 13 例 ; 有 淋 巴 结 或 / 和 远 处 转 移 者 100 例 ; 按 WHO 肺 癌 组 织 分 类 标 准 进 行 组 织 分 型, 鳞 癌 96 例 腺 癌 76 例 腺 鳞 癌 7 例 大 细 胞 肺 癌 8 例 所 有 患 者 术 前 均 未 接 受 过 化 放 疗 和 EGFR-TKI 治 疗 等 抗 肿 瘤 治 疗 所 有 标 本 均 以 10% 福 尔 马 林 固 定, 常 规 石 蜡 包 埋 封 存 生 存 时 间 从 术 后 第 1 天 算 起, 截 止 至 2009 年 11 月 14 日

3 年 1 2 月 第 1 2 卷 第 1 2 期 Real-time PCR 采 用 Real-time PCR Taqman 探 针 技 术 分 析 肺 癌 患 者 石 蜡 组 织 中 EGFR 外 显 子 突 变 状 况 石 蜡 组 织 DNA 提 取 采 用 TAKARA 试 剂 盒 并 按 说 明 书 步 骤 进 行 首 先 将 3 片 -5 片 10 μm 厚 的 石 蜡 切 片 放 于 Eppendorf 管 中, 加 入 DNA 抽 提 液 10 滴, 充 分 混 匀,100 o C 加 热 10 min, rpm 离 心 10 min, 吸 取 其 上 清 直 接 用 于 Realtime PCR EGFR 基 因 突 变 实 时 荧 光 定 量 PCR 法 检 测 试 剂 盒 由 北 京 金 菩 嘉 医 疗 科 技 有 限 公 司 提 供, 采 用 Taqman 探 针 技 术 检 测 EGFR 基 因 外 显 子 19 dele746-a750(delia) dell747-p753inss(delib) 突 变 以 及 外 显 子 21 L858R L861Q 的 突 变 PCR 反 应 体 系 包 括 : 模 板 正 反 向 引 物 Master Mix 及 Taqman 标 记 探 针 del-e746-a750 dell747- P753insS 或 L858R L861Q 探 针 每 次 实 验 均 设 定 各 突 变 的 阴 阳 性 对 照 孔 及 空 白 对 照 孔 反 应 循 环 参 数 为 :50 o C 2 min,95 o C 10 min 以 激 活 DNA 聚 合 酶 ;95 o C 15 s,62 o C 1 min, 循 环 40 次 Real-time PCR 仪 为 美 国 ABI 公 司 7500 型 结 果 判 读 : 以 无 模 板 对 照 扩 增 曲 线 的 最 高 点 为 准 设 定 阈 值 没 有 出 现 扩 增 曲 线 或 Ct 值 =0 的 样 本 为 阴 性 样 本 ; 出 现 扩 增 曲 线 且 Ct 34.0 的 样 本 为 阳 性 样 本 ;34.0 Ct 38 的 样 本 为 可 疑 阳 性, 需 重 复 1.3 荧 光 原 位 杂 交 (FISH) 采 用 FISH 技 术 检 测 EGFR 基 因 扩 增,FISH 检 测 试 剂 盒 由 北 京 金 菩 嘉 医 疗 科 技 有 限 公 司 提 供, 其 中, 人 7 号 染 色 体 中 心 粒 探 针 有 FITC 标 记 ( 呈 绿 色 荧 光 信 号 ),EGFR 探 针 有 Rhodamine 标 记 ( 呈 红 色 荧 光 信 号 ), 具 体 实 验 步 骤 按 说 明 书 进 行 首 先 对 经 10% 中 性 福 尔 马 林 固 定 石 蜡 包 埋 的 肺 癌 组 织 切 片 (3 μm 厚 ) 进 行 室 温 二 甲 苯 脱 蜡 2 次, 每 次 10 min, 随 后 将 组 织 切 片 依 次 置 于 100% 85% 和 70% 乙 醇 各 2 min 然 后 在 50 o C 下 用 30%[w/v] 酸 性 亚 硫 酸 钠 处 理 组 织 切 片 20 min-30 min 后, 用 90 o C 水 煮 30 min, 以 去 除 核 酸 表 面 的 蛋 白 质 2 SSC 溶 液 漂 洗 后,200 μg/ml 蛋 白 酶 K 37 o C 消 化 30 min 之 后 与 经 变 性 后 的 相 关 探 针 在 42 o C 杂 交 16 h, 经 SSC 洗 涤,DAPI 复 染, 最 后 在 荧 光 显 微 镜 下 判 读 结 果 判 读 标 准 : 计 数 至 少 100 个 细 胞, 统 计 Ratio 值 Ratio 值 =100 个 细 胞 核 中 红 信 号 总 数 /100 个 细 胞 核 中 绿 信 号 总 数 若 Ratio<2 为 阴 性 结 果, 提 示 该 样 本 无 EGFR 基 因 扩 增 ; 若 Ratio>2 为 阳 性 结 果, 提 示 样 本 中 EGFR 基 因 发 生 扩 增 ; 此 外, 若 >10% 的 细 胞 中 存 在 大 于 或 等 于 15 个 红 色 信 号 或 存 在 成 簇 的 红 色 信 号 的, 或 >40% 的 细 胞 中 红 色 信 号 个 数 大 于 或 等 于 4 的, 均 为 阳 性 结 果, 提 示 样 本 中 EGFR 基 因 发 生 扩 增 1.4 统 计 学 处 理 采 用 SPSS 10.0 软 件 进 行 统 计 学 分 析 实 验 数 据 以 Mean±SD 表 示 采 用 的 统 计 学 方 法 有 t 检 验 双 变 量 相 关 性 分 析 等 以 P<0.05 为 具 有 统 计 学 差 异 2 结 果 2.1 EGFR 基 因 的 拷 贝 数 变 化 和 患 者 临 床 特 点 分 析 本 研 究 组 共 有 187 例 患 者, 其 临 床 病 理 生 理 特 征 见 表 1 其 中, 年 龄 按 中 位 数 分 为 62 岁 和 <62 岁 两 组 EGFR 基 因 在 肿 瘤 细 胞 中 拷 贝 数 增 加 包 括 两 种 情 况 : EGFR 高 多 倍 体 扩 增 和 成 簇 扩 增 EGFR 高 多 倍 体 扩 增 是 指 Ratio>2, 或 者 >10% 的 细 胞 中 存 在 大 于 或 等 于 15 个 红 色 信 号, 或 者 >40% 的 细 胞 中 红 色 信 号 个 数 大 于 或 等 于 4 的 ; 此 外 存 在 成 簇 的 红 色 信 号 的, 为 EGFR 成 簇 扩 增, 均 为 阳 性 结 果, 提 示 样 本 中 EGFR 基 因 发 生 扩 增 ( 图 1) EGFR 基 因 拷 贝 数 增 加 与 患 者 临 床 病 理 生 理 特 征 的 关 系 如 表 2 所 示 在 187 例 病 例 中,EGFR 扩 增 阳 性 病 例 89 例 (89/187, 47.6%), 其 中, 男 性 61 例 (61/125, 48.8%), 女 性 28 例 (28/62, 45.2%); 腺 癌 42 例 (42/87, 48.3%), 鳞 癌 42 例 (42/98, 42.9%), 腺 鳞 癌 5 例 (5/10, 50.0%), 大 细 胞 肺 癌 4 例 (4/5, 80.0%) 经 统 计 学 分 析,EGFR 基 因 扩 增 阳 性 病 例 在 不 同 年 龄 性 别 和 组 织 学 类 型 的 患 者 中 的 分 布 没 有 统 计 学 差 异 (P>0.05); 同 时, 亦 与 患 者 吸 烟 与 否 以 及 是 否 伴 有 肿 瘤 的 转 移 均 无 关 (P>0.05) 2.2 EGFR 外 显 子 突 变 与 患 者 临 床 特 点 分 析 如 表 3 所 示, 在 187 例 病 例 中, 共 有 38 例 (20.3%, 38/187) 患 者 发 生 了 EGFR 外 显 子 19 和 21 的 突 变 其 中, 腺 癌 患 者 的 突 变 率 为 35.5%(27/76), 远 远 高 于 非 腺 癌 患 者 (9.9%, 11/111)(P=0.000) 在 非 腺 癌 患 者 中, 鳞 癌 突 变 率 为 7.3%(7/96), 腺 鳞 癌 为 28.6%(2/7), 大 细 胞 肺 癌 为 25%(2/8), 其 中, 虽 然 腺 鳞 癌 和 大 细 胞 癌 突 变 率 较 高, 但 由 于 其 病 例 数 相 对 偏 少, 故 需 要 更 多 的 病 例 来 进 一 步 分 析 这 些 结 果 提 示 在 不 同 组 织 学 类 型 的 肺 癌 中 EGFR 基 因 的 外 显 子 19 和 21 的 突 变 率 是 不 同 的, 其 中 腺 癌 患 者 的 突 变 率 明 显 高 于 非 腺 癌 患 者 在 这 187 例 病 例 中, 男 性 患 者 的 EGFR 突 变 率 为 14.4%(18/125), 明 显 低 于 女 性 患 者 (32.3%, 20/62)(P=0.004) 进 一 步 在 腺 癌 的 病 人 中 分 析 亦 得 出 相 同 的 结 论, 即 男 性 患 者 的 突 变 率 为 27.5%(11/40), 远 远 低 于 女 性 患 者 (44.4%, 16/36) (P=0.016) 此 外, 在 吸 烟 与 否 的 因 素 分 析 中 亦 发 现, 非 吸 烟 者 EGFR 的 突 变 率 为 38.2%(26/68), 远 远 高 于 吸 烟 者 (10.1%, 12/119)(P=0.000), 因 此,EGFR 突 变 在 不 同 吸 烟 状 态 的 病 人 中 也 具 有 统 计 学 差 异 (P=0.000)

4 年 1 2 月 第 1 2 卷 第 1 2 期 进 一 步 在 腺 癌 患 者 分 析 中 亦 得 出 相 同 的 结 论, 即 非 吸 烟 患 者 的 EGFR 突 变 率 为 46.5%(20/43), 远 高 于 吸 烟 患 者 (21.2%, 7/33)(P<0.05) 而 EGFR 基 因 外 显 子 19 和 21 的 突 变 与 肺 癌 患 者 的 年 龄 临 床 分 期 肿 瘤 大 小 转 移 情 况 等 没 有 明 显 的 关 系 (P>0.05) 进 一 步 对 EGFR 基 因 不 同 外 显 子 突 变 情 况 分 析 发 现, 在 EGFR 突 变 的 38 例 患 者 中, 外 显 子 19 的 突 变 率 为 36.8% (14/38), 明 显 低 于 外 显 子 21 的 突 变 (71.1%, 27/38) (P<0.05) 其 中, 外 显 子 19 的 突 变 以 dele746-a750 型 (delia) 为 主, 有 11 例 (28.9%, 11/38), 而 dell747-p75 inss 型 突 变 (delib) 只 有 3 例 (7.9%, 3/38); 而 在 本 组 病 例 中,27 例 外 显 子 21 的 突 变 均 为 L858R 型 突 变 (71.1%, 27/38), 未 见 L861Q 型 的 突 变 3 例 病 人 为 外 显 子 19 和 21 的 双 突 变 (7.9%, 7/38) 因 此, 在 本 组 病 例 中,EGFR 外 显 子 21 的 突 变 率 高 于 外 显 子 19, 而 在 外 显 子 19 的 突 变 以 dele746-a750 型 为 主, 外 显 子 21 的 突 变 以 L858R 型 为 主 2.3 EGFR 外 显 子 的 突 变 和 基 因 扩 增 的 相 关 性 分 析 本 研 究 组 187 例 患 者 的 EGFR 基 因 扩 增 和 外 显 子 突 变 的 信 息 和 部 分 相 关 的 临 床 资 料 见 附 表 1 在 187 例 病 例 中,EGFR 基 因 扩 增 阳 性 率 为 47.6%(89/187), 外 显 子 19 和 21 的 突 变 率 为 20.3%(38/187) 其 中, 在 EGFR 外 显 子 突 变 的 38 例 中,65.8%(25/38) 的 患 者 同 时 具 有 EGFR 基 因 的 扩 增 ; 而 在 89 例 EGFR 基 因 扩 增 的 患 者 中, 亦 有 28.1% (25/89) 的 患 者 具 有 EGFR 基 因 突 变 运 用 双 变 量 χ 2 检 验 发 现 EGFR 基 因 扩 增 与 其 基 因 突 变 之 间 具 有 一 定 的 相 关 性 (χ 2 =6.331, P=0.012)( 表 4) 进 一 步 分 层 分 析 发 现 ( 表 5), 在 早 期 ( 特 别 是 在 I 期 ) 腺 癌 非 吸 烟 的 女 性 患 者 中,EGFR 基 因 外 显 子 19 和 21 的 突 变 与 其 拷 贝 数 增 加 具 有 高 度 一 致 性 : 即 65%-85.7% 的 患 者 在 EGFR 基 因 突 变 的 同 时 具 有 EGFR 基 因 的 扩 增 (P<0.05) 2.4 EGFR 基 因 的 异 常 与 肺 癌 患 者 的 预 后 分 析 在 187 例 患 者 的 正 在 随 访 中, 截 止 2009 年 11 月 15 日 现 仅 有 78 例 患 者 具 有 完 整 的 预 后 资 料, 其 中 死 亡 病 例 20 例, 至 今 生 存 病 例 58 例 我 们 随 后 对 78 例 患 者 依 据 EGFR 基 因 的 突 变 或 / 和 基 因 扩 增 进 行 了 生 存 期 的 初 步 分 组 分 析 依 据 EGFR 基 因 外 显 子 突 变 将 患 者 分 为 EGFR 基 因 突 变 组 和 无 突 变 组 ; 依 据 EGFR 基 因 扩 增 将 患 者 分 为 EGFR 基 因 扩 增 组 和 无 扩 增 组 ; 依 据 EGFR 基 因 异 常 ( 突 变 + 扩 增 ) 将 患 者 分 为 EGFR 基 因 异 常 组 和 正 常 组 如 图 2A 所 示,EGFR 突 变 阳 性 组 患 者 14 人, 中 位 生 存 期 为 704 天, 突 变 阴 性 组 患 者 64 人, 中 位 生 存 期 为 577 天, 两 组 生 存 曲 线 之 间 亦 无 统 计 学 差 异 (P>0.05) 在 EGFR 基 因 扩 增 的 分 析 中 发 现,EGFR 基 因 扩 增 阳 性 组 患 者 38 人, 中 位 生 存 期 为 670 天, 而 阴 性 组 患 者 40 人, 中 位 生 存 期 为 546 天, 两 组 生 存 曲 线 之 间 比 较,EGFR 基 因 扩 增 患 者 要 明 显 好 于 无 扩 增 的 患 者, 虽 然 目 前 在 统 计 学 上 尚 无 差 异 (P=0.054)( 图 2B), 但 已 有 表 1 研 究 对 象 的 基 本 情 况 Tab 1 Basic information of 187 patients with NSCLC Characteristic Number Percentage Age % < % Histology Adenocarcinoma % Squamous cell carcinoma % Ad-SCC 7 3.7% Large cell lung cancer 8 4.3% Gender Male % Female % Metastasis None % Yes % Smoke status Never % Ever % 表 2 EGFR 拷 贝 数 增 加 与 临 床 病 理 生 理 特 征 的 关 系 Tab 2 Relationship between Clinico-pathological and EGFR gene amplification FISH Characteristic - + Clinical stage I 28 (52.8%) 25 (47.2%) II 10 (45.5%) 12 (54.5%) III 51 (51.5%) 48 (48.5%) IV 9 (69.2%) 4 (30.8%) Clinical stage Early (I-II) 38 (50.7%) 37 (49.3%) Late (III-IV) 60 (53.6%) 52 (46.4%) Histology Ad 38 (50.0%) 38 (50.0%) SCC 54 (56.3%) 42 (43.8%) Ad+SCC 3 (42.9%) 4 (57.1%) LCLC 3 (37.5%) 5 (62.5%) Gender Male 64 (51.2%) 61 (48.8%) Female 34 (54.8%) 28 (45.2%) Metastaisis None 48 (55.2%) 39 (44.8%) Yes 50 (50.0%) 50 (50.0%) Smoke status Never 37 (54.4%) 31 (45.6%) Ever 61 (51.3%) 58 (48.7%) Ad: adenocarinoma; SCC: squamous cell carcinoma; LCLC: large cell lung cancer. χ 2 P

5 年 1 2 月 第 1 2 卷 第 1 2 期 1223 表 3 EGFR 基 因 突 变 与 临 床 病 理 生 理 特 征 的 关 系 Tab 3 Relationship between Clinico-pathological and EGFR gene mutation Exon19 Exon21 Total mutation Characteristic χ 2 P χ 2 P χ 2 P no delia delib no L858R - + Clinical I 47 (88.7%) 4 (7.5%) 2 (3.8%) 43 (81.1%) 10 (18.9%) 39 (73.6%) 14 (26.4%) Stage II 21 (95.5%) 0 (0.0%) 1 (4.5%) (77.3%) 5 (22.7%) (77.3%) 5 (22.7%) III 94 (94.9%) 5 (5.1%) 0 (0.0%) 87 (87.9%) 12 (12.1%) 82 (82.8%) 17 (17.2%) IV 11 (84.6%) 2 (15.4%) 0 (0.0%) 13 (100.0%) 0 (0.0%) 11 (84.6%) 2 (15.4%) Clinical Early 68 (90.7%) 4 (5.3%) 3 (4.0%) (80.0%) 15 (20.0%) (74.7%) 19 (25.3%) Stage Late 105 (93.8%) 7 (6.3%) 0 (0.0%) 100 (89.3%) 12 (10.7%) 93 (83.0%) 19 (17.0%) Histoglogy Ad 66 (86.8%) 9 (11.8%) 1 (1.3%) 58 (76.3%) 18 (23.7%) 49 (64.5%) 27 (35.5%) SCC 94 (97.9%) 1 (1.0%) 1 (1.0%) (93.8%) 6 (6.3%) (92.7%) 7 (7.3%) Ad+SCC 5 (71.4%) 1 (14.3%) 1 (14.3%) 6 (85.7%) 1 (14.3%) 5 (71.4%) 2 (28.6%) LCLC 8 (100.0%) 0 (0.0%) 0 (0.0%) 6 (75.0%) 2 (25.0%) 6 (75.0%) 2 (25.0%) Gender Male 116 (92.8%) 7 (5.6%) 2 (1.6%) (91.2%) 11 (8.8%) (85.6%) 18 (14.4%) Female 57 (91.9%) 4 (6.5%) 1 (1.6%) 46 (74.2%) 16 (25.8%) 42 (67.7%) 20 (32.3%) Metabasis None 82 (94.3%) 4 (4.6%) 1 (1.1%) (85.1%) 13 (14.9%) (80.5%) 17 (19.5%) Yes 91 (91.0%) 7 (7.0%) 2 (2.0%) 86 (86.0%) 14 (14.0%) 79 (79.0%) 21 (21.0%) Smoke Never 58 (89.3%) 9 (13.2%) 1 (1.5%) (73.5%) 18 (26.5%) (61.8%) 26 (38.2%) Ever 115 (96.6%) 2 (1.7%) 2 (1.7%) 110 (92.4%) 9 (7.6%) 107 (89.9%) 12 (10.1%) 表 4 EGFR 基 因 突 变 和 扩 增 的 相 关 性 分 析 Tab 4 The correlation analysis between EGFR mutation and amplication EGFR mutation Total - + FISH Total χ 2 =6.331, P=0.012.

6 1224 中国肺癌杂志2009年12月第12卷第12期 A B C D 图 1 荧光原位杂交法检测EGFR基因拷贝数变化 其中 人7号染色体中心粒探针有FITC标记 呈绿色荧光信号 EGFR探针有Rhodamine标记 呈红色荧光信号 具体请见方法学 A EGFR 二倍体 B EGFR低多倍体 C EGFR高多倍体 D EGFR成簇扩增 Fig 1 EGFR gene amplification detection by fluorescence in situ hybridization (FISH) Chromosome 7 centromere was labeled with FITC (green) and EGFR gene was labeled with Rhodamine (red). (See Metheds for detail). A: EGFR disomy; B: EGFR low polysomy; C: EGFR high polysomy; D: EGFR clustered anplification. 明显的趋势 进一步我们把EGFR基因突变或/和扩增联 例患者仅有EGFR基因的扩增而无EGFR外显子的突变 6 合在一起分析发现 EGFR基因异常组43人 中位生存期 例患者中女性患者4人 腺癌4例 鳞癌和腺鳞癌各1例 为599天 正常组35人 中位生存期为546天 虽然EGFR 以下为2例厄洛替尼治疗有效患者 异常组患者生存期要高于EGFR基因正常组 但两组生存 患者甲 女 63岁 主因 间断咳嗽 气短2月余 于 曲线之间亦无统计学差异 P=0.185 图2C 由于本 2009年6月20日住院治疗 CT示右侧胸腔积液 右胸膜 组病例随访时间短 且尚未完成所有病人的随访 故没 多发结节 于6月25日全麻下行VATS右胸膜活检 胸膜 有再进一步进行Cox多因素回归分析 固定术 病理 右胸膜转移性低分化腺癌 CEA EGFR基因突变的检测与EGFR-TKI治疗临床有效病例 Calretinin - 于术后行4个周期GP方案化疗 复查CT 个案分享 由于本研究为回顾性研究 在上述病例中目前 示右胸膜多发结节较前无明显缩小 遂于2009年10月9日 已有16例患者经过了EGFR-TKI的治疗 厄洛替尼和吉非 服用靶向药物厄洛替尼治疗 1个月后复查胸部CT示右 替尼治疗患者各8例 其中 6例 37.5%, 6/16 患者肺 胸膜多发结节基本消失 胸膜变薄 图3 癌进展取得了有效的控制 在这6例患者中5例 83.33%, 患者乙 女 51岁 于2008年2月因查体发现右上 5/6 具有EGFR外显子19 3例 或21 2例 的突变 1 肺占位 在深圳一家医院以肺结核球抗结核治疗 图 中国肺癌杂志

7 1225 B C Cum survival A 1.0 Cum survival Cum survival 中国肺癌杂志2009年12月第12卷第12期 Survival time/d Survival time/d Survival time/d 图 2 EGFR基因异常组和正常组之间Kaplan-Meier生存曲线比较 A EGFR外显子突变组与无突变组比较 P=0.201 B EGFR基因扩增组与非扩增组比较 P=0.054 C EGFR基因异常组与非异常组比较 P=0.185 Fig 2 Comparison of survival curves between EGFR gene abnormal groups and normal groups A: EGFR exons 19 and 21 mutation group and none mutation group (P=0.201); B: EGFR gene amplification positive group and negative group (P=0.054); C: EGFR gene mutation and/or amplification positive group and negative group (P=0.185). A A B B 图 3 厄洛替尼治疗有效病例1 胸膜腔多发性转移结节 腺癌 A 胸部CT B 胸部CT C Fig 3 Case 1 of NSCLC patient with Tarceva effective treatment: Pleural cavity multiple metastatic nodules (adenocarcinoma) A: Chest CT scan on Oct. 19, 2009; B: Chest CT scan on Nov. 11, A 2008年11月在抗结核治疗过程中出现头痛 颅内 高压等脑部症状 复查胸部CT 图4B 显示右上肺占位 图 4 厄洛替尼治疗有效病例2 右肺上叶周围性腺鳞癌 增大 头颅MRI示颅脑出现转移灶 遂于2008年12月行 A 胸部CT B 胸部CT C 胸部CT 颅脑转移瘤切除术 术后病理报告为腺鳞癌 术后行GP Fig 4 Case 2 of NSCLC patient with Tarceva effective treatment: Right lung upper 化疗1个周期和全脑放射 因标本检测为EGFR基因外显 子19 dele746-a750 遂于2009年2月末起服用厄洛替尼治 疗 1个月后复查胸部CT示原发灶明显缩小 此后长期 lobe peripheral Adeno-squamous cell carcinoma A: Chest CT scan on Feb. 27, 2008; B: Chest CT scan on Dec. 11, 2008; C: Chest CT scan on Aug. 11, 服用厄洛替尼 最近头颅MRI 胸CT复查均显示病情控 制良好 图4C 中国肺癌杂志

8 年 1 2 月 第 1 2 卷 第 1 2 期 表 5 EGFR 外 显 子 突 变 和 EGFR 基 因 拷 贝 数 扩 增 相 关 性 分 析 Tab 5 Correlation analysis between EGFR Exons mutation and its amplification EGFR gene amplification FISH EGFR gene mutation - + Clinical stage I - 26 (66.7%) 13 (33.3%) (14.3%) 12 (85.7%) χ 2 P II - 7 (41.2%) 10 (58.8%) (60.0%) 2 (40.0%) III - 44 (53.7%) 38 (46.3%) (41.2%) 10 (58.8%) IV - 8 (72.7%) 3 (27.3%) (50.0%) 1 (50.0%) Clinical stage Early - 33 (58.9%) 23 (41.1%) (26.3%) 14 (73.7%) Late - 52 (55.9%) 41 (44.1%) (42.1%) 11 (57.9%) Histology Ad - 29 (59.2%) 20 (40.8%) (33.3%) 18 (66.7%) SCC - 51 (57.3%) 38(42.7%) (42.9%) 4 (57.1%) Ad+SCC - 3 (60.0%) 2 (40.0%) (0.0%) 2 (100.0%) LCLC - 2 (33.3%) 4 (66.7%) (50.0%) 1 (50.0%) Gender Male - 58 (54.2%) 49 (45.8%) (33.3%) 12 (66.7%) Female - 27 (64.3%) 15 (35.7%) (35.0%) 13 (65.0%) Metabasis None - 43 (61.4%) 27 (38.6%) (29.4%) 12 (70.6%) Yes - 42 (53.2%) 37 (46.8%) (38.1%) 13 (61.9%) Smoke status Never - 29 (69.0%) 13 (31.0%) (30.8%) 18 (69.2%) Ever - 56 (52.3%) 51 (47.7%) (41.7%) 7 (58.3%)

9 年 1 2 月 第 1 2 卷 第 1 2 期 讨 论 大 规 模 的 临 床 试 验 已 经 表 明 酪 氨 酸 激 酶 抑 制 剂 EGFR-TKI 在 晚 期 非 小 细 胞 肺 癌 中 的 疗 效 和 生 存 上 的 优 势 已 有 多 家 报 道 证 实 EGFR-TKI 的 疗 效 与 EGFR 外 显 子 的 突 变 和 基 因 扩 增 明 显 相 关 EGFR 基 因 的 突 变 89% 集 中 在 19 外 显 子 的 缺 失 和 21 外 显 子 的 L858R 错 义 突 变 Paez 等 率 先 分 析 了 119 例 NSCLC 患 者 的 突 变 与 临 床 特 征, 发 现 EGFR 突 变 发 生 率 在 腺 癌 中 高 于 其 它 病 理 类 型, 女 性 高 于 男 性 本 研 究 通 过 对 187 例 NSCLC 患 者 EGFR 最 常 见 的 19 外 显 子 两 种 缺 失 突 变 和 21 外 显 子 的 两 种 错 义 突 变 进 行 检 测, 结 果 与 上 述 报 道 相 似 :EGFR 突 变 发 生 在 不 同 性 别 和 病 理 类 型 的 病 例 中 有 明 显 差 异, 腺 癌 和 腺 鳞 癌 的 突 变 发 生 率 高 于 其 它 病 理 类 型 ; 女 性 突 变 发 生 率 高 于 男 性 此 外, 非 吸 烟 者 中 的 突 变 率 高 于 吸 烟 者 这 些 特 点 具 有 重 要 的 意 义, 因 为 EGFR 的 突 变 与 否 与 TKI 的 临 床 疗 效 相 关 腺 癌 患 者 占 NSCLC 的 大 约 40%, 而 大 规 模 的 临 床 实 验 表 明, 大 约 三 分 之 一 的 患 者 在 使 用 TKI 后, 疾 病 得 到 控 制 本 研 究 发 现, 在 中 国 的 NSCLC 患 者 中,20.3% (38/187) 的 患 者 存 在 EGFR 外 显 子 19 或 / 和 21 的 突 变, EGFR 的 突 变 状 态 与 患 者 的 病 理 类 型 性 别 吸 烟 状 况 有 关 : 女 性 腺 癌 非 吸 烟 者 中 EGFR 外 显 子 的 突 变 率 显 著 高 于 其 他 患 者, 是 选 用 TKI 治 疗 的 优 势 人 群, 这 与 国 外 文 献 报 道 相 符 因 此, 在 选 用 患 者 时 应 该 考 虑 这 些 因 素 以 往 的 研 究 表 明,EGFR 拷 贝 数 增 加 的 NSCLC 患 者 的 生 存 时 间 较 无 EGFR 拷 贝 数 增 加 的 患 者 短 我 们 通 过 FISH 检 测 发 现, 在 这 组 病 例 中 47.6%(89/187) 的 患 者 存 在 EGFR 基 因 拷 贝 数 增 加,EGFR 基 因 的 拷 贝 数 增 加 与 否 与 患 者 的 年 龄 性 别 组 织 学 类 型 肿 瘤 大 小 分 期 是 否 转 移 及 吸 烟 状 况 无 关 但 EGFR 突 变 与 拷 贝 数 增 加 具 有 一 定 的 相 关 性 (P=0.012) 在 EGFR 突 变 阳 性 的 患 者 中, 大 部 分 具 有 EGFR 基 因 拷 贝 数 的 增 加 (65.8%, 25/38), 而 在 EGFR 基 因 扩 增 的 患 者 中, 亦 有 28.1%(25/89) 的 患 者 具 有 EGFR 基 因 突 变 进 一 步 分 析 发 现, 在 早 期 患 者 腺 癌 患 者 和 非 吸 烟 的 女 性 患 者 中, EGFR 外 显 子 19 和 21 的 突 变 与 EGFR 拷 贝 数 增 加 具 有 一 致 性 : 大 部 分 突 变 阴 性 的 患 者 FISH 亦 为 阴 性 ; 大 部 分 突 [6] 变 阳 性 的 患 者 FISH 亦 为 阳 性 Han 等 观 察 了 东 亚 地 区 NSCLC 患 者 的 EGFR 基 因 突 变 拷 贝 数 增 加 和 KRAS 突 变 情 况 与 患 者 的 长 期 生 存 后, 认 为 EGFR 突 变 是 影 响 TKI 疗 效 的 独 立 的 变 量 ; 而 FISH 阳 性 也 提 示 患 者 对 TKI 的 反 应 较 好, 但 生 存 时 间 并 不 能 显 著 延 长 虽 然 现 在 文 献 报 道 的 EGFR 酪 氨 酸 激 酶 结 构 域 的 突 变 已 经 达 30 余 种, 但 大 致 可 分 成 3 类 : 外 显 子 19 的 缺 失 外 显 子 的 单 核 苷 酸 的 替 换 突 变 及 20 外 显 子 的 复 制 突 变 而 外 显 子 21 的 L858R 和 外 显 子 19 的 缺 失 突 变 占 突 变 的 绝 大 多 数, 被 认 为 是 活 化 性 突 变 L858R 单 核 苷 酸 的 替 换 突 变 靠 近 保 守 的 Asp-Phe-Gly 序 列, 突 变 使 A-loop 的 稳 定 性 增 加 而 外 显 子 19 的 缺 失 突 变 靠 近 alpha-c-helix, 而 后 者 控 制 着 与 ATP 结 合 囊 的 角 度, 突 变 使 ATP 结 合 囊 变 窄 [7] [8] Mitsudomi 等 注 意 到 两 种 突 变 在 使 用 TKI 后 的 反 应 有 差 异 : 在 使 用 厄 洛 替 尼 或 吉 非 替 尼 后,EGFR 外 显 子 19 缺 失 突 变 的 患 者 有 效 率 高 于 具 有 L858R 突 变 的 患 者, 且 生 存 时 间 较 L858R 突 变 患 者 长 我 们 的 研 究 发 现,EGFR 突 变 具 有 性 别 差 异, 目 前 现 在 还 没 有 很 好 的 解 释 但 是, 推 测 与 雌 激 素 有 关 激 素 本 身 有 可 能 就 是 一 个 致 癌 剂 比 如, 绝 经 期 前 的 女 性 NSCLC 患 者 肺 癌 往 往 更 具 侵 袭 性 [9,10] [11], 而 且, 有 作 者 报 道,EGFR 通 路 和 雌 激 素 受 体 间 存 在 相 互 作 用, 比 如, 在 NSCLC 细 胞 株 中 和 小 鼠 移 植 模 型 中, 雌 激 素 受 体 拮 抗 剂 和 吉 非 替 尼 间 具 有 协 同 效 应, 但 雌 激 素 在 NSCLC 发 病 中 的 确 切 机 制 还 需 进 一 步 阐 明 吸 烟 状 态 也 影 响 着 EGFR 的 突 变 率 我 们 的 研 究 发 现 : 在 非 吸 烟 者 中, 突 变 率 36.8%(21/57) 远 远 高 于 吸 烟 者 9.3%(10/107); 在 腺 癌 患 者 中, 非 吸 烟 患 者 的 突 变 率 为 43.6%(17/39), 吸 烟 患 者 的 突 变 率 为 15.2% (5/33) 有 作 者 报 道, 在 现 在 吸 烟 以 前 吸 烟 和 从 不 吸 烟 的 NSCLC 中,EGFR 的 突 变 率 分 别 为 :3% 8% 和 20%, 这 表 明 有 一 种 趋 势 : 吸 烟 与 EGFR 的 突 变 有 负 相 关 而 烟 草 不 是 非 吸 烟 患 者 EGFR 突 变 的 致 癌 剂, 而 EGFR 突 变 才 是 非 吸 烟 患 者 最 早 的 分 子 改 变 我 们 的 研 究 发 现,EGFR 基 因 突 变 和 拷 贝 数 增 加 在 NSCLC 中 非 常 普 遍, 而 大 多 数 突 变 的 病 人 都 具 有 EGFR 拷 贝 数 的 增 加, 二 者 具 有 相 关 性 但 两 者 的 相 互 关 系 如 [12] 何 哪 个 更 早 发 生 尚 不 明 确 有 作 者 通 过 显 微 切 割, 将 具 有 突 变 的 肺 癌 组 织 和 其 周 围 的 正 常 呼 吸 道 上 皮 分 开, 发 现 突 变 往 往 局 限 在 肿 瘤 组 织 中, 很 少 在 距 离 肿 瘤 组 织 远 的 地 方 发 现 突 变 ; 而 通 过 分 析 原 发 肿 瘤 组 织 周 围 的 正 常 呼 吸 道 上 皮 和 转 移 性 癌 组 织, 研 究 发 现, 拷 贝 数 增 加 在 原 发 肿 瘤 和 转 移 肿 瘤 中 可 见, 而 在 肿 瘤 周 围 的 正 常 呼 吸 道 上 皮 中 少 见 因 此, 推 导 了 EGFR 突 变 和 拷 贝 数 增 加 在 肺 癌 发 生 中 可 能 的 机 制 由 于 肺 癌 的 发 生 是 一 个 多 步 骤 的 过 程, 从 癌 前 病 变 原 位 癌 到 进 展 期 癌 最 后

10 年 1 2 月 第 1 2 卷 第 1 2 期 发 展 为 转 移 性 癌 多 位 作 者 通 过 分 析 了 不 同 阶 段 的 肺 癌 组 织 后, 提 出 突 变 是 早 期 侵 袭 前 的 改 变 ; 而 拷 贝 数 增 加 是 晚 期 的 与 侵 袭 相 关 的 改 变 因 此, 突 变 的 发 生 早 于 拷 贝 数 增 加, 而 拷 贝 数 的 增 加 往 往 带 有 转 移 的 表 型 综 上 所 述,EGFR 基 因 突 变 率 在 不 同 的 NSCLC 患 者 中 不 同, 其 中, 在 女 性 腺 癌 和 非 吸 烟 患 者 中 突 变 率 高 ;EGFR 基 因 扩 增 与 患 者 的 性 别 组 织 类 型 吸 烟 状 态 等 临 床 特 征 未 见 相 关 性, 但 可 能 与 患 者 的 预 后 相 关 有 EGFR 基 因 突 变 的 患 者 对 TKI 治 疗 疗 效 较 高 因 此, 在 肺 癌 的 个 体 化 治 疗 中 检 测 EGFR 基 因 的 突 变 具 有 重 要 的 临 床 指 导 意 义 参 考 文 献 1 Maria Sibilia, Renate Kroismayr, Beate M, et al. The epidermal growth factor receptor: from development to Tumorigenesis. Differentiation, 2007, 75(9): Lynch TJ, Bell DW, Sordella R, et al. Activating mutations in the epidermal growth factor receptor underlying responsiveness of non-small-cell lung cancer to gefitinib. N Engl J Med, 2004, 350(21): Paez JG, Janne PA, Lee JC, et al. EGFR mutations in lung cancer: Correlation with clinical response to gefitinib therapy. Science, 2004, 304(5676): Kosaka T, Yatabe Y, Endoh H, et al. Mutations of the epidermal growth factor receptor gene in lung cancer: biological and clinical implecations. Cancer Res, 2004, 64(24): Cappuzzo F, Hirsch FR, Rossi E, et al. Epidermal growth factor receptor gene and protein and gefitinib sensitivity in non-small cell lung cancer. J Natl Cancer Inst, 2005, 97(9): Han SW, Kim TY, Jeon YK, et al. Optimization of patient selection for gefitinib in non-small cell lung cancer by combined analysis of epidermal growth factor receptor mutation, K-ras mutation, and Akt phosphorylation. Clin Cancer Res, 2006, 12(8): Shigematsu H, Gazdar AF. Somatic mutations of epidermal growth factor receptor signaling pathway in lung cancers. Int J. Cancer, 2006, 118(2): Mitsudomi T, Kosaka T, Endoh H, et al. Mutations of the epidermal growth factor receptor gene pridict prolonged survival after gefitinib treatment in patients with non-mall-cell lung cancer with postoperative recurrence. J Clin Oncol, 2005, 23(11): Taioli E, Wynder EL. Re: Endocrine factors and adenocarcinoma of the lung in women. J Natl Cancer Inst, 1994, 86(11): Siegfried JM. Women and lung cancer: does oestrogen play a role? Lancet Oncol 2001, 2(8): Stabile LP, Lyker JS, Gubish CT, et al. Combined targeting of the estrogen receptor and the epidermal growth factor receptor in non-small cell lung cancer shows enhanced antiproliferative effects. Cancer Res, 2005, 65(4): Tang X, Shigematsu H, Bekele BN, et al. EGFR tyrosine kinase domain mutations are detected in histologically normal respitory epithelium in lung cancer patients. Cancer Res, 2005, 65(17): ( 收 稿 : 修 回 : ) ( 本 文 编 辑 丁 燕 ) 启 事 周 允 中 教 授 从 医 50 年 庆 典 于 上 海 举 行 2009 年 11 月 13 日 晚, 周 允 中 教 授 从 医 50 年 庆 典 在 上 海 举 行 本 次 庆 典 由 上 海 市 胸 科 医 院 上 海 市 肺 部 肿 瘤 临 床 医 学 中 心 举 办, 来 自 北 京 天 津 广 州 四 川 山 东 福 建 江 苏 及 上 海 的 数 十 位 专 家 出 席 庆 典 因 故 未 能 出 席 的 原 天 津 肿 瘤 医 院 胸 外 科 主 任 张 熙 曾 教 授 和 广 东 省 人 民 医 院 副 院 长 吴 一 龙 教 授 也 特 别 发 来 贺 电 中 国 胸 心 血 管 外 科 临 床 杂 志 编 辑 部 冯 远 景 主 任 及 编 辑 部 刘 谦 主 任 到 会 祝 贺 上 海 市 胸 科 医 院 冯 运 院 长 廖 美 琳 教 授 在 致 辞 中 高 度 评 价 周 允 中 教 授 支 修 益 教 授 代 表 中 华 医 学 会 及 中 国 医 师 协 会 致 贺 辞 与 会 专 家 与 周 允 中 教 授 合 影 留 念, 共 话 春 秋, 气 氛 喜 庆 热 烈 周 允 中 教 授 从 医 50 年, 历 任 上 海 市 胸 科 医 院 院 长 胸 外 科 主 任 上 海 市 肺 部 肿 瘤 临 床 医 学 中 心 主 任 上 海 市 胸 科 医 院 首 席 专 家 美 国 芝 加 哥 大 学 客 座 教 授 中 华 医 学 会 心 胸 外 科 学 会 委 员 中 国 胸 外 科 医 师 协 会 副 会 长 上 海 医 学 会 心 胸 外 科 专 业 委 员 会 副 主 任 委 员 中 国 癌 症 研 究 基 金 会 理 事 及 中 日 消 化 外 科 学 组 委 员 为 我 国 胸 部 外 科 事 业 的 发 展 做 出 了 卓 越 贡 献, 是 我 国 胸 部 外 科 界 享 有 盛 誉 的 著 名 专 家 和 学 者 他 豁 达 谦 逊, 淡 泊 名 利, 宽 厚 仁 和, 尊 老 爱 幼, 展 现 一 代 名 医 的 大 家 风 范, 彰 显 人 生 境 界 的 从 容 儒 雅, 因 而 赢 得 了 国 内 外 同 道 友 人 的 衷 心 尊 敬 申 屠 阳