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- 统 易
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6 H E.coli 5
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10 R 1 HO O OH OH R 2 O O O CH 2 O OH OH OH 1: R 1 =OH, R 2 =-L-Ram0.25% 2: R 1 =OH, R 2 =Ac 0.12% 3: R 1 =OH, R 2 =H ) 4: R 1 =H, R 2 =Ac % HO HO 5: 0.073% COOCH % Fig. 1 9
11 10
12 11
13 12
14 (A) (kda) (B) STD Trypsin activation (min) Fusion Protein Intermediate ] Mature Fusion Protein Intermediate ] Mature 13
15 14
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18 HO COOH NH HO O N H O A:caffeic acid B:uracil 0.013% 0.097% O CH 2 OH O O OH OH CH 2 OH O O OH OH OH OH HN (CH 2 )n O OH HN (CH 2 ) 12 CH 3 OH OH 8 E OH OH OH C: cerebroside (mix.) 0.037% D:aralia-cerebroside (cryst. single compound) Z OH CH 2 OH O HO OH O CH 2 OH (CH 2 ) 7 CH % (CH 2 ) 7 CH 3 HO O OH O H CH 2 C CH 2 E: DGDG 0.044% O O Acyl ; 16:0(Pal) 4.0 % 18:0(Ste) 6.2 % 18:1(Ole) 3.3 % 18:2(Lin) 8.6 % 18:3(Lnn) 77.9 % Acyl Acyl H 2 C O Acyl H: free fatty acid 0.55% O H C H 2 C O O Acyl Acyl F: triacylglycerol (TAG) 0.013% J: fatty acid methyl ester 1.35% I: sterol mix % K: 1,1-dibutoxylbutane (rac.) 0.057% L: squalene 0.012% G: (pending) % Fig. 1 17
19 4-aminophenylmercuric acetate (AMPA) 18
20 MMP-2 Inhibitory Effect (%) Interfering Effect (%) Inhibitory Equisetum arvense Osmunda japonica Pteridium aquilinum Matteuccia struthiopteris Laportea macrostachya Elatostema umbellatum Reynoutria japonica Rumex japonicus Anemone flaccida Asiasarum sieboldii Cardamine leucantha Wasabia japonica Astilbe thunbergii Rodgersia podophylla Pueraria lobata Corchorus olitorius Aralia cordata Aralia elata Anthriscus sylvestris Angelica ursina Glehnia littoralis Oenanthe javanica Symphytum officinale Sambucus sieboldiana Codonopsis lanceolata Cacalia delphiniifolia Cacalia hastata Cirsium japonicum Cirsium purpuratum Petasites japonicus Sonchus asper Allium grayi Erythronium japonicum Hemerocallis fulva Hosta albo-marginata Hosta montana Smilax riparia Zingiber mioga Ulva pertusa Codium fragile Dictyota dichotoma Dictyopteris divaricata Sphaerotrichia divaricata Desmarestia viridis Ecklonia stolonifera Undaria pinnatifida Sargassum confusum Sargassum hemiphyllum Sargassum horneri Sargassum patens Sargassum thunbergii Sargassum siliquastrum Gelidium elegans Grateloupia okamurae Grateloupia lanceolata Solieria tenuis Gracilaria vermiculophylla Ahnfeltiopsis flabelliformis Chondrus ocellatus Lomentaria catenata Ceramium kondoi Laingia pacifica Symphyocladia latiuscula Zostera marina
21 20
22 ND:not detected ND MMP (ppm)
23 22
24 or ph7 (NaOH) (ph7) C 18 -Sep-Pak(pH7) ph2 (HCl) 0.1% (ph2) A C 18 -Sep-Pak(pH2) B C 18 -Sep-Pak(pH7) C 0.1% (%) AR (ppm) AR(%) AR A B C (ppm) % Fraction Nos AR 280nm 320nm Absorbance 23
25 24
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39 [%] 1 [%] [m] [] [kj/kg]
40 x10-3 [m 3 /kg] 3.45x10-3 [m 3 /kg] 1 39
41 40
42 Na 2 SO 3 Na 2 SO 3 Na 2 SO 3 41
43 Biosci.Biotechnol.Biochem.,69(6), (2005) Die starke 42
44 E-2248.txt 1 SPPGTKDVTADLFEWNYASVAKECTTALGPAGYGYVQVSPPAEHIQGAQWWTSYQPVSYK SV LGPAGYGYVQVSPP EHIQG QWWTSYQPVSY 60 coelicolor.txt 1 SPPGDKDVTAVMFEWKFTSVAQACTDTLGPAGYGYVQVSPPQEHIQGGQWWTSYQPVSYR SV EHIQG QWWTSYQPVSY 60 limosus.txt 1 APPGAKDVTAVLFEWKFASVARACTDSLGPAGYGYVQVSPPQEHIQGSQWWTSYQPVSYK LGPAGYGYVQVSPP EHIQG QWWTSYQPVSY 60 lividans(tk21).txt 1 SPPGDKDVTAVMFEWKFTSVAQACTDTLGPAGYGYVQVSPPQEHIQGGQWWTSYQPVSYR SV EHIQG QWWTSYQPVSY 60 lividans(tk24).txt 1 SPPGDKDVTAVMFEWKFTSVGQACTDTLGPAGYGYVQVSPPQEHIQGGQWWTSYQPVSYR SV EHIQG QWWTSYQPVSY 60 E-2248.txt 61 IAGRLGDRTAFRNMVNTCHAAGVKVVVDTVINHMSAGSGTGTGGSSYTKYDYPGLYSVYD TCHAAGVKVV D V NHM GTGTGGS KYDYPG S D 120 coelicolor.txt 61 IAGRLGDRAQFKSMVDTCHAAGVKVVADSVVNHMSAGNGTGTGGSSYTKYDYPGLYSSND D V GTGTGGS KYDYPG S D 120 limosus.txt 61 IAGRLGDRAAFKSMVDTCHAAGVKVVADSVINHMAAGSGTGTGGSAYQKYDYPGIWSGAD D V GTGTGGS KYDYPG S D 120 lividans(tk21).txt 61 IAGRLGDRAQFKSMVDTCHAAGVKVVADSVVNHMSAGNGTGTGGSSYTKYDYPGLYSSND D V GTGTGGS KYDYPG S D 120 lividans(tk24).txt 61 IAGRLGDRAQFKSMVDTCHAAGVKVVADSVVNHMSAGNGTGTGGSSYTKYDYPGLYSSND D V GTGTGGS KYDYPG S D 120 E-2248.txt 121 FDDCTSQVSNYSDRWNVQHCELVGLADLDTGEEYVRKTIAGYMNDLLTLGVDGFRIDAAK NVQ CELVGLADLDTGE YVR Y DLL LGVDGFRIDAAK 180 coelicolor.txt 121 LDNCTSQINNYGDRFNVQECELVGLADLDTGEDYVRGKIAGYLNDLLSLGVDGFRIDAAK NVQ CELVGLADLDTGE YVR IA Y DLL LGVDGFRIDAAK 180 limosus.txt 121 MDDCRSEINDYGNRANVQNCELVGLADLDTGESYVRDRIAAYLNDLLSLGVDGFRIDAAK R NVQ CELVGLADLDTGE YVR IA Y DLL LGVDGFRIDAAK 180 lividans(tk21).txt 121 LDNCTSQINNYGDRFNVQECELVGLADLDTGEDYVRGKIAGYLNDLLSLGVDGFRIDAAK NVQ CELVGLADLDTGE YVR IA Y DLL LGVDGFRIDAAK 180 lividans(tk24).txt 121 LDNCTSQINNYGDRFNVQECELVGLADLDTGEAYVRGKIAGYLTDLLSLGVDGFRIDAAK NVQ CELVGLADLDTGE YVR IA Y DLL LGVDGFRIDAAK 180 E-2248.txt 181 HIPAGDLANIKSRLTNPSAYWKQEVIYGAGEAVQPSEYTGNGDVQEFRYAYDLKRVFTSE IK N I G GEAV P EY G GDVQEFRYA DLKRV E 240 coelicolor.txt 181 HMAAADLAAIKSRLSNPNVYWKHEAIYGAGEAVSPTEYVGSGDVQEFRYARDLKRVFNGE A I GEAV P EY G GDVQEFRYA DLKRV E 240 limosus.txt 181 HMPAADLTAIKAKVGNGSTYWKQEAIHGAGEAVQPSEYLGTGDVQEFRYARDLKRVFQNE I G GEAV P EY G GDVQEFRYA DLKRV E 240 lividans(tk21).txt 181 HMAAPDLAAIKSRLSNPNVYWKHEAIYGSGEAVSPTEYVGCGDVQEFRYARDLKRVLQGE A I GEAV P EY G GDVQEFRYA DLKRV E 240 lividans(tk24).txt 181 HMAAADLAAIKSRLSNPNVYWKHEAIYGAGEAVSPTEYVGSGDVQEFRYARDLKRVFNGE A I GEAV P EY G GDVQEFRYA DLKRV E 240 E-2248.txt 241 KLAYLTNYGEGWGYLNSSVAGVFVDNHDTERNGSTLNYKSGADYTLANVFMLAWPYGAPD L VFV NHDTER G TL YK G YTLA VFMLAWPYG PD 300 coelicolor.txt 241 NLAYLKNFGEAWGHLPSDEAAVFVTNHDTERNGETLTYKDGATYTLAHVFMLAWPYGSPD L N NHDTER G TL YK G YTLA VFMLAWPYG PD 300 limosus.txt 241 NLAHLKNFGEDWGYMASGKSAVFVDNHDTERGGDTLNYKNGSAYTLAGVFMLAWPYGSPD L N NHDTER G TL YK G YTLA VFMLAWPYG PD 300 lividans(tk21).txt 241 NLAYLKNFGEAWGHLPSDEAAVFVTNHDTERNGETLTYKDGATYTLAHVFMLAWPYGSPD L N NHDTER G TL YK G YTLA VFMLAWPYG PD 300 lividans(tk24).txt 241 NLAYLKNFGEAWGHLPSDEAAVFVTNHDTERNGETLTYKDGATYTLAHVFMLAWPYGSPD L N S NHDTER G TL YK G YTLA VFMLAWPYG PD 300 E-2248.txt 301 VNSGYEWSDADAGPPNGGQVNACWQDGWKCQHAWPEIKSMVAFRNATRGQAVANWWDNGN DAGPPNG VNAC DGWKCQHAW E SMV GQ V WWDNG 360 coelicolor.txt 301 VHSGYEFTDHDAGPPNGGQVNACYSDGWKCQHAWREISSMVGFRNTARGQGVTDWWDNGG DAGPPNG VNAC DGWKCQHAW E SMV RN GQ V WWDNG 360 limosus.txt 301 VHSGYEFTDHDAGPPNGGTVNACYSDGWKCQHAWPELSSMVGLRNTASGQPVTNWWDNGG DAGPPNG VNAC DGWKCQHAW E SMV GQ V WWDNG 360 lividans(tk21).txt 301 VHSGYEFTDHDAGPPNGVQVNACYSDGWKCQHAWCEISSMVAFRNTARGQGVTDWWDNGG DAGPPNG VNAC DGWKCQHAW E SMV GQ V WWDNG 360 lividans(tk24).txt 301 VHSGYEFTDHDAGPPNGGQVNACYSDGWKCQHAWREISSMVAFRNTARGQGVTDWWDNGG DAGPPNG VNAC DGWKCQHAW E SMV RN GQ V WWDNG 360 E-2248.txt 361 NAIAFGRGTKGYVAINHESSSLTRTYQTSLPAGTYCNVQNNTPVTVNSSGQSTATLGSNT RT LP G YC VQ VTV G TAT T 420 coelicolor.txt 361 DQIAFGRGSKAYVAINHEGTSLTRTFQTSLPAGDYCDVQTGKGVTVDGAGRFTATLGAGT RT Q LP G YC VQ VTV G TAT T 420 limosus.txt 361 DQIAFGRGDKAYVAINHEGSALNRTFQSGLPGGAYCDVQSGRSVTVGSDGTFTATVAAGT RT Q LP G YC VQ VTV G TAT T 420 lividans(tk21).txt 361 DQIAFGRGSKAYVAINHEGTSLTRTFQTSLPAGDYCDVQTGKGVTVNGAGRFTATLGAGT L RT Q LP G YC VQ VTV G TAT T 420 lividans(tk24).txt 361 DQIAFGRGSKAYVAINHEGTSLTRTFQTSLPAGDYCDVQTGKGVTVDGAGRFTATLGAGT K L RT Q LP G YC VQ VTV G TAT T 420 E-2248.txt 421 ALALYAGKSSC coelicolor.txt 421 AVALHVGARTCDGGDPGDPDPVS-SGVSFAVDATTSWGQNIYVTGNRPELGN AL 471 limosus.txt 421 ALALHTGARTCSGGGTG-PGTGQ-TSASFHVNATTAWGENIYVTGDQAALGNWDPARALK 478 lividans(tk21).txt 421 AVALHVGARTCDGGDPGDPDPVSFRRVPSAVDATTSWGQNIYVTGNRPELGNWNPGGALQ AL 480 lividans(tk24).txt 421 AVALHVGARTCDGGDPGDPDPVS-SGVSFAVDATTSWGQDIYVTGNRPGLGHWDPGGGLQ AL 479 E-2248.txt coelicolor.txt limosus.txt 479 LDPAAYPVWKLDVPLAAGTPFQYKYLRKDAAGKAVWESGANRTATVGTTGALTLNDTWRG 538 lividans(tk21).txt 481 LDPAAYPVWKRDVELPEGTTFEYKYLRKDDAGNVTWESGANRTATVNTTKT-TLNDTWRN 539 lividans(tk24).txt 480 LDPAAYPVWKRDVELPEGTTFEYKSLRKADAGNVTWESGANRTATVNTTKT-TLNDTWRN
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46 ࡄ 㧔 ⒓㧕 ࡄ 㧔 ⒓㧕ࡔ ࡘ 45
47 , 20, 40, 60, 80, 100 % % 20% 60%
48 1 1mM = de
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50 a 1b 2a 2b mm 1/
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53 GABA GABA GABA GABA 450W 10mL GABA GABA GABA GABA mg/100g GABA GABA GABA [mg/ml] CFU/g CFU/g GABA mg/100g x x GABA 2 1.0x x x x
54 x x x x10 2 CFU/ml 1.1x x x x x x x x10 1 CFU/ml 3.8x x x Cereal Chem., 82(2005).,33(2005). 44(2005). 53
55 54
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64 Paenidase Total activity Total protein Specific activity Purification Yield (U) (mg) (U/mg) (-fold) (%) Culture medium Ammonium sulfate DEAE batch Sephacryl S-100 HR DEAE-Sepharose FF st Mono Q P-I * P-II * nd Mono Q P-I * P-II * Paenidase activity was measured using Suc-[D-Asp]-MCA as a substrate. *1 P-I, paenidase I; *2 P-II, paenidase II. P-I P-II (kda) Relative activity (%) Residual activity (%) (A) ph (B) Temperature Substrates Proteinase/peptidases Relative activity (%) Paenidase I Paenidase II Suc-[D-Asp]-MCA DAEP Arg-MCA Cathepsin H <0.1 <0.1 Bz-Arg-MCA Trypsin <0.1 <0.1 Boc-Gln-Ala-Arg-MCA Trypsin <0.1 <0.1 Pro-Phe-Arg-MCA Kallikrein/Proteasome <0.1 <0.1 Ac-Tyr-Val-Ala-Asp-MCA Caspase Ac-Asp-Glu-Val-Asp-MCA Caspase-3/7/ Ac-Val-Glu-Ile-Asp-MCA Caspase Final substrate concentration was 0.5 mm. 63
65 Paenidase Paenibacillus sp. B38 Paenidase Suc-[D-Asp]-MCA Suc-[D-Asp]-pNA Paenidase Paenidase S S-DNA(1.4kbp) Storeptmyces sp. 100% D- Paenibacillus sp. B38 Paenidase PaenidaseI II)Paenidase I/II H D-Asp Paenidase S2262 Storeptmyces sp. Paenidase 64
66 65
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70 Journal of Biotechnology 118: ,(2005). 69
71 70
72 1,000kg 150kg L- 102kg 3000m 2 50ml 17 % 50ml Journal of Biotechnology 118: ,(2005) 71
73
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80 somni cell somni cell somni cell 79
81 GABA GABA 80
82 平成 17 年度試験研究成果概要 発行平成 19 年 1 月発行者秋田県農林水産技術センター総合食品研究所 秋田市新屋町字砂奴寄 4-26 tel fax この印刷物は 200 部作成し 印刷経費は 1 部当たり 円です
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i i ii 1 2 3 4 % N) 5 50.0 AMINO ACID #64 [modified by Administrator] IntAmp_1 nc 40.0 30.0 20.0 10.0 0.0-10.0 1 - ala - 10.483 2 - thr - 11.107 3 - gly - 11.872 4 - val - 13.458 5 - ser - 14.903 6 - pro
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