博落回属植物中分离得到 1 仪器与材料 BrukerAV 400MHz 型核磁共振仪 ( 瑞士 Bruker 公司 );HPLC Q TOF MS( 美国 Agilent 公司 ); 制备高效液相色谱仪 ( 美国 Agilent 公司 ); 柱色谱硅胶 (300~400 目 ) GF 254 薄层硅

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1 年 月 第 卷 第 期 中国现代中药 M C M O V N 基础研究 博落回鲜叶中生物碱类化学成分的分离与结构鉴定 杨鹏 向锋 卿志星 曹华亮 曾建国 湖南中医药大学 药学院 湖南 长沙 国家中药材生产 湖南 技术中心 湖南 长沙 湖南农业大学 兽用中药资源与中兽药创制国家地方联合工程研究中心 湖南 长沙 摘要 目的 研究博落回叶的化学成分 方法 采用硅胶柱色谱以及制备液相色谱法进行分离纯化 并根据 波谱数据鉴定化合物结构 结果 从博落回新鲜叶的乙醇提取物中分离纯化得到 个生物碱 分别鉴定为 原阿 甲基四氢黄连碱 片碱 别隐品碱 血根碱 白屈菜红碱 去甲基白屈菜红碱 去氢紫堇碱 N 黄柏碱 甲氧基去甲基血根碱 氰基二氢血根碱 氰基二氢白屈菜红碱 丙酮基二氢血 二氢血根碱 二氢白屈菜红碱 结论 其中化合物 为首次在博落回属植物中分离得到 根碱 关键词 博落回 叶 生物碱 I I A m F L M YANGP XI ANGF QI NGZ CAOH ZENGJ C P m H U C M C C H C C U B F I C C N P U E R C V H M R I H A U C C A O T m M M T w w m m m w m R N N m m m C C m mm m K w M W RB 博落回 M W RB 系 罂 粟 效液相色谱法对博落回叶化学成分进行研究 分离 科博落回属植物 是多年生草本植物 多以全草入 得到 个化合物 通过H NMR C NMR等波谱技 药 具有杀虫 解毒 消肿等功效 主要分布在中 术确定化合物的结构 分别鉴定为 原阿片碱 国以及东南亚 在我国主要分布在湖南 安徽 江 别隐品碱 血根碱 白屈菜红碱 去甲 苏等省 现代研究表明博落回中主要活性成分是 基白屈菜红碱 去氢紫堇碱 N 甲基四氢黄 甲氧基去甲基血根碱 连碱 黄柏碱 生物碱 具有抗炎 抗菌 抗肿瘤 促进动物生 长 等作用 在本研究团队对博落回化学成分已有 的研究基础上 选择博落回不同部位进行更全面 氰基 二 氢 血 根 碱 氰基二氢白屈菜红碱 的化学成分研究 本实验利用硅胶柱色谱和制备高 二氢白屈菜红碱 其中 为首次在 丙 酮 基 二 氢 血 根 碱 二 氢 血 根 碱 基金项目 湖南省科技重点计划 S K 通信作者 曾建国 教授 研究方向 中药资源与综合利用 T E m

2 博落回属植物中分离得到 1 仪器与材料 BrukerAV 400MHz 型核磁共振仪 ( 瑞士 Bruker 公司 );HPLC Q TOF MS( 美国 Agilent 公司 ); 制备高效液相色谱仪 ( 美国 Agilent 公司 ); 柱色谱硅胶 (300~400 目 ) GF 254 薄层硅胶高效板 ( 青岛海洋化工厂 ); 实验用乙醇 甲醇 二氯甲烷 正己烷 丙酮 三乙胺 浓氨水 浓硫酸均为分析纯 ; 色谱纯甲醇 乙腈 甲酸 ( 德国 Merck 公司 ); 实验用水为蒸馏水和 Mili Q 超纯水 博落回新鲜叶于 2014 年 9 月采自国家中药材生产 ( 湖南 ) 技术中心长沙基地, 经湖南中医药大学杨广民教授鉴定为罂粟科博落回属植物博落回 Ma cleayacordata(wild )R Br 的叶子, 标本存放于国家中药材生产 ( 湖南 ) 技术中心 2 提取与分离取博落回新鲜叶 100kg, 委托湖南美可达生物资源有限公司提取, 清水洗净,95% 乙醇水浸泡 12h, 多功能提取罐回流提取 2 次, 每次提取时间为 1h, 回收溶剂, 浓缩得到博落回流浸膏 14kg, 继续用旋转蒸发仪浓缩, 得到浸膏 6kg, 浸膏加入 10 倍量 1% 硫酸水溶液, 搅拌, 调 ph 至 3, 静止 24h, 滤去沉淀, 滤液加浓氨水调 ph 到 10, 搅拌, 静止 24h, 除去上清液, 得到沉淀, 浓缩干燥后为 290 5g 沉淀部分经硅胶柱色谱, 依次用石油醚 乙酸乙酯 (4 1~1 1) 和甲醇洗脱, 收集流分, 共得 5 个组分 每个组分经反复硅胶柱色谱和制备高效液相色谱法进行分离纯化 分离得到化合物 1(728 0mg) 2(1 4g) 3(316 4mg) 4(225 3mg) 5(8 2mg) 6(7 6mg) 7(7 0mg) 8(5 4mg) 9(9 4mg) 10(11 6 mg) 11(10 4 mg) 12(21 6 mg) 13(17 9mg) 14(15 8mg) 3 结构鉴定化合物 1: 白色粉末 ESI MSm/z:354 1[M+ H] + ; 分子式为 C 20 H 19 NO 5 1 H NMR(400 MHz, CDCl 3 )δ:6 89(1H,s,H 1),6 67(2H,dd,J= 4Hz,H 11,12),6 63(1H,s,H 4),5 94(2H, s,2 OCH 2 O 3),5 91(2H,s,9 OCH 2 O 10),3 78 (2H,m H 13),3 57(2H,m,H 8),2 88(2H, 1372 m,h 6),2 52(2H,m,H 5),1 91(3H,s,N CH 3 ); 13 C NMR(100MHz,CDCl 3 )δ:108 2(C 1), 148 1(C 2),146 1(C 3),110 6(C 4),132 9(C 4a),31 9(C 5),57 9(C 6),50 9(C 8),118 0 (C 8a),146 4(C 9),146 0(C 10),106 8(C 11),125 7(C 12),129 1(C 12a),46 6(C 13), 194 9(C 14),136 3(C 14a),101 3(2 OCH 2 O 3), 100 9(9 OCH 2 O 10),41 7(N CH 3 ) 以上数据与文献报道基本一致 [9], 故鉴定化合物 1 为原阿片碱 化合物 2: 无色晶体 ( 甲醇 ) ESI MSm/z:370 1 [M+H] + ; 分子式为 C 21 H 24 NO 5 1 H NMR(400MHz, CDCl 3 )δ:6 93(1H,s,H 1),6 87(1H,d,J= 4Hz,H 11),6 79(1H, d, J=4 Hz, H 12), 6 61(1H, s, H 4),5 91(2H, s,2 OCH 2 O 3), 3 88(3H,s,9 OCH 3 ),3 79(3H,s,10 OCH 3 ), 3 78(2H,m,H 13),3 57(2H,m,H 8),2 88 (2H,m,H 6),2 52(2H,m,H 5),1 91(3H, s,n CH 3 ); 13 C NMR(100 MHz, CDCl 3 )δ:109 2 (C 1),146 1(C 2),147 4(C 3),110 6(C 4), 132 9(C 4a),32 4(C 5),57 6(C 6),50 2(C 8),128 6(C 8a),151 6(C 9),146 1(C 10), 110 6(C 11),127 7(C 12),129 6(C 12a),46 3 (C 13),193 3(C 14),136 0(C 14a),101 2(2 OCH 2 O 3), 60 1(9 OCH 3 ), 55 1(10 OCH 3 ), 41 2(N CH 3 ) 以上数据与文献报道基本一致 [9], 故鉴定化合物 2 为别隐品碱 化合物 3:ESI MSm/z:332 0[M] +, 分子式为 C 20 H 14 NO + 4 ; 化合物 4:ESI MSm/z:348 1[M] + ; 分子式为 C 21 H 18 NO + 4 与实验室血根碱 白屈菜红碱对照品在石油醚 乙酸乙酯 (2 1) 石油醚 丙酮 (3 1) 中展开, 结果 Rf 值一致, 故化合物 3 和 4 分别鉴定为血根碱 白屈菜红碱 化合物 5: 粉红色粉末 ESI MSm/z:334 1[M+ H] + ; 分子式为 C 20 H 15 NO 4 1 H NMR(600 MHz, CDCl 3 )δ:9 77(1H, s, H 6),8 73(1H, s, H 1),8 38(1H,s,H 4),8 38(1H,d,J=8 4Hz, H 12),7 87(1H, d, J=8 4 Hz, H 11),7 62 (1H,d,J=8 4Hz,H 10),7 29(1H,d,J= 8 4Hz,H 9),6 16(2H,s,2,3 OCH 2 O ),4 15 (3H, s,7 OCH 3 ),4 08(3H, s,8 OCH 3 ); 13 C NMR(150MHz,CDCl 3 )δ:104 4(C 1),148 5(C 2),148 0(C 3),102 1(C 4),121 8(C 4a),

3 128 0(C 4b),145 2(C 6),120 1(C 6a),146 4 (C 7),149 4(C 8),127 1(C 9),118 2(C 10), 128 8(C 10a), 118 7(C 10b), 118 3(C 11), 129 7(C 12),131 0(C 12a),101 4(2,3 OCH 2 O ), 62 0(7 OCH 3 ),56 8(8 OCH 3 ) 以上数据与文献报道基本一致 [10], 故鉴定化合物 5 为去甲基白屈菜红碱, 为首次在博落回属植物中分离得到 化合物 6: 黄色晶体 ( 甲醇 ) ESI MSm/z:366 1 [M] + ; 分子式为 C 22 H 24 NO H NMR(400MHz, CD 3 OD)δ:9 66(1H,s,H 8),8 01(1H,d,J= 8 6Hz,H 11),7 92(1H,d,J=8 6Hz,H 12), 7 25(1H, s, H 1),7 04(1H, s, H 4),4 98 (2H, t, J=6 4 Hz, H 6), 4 25(3H, s, 9 OCH 3 ),4 08(3H,s,10 OCH 3 ),4 04(3H,s,3 OCH 3 ),4 02(3H,s,2 OCH 3 ),3 22(2H,t,J= 6 4Hz, H 5),2 83(3H, s,13 CH 3 ); 13 C NMR (100MHz,CD 3 OD)δ:152 6(C 2),151 4(C 10), 149 2(C 3),146 1(C 9),145 0(C 8),135 5(C 12a),132 6(C 13a),132 2(C 4a),128 1(C 11),123 3(C 8a),122 7(C 12),121 0(C 13b), 116 4(C 13),115 9(C 1),112 3(C 4),62 6(9 OCH 3 ),58 5(C 6),57 3(10 OCH 3 ),56 9(2 OCH 3 ),56 5(3 OCH 3 ),28 1(C 5),18 5(13 CH 3 ) 以上数据与文献报道基本一致 [11], 故鉴定化合物 6 为去氢紫堇碱, 为首次在博落回属植物中分离得到 化合物 7: 黄色晶体 ( 甲醇 ) ESI MSm/z:338 1 [M] + ; 分子式为 C 20 H 20 NO H NMR(400 MHz, CDCl 3 )δ:6 82(1H,s,H 1),6 75(1H,d,J= 8 4Hz,H 12),6 70(1H,d,J=8 4Hz,H 12), 6 67(1H, s, H 4),6 01(2H, s,2 OCH 2 O 3), 5 95(2H, s,9 OCH 2 O 10),4 25(1H, d, J= 15 6Hz,H 8b),3 74(1H,m,H 14),3 56(1H, d,j=15 6Hz,H 8a),3 24(1H,m,H 13b), 3 20(3H,s,N CH 3 ),3 15(1H,s,H 6b),2 84 (1H,m,H 5b),2 68(1H,m,H 6a),2 66(1H, m, H 13a), 2 62 (1H, m, H 5a); 13 C NMR (100MHz,CDCl 3 )δ:150 1(C 9),148 7(C 2), 146 2(C 10),145 3(C 3),128 5(C 12a),121 6 (C 13b),120 7(C 12),120 1(C 4a),118 4(C 8a),112 5(C 4),110 3(C 11),108 3(C 1), 102 0(9 OCH 2 O 10),101 5(2 OCH 2 O 3),64 6(C 13a),56 9(C 8),53 5(C 6),52 1(N CH 3 ), 35 6(C 13),27 8(C 5) 以上数据与文献报道基本一致 [12], 故鉴定化合物 7 为 N 甲基四氢黄连碱, 为首次在博落回属植物中分离得到 化合物 8: 橙红色晶体 ( 甲醇 ) ESI MSm/z:342 1 [M] + ; 分子式为 C 20 H 24 NO H NMR(400MHz, CD 3 OD)δ:6 86(1H,s,H 1),6 84(1H,s,H 4),6 75(1H, s, H 12),6 72(1H, s, H 9), 5 08(1H,m,H 13a),4 68(2H,m,H 8),3 82 (6H,s,2 OCH 3 ),3 47(1H,m,H 6),3 38 (1H,m,H 6 ),3 34(2H,m,H 13),3 11(1H, m,h 5),3 05(1H,m,H 5 ); 13 C NMR(100MHz, CD 3 OD)δ:150 1(C 10),149 1(C 3),148 7(C 2),147 3(C 11),126 1(C 12a),122 5(C 8a), 120 2(C 4a), 116 4(C 13b), 115 7(C 12), 114 3(C 4),112 8(C 9),110 7(C 1),66 8(C 13a),65 5(C 8),56 2(2 OCH 3 ),52 5(C 6), 50 7(N CH 3 ),35 1(C 13),24 5(C 5) 以上数据与文献报道基本一致 [10], 故鉴定化合物 8 为黄柏碱, 为首次在博落回属植物中分离得到 化合物 9: 桔黄色粉末 ESI MSm/z:348 1[M+ H] + ; 分子式为 C 20 H 13 NO 5 ; 1 H NMR(600MHz,CDCl 3 ) δ:9 77(1H,s,H 6),8 73(1H,s,H 1),8 38 (1H,s,H 4),8 38(1H,d,J=8 4Hz,H 12), 7 87(1H,d,J=8 4Hz,H 11),7 62(1H,d, J=8 4Hz,H 10),7 29(1H,d,J=8 4Hz,H 9), 6 16(2H, s, 2, 3 OCH 2 O ), 4 15(3H, s, 7 OCH 3 ),4 08(3H,s,8 OCH 3 ); 13 C NMR(150MHz, CDCl 3 )δ:104 4(C 1),148 5(C 2),148 0(C 3), 102 1(C 4),121 8(C 4a),128 0(C 4b),145 2 (C 6),120 1(C 6a),146 4(C 7),149 4(C 8), 127 1(C 9),118 2(C 10),128 8(C 10a),118 7 (C 10b),118 3(C 11),129 7(C 12),131 0(C 12a), 101 4(2, 3 OCH 2 O ), 62 0(7 OCH 3 ), 56 8(8 OCH 3 ) 以上数据与文献报道基本一致 [11], 故鉴定化合物 9 为 6 甲氧基去甲基血根碱, 为首次在博落回属植物中分离得到 化合物 10: 白色粉末 ESI MSm/z:359 1[M+ H] + ; 分子式 C 21 H 14 N 2 O 4 1 H NMR(400MHz,CDCl 3 ) δ:7 71(1H,d,J=8 4Hz,H 11),7 65(1H,s, H 4),7 56(1H, d, J=8 4 Hz, H 12),7 37 (1H,d,J=8 4Hz,H 10),7 12(1H,s,H 4), 1373

4 6 97(1H,d,J=8 4Hz,H 9),6 12(2H,dd, J=1 6Hz,2 OCH 2 O 3),6 10(2H,s,7 OCH 2 O 8),5 32(1H,s,H 6),2 66(3H,s,N CH 3 ); 13 C NMR(100MHz,CDCl 3 )δ:104 6(C 1),148 1 (C 2),147 9(C 3),100 7(C 4),126 8(C 4a), 138 6(C 4b),48 8(C 6),117 2(C 6a),148 7(C 7),145 1(C 8),109 5(C 9),125 4(C 10),125 4 (C 10a),123 2(C 10b),120 2(C 11),117 4(C 12),131 4(C 12a),101 3(2 OCH 2 O 3),102 3(7 OCH 2 O 8),41 6(N CH 3 ),107 7(6 CN) 以上数据与文献报道基本一致 [4], 故鉴定化合物 10 为 6 氰基二氢血根碱 化合物 11: 白色粉末 ESI MSm/z:375 1[M+ H] + ; 分子式 C 22 H 18 N 2 O 4 1 H NMR(400MHz,CDCl 3 ) δ:7 72(1H,d,J=8 4Hz,H 11),7 65(1H,s, H 4),7 58(1H, d, J=8 4 Hz, H 10),7 56 (1H,d,J=8 4Hz,H 12),7 12(1H,s,H 1), 7 07(1H,d,J=8 4Hz,H 9),6 06(2H,s,2 OCH 2 O 3),5 6(1H, s, H 6),4 0(3H, s,8 OCH 3 ),3 94(3H,s,7 OCH 3 ),2 62(3H,s,N CH 3 ); 13 C NMR(100MHz,CDCl 3 )δ:104 6(C 1), 148 6(C 2),148 1(C 3),100 7(C 4),126 7(C 4a),138 7(C 4b),48 7(C 6),120 8(C 6a), 146 2(C 7),152 4(C 8),113 6(C 9),119 4(C 10),125 1(C 10a),123 0(C 10b),119 9(C 11), 125 2(C 12),131 4(C 12a),101 3(2 OCH 2 O 3), 41 6(N CH 3 ),118 4(6 CN),61 3(7 OCH 3 ),56 1 (8 OCH 3 ) 以上数据与文献报道基本一致 [4], 故鉴定化合物 11 为 6 氰基二氢白屈菜红碱 化合物 12: 白色粉末 ESI MSm/z:390 1[M+ H] + ; 分子式 C 23 H 19 NO 5 1 H NMR(400MHz,CDCl 3 ) δ:7 71(1H,d,J=8 4Hz,H 11),7 53(1H,s, H 4),7 48(1H, d, J=8 4 Hz, H 12),7 34 (1H,d,J=8 4Hz,H 10),7 10(1H,s,H 1), 6 87(1H,d,J=8 0Hz,H 9),6 05(2H,s,2 OCH 2 O 3),6 03(2H,s,7 OCH 2 O 8),4 88(1H, dd,j=6,10 4Hz,H 6),2 65(3H,s,N CH 3 ), 2 32(2H,d,J=14 8Hz,H 1 ),2 06(3H,s, H 3 ); 13 C NMR(100MHz,CDCl 3 )δ:104 5(C 1), 148 4(C 2),147 7(C 3),100 7(C 4),125 8(C a),139 3(C 4b),54 6(C 6),123 6(C 6a), 144 4(C 7),147 3(C 8),107 7(C 9),116 6(C 10),127 7(C 10a),116 2(C 10b),127 7(C 10a), 120 1(C 11), 124 1(C 12), 131 1(C 12a),101 6(2 OCH 2 O 3),43 1(N CH 3 ),101 2 (7 OCH 2 O 8),46 7(C 1 ),207 3(C 2 ),31 4 (C 3 ) 以上数据与文献报道基本一致 [9], 故鉴定化合物 12 为 6 丙酮基二氢血根碱 化合物 13: 白色粉末 ESI MSm/z:334 1[M+ H] + ; 分子式 C 20 H 15 NO 4 1 H NMR(400MHz,CDCl 3 ) δ:7 70(1H,d,J=8 4Hz,H 11),7 68(1H,s, H 4),7 49(1H, d, J=8 4 Hz, H 12),7 31 (1H,d,J=8 4Hz,H 10),7 11(1H,s,H 1), 6 86(1H,d,J=8 0Hz,H 9),6 05(2H,s,2 OCH 2 O 3),6 03(2H,s,7 OCH 2 O 8),4 20(2H, s,h 6),2 62(N CH 3 ); 13 C NMR(100MHz,CDCl 3 ) δ:104 4(C 1),148 2(C 2),147 6(C 3),100 8 (C 4),126 6(C 4a),142 6(C 4b),48 5(C 6), 113 7(C 6a),144 7(C 7),147 2(C 8),107 3 (C 9),116 3(C 10),127 4(C 10a),124 5(C 10b),120 4(C 11), 124 0(C 12), 130 9(C 12a),101 4(2 OCH 2 O 3),41 7(N CH 3 ),101 1 (7 OCH 2 O 8) 以上数据与文献报道基本一致 [9], 故鉴定化合物 13 为二氢血根碱 化合物 14: 白色粉末 ESI MSm/z:350 1[M+ H] + ; 分子式 C 21 H 19 NO 4 1 H NMR(400MHz,CDCl 3 ) δ:7 71(1H,d,J=8 8Hz,H 11),7 67(1H,s, H 4),7 51(1H, d, J=8 8 Hz, H 10),7 46 (1H,d,J=8 8Hz,H 12),7 10(1H,s,H 1), 6 95(1H,d,J=8 8Hz,H 9),6 04(2H,s,2 OCH 2 O 3),3 92(7 OCH 3 ),3 88(8 OCH 3 ),4 29 (2H,s,H 6),2 59(N CH 3 ); 13 C NMR(100MHz, CDCl 3 )δ:104 4(C 1),148 2(C 2),147 6(C 3), 100 8(C 4),126 5(C 4a),142 8(C 4b),48 8 (C 6),126 4(C 6a),146 0(C 7),152 2(C 8), 111 1(C 9),118 8(C 10),126 5(C 10a),124 2 (C 10b),120 2(C 11),123 9(C 12),130 9(C 12a),100 8(2 OCH 2 O 3),41 7(N CH 3 ),61 1 (7 OCH 3 ),55 9(8 OCH 3 ) 以上数据与文献报道基本一致 [9], 故鉴定化合物 14 为二氢白屈菜红碱

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