$ 西安交通大学学报 医学版 第 卷 变应性鼻炎 (*,7.",.#..-%& 是由过敏原 引起的鼻部炎症性疾病 主要症状是鼻塞 鼻腔分泌物增多 鼻腔瘙痒 目前认为遗传和环境如过敏原 均参与 %& 发病 '+* 样受体 '+*4*.,"+, '& 是表达于不同细胞的模式识别受体家族 在过 敏性疾病中

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1 第 卷第 期 年 月 西安交通大学学报 医学版!"#$## %&'& & 临床研究 变应性鼻炎患者血液嗜酸性粒细胞富集群中 和 的变化及其相关性 张晓文 张慧云 王 维 湛萌萌 何韶衡 锦州医科大学附属第一医院 变态反应与临床免疫研究中心 辽宁锦州 苏州市相城人民医院中心实验室 江苏苏州 $ 摘要 目的 探讨变应性鼻炎 %& 患者血液嗜酸性粒细胞富集群中 '&'&'& 和 '& 的变化及其相关性 探索其在 %& 中的发病机制 方法 收集健康人和 %& 患者的外周静脉血 用蒿草花粉 尘螨和梧桐花粉过敏原提取液刺激 流式细胞术检测刺激前后嗜酸性粒细胞富集群中 '&'&'& 和 '& 的表达 软件分析 '& '& '& 和 '& 嗜酸性粒细胞的相关性 结果 与健康组比较 %& 患者未经过敏原刺激时嗜酸性粒细胞富集群中 '& 细胞的比例降低 '& 细胞的平均荧光强度 (#)*+,-"#".##-./01 升高 '& 细胞的比例升高 倍 蒿草花粉过敏原提取液诱导 %& 患者 '& 嗜酸性粒细胞的比例升高 此外 %& 患者血液 '& 和 '& '& 和 '& '& 和 '& 的嗜酸性粒细胞均呈中度相关 (,-+# 相关系数分别为 $$ 而健康人嗜酸性粒细胞富集群中 '&'&'& 和 '& 的变化在过敏原刺激前后差异均无统计学意义 结论 嗜酸性粒细胞源的 '& '& 和 '& 可能在 %& 中起重要作用 '&'& 和 '& 可能是治疗 %& 的潜在靶点 关键词 变应性鼻炎 嗜酸性粒细胞 '&'&'&'& 中图分类号 & 文献标志码 % $!!"!#$%"&! '"!#!!%!$#% #$%' "&!&&"%$!& %2 3.(+45 # %2.4# 6%2 6. % / #74 #7 8(+4#7 %*,7(#!9*.#."(*1#+*+7&-(,"9#, 0.,-%).*.(! +-.(*+):.#;+ /!."(*#.,-.:.#;+9#,(*(+,(+, ;+3.(#7"#7+*-+-.(*;+$9.#( ()*(+"#" (#"#) *# +"#" +&,-")*##") #./"+" #-"*#"# ")"# & "-"(#"#*"#"- *#) &/-* " *0"- $,$$& )*+ *"#"- 1)##! *" - 1" #"&"#)" *./*#" * )") &$& #"#") &1 # ) + &""#-* " " " " *& && &$"& &$# &.*"* # "./& (""" +&" ) -#)+)&,-.* # 收稿日期 44 修回日期 44 基金项目 国家自然科学基金资助项目 +$ +,! (.+#(*(,(*".#" 0+#!(.+#+)9.#(+$(#! 通信作者 何韶衡 教育部长江学者特聘教授 博导 84(.*-+(#7 "+ 优先出版 #-"#.#"-!(.*&$*44!"#

2 $ 西安交通大学学报 医学版 第 卷 变应性鼻炎 (*,7.",.#..-%& 是由过敏原 引起的鼻部炎症性疾病 主要症状是鼻塞 鼻腔分泌物增多 鼻腔瘙痒 目前认为遗传和环境如过敏原 均参与 %& 发病 '+* 样受体 '+*4*.,"+, '& 是表达于不同细胞的模式识别受体家族 在过 敏性疾病中起重要作用 病原微生物及其产物和内源性刺激均可通过 '& 依赖途径激活靶细胞 引 起或加重过敏反应 '& 在识别革兰氏阴性细菌中起重要作用 最 $ 近的研究发现过敏患者 '& &% 水平升高 提示 '& 可能参与过敏反应 '& 可识别脂多糖 '& 激活后可产生针对入侵病原微生物免疫应答 研究报道 过敏性哮喘和 %& 患者 '& 表达升高 提示 '& 可能参与气道炎症性疾病 呼吸道的炎症细胞如嗜酸性粒细胞和结构细胞均表达 '& 动物模型实验证明 '& 激动剂可控制 过敏性哮喘 '& 大量表达于 %& 患者鼻黏膜上 皮细胞和骨髓白细胞 提示 '& 和 '& 可能参与过敏性气道炎症 嗜酸性粒细胞参与 %& 等气道过敏性疾病 然而 目前人们对 %& 患者血液嗜酸性粒细胞 '&- 的表达 尤其是过敏原对嗜酸性粒细胞上 '&- 表达的影响还知之甚少 本研究旨在用流式细胞仪技术检测 '&'&'& 和 '& 在 %& 患者嗜酸性粒细胞群中的表达情况 并分析其相关性 以期为 %& 的治疗提供新方向 / 材料与方法 // 实验试剂 购自.+*7#!(#.7+9% 表 / 志愿者的一般资料 % 的试剂 %99 耦合的小鼠抗人 99& %9 耦合的鼠抗人 '&%9 耦合的小鼠 172 < 耦合的小鼠 %=(0.(* <.(4.*.. 死细胞去除染料 0"& 阻断剂 红细胞裂解液 购自 &>--/.##(+*.-/% 的试剂 8 耦合的小鼠抗人 '&8 耦合的小鼠 172% 购自 (#(9,;*(5(, % (#(9,;9% % 的试剂 01'9 耦合小鼠抗人 '&01'9 耦合的小鼠 172% 购自.+-".#"-(,.7#*!)+,! /%% 公司的试剂 < 耦合的小鼠抗人 '& 蒿草花粉过敏原提取液 尘螨提取液和梧桐花粉过敏原提取液购自北京新华联协和药业有限责任公司 中国 缓冲液购自 +*(,.+ 北京 中国 9+).9+4, '/ 固定 透膜试剂盒购自.+-".#"-(,.4 7#*!)+,!/%% 皮肤点刺试验过敏原购自 %?4%8@#(, 其他常用的化学试剂如盐和缓冲液均为分析级纯度 低温高速离心机 ',+ ".#.)."% 水浴锅 精宏 中国 0%9<,- 流式细胞仪.+-".#"-% / 研究对象 共募集了 位志愿者 其中 例 %& 患者 %& 病例组 和 例健康人 正常对照组 其一般资料见表 组间在年龄 性别构成上差异均无统计学意义 本实验 %& 的诊断标准符合 $ 年美国耳鼻咽喉头颈外科学会专家组发布的 %& 临床 实践指南 所有 %& 患者均处于急性发作期 且至少 周前停止服用抗鼻炎治疗的药物 所有志愿者至少 月内未发生过呼吸道感染 本临床研究获得了锦州医科大学附属第一医院伦理委员会的批准 并与每位志愿者均签订了知情同意书 '(2 #,(*.#)+,(.+#+) +*#,- 分组 -178 例数 总阴性弱阳性阳性 年龄 岁 女 男 病史 年 发病年龄 岁 人群分组 正常对照组 %& 病例组 $ $$ $ 过敏原分组 尘螨 $ $ $ 蒿草 $ $ $ $$ 梧桐 $ 年龄 病史和发病年龄的描述均为中位数 极大值 极小值 -178 阴性 $ 弱阳性 $$ 阳性 $ /0 血液样本的采集 对募集的 %& 急性发作期入院患者和门诊正常人的志愿者分别采集病史资料 均进行皮肤点刺试验 点刺试验阳性的 %& 患者和点刺试验阴性的正常人为本研究的研究对象 即 %& 病例组和正常对照组 每位志愿者均采集 外周静 脉血于含 8'% 抗凝剂的采血管中 /1 流式细胞术检测血液嗜酸性粒细胞富集群 和 的表达 全血在无菌环境下分别加入尘螨 蒿草花粉和梧桐花粉过敏原提取液 质量浓度为 7A 水浴震荡孵育!"#

3 期 张晓文 张慧云 王 维 等 变应性鼻炎患者血液嗜酸性粒细胞富集群中 '&'&'& 和 '& 的变化及其相关性 $,.# 离心.# 后弃去上清 加入死细胞去除染料和 0"& 阻断剂 均匀混合后 避光孵育 $.# 然后加入抗 99&'& 和 '& 抗体 避光孵育 $.# 后加入红细胞裂解液 避光孵育.# 离心弃上清后加入 的,.# 离心.# 弃上清 用固定 透膜液固定细胞 透膜洗液清洗后加入抗 '& 和 '& 抗体孵育 再用 清洗 最后用流式细胞仪检测 '&'&'& 和 '& 的表达 / 统计学处理 使用 软件分析数据 多组间比较采用秩和检验 组间差距有统计学意义时用 /(##46.# 进一步做比较 相关性分析采用 (,-+# 相关 $ 为差异有统计学意义 结 果 1/ 蒿草花粉过敏原诱导 ( 嗜酸性粒细胞富集群 细胞比例升高 流式细胞术检测嗜酸性粒细胞富集群 设门方法见图 中 '& 的表达变化 结果显示 %& 患者血液经蒿草花粉刺激后 嗜酸性粒细胞富集群中 '& 细胞的比例升高了约 $ 梧桐花粉和尘螨过敏原提取液对 '& 的表达影响差异无统计学意义 图 种过敏原对正常对照组 '& 表达影响无统计学意义 对 %& 病例组患者静息状态下嗜酸性粒细胞富集群 '& 细胞比例与正常对照组比较差异无统计学意义 图 / 嗜酸性粒细胞富集群的设门方法 0.72(.#7-,(7.-)+, +-.#+.*4#,."!" *- % 细胞碎片去除后的细胞群 死细胞去除后的细胞群 9 粒细胞群 嗜酸性粒细胞富集群 99& 细胞群 图 流式细胞仪检测人外周血嗜酸性粒细胞富集群中 细胞 ( 及百分比分析 ) 0.7 &,-#(. )*+5 "+,." 7,(- %+) '&.# +-.#+.*4#,."!" *-),+(#*++!(#!,"#(7 (#(*-.- 蒿草 蒿草花粉提取液 尘螨 尘螨提取液 梧桐 梧桐花粉提取液 健康人静息状态与相对应的静息状态的 %& 患者组比较 $ 静息状态的 %& 患者与相对应的经蒿草刺激的 %& 患者组比较 $ 1( 患者嗜酸性粒细胞富集群中 表达增强 流式细胞术检测 %& 患者组和正常对照组外周血的嗜酸性粒细胞富集群中 '& 图 % 的表达 结果显示 %& 患者嗜酸性粒细胞富集群中 '& 细胞的 /01 与健康对照组相比升高 $ 梧桐花粉 蒿草花粉和尘螨过敏原提取液对健康人和 %& 患者血液嗜酸性粒细胞 '& 表达影响很小 $!"#

4 $ 西安交通大学学报 医学版 第 卷 图 0 人外周血嗜酸性粒细胞富集群中 细胞 的流式细胞仪检测结果 ( 及表达变化分析 ) 0.7&,-#(. )*+5"+,."7,(-%+)/01+)'&.# +-.#+.*4#,."!" *-),+(#*++! (#!,--.+#- /01(#(*-.- 蒿草 蒿草花粉提取液 尘螨 尘螨提取液 梧桐 梧桐花粉提取液 健康人静息状态与相对应的静息状态的 %& 患者组比较 $ 10( 患者嗜酸性粒细胞富集群中 细胞比例增多 用流式细胞术检测 %& 患者和正常人群血液嗜酸性粒细胞富集群 '& 和 '& 的细胞比例 结果显示 与健康人相比 %& 患者嗜酸性粒细胞富集 群中 '& 细胞的比例升高 倍 图 % '& 嗜酸性粒细胞的 /01 升高 图 9 $ 而 '& 在正常人和 %& 患者血液嗜酸性粒细胞的表达差异无统计学意义 图 人外周血嗜酸性粒细胞富集群中 细胞表达的流式细胞仪检测结果 ( 和百分比分析 ) 代表图 + 及表达变化的比较 0.7&,-#(. )*+5"+,."7,(-%+)'&,--.+#.# +-.#+.*4#,."!" *-),+ (# *++!(#!,"#(7 (#(*-.-/01+)'& 9(#! /01(#(*-.-+),--.+# 蒿草 蒿草花粉提取液 尘螨 尘螨提取液 梧桐 梧桐花粉提取液 健康人静息状态与相对应的静息状态的 %& 患者组比较 $ 1 嗜酸性粒细胞群 和 和 和 的表达中度相关 静息状态下 %& 患者嗜酸性粒细胞富集群中 '& 和 '& 表达增强 蒿草花粉过敏原诱导嗜酸性粒细胞富集群 '& 表达升高 提示 '&'&'& 和 '& 之间有潜在关系 进一步对其细胞表达水 平进行了相关性分析 (,-+# 检验结果显示 表 %& 患者嗜酸性粒细胞群中 '& 和 '& '& 和 '& '& 和 '& 的嗜酸性粒细胞均呈中度相关 (,-+# 相关系数分别为 $$!"#

5 期 张晓文 张慧云 王 维 等 变应性鼻炎患者血液嗜酸性粒细胞富集群中 '&'&'& 和 '& 的变化及其相关性 $ 表 ( 患者 和 嗜酸性粒细胞的相关性 '(9+,,*(.+#-5 # '& '& '& (#! '& +-.#+.*- '&- '& '& '& '& '& '& '& '& $ 0 讨 论螨虫和植物花粉如艾蒿花粉 梧桐花粉是室内 外过敏原的重要来源 通过与过敏反应效应细胞如嗜酸性粒细胞 嗜碱性粒细胞和肥大细胞表面的 "&1 复合物发生反应可诱导 %& 等过敏性疾病的 4 发生 近年来的研究发现参与各种抗原免疫应 4 答的 '& 也可诱导 %& 发病 $ '& 配体可以抑制肥大细胞脱颗粒 提示 '& 可能有抑制过敏反应的作用 本研究结果发现 %& 患者静息状态下嗜酸性粒细胞富集群 '& 细胞的比例降低 提示进一步证实 '& 可抑制 %& 发病 而经蒿草花粉过敏原刺激后 %& 患者血液嗜酸性粒细胞富集群中 '& 升高约 提示过敏原中的某种蛋白成分可能诱导嗜酸性粒细胞表达 '& 但其具体机制尚需进一步研究 研究发现 '& 在 %& 患者中表达水平升高 提示 '& 可能参与 %& 本研究发现 %& 患者嗜酸性粒细胞富集群中 '& 细胞的 /01 升高 $ 进一步提示 '& 参与 %& 发病 有报道称 '& 激活嗜酸性粒细胞与患者的过 敏状态有关 此外 研究发现 '& 广泛参与气 4 道过敏性疾病 本研究发现 %& 患者静息状态下嗜酸性粒细胞富集群中 '& 细胞的比例升高 倍 由于 '& 激动剂可控制过敏性哮喘 本研究结果提示 %& 可能通过反馈机制诱导嗜酸性粒细胞表达 '&%& 发病可能与其他细胞 '& 表达减少有关 此外 本研究未发现 %& 患者和健康人血液嗜酸性粒细胞 '& 的差异性表达 但并不排除其他细胞通过 '& 影响过敏性炎症发生的可能 '&- 通过与其配体相互作用 激活免疫细胞和结构细胞而发挥天然免疫和适应性免疫应答 '&- '& 除外 与其配体交联可诱导 / 募集至 4 '&- 上的 '1& 结构域 提示 '&- 之间可能存在某种联系 本研究发现 %& 患者嗜酸性粒细胞群 中 '& 和 '& '& 和 '& '& 和 '& 的嗜酸性粒细胞均呈中度相关 提示 '&- 可能通过诱导其他 '&- 的表达而参与 %& 总之 嗜酸性粒细胞源的 '&'& 和 '& 可能在 %& 中起重要作用 '&'& 和 '& 可能是治疗 %& 的潜在靶点 参考文献.+'2 3##) #)#+")( 0")(#"&4!//))+!" $&.'!%/+425!+'5$5&2( #(#$*"# #&4!/!"2&.$!+6 $'.&,# ####"#6"#( &",)#$#$$(& 4+/.%($/.+&!### +#()7&")) ($& $//.' /&#"( #"""## &6."'#$ $$( & ++'.62+$+56/. 5&+* #))) ()#"( )&+#+ ))(&!6$+'/+!+6$,.+$'2+! & " ("#" * " #)-!5("""!8(( ""* &+), /!, $($& +'$$6'!4'$6'!+$& (# -""-)*"( ))##&& +/64$' + '+&("7 # ))& /+ (& 46$3$/.'!+''.6'$/+&!+/%+( ++*#!+$8( *"))&+ $ (&.$..+'2.'2 '&!#"-(!#)#( ))""#""&+#,)#$(&.6'6'!++8+$.. '9+$.!&( #)#( #&/))$($& 下转第 $ 页!"#

6 $ 西安交通大学学报 医学版 第 卷 的评价尚无统一 准确的诊断标准 由于孕酮生成受 脉冲影响而呈脉冲式分泌 因此本研究未比较两组患者血中孕酮水平 此外 高龄女性生育力下降与卵子质量下降 染色体非整倍体增加等多种因素有关 本研究结果为此类人群妊娠率下降提供了新思路 其结论有待进一步研究 参考文献 8+5!++45!25 +!+.+' +& ")#) "#( - 5 5""## %/$##&"'#!" (& 张炽敏 薛勤 于红 等 & 输卵管妊娠包块超声血流分级与血 ( /2 保守治疗结果的对比 & 中国超声医学杂志 $($$& $,.'./.+'5+ +8'2 4&$ ""( )" " "# # " $/#("(-""$(& $$$($& 3+69+'2 4'2.&"#"( "*)"-#/( "#&!+#!" $($& $ 何巧花 李杭生 梁琳琳 等 & 辅助生殖技术中黄体酮针剂和阴道制剂的应用效果比较 & 郑州大学学报 医学版 (& $.+. 5'+2+++' '&## ( )&""#!-(& 6$! !66' +&,( ")- ("( )*"#5 &/!"/$$&.$$+'!.+8!$/+.5&, ) *) **"#( )#&.) "$#$($&,+6!4+$$+'+2'$$++ 24&,")( "## )"# "* &6$& +8+$+8++!+.+'2/.8& -"*"#&6 (&,##/))+)#$# "#!"( #&/###"## + #))&$$(& 陈雨骤 家安 沈理 等 & 早期不明位置妊娠经阴道彩色多普勒超声检测妊娠黄体临床价值探讨 & 中国超声医学杂志 $ $($& 张婷 林小影 钟文明 等 & 经阴道三维能量多普勒超声对早期宫内妊娠黄体的临床研究 & 海南医学 ( & 王丽 吕淑兰 杨筱凤 等 & 黄体血流分级对未破裂型输卵管妊娠保守治疗的影响 & 实用妇产科杂志 ($& 编辑 胡爱玲 上接第 $ 页 2 /%' ++.$6!(!+'$$6' / +.&)#-"#( &+ /))$($& 2+6''5/$'.$%+'+&+# "##)#(# ))&+/2(& $+'69+'26$/. +4+'/6& ))#- ""( # )) )#&)) &!+'$$6' +/+5 6&#( &")"# #&$& '$$6' 5+'5+,,+' +8.+5' /&( # ))#" *# ##" &4!/!"2 & $!. 5&-#() ))-( "(&#4(&.6!+$/4++'2+/+ 8/&$##( (##)&'$#!4( #("()""#) &#4$(& $$($& 编辑 国 荣!"#

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