2018 年 7 月第 20 卷第 7 期 ModChinMed Jul 2018 Vol 20 No 7 病 高脂血症作为心血管疾病的重要危险因素之一, 其在动脉粥样硬化和脑血管病的发生和发展中发挥着重要作用 预防和治疗高脂血症是防治心脑血管疾病的重要途径 [2] 目前, 临床上使用的降血脂药物包

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1 年 月 第 卷 第 期 M C M V N 基础研究 旋覆花总黄酮的降脂作用研究 杨振 何丽明 倪赛宏 傅水莲 邹丽园 洪铁 吉林农业大学 中药材学院 吉林 吉林大学 药学院 药理教研室 吉林 长春 吉林省中医药科学院 吉林 长春 长春 吉林大学 中日联谊医院 吉林 长春 摘要 目的 探究旋覆花中黄酮对高血脂症模型大鼠的影响 方法 通过给予高脂饲料建立高血脂症模型 经口给予各剂量旋覆花总黄酮 周 测定大鼠日均进食量 动物处死前 分笼饲养 后收集大鼠粪便 麻醉 后腹主动脉取血 收集血清与肝脏 分别测定其血清中总胆固醇 TC 甘油三脂 TG 低密度脂蛋白 胆固醇 C 高密度脂蛋白 胆固醇 HD C 超氧化物歧化酶 S OD 丙二醛 MDA 谷胱甘肽过氧化物还原酶 LD GS H PX 肿瘤坏死因子 TNF L 白细胞介素 I L 水平 测定肝脏中总胆固醇含量 粪 α 白细胞介素 I 伊红 HE 常规染色 结果 连续给予高脂饲料 周后 相较于 便中胆汁酸含量 肝组织石蜡切片苏木素 高血脂症模型大鼠的体质量 肝脏中胆固醇水平显著升高 血清中 TC TG LD C水平显著升高 HD C水平显 著降低 肝脏出现严重的脂肪变性 血清中 GS H PX和 S OD水平显著降低 MDA水平显著升高 TNF 水 α与 I 平显著升高 I 水平显著降低 旋覆花总黄酮能够改善脂肪肝程度 降低高脂血症大鼠体质量 肝脏中胆固醇 水平血清中 TC TG LD C水平 升高 HD C水平与粪便中胆汁酸水平 同时能够提高 GS H PX和 S OD活性 降 低 MDA水平 降低 TNF 水平 升高 I 水平 结论 旋覆花总黄酮能够通过抑制脂质过氧化反应发挥促 α I 进胆汁酸排泄及抑制炎症的作用 进而发挥降血脂及改善脂肪肝作用 关键词 旋覆花总黄酮 高脂血症 抗氧化 抗炎 S H m E F I F YANGZ HEL m NIS FUS ZOUL HONGT C C M M A U C C P A m T C M C C D m P m S P m U C C C U H U C C Ab Obj T F I m m M A m F I T k m w m b m C S OD MDA GS H PX TNF I T b LD C HD α I w m L w b m HE R F I TC TG LD C MDA TNF HD C GS H PX α I S OD I m m b C F I m b b m b mm K w F I m mm j 我国心脑血管疾病发病率逐年升高且日益年轻 重的疾病 流行病学研究显示 我国约有 亿 化 目前 心脑血管疾病已成为危害人群健康最严 人患心血管疾病 每小时约 人死于心脑血管疾 基金项目 吉林省重点科技攻关项目 通信作者 洪铁 教授 研究方向 中药药理 E m j

2 2018 年 7 月第 20 卷第 7 期 ModChinMed Jul 2018 Vol 20 No 7 病 高脂血症作为心血管疾病的重要危险因素之一, 其在动脉粥样硬化和脑血管病的发生和发展中发挥着重要作用 预防和治疗高脂血症是防治心脑血管疾病的重要途径 [2] 目前, 临床上使用的降血脂药物包括 : 用于促进胆酸或胆固醇排泄 促进胆固醇的降解 抑制胆酸和胆固醇吸收的胆酸螯合剂, 如考来替泊 考来烯胺等 ; 抑制胆固醇合成关键酶羟甲基戊二酰辅酶 A(HMG CoA) 还原酶的 HMG CoA 还原酶抑制剂类, 如洛伐他汀 普伐他汀等 ; 抑制 camp 的形成 导致甘油三酯酶活性降低 进而降低血液中甘油三酯浓度的烟酸及其衍生物, 如阿西莫司 烟酸肌醇酯等 上述药物虽能够达到降血脂的作用, 但长期服用均出现较严重的不良反应, 因此, 寻求疗效显著 安全可靠的调血脂的药物得到广泛关注 [3 5] 旋覆花是一种传统的中草药, 为菊科旋覆花属植物欧亚旋覆花的干燥头状花絮, 主要分布于中国 韩国和日本, 中国主要产于河南 河北 江苏 浙江 新疆 东北等地 [6] 该药收载于 中华人民共和国药典 2015 年版一部, 味咸 性温, 入肺 肾经, 主治咳嗽消炎等 目前, 已报道的旋覆花的化学成分约有 40 多种, 主要含有甾醇 倍半萜 香豆素及黄酮类化合物, 具有抗炎 抗肝损伤 抗肿瘤 抗氧化等多种生物活性 本研究采用高糖高脂饮食建立高脂血症 SD 大鼠模型, 初步探讨旋覆花总黄酮对高脂血症大鼠的降脂及改善脂肪肝作用 [7 8] 1 材料 1 1 动物 SD 大鼠, 雄性,150~160g,SPF 级, 购于辽宁长生生物制品有限公司, 许可证号 :SCXK( 辽 ) 动物饲养于吉林省中医药科学院的 SPF 屏障系统内, 室内温度 (23±2), 相对湿度 (50±10)%, 昼夜明暗交替时间 12/12h, 大鼠自由进食饮水 1 2 试剂和药品旋覆花采自吉林省长春市双阳区, 标本存放于吉林省中医药科学院长白山资源所 ( 编号 : ), 经吉林省中医药科学院牛志多研究员鉴定为欧亚旋覆花 InulabritannicaThunb 总胆固醇 (TC) 试剂盒 甘油三脂 (TG) 试剂盒 总胆汁酸 (TBA) 试剂盒 低密度脂蛋白胆固醇 (LDL C) 试剂盒 高密度脂蛋白胆固醇 (HDL C) 试剂盒 丙二醛 (MDA) 试剂盒 超氧化物歧化酶 (SOD) 试剂盒 谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH PX) 试剂盒 ( 南京建成生物工程研究所 ); 血清白细胞介素 10 (IL 10) 白细胞介素 6(IL 6) 和肿瘤坏死因子 (TNF α) 的 ELISA 试剂盒 ( 武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司 ); 苏木紫 (Britain 进口分装 ); 曙红 ( 水溶, 天津市大茂化学试剂厂 ) 2 方法 2 1 旋覆花总黄酮的制备取一定量旋覆花浸泡 3h 后, 过滤, 滤渣用乙醇回流提取 2 次后过滤, 合并滤液, 浓缩 减压干燥以获得黄酮粗提取物 AB 8 大孔树脂纯化欧亚旋覆花总黄酮的工艺条件为 : 提取物上样浓度为 0 2g ml -1, 以 2mL min -1 的流速缓慢上样, 用 70% 乙醇进行洗脱, 洗脱速度为 3mL min -1, 以高效液相法测定黄酮的含量, 纯化后总黄酮纯度为 86 54% 2 2 动物分组大鼠适应性喂养 3d 后, 将其随机分为,, 辛伐他丁阳性药组 (3 33mg kg -1 ), (100 mg kg -1 ) 中剂量组 (50mg kg -1 ) 低剂量组 (25mg kg -1 ), 除空白组饲喂基础饲料外, 其余各组大鼠喂食高脂饲料 (63 6% 维持饲料 20% 蔗糖 15% 猪油 1 2% 胆固醇 0 2% 胆酸钠 ) 建造高血脂症模型, 连续造模 4 周 第五周开始, 继续给予高糖高脂饲料的同时给予相应剂量的受试物干预, 持续 8 周, 每周测定 1 次体质量, 根据体质量调整给药剂量, 每日早 9 时每笼 (5 只 ) 给予 400g 饲料, 次日早 9 时收集饲料, 称体质量, 计算每只大鼠的日均摄食量 2 3 血清指标实验结束时, 禁食 12h 后, 腹腔注射 10% 水合氯醛使大鼠麻醉, 腹主动脉取血, 室温静置 30min 后,300 g,4, 离心 10min, 收集上清液, -80 保存 按照试剂盒操作说明书测定血清中 TC TG LDL C HDL C SOD MDA GSH PX TNF α IL 6 IL 10 水平 2 4 肝脏指标实验结束后, 迅速解剖大鼠, 精确称取大鼠相 803

3 2018 年 7 月第 20 卷第 7 期 ModChinMed Jul 2018 Vol 20 No 7 同部位肝脏 0 2g, 在冰水中制成 10% 匀浆,4 4000r min -1 离心 10min, 提取上清液, 测定其中总胆固醇水平 取 0 5cm 0 5cm 0 3cm 块状的肝脏组织用预冷的 0 9% 氯化钠溶液冲洗后擦干, 快速置于中性福尔马林溶液中固定 2 5 粪便胆汁酸于大鼠处死前 12h 将大鼠分笼饲养,12h 后收集大鼠粪便, 粪便经真空冷冻干燥后, 用磷钼酸比色法测定粪便中总胆汁酸的含量 [9] 2 6 肝脏病理形态学观察固定好的肝脏组织块, 依次用 75% 95% 和 100% 乙醇梯度脱水, 石蜡包埋, 切片,H&E 染色, 于光学显微镜下病理学观察每组切片中肝脏的脂肪变性 炎症细胞及组织坏死程度 按照如下标准进行评分 : + 表示肝小叶结构尚存, 肝组织结构大致正常, 汇管区周围肝细胞肿胀 轻度脂肪变性 ; ++ 表示肝细胞排列紊乱, 大部分肝细胞肿胀 气球样变, 汇管区少量炎细胞浸润 ; +++ 表示肝小叶结构轮廓消失, 肝细胞形态不规则, 可见部分肝细胞脂肪变性, 也可见部分动物出现肝细胞点状或片状坏死, 汇管区炎细胞浸润 2 7 统计方法数据以 ( x±s) 珋表示, 采用统计软件 SPSS17 0 对实验数据进行 One WayANOVA 方差分析 3 结果 3 1 对大鼠体质量及食量的影响表 1 结果显示, 各剂量组大鼠进食量未存在统计学差异 ; 与相比, 高脂血症大鼠体质量增长率显著增加 (P<0 05), 连续给予旋覆花总黄酮 4 周能够显著降低高脂血症大鼠体质量增长率 (P<0 05,P<0 01) 表 1 对高血脂症大鼠日均进食量及体质量增长率的影响 ( 珋 x±s,n=10) 日均摄食量 /g 体质量增长率 (%) 31 24± ± ± ±1 624 ## 32 64± ± ± ± ± ± ± ±1 345 注 : 与相比, ## P<0 05; 与相比, P<0 05, P<0 01; 下同 对高血脂症大鼠血脂水平的影响表 2 结果显示, 与相比, 高脂血症大鼠血清中 TC TG LDL C 水平显著增加,HDL C 水平显著降低 (P<0 05), 连续给予旋覆花总黄酮 4 周能够显著降低高脂血症大鼠血清中 TC TG LDL C 水平, 升高 HDL C 水平 (P<0 05,P< 0 01) 3 3 对高血脂症大鼠肝脏中胆固醇与粪便中胆汁酸水平的影响表 3 结果显示, 与相比, 高脂血症大鼠肝脏中胆固醇水平显著增加 (P<0 05), 连续给予旋覆花总黄酮 4 周能够显著降低高脂血症大鼠肝脏中胆固醇水平 (P<0 01); 与相比, 高脂血症大鼠粪便胆汁酸水平显著增加 (P<0 05), 连续给予旋覆花总黄酮 4 周能够显著增加高脂血症大鼠粪便中胆汁酸水平 (P<0 05, P<0 01) 3 4 对高血脂症大鼠肝脏病理形态的影响形态评分结果见表 4, 光镜下 H&E 染色显示, 普通饮食组大鼠肝细胞排列整齐, 肝小叶规则, 细胞中央有大而圆的核, 细胞质均匀 ( 见图 1A) 高脂饮食组大鼠肝细胞肿胀, 体积较正常明显增大, 出现脂肪变性, 胞质内可见大小不等的脂滴空泡, 以大泡性脂肪滴为主, 汇管区有以单核 淋巴细胞为主的炎症细胞浸润, 部分出现点状坏死和灶状坏死, 大鼠出现散在性肝细胞脂肪变性 ( 见图 1B) 给予旋覆花高 中 低剂量及辛伐他丁可改善肝脏的相关病理改变 ( 见图 1C D E F) 3 5 对高血脂症大鼠血清抗氧化活性的影响表 5 结果显示, 与相比, 高脂血症大鼠血清中 SOD 活性显著降低 MDA 水平及 GSH PX 活性显著升高 (P<0 05); 连续给予旋覆花总黄酮 4 周能够显著升高高脂血症大鼠血清中 SOD 活性, 降低 MDA 水平及 GSH PX 活性 (P<0 05,P< 0 01) 3 6 对高血脂症大鼠血清炎症因子的影响表 6 结果显示, 与相比, 高脂血症大鼠血清中 TNF α IL 6 水平显著升高,IL 10 水平显著降低 (P<0 05); 连续给予旋覆花总黄酮 4 周能够显著降低高脂血症大鼠血清中 TNF α IL 6 水平, 升高 IL 10 水平 (P<0 05,P<0 01, P<0 001)

4 年 月 第 卷 第 期 M C M V N 表 对高脂血症大鼠血清中 TC TG LD C HD C水平的影响 珋± mm L TC TG ± LD C ± HD C ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± 表 对高脂血症大鼠肝脏中胆固醇及粪便中胆汁酸 表 对大鼠肝脏病理形态的影响 水平的影响 珋± 形态评分 肝脏中胆固醇 mm 粪便中胆汁酸 μ ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± 注 A普通饮食组 B高脂饮食组 C高脂饮食 D高脂饮食 旋覆花低剂量组 E高脂 饮食 旋覆花中剂量组 F高脂饮食 旋覆花高剂量组 图 各组大鼠肝脏组织 HE染色结果 HE PX水平的影响 表 对高脂血症大鼠血清中 SOD MDA GSH 珋± S OD U ml MDA m ml GSH PX m L ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± 注 与相比 P P P

5 年 月 第 卷 第 期 M C M V N 表 对高脂血症大鼠血清中 TNF I 水平的影响 α I 珋± TNF ml α I ml I ml ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± 讨论与结论 高脂血症作为由机体内脂质代谢紊乱引发的血 脂血症低度炎症状态 有大量的研究报道 中药黄酮类具有改善脂肪 肝的作用 如山楂总黄酮 甘草总黄酮 大豆异黄 浆中脂质浓度升高的疾病 其临床表现为体质量增 酮等 但其改 善 脂 肪 肝 的 机 制 也 存 在 着 不 同 加 血清 TC TG以及 LD C水平过高 HD C水 如山楂总黄酮 大豆异黄酮主要作用机制是抗氧化 平过低 本研究表明 经口给予旋覆花总黄酮能 作用 甘草总黄酮是通过激活 AMPK信号分子 够在不影响大鼠进食量的情况下抑制体质量增加 改善脂肪肝 而本研究表明旋覆花总黄酮的作用 同时降低高血脂症模型大鼠肝脏中胆固醇水平 粪 机制是多方面的 除抗氧化作用外 具有促进胆汁 便中胆汁酸 水 平 血 清 中 TC TG及 LD C水 平 酸排泄及抑制炎症的作用 进而发挥降血脂及改善 提高 HD C水平 具有改善高脂血症临床症状 脂肪肝的作用 这也为旋覆花治疗脂肪肝奠定了理 胆固醇在肝中 不 断 代 谢 为 胆 汁 酸 其 随 胆 汁 论基础 排入肠腔 参与脂肪的消化与 吸 收 随 后 约 胆汁酸再经小肠被重 吸 收 形 成 肝 肠 循 环 而 参考文献 重复利用 本 研 究 结 果 显 示 旋 覆 花 总 黄 酮 能 够 余林德 陈占利 中西医治疗高脂血症临床研究进展 促进胆汁酸排 泄 进 而 阻 止 机 体 对 于 胆 汁 酸 的 吸 收 以抑制肝 肠 循 环 进 而 达 到 降 低 肝 脏 中 胆 固 醇的效果 同时 实验探究了旋覆花总黄酮对高血脂症大 鼠血清相关指标的影响 结果显示 高血脂症大鼠 血清中脂质过氧化反应总产物 MDA水平增加 而抗 氧化酶 GS H PX和 S OD活性极显著下降 表明高脂 血症大鼠脂质过氧化水平增加和自由基清除能力下 降 经口给予旋覆花总黄酮后 大鼠血清中的 GSH PX和 SOD活性均显著提高 MDA含量显著降低 即旋覆花总黄酮可能通过提高机体抗氧化活性 降 低体内自由基的水平 改善高脂血症大鼠体内氧化 抗氧化失衡状态 在高血 压 高 血 脂 症 动 脉 粥 样 硬 化 患 者 血 浆中 炎症因 子 水 平 发 生 明 显 变 化 其 由 脂 肪 组 织分泌产生 参 与 炎 症 反 应 且 在 脂 肪 分 解 代 谢 中发挥作用 促炎 及 抗 炎 因 子 的 失 衡 可 导 致 脂 肪 肝 研究显 示 高 血 脂 症 大 鼠 的 血 清 中 TNF α I 水平显著升高 I 水平显著降低 经口给 水 予旋覆 花 总 黄 酮 后 大 鼠 血 清 中 TNF α I 平显著降低 I 水平显著升高 其能够缓解高 亚太传统医药 CLARKAM DES MEULESM LUOW S m k m N R wc 王应军 王磊 胡宾 等 降血脂药物的研究进展 中国 民族民间医药 赵士魁 周伟澄 降血脂药物研究进展 中国医药工 业杂志 韩建军 宁娜 降血脂药物的研究进展 药学研究 何国云 李钢 耿红梅 旋覆花的研究进展 中国医学 创新 D SB XY R QS C m C mi T b C MAP 朱虹 唐生安 秦楠 等 旋覆花中化学成分及其活性研 中国中药杂志 究 韩爱丽 珊瑚状猴头菌多糖降血胆固醇作用及机制的研 究 D 太原 山西农业大学 周红军 郭巍 中药治疗高血脂症的临床研究进展 现代中西医结合杂志 下转第 页

6 年 月 第 卷 第 期 M C M 显示 种不同方法测定的抗氧化活性均与总酚含 量呈正相关 P V N 参考文献 国家药典委员会 中华人民共和国药典 一部 M 北 京 中国医药科技出版社 讨论 董琳 王勇 张小坡 等 海南砂仁脂溶性成分的 GC MS 本实验首次采用福林酚比色法测定砂仁的总酚 含量 通过全波长扫描确定最大吸收波长为 m 并通过实验探索得显色体系各试剂的用量 当福林 酚试剂与 N O溶液的体积比为 福林酚 C 试剂用量为 ml时吸光度具有最大值 测定显色 体系 m 的吸光度变化 发现显色时间达到 m 后吸光度值稳定 本实验选择 m 作为显 色完全的最佳反应时间 在总酚的测定过程中 由 于不同产地的砂仁总酚含量差距较大 为了控制吸 光度值在 以减小误差 加入的供试品溶液 量在 ml 分析 陆山 红 赵 荣 华 幺 晨 等 砂 仁 的 化 学 及 药 理 研 究 进 展 中药药理与临床 李宗主 阳春砂仁化学成分及质量初步研究 D 北京 中国协和医科大学 陈程 付琛 叶文才 等 阳春砂仁的酚性成分研究 中药材 尤小梅 李远志 廖有传 等 春砂仁根和叶提取物抗氧 化活性研究 食品科技 唐建阳 刘凤娇 苏明星 等 砂仁提取物的抗菌及抗氧 化效应研究 厦门大学学报 自然科学版 含量测定结果显示不同产地总酚含量在 m 具有统计学差异 酚类成分多具有 抗氧化 清除自由基 抑菌等作用 相关研究报道 刘金鹏 佩兰和海南砂仁化学成分的分离与其抗氧化研 究 D 杭州 浙江工商大学 王智民 刘晓谦 高慧敏 等 发展大健康产业过程中的 日益增多 砂仁是否具有此类药效作用值得我 中 国 药 学 杂 志 药食两用中药 研 发 们进一步去研究 此次实验发现 不同产地的砂仁 均具有一定的抗氧化活性 DPPH法的 TEAC值在 mm L ABTS法 的 TEAC 值 在 mm L FRAP法的 F SO标准溶液 的浓度在 mm L 种方法测定的 抗氧化活性均与总酚含量呈显著正相关 相关系数 揭示其化学成分活性可能具有相似性 不同 产地的砂仁总酚含量以及其抗氧化活性均高低不一 崔 雪 靖 复 方 半 边 莲 和 复 方 杏 香 兔 耳 风 保 肝 活 性 研 究 D 郑州 河南大学 朱晓娣 茜草和益智叶降血糖 保肝作用研究 D 郑 州 河南大学 朱玉昌 焦必宁 ABTS法体外测定果蔬类总抗氧化能力 食品与发酵工业 的研究进展 R m M C C m A S F P m 要确保其临床疗效 需要对其含量及具体成分做进一 F C m 步的研究和控制 砂仁作为药食两用的药材 其产量 吴建 华 吴 志 瑰 裴 建 国 等 多 酚 类 化 合 物 的 研 究 进 低 用量大 价格不断攀高 有必要去丰富其化学成 分基础知识 充分挖掘利用其药用价值 为更全面地 评价砂仁药材的质量提供实验依据 以便砂仁在食 展 沈燕琳 山楂果实酚类物质组分分析及其生物活性评 价 D 杭州 浙江大学 品 医药等领域得到更充分的开发应用 收稿日期 檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿 上接第 页 朱黎霞 王利胜 张英丰 丹参总酚酸 山楂总黄酮组分 配伍对高脂血症大鼠血脂 超氧化物歧化酶及丙二醛的 中国医药导报 影响 李国莉 赵伟明 杨建军 等 大豆异黄酮降血脂作用的 研究 食品科学 华冰 甘草总黄酮的降血脂作用及机制的研究 D 银 川 宁夏医科大学 李晓东 陈芝芸 俞建顺 等 山楂叶总黄酮对非酒精性 脂肪性肝炎大鼠组织 COX N 表达的影响 中国 中药杂志 收稿日期

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