期臧艳艳柴文戍王君灵等过敏性鼻炎合并哮喘患者血液嗜酸性粒细胞群中 ) 物质及其受体表达上调. 过敏性哮喘是一种以肺组织细胞浸润主要为嗜酸粒细胞及细胞黏液过度分泌以及气道高反应性为特征的小气道炎症性疾病过敏性鼻炎为上呼吸道过敏性疾病成人鼻炎更易发展为哮喘目前的研究认为嗜酸性

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僧闻
5 years ago
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1 第卷第期年月西安交通大学学报医学版!"#$## %&&!& 临床研究过敏性鼻炎合并哮喘患者血液嗜酸性粒细胞群中物质及其受体表达上调臧艳艳柴文戍王君灵张慧云杨蕊铭何韶衡锦州医科大学附属第一医院变态反应与临床免疫研究中心呼吸内科辽宁锦州摘要目的检测不同过敏原刺激下过敏性鼻炎合并哮喘 "#$%& $&!&& #&"&"" 患者嗜酸性粒细胞群中 ) 物质 "!)) 和 *+ 受体!$,&!&!$$*+ 的表达水平并阐述其在疾病发生过程中的作用方法募集 - 例健康人及例急性期入院的患者所有志愿者进行皮肤点刺试验并收集外周血用蒿草花粉尘螨和梧桐花粉种过敏原粗提液刺激后流式细胞术检测外周血嗜酸性粒细胞群中 ) 和 *+ 的表达水平并用 ) 软件进行数据分析结果例患者外周血嗜酸性粒细胞中 ) 细胞的比例与正常人相比升高了. 倍 /-/-*+ 细胞的比例和平均荧光强度分别上调了 1-/ / 和./-- 此外质量浓度为 % 的蒿草花粉粗提液刺激患者外周血后 ) 细胞的比例上调约 1/1/ 而健康人嗜酸性粒细胞群中 ) 和 *+ 经不同种类和浓度过敏原刺激后其表达水平无统计学差异结论嗜酸性粒细胞源 ) 和 *+ 可能在的发生过程中起重要作用而 ) 和 *+ 可能是治疗的新靶点关键词过敏性鼻炎合并哮喘嗜酸性粒细胞 ) 物质 *+ 受体过敏原中图分类号文献标志码 1.! "#!$!$!#!% "!&%$%!$ $&%% * "!2"!!2 *7!2#&!% * &2! * &2&!% "2!% #$%"!#&!&"#!#%"$!$"$!&$"$ ;&&! &$&#&"&"#7&! ;&"#!&$&7&!&!" "## $"#) *##+#"*+,),$"#"& -$" )*"#" *#+ + *#" #+"# &$ # *,),$*&." #.// &-/&-& ) #"+# *#" 1&- / &/&".& /-&-&# &1""& +- #"#" #$,),$ + 1& /&1/&&.* #"#*"#"$")"./*+" *& ""$") + +"+,),$&$") +,),$+& )* + ##+#"*+ ## 收稿日期 2.2 修回日期 22 基金项目国家自然科学基金面上项目 *-.-1 $*"&!"#*"$"#&!!"&!&!"*-."!-1 通信作者何韶衡教育部长江学者特聘教授博导 2"&#"!%"&# 优先出版,!!,&!, "&#11-#22!

2 期臧艳艳柴文戍王君灵等过敏性鼻炎合并哮喘患者血液嗜酸性粒细胞群中 ) 物质及其受体表达上调. 过敏性哮喘是一种以肺组织细胞浸润主要为嗜酸粒细胞及细胞黏液过度分泌以及气道高反应性为特征的小气道炎症性疾病过敏性鼻炎为上呼吸道过敏性疾病成人鼻炎更易发展为哮喘目前的研究认为嗜酸性粒细胞等炎症细胞浸润是过敏性鼻炎和哮喘共同的病理生理学基础 ) 物质 "!)) 源于神经组织是一种神经肽人体的嗜酸性粒细胞淋巴细胞和巨噬细胞均可分泌 ) 研究发现过敏性鼻炎患者血浆和 - 哮喘鼠模型肺泡灌洗液的 ) 浓度均显著升高 ) 可通过直接活化其受体诱导鼻炎患者鼻黏膜充血释放组胺提示 ) 可能参与过敏性气道疾病此外 ) 可诱导过敏性鼻炎患者的鼻黏膜分泌趋化因子 * 促进嗜酸性粒细胞趋化和迁移诱导和加. 重过敏性炎症反应进一步提示 ) 可能通过嗜酸性粒细胞参与过敏性气道疾病 ) 主要通过其高亲和力 *+ 受体!$,&!&!$$*+ 在炎 1 症呼吸和记忆方面发挥重要作用有报道称哮喘患者气道上皮细胞 ) 和 *+ 均表达增加 *+ 阻断剂可显著改善哮喘鼠的过敏炎症反应提示 ) 可能通过 *+ 参与过敏性气道疾病的发生近年来人们对 ) 和 *+ 在神经系统和心血 2 管系统的表达和作用进行了深入研究但是 ) 和 *+ 在呼吸疾病尤其是过敏性鼻炎合并哮喘 "#$%& $&!&& #&" &"" 患者外周血嗜酸性粒细胞中的表达水平还未见相关报道因此本实验应用流式细胞术检测患者外周血经不同过敏原刺激后嗜酸性粒细胞群中 ) 和 *+ 的表达变化探讨其在疾病发生过程中的作用, 材料与方法,, 实验试剂 <- 耦合的鼠抗人抗体表, 志愿者的一般资料 &="&"# <&"&#&,& 死细胞去除染料受体阻断剂红细胞裂解液高尔基受体阻断剂购自 &#%!"! &% ) 耦合的鼠抗人 *+ 抗体 ) 耦合的鼠 % 同型抗体购自 >;&!!"#& 耦合的兔抗人 ) 抗体购自 &"! $* 耦合的兔 % 同型抗体购自 &&!!%# &$ ; 固定透膜试剂盒购自 &2 &!)"$&%!#$; 皮肤点刺试验过敏原购自 +2?!"$, 蒿草花粉提取液尘螨提取液和梧桐花粉提取液购自北京新华联协和药业有限责任公司 ) 缓冲液购自 2 #"$&#"$& 其他常用的化学试剂如盐和缓冲液均为分析纯低温高速离心机 $&!2 && 水浴锅精宏 <$ 流式细胞仪 &&!,- 方法,-, 研究对象本研究募集门诊健康人和急性期入院的患者进行皮肤点刺试验选取点刺试验阳性的例患者和点刺试验阴性的 - 例健康人为研究对象哮喘的诊断标准符合 1 年中华医学会发布的支气管哮喘防治指南鼻炎的诊断标准符合. 年中华医学会发布的变应性鼻炎诊疗指南实验要求患者停止服用治疗哮喘和鼻炎的药物至少周且所有志愿者至少月内无呼吸道感染症状本研究获得锦州医科大学附属第一医院伦理委员会的批准并与每位志愿者签订了知情同意书,-- 收集血液样本采集志愿者病史资料表其中健康人和患者的年龄和性别构成比均无统计学差异表每位志愿者均采集外周静脉血于含抗凝剂的采血管中 "!$"#&!$"&!#!$ 项目健康人尘螨蒿草梧桐尘螨蒿草梧桐总计例数 - 1. 年龄岁性别女男 1. 病史年发病年龄岁 * 注表中年龄病史和发病年龄的描述均为中位数极小值极大值 * 不适用,-. 流式细胞术检测外周血嗜酸性粒细群中 ) 和 *+ 的表达全血加入与蒿草花粉尘螨和梧桐花粉过敏原粗提液每种过敏原粗提液的终质量浓度均为 % 和 %@ 水浴震荡孵育 $&! 离心后弃去上清加入死细胞去除染料与阻断剂避光孵育.&! 加入!

西安交通大学学报!医学版 " # F# " 第!" 卷 _`E#% 耦合的鼠抗人 QQ>! 抗体&避光孵育 %F; 后裂解红细胞&离心后用 A_@ 溶液清洗并用固定液 DF" 统计学分析 " 用统计软件 @A@@%!

表达水平升高 " 本实验用流式细胞术检测了不同过敏原刺激表 E" 志愿者的年龄和性别构成比 ^,#"> X] / e71 + 志愿者资料病例数健康人下人体外周血嗜酸性粒细胞群!嗜酸性粒细胞富集群 =>?=@ " 性别 "男 "女 E!!$KKJ " "! I"#!J " $!%$ %$! F$$$J " %$! F$$$J " %! #$ 年龄!

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3 西安交通大学学报!医学版 " # F# " 第!" 卷 _`E#% 耦合的鼠抗人 QQ>! 抗体&避光孵育 %F; 后裂解红细胞&离心后用 A_@ 溶液清洗并用固定液 DF" 统计学分析 " 用统计软据&用 Y T *$ 分析组间差异"#$$F 为固定细胞%透膜洗液清洗后加入 S^Q 耦合的兔抗人和 =AQ 耦合的鼠抗人 BC%> 抗体孵育&再次用透膜洗液清洗后上流式细胞仪检测嗜酸性粒细群中 E" 结 "" 和 BC%> 的表达 EG D">H< 患者嗜酸性粒细胞群中 <! 表达水平升高 " 本实验用流式细胞术检测了不同过敏原刺激表 E" 志愿者的年龄和性别构成比 ^,#"> X] / e71 + 志愿者资料病例数健康人下人体外周血嗜酸性粒细胞群!嗜酸性粒细胞富集群 =>?=@ " 性别 "男 "女 E!!$KKJ " "! I"#!J " $!%$ %$! F$$$J " %$! F$$$J " %! #$ 年龄!岁" "#!& "$!& &! F!!!J " I!!!!!J " %F %& K! EIIKJ " $!$E %#! IIIKJ " 确切概率法得出 " 值 " 注#病例数 ##E$&性别及年龄采用的设门方法见图的表达水平结果显示&与健康人对照组相比 =>?=@ 患者嗜酸性粒细胞富集群细胞的比例升高了 %F倍!!G H#$E%& "G %!7$;L 蒿草花粉 $$E%"此外&用质量浓度为 $? 粗提液刺激患者外周血细胞的比例上调约 I&%J!!GH#I!K& "G$$$&&图 #图!" 图 D" 嗜酸性粒细胞群的设门方法 %N 7 7 X ) 21))/ 7=#细胞碎片去除后的细胞群% _#死细胞去除后的细胞群% Q#粒细胞群% W#嗜酸性粒细胞群! QQ>!? 细胞群" 图 E" 细胞的百分比 #V+) X@A? 2 ) 21))/ X ;/;, 1 7蒿草#蒿草花粉粗提液! $% 和 %$!7$;L"%尘螨#尘螨粗提液! $% 和 %$!7$;L"%梧桐#梧桐花粉粗提液! $% 和 %$!7$;L"% =>?=@#过敏性鼻炎合并哮喘%与相对应的静息状态健康人对照组比较&% % "#$$F%与静息状态的过敏性鼻炎合并哮喘患者组比较&%"#$$F EG E">H< 患者嗜酸性粒细胞群中 I@D> 表达升高 " 流式细胞术检测不同过敏原刺激下人体外周血 BC%>? 嗜酸性粒细胞的百分比和平均荧光强度结果显示&与健康人对照组相比& =>?=@ 患者嗜酸性别上调 #IEJ!!GH!#$K& "G$$$%"和 &F"J!! GHEKKE& "#$$$%"&而加入不同过敏原 BC%>? 细胞的比例及平均荧光强度均无统计学意义!图 E# 图 K" 粒细胞群中 BC%> 细胞的比例和平均荧光强度分? $$*++,+ /1/2. )#

4 #期臧艳艳&柴文戍&王君灵&等 -过敏性鼻炎合并哮喘患者血液嗜酸性粒细胞群中 A 物质及其受体表达上调图 F" 表达水平的流式细胞仪代表图!> ] X <2 ; 27 X +) X@A ) 2 1))/ X ;/;, 1 7) * ) S =>?=@#过敏性鼻炎合并哮喘%蒿草#蒿草花粉粗提液 *)#同型对照% 图 J" 人体外周血嗜酸性粒细胞群中 I@D>H 细胞的百分比 EV+) XBC%>? 2 ) 21))/ X ;/;, 1 7蒿草#蒿草花粉粗提液! $% 和 %$!7$;L"%尘螨#尘螨粗提液! $% 和 %$!7$;L"%梧桐#梧桐花粉粗提液! $% 和 %$!7$;L"% =>?=@#过敏性鼻炎合并哮喘%与相对应的静息状态健康人对照组比较&% %"#$$F 图 K" 人体外周血嗜酸性粒细胞群中 I@D> 表达水平的流式细胞仪代表图 F> ] X <2 ; 27 XBC%> +) ) 2 1))/ X ;/;, 1 7) * ) S =>?=@#过敏性鼻炎合并哮喘 *)#同型对照% 图 L" 人体外周血嗜酸性粒细胞群中 I@D>H 细胞的平均荧光强度 I Y X / 2 XBC%>? 2 ) 21))/ X ;/;, 1 7* 蒿草#蒿草花粉粗提液! $% 和 %$!7$;L"%尘螨#尘螨粗提液! $% 和 %$!7$;L"%梧桐#梧桐花粉粗提液! $% 和 %$!7$;L"% =>?=@#过敏性鼻炎合并哮喘%与相对应的静息状态健康人对照组比较&% %"#$$F $$*++,+ /1/2. )# #F!

5 .- 西安交通大学学报医学版第卷挥作用是诸多疾病的分子基础此外 *+ 活化可促进细胞分泌 *2 和 2 进一步促进和图人体外周血嗜酸性粒细胞群中 1, 细胞平均荧光强度的流式细胞仪代表图 &%$!"&# $& %$""!#2 $!&!!& ;*+ #&!&!&#2!2 $&#"&!$"!# 同型对照过敏性鼻炎合并哮喘. 讨论支气管哮喘和过敏性鼻炎均为呼吸道常见的过敏性炎症疾病二者常常同时存在并相互影响严重威胁人类健康已成为全球性健康问题 ) 是一种强效促炎介质其来源广泛主要存在于中枢神经系统和外周神经系统可诱导炎性介质如细胞因子氧自由基花生四烯酸衍生物和组胺释放并引起组织损伤这些炎性介质可诱导白细胞募集并进一步放大炎症反应研究发现过敏性鼻炎和哮喘性咳嗽 -2. 患者血浆 ) 表达升高本研究中患者嗜酸性粒细胞富集群中 ) 细胞的比例升高提示升高的血浆 ) 水平来自嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞源 ) 可能在的发生过程起重要作用目前过敏原与 ) 在发病过程中的关系还未见报道现有研究显示过敏原鼻激发试验可通过上调肺组织 ) 的表达从而诱导支气管高反应 1 性且过敏性炎症可促进豚鼠肺神经元中 ) 的合成提示过敏原可能通过促进 ) 的表达参与的发病本研究发现蒿草花粉粗提液可诱导患者外周血 ) 嗜酸性粒细胞的比例上调约 1 提示过敏原可能通过诱导嗜酸性粒细胞释放 ) 参与然而由于目前尚缺少过敏原可通过调节嗜酸性粒细胞表达 ) 参与过敏性疾病的发病的相关研究其具体机制尚需进一步研究 *+ 是 ) 的高亲和力受体广泛分布在中枢神经系统和外周组织中也表达于气道平滑肌细胞黏膜下腺细胞和血管内皮细胞在炎症的局部微环境中 )*+ 复合物被视为一个整体来发放大炎症反应本研究通过流式细胞术发现患者外周血嗜酸性粒细胞 *+ 表达增强而 ) 可通过与高亲和力 *+ 和低亲和力 *+ *+ 结合后刺激多种细胞分泌细胞因子诱导肥大细胞释放组胺和脱颗粒并进一步募集淋巴细胞和肥大细胞进而参与过敏性鼻炎发病提示 ) 可能通过嗜酸性粒细胞表面的 *+ 参与有报道称 *+ 受体拮抗剂可消除过敏原诱发的支气管高 1 反应性 *+ 敲除鼠的鼻黏膜中嗜酸性粒细胞浸润减少过敏性鼻炎的症状缓解结合本研究的发现我们可以推断嗜酸性粒细胞源 ) 可能通过自分泌途径作用于 *+ 诱导炎性介质的释放进而参与发病但是否能通过阻断 *+ 的表达进而治疗还有待进一步研究综上所述嗜酸性粒细胞是发病过程中的重要效应细胞过敏原可能是发病的主要诱因 ) 和 *+ 是发病的重要介质患者血液嗜酸性粒细胞 ) 和 *+ 表达增强且 ) 极有可能通过嗜酸性粒细胞表面的 *+ 参与发病 ) 和 *+ 有望成为治疗的新靶点参考文献 $.,,, ))1!$$$, &)" +, """ & -#1--.&.,,&,#"+"+ " #++ &,,+#-...1& 21$/%&$#"++ #"++ *"&,#.-.-1& --1.,. 2&/# * "# # +#&1/ &. 章如新刘国钧温武等 & 物质在变应性鼻炎中对 ),$ +), 表达的影响及其意义 & 临床耳鼻咽喉科杂志 1 & 1-1!$.$//&# +" + " ++ +""# &#+ )11& ),!,-. ),-!1,-),!&$# + "+++" &, 1-.-&!

6 期臧艳艳柴文戍王君灵等过敏性鼻炎合并哮喘患者血液嗜酸性粒细胞群中 ) 物质及其受体表达上调...,$$,-!%1$ 2,--1,&/ "###" *,7+"&#-.1.1&,1,!, /)1$&,# "# ###&..1--1&!1$)%,)-1,/.%, %),%,!&)##"#+& "1.-.& )1$,1) &$# #+,+ + #"&+") & 中华医学会呼吸病学分会哮喘学组 & 支气管哮喘防治指南 & 中华结核和呼吸杂志 1& 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志编辑委员会鼻科组 & 中华医学会耳鼻咽喉头颈外科学分会鼻科学组 & 变应性鼻炎诊断和治疗指南 & 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志..& -., )&$#+*# "####&.&.$, 11!1,!,$!.&+ #*#&) #"## +"" # &,+)/!-- -..& /.,/..)!)$,/&, "#"# "+ &, /1++.1.&,)/1,)/1$,$/&#"+# ## # &+" )1..-.-& $1.!$%!) 1& # "#/# #"+#+"&)- -1.& )$$!!!))!& #+#+++"## &$#2"--&,.) -//1,/,,$!-& # "# #, *+ & -$# & 2,.., )2&#"* # +), "+#&1++ ).--& 1.$),, %,1)&$# 1& 编辑卓选鹏西安交通大学学报医学版优秀稿件征集启事西安交通大学学报医学版年面向校内外征集优秀稿件国家或省部委基金项目资助论文基础医学临床医学预防医学中医药等专业的研究性论文知名专家教授撰写的述评性论文研究生学位论文若您在相关专业领域的研究资料尚未公开发表欢迎积极撰稿投寄本刊投稿时注明约稿对于评审优秀的稿件本刊将通过快速通道优先发表感谢您的支持与合作地址西安市雁塔西路 1 号西安交通大学学报医学版编辑部 1 投稿网址! 电话 ) ""&#!!

$ 西安交通大学学报医学版第卷变应性鼻炎 (,7.",.#..-%& 是由过敏原引起的鼻部炎症性疾病主要症状是鼻塞鼻腔分泌物增多鼻腔瘙痒目前认为遗传和环境如过敏原均参与 %& 发病 '+ 样受体 '+4.,"+, '& 是表达于不同细胞的模式识别受体家族在过敏性疾病中

$ 西安交通大学学报医学版第卷变应性鼻炎 (*,7.,.#..-%& 是由过敏原引起的鼻部炎症性疾病主要症状是鼻塞鼻腔分泌物增多鼻腔瘙痒目前认为遗传和环境如过敏原均参与 %& 发病 '+* 样受体 '+*4*.,+, '& 是表达于不同细胞的模式识别受体家族在过敏性疾病中第卷第期年月西安交通大学学报医学版!"#$## %&'& & 临床研究变应性鼻炎患者血液嗜酸性粒细胞富集群中和的变化及其相关性张晓文张慧云王维湛萌萌何韶衡锦州医科大学附属第一医院变态反应与临床免疫研究中心辽宁锦州苏州市相城人民医院中心实验室江苏苏州 $ 摘要目的探讨变应性鼻炎 %& 患者血液嗜酸性粒细胞富集群中 '&'&'& 和 '& 的变化及其相关性探索其在