. 西安交通大学学报 医学版 第 卷 特应性皮炎 #$ 是一种常见的慢性炎症性皮肤疾病 影响 的人群 任何年龄均可发病 嗜酸性粒细胞起源于骨髓 $ 造血祖细胞 与嗜碱性粒细胞和肥大细胞一样 是参与过敏反应的主要效应细胞之一 正常皮肤组织无嗜酸性粒细胞 而 #$ 患者外周血嗜酸性粒细

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1 第 卷第 期 年 月 西安交通大学学报 医学版!"#$## %&'&!& 临床研究 特应性皮炎患者嗜酸性粒细胞富集群中 物质及其受体 的表达变化 杨蕊铭 张慧云 郑文娇 王君灵 张泽南 何韶衡 锦州医科大学附属第一医院变态反应与临床免疫研究中心 辽宁锦州 苏州市相城人民医院中心实验室 江苏苏州 " 淄博矿业集团有限责任公司中心医院检验科 山东淄博 "" 摘要 目的 检测特应性皮炎 #$ 患者外周血嗜酸性粒细胞富集群中 % 物质 &% 和 ' 受体 ' 的表达 并分析其在 #$ 中的可能作用 方法 采集健康对照组 及 #$ 患者的外周静脉血 用尘螨 蒿草花粉和梧桐花粉过敏原粗提液刺激 后 流式细胞术检测嗜酸性粒细胞富集群中 &% 和 ' 的表达 结果 与 组比较 静息状态下 #$ 患者嗜酸性粒细胞富集群中 ' 细胞的比例升高了 )&% 细胞的比例减少了 * 倍 &% 细胞的 +,- 降低了 "" 过敏原对 和 #$ 患者嗜酸性粒细胞富集群中 &% 及 ' 表达的影响无统计学差异 结论 #$ 患者嗜酸性粒细胞富集群中 ' 表达上调 提示嗜酸性粒细胞表面的 ' 可能在特应性皮炎中起重要作用 ' 拮抗剂或阻断剂可能是治疗 #$ 的有效制剂 关键词 特应性皮炎 嗜酸性粒细胞 % 物质 &%' 过敏原中图分类号 文献标志码 # *."!"#$%&'$# %#'% "$"'#" /#' 11! #' 1! '!123 #'4!51! #'!2! &23! #562!51!125-!353726!6,167# ! :!1;67141!93! &9312!! % &93"$26! !! !1!63313""1!2!)# $"#')* +#"#, -#",./#"./& ",-##", # 1"./ "#" - #","&$"')*+ #"#-"#" -#, &')*+#"#,./ #" #," - 1 -#" -,", )&& ""$./"#" &*"&",##!$ "#" "" &&1-"# $"')*+#"#,./ " 1& " ')*./"#+""')*,,./&.# ')*,#./,& * +! #",./# $#')* 收稿日期 ** 修回日期 * 基金项目 国家自然科学基金资助 '3*"*. &36'213!25'2625&1!,3!213!381!2'3*"2!*. 通信作者 何韶衡 教育部长江学者特聘教授 博导 !.3 优先出版!7!1! !

2 . 西安交通大学学报 医学版 第 卷 特应性皮炎 #$ 是一种常见的慢性炎症性皮肤疾病 影响 的人群 任何年龄均可发病 嗜酸性粒细胞起源于骨髓 $ 造血祖细胞 与嗜碱性粒细胞和肥大细胞一样 是参与过敏反应的主要效应细胞之一 正常皮肤组织无嗜酸性粒细胞 而 #$ 患者外周血嗜酸性粒细胞增多 皮损处可见嗜酸性粒细胞浸润 且其数量与疾病的严重程度相关 嗜酸性粒细胞在炎性分子和细胞因子的作用下可募集其它炎症细胞进而加重皮 肤损伤 上述研究提示 嗜酸性粒细胞与 #$ 的发生 发展有一定的关系 % 物质 772!%&% 是有特异性的神经活 性和促炎活性的神经肽 研究报道 #$ 鼠模型的皮肤受损部位 &% 肥大细胞和神经纤维细胞增 多 皮内注射 &% 可诱导或加重正常人和 #$ 患者皮肤的炎症反应 提示 &% 参与 #$ 发病 ' 是 &% 的高亲和力受体 &% 可通过激活 ' 增强皮 ". 肤的炎症反应 湿疹患者外周血单核细胞 细胞 ' 细胞和嗜碱性粒细胞 ' 表达显著升 * 高 #$ 患者 ' 单核细胞增多 提示 &% 可能通过 ' 参与 #$ 发病 然而 目前尚无 #$ 患者血液嗜酸性粒细胞 &% 和 ' 的表达的报道 螨虫和植物花粉是室内 外过敏原的主要来源 通过与致敏的肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面的 -, 复合物发生反应可诱导过敏性疾病的发 生 有报道称尘螨过敏原可诱导 #$ 的发生 <# 激发鼠支气管后 其肺组织的神经细胞内 &% 显著增多 说明过敏原可诱导 &% 的表达 但是目前尚无过敏原对 #$ 患者血液嗜酸性粒细胞 &% 和 ' 表达影响的研究 因此 本研究采用流式细胞仪检测 #$ 患者外周血 &% 和 ' 在嗜酸性粒细胞富集群中的表达情况 及尘螨 蒿草花粉和梧桐花 表 志愿者的一般资料 粉过敏原对 &% 和 ' 表达的影响 旨在为 &% ' 与嗜酸性粒细胞的相关研究提供方向 材料与方法 实验试剂及仪器 蒿草花粉提取液 屋尘螨提取液和梧桐花粉粗提液 北京新华联协和药业限责任公司 中国 =< 耦合的鼠抗人 31 #>2,125< 死细胞去除染料, 阻断剂 红细胞裂解液 =,#=135! 美国,- 标记兔抗人 &% 抗体 18&2! 美国 #% 标记鼠抗人 ' 抗体?$&77 美国,- 标记兔 - 同型抗体 =1371! 美国 #% 标记鼠 - 同型抗体?$ &77 美国 固定 透膜试剂盒 =$ =1371!7 美国 皮肤点刺试验过敏原试剂 ##= 丹麦 其他常用的化学试剂均为分析级纯度 低温高速离心机 63&1!181 美国 水浴锅 精宏 中国,#&<67 流式细胞仪 =$ =1371!7 美国, 方法, 研究对象纳入标准 募集锦州医科大学附属第一医院皮肤科就诊的 #$ 患者和门诊健康人为志愿者 对志愿者进行皮肤点刺试验 点刺试验阳性的 #$ 患者和点刺试验阴性的健康人为本研究的研究对象 共纳入 位健康人和 " 例 #$ 患者 #$ 诊 断符合. 年发布的 #$ 诊断指南 本实验要求所有 #$ 患者至少 周前停止服用抗过敏药物 本研究获得了锦州医科大学附属第一医院伦理委员会的批准 每位志愿者均签订了知情同意书,, 收集血液样本 采集研究对象的资料 表 每位研究对象均采集 外周静脉血于含 $# 抗凝剂的采血管中 2!6251!836213!38;35!67 人群 例数 年龄 岁 女 男 病史 年 发病年龄 岁 健康人.". #$ 患者 " * " "* *". 花粉 "." """.* 蒿草 "." "" ".* 梧桐. 螨虫. 螨虫 花粉."*. "" "". 螨虫 蒿草. "* ""*."". 螨虫 梧桐 "*. ""* *". 注 表中年龄 病史和发病年龄的描述均为中位数 极小值 极大值!

3 #期 杨蕊铭% 张慧云% 郑文娇% 等 -特应性皮炎患者嗜酸性粒细胞富集群中 7 物质及其受体 9:%; 的表达变化 $DE" 流式细胞术分析血液中嗜酸性粒细胞富集群 87 和 9:%; 的 表达 " 全 血加入尘 螨蒿草花 粉 和 梧 桐花粉 过 敏 原 粗 提 液!终 质 量 浓 度 为 $%%L$KZ 和 $K %$%L$KZ"%!Bd 水浴震荡孵育 %'& %#$$ 3离 心后弃去上清%加入死细胞 去 除 染 料 与 D2; 阻 断 剂% #F! 计学 意 义 者%用 C33 JO' 3*# 进 一 步 两 两 比 较'!#$$4 为差异有统计学意义' D" 结 "" 果 光孵育 %4K 3 后 裂 解 红 细 胞%离 心 后 用 固 定 透 膜 液 DF $">& 患 者 外 周 血 嗜 酸 性 粒 细 胞 富 集 群 中 3! 表 达降低 " 应用流 式 细 胞 术 检 测 56 患 者 外 周 血 嗜 酸 性粒细胞富集群!设门方法见图 %"中 87 的表达' 结 固定细胞%加入 抗 87 和 抗 9:%; 抗 体 孵 育%上 流 式 细胞仪检测嗜 酸 性 粒 细 胞 富 集 群 中 87 和 9:%; 的 果显示% 56 患者的嗜酸性 粒 细 胞 富 集 群 中 87> 细胞 的比例较健康对照组降低了 %% B 倍!!#$$$%%图 # 表达' 图!"%且 56 患 者 嗜 酸 性 粒 细 胞 富 集 群 中 87> 细 胞 $E" 统计学分析 " 应用统计软件 8788%!$ 分析数 据':/] JO " 秩和检验分析组间差 异%有统 的 CDE降低了 44@!! #$$$%%图?图 4"%而 过 敏 原对 87 的表达无影响!图!图 4"' 均匀混合后%避光孵育 %4K 3%加入抗 ==;! 抗体%避 图 $" 嗜酸性粒细胞富集群的设门方法 D %H 3L L V 3)' J 3 2'12 L5#细胞碎片去除后的细胞群& a#死细胞去除后的细胞群& =#细胞群& 6#嗜酸性粒细胞富集群! ==;!> 细胞群"' 图 D">& 患者血液嗜酸性粒细胞 3! 表达变化的流式细胞仪图 D #;) 3 YV e2* K 2L )' V '+) 3 V87 3 3)' V K'/K3), 1 L)' E <=#健康对照组& 56#特应性皮炎' *)#同型对照& 图 E" 人外周血中嗜酸性粒细胞富集群中 3!G 细胞的百分比 D!7 2 3 L V87> 3)' 3'/K3), 1 L)' 蒿草#蒿草花粉粗提液&尘螨#尘螨粗提液&梧桐#梧桐花粉粗提液&与相对应的健康人群比较%&!#$$$%' $$*++,+ /1/23 '. )#

4 . 西安交通大学学报 医学版 第 卷,., 患者外周血嗜酸性粒细胞富集群中 表达升高 应用流式细胞术检测 #$ 患者外周血嗜酸性粒细胞富集群中 ' 的表达情况 结果显示 图. 图 * 与健康对照组相比 #$ 患者嗜酸性粒细胞富集群中 ' 细胞的比例升高了 ) 而过敏原对 ' 的表达无影响 - 讨 论嗜酸性粒细胞是血液终末分化的粒细胞之一 可 图 人外周血嗜酸性粒细胞群中! / 细胞 1 的流式细胞仪图,1 67!21;853A ,-38 &% 371!31571!2! 同型对照 健康对照组 #$ 特异性皮炎 通过释放趋化因子 诱导炎症细胞募集而参与包括 #$ 在内的皮肤炎症反应 研究发现 #$ 患者外周血中嗜酸性粒细胞数量增多 并与 #$ 的严重程度相关 提示嗜酸性粒细胞可能参与 #$ 发病或募集皮损部位其他炎症细胞共同参与 #$ 的发病 图 人外周血中嗜酸性粒细胞富集群中! / 细胞 1 的表达,1" +,-38' 371!31571!2! 蒿草 蒿草花粉粗提液 尘螨 尘螨粗提液 梧桐 梧桐花粉粗提液 与相对应的健康人群比较 图 患者血液嗜酸性粒细胞 表达变化的流式细胞仪图,1.67!21;853A !38'1!371! ! 同型对照 健康对照组 #$ 特应性皮炎 &% 具有促炎性质 能够诱导炎症介质如细胞因子和组胺的释放并引起血管扩张 进而诱导过敏反 应 &% 来源广泛 体内的多种细胞包括神经细胞和炎性细胞如巨噬细胞 嗜酸性粒细胞 淋巴细胞和树突状细胞均可分泌 &% 研究发现皮肤病患者如慢 * 性自发性荨麻疹患者 湿疹患者 #$ 患者的血 浆 &% 水平显著升高 嗜酸性粒细胞可分泌 &% 因此 我们推断升高的血浆 &% 水平可能来源于嗜酸性粒细胞 并进一步探究了 #$ 患者血液嗜酸性粒细 胞 &% 的表达 结果发现 #$ 患者外周血嗜酸性粒细胞富集群中 &% 细胞减少了 * 倍 &% 嗜酸性粒细胞的 +,- 降低了 "" 由于 #$ 患者血液嗜酸性粒细胞数量相对较少 而中性粒细胞 单核细胞和淋巴细胞等均可分泌 &% 本研究结果提示可能嗜酸性粒细胞产生的 &% 不是 #$ 患者血浆 &% 的主要来源 升高的血浆 &% 水平可能与 #$ 患者血液 $ 细胞分泌 &% 增多有关!

5 期 杨蕊铭 张慧云 郑文娇 等 特应性皮炎患者嗜酸性粒细胞富集群中 % 物质及其受体 ' 的表达变化." 图 人外周血中嗜酸性粒细胞富集群中 / 细胞的百分比,1*%6!238' 371!31571!2! 蒿草 蒿草花粉粗提液 尘螨 尘螨粗提液 梧桐 梧桐花粉粗提液 与相对应的健康人群比较 ' 是神经系统和外周组织 &% 的高亲和力 " 受体 研究发现 &%' 复合物是炎症微环境. 重要的组成部分 ' 激动剂在过敏原诱导的 #$ 中起重要作用 ' 敲除鼠和 ' 拮抗剂可抑制神经 炎症皮肤损伤 ' 拮抗剂可以缓解 * 慢性瘙痒 提示 ' 参与 #$ 的发病 本研究首次用流式细胞仪技术发现 #$ 患者外周血嗜酸性粒细胞富集群中 ' 细胞的比例升高了 提示升高的血浆 &% 可能通过与嗜酸性粒细胞表面的 ' 结合而发挥其生物学功能 &%' 复合物在 #$ 发病机制中发挥重要作用 嗜酸性粒细胞是 过敏反应的主要效应细胞之一 #$ 鼠模型 &% 神经纤维附近嗜酸性粒细胞脱颗粒和 &% 可激活人类嗜酸性粒细胞的报道进一步证实了我们的发 现 然而 #$ 患者嗜酸性粒细胞表面 ' 表达升高的机制尚需进一步研究 此外 我们还发现尘螨 梧桐花粉和蒿草花粉过敏原对 #$ 患者嗜酸性粒细胞 &% 和 ' 表达的影响无统计学差异 可能提示过敏原不是通过诱导嗜酸性粒细胞分泌 &% 或表达 ' 参与 #$ 由于尘螨过敏原 艾蒿花粉过敏原和梧桐花粉过敏原对 #$ 患者外周血非嗜酸性粒细胞 &% 和 ' 的表达影 响不同 目前尚无过敏原调节嗜酸性粒细胞表达 &% 和 ' 的报道 因此过敏原调节 &% 和 ' 表达的机制尚需进一步研究 更详细的工作可能有助于发现潜在的机制 总之 #$ 患者嗜酸性粒细胞 ' 表达增强 提示嗜酸性粒细胞表达的 ' 可能参与 #$ 发病 ' 的拮抗剂或阻断剂可能是治疗 #$ 的有效制剂 参考文献 2'. &!#,#",&, /,*"+".& '213$1'.*)2&,#,,,+# ",&4/,."+.&.%2%$45!.''2$$!&$#,"+"#" #, # 6,""&,,.+""& 21!*. $'4'.*1.3.$1&* # '',,"#",+ "&.#.,,+ *& "4'4*)$.*2*$$'74./ '&## #+"""&, /".*+.*&.$4'12!$%2'!4'54* 744& # "### #",#,"&*."+& *51.'!514'7.'7 8&" #$"')*#6,"$+"#",# ##,&#*+"& 51.'75'514'7 41&+" #/ #"')*,## ",&!"*"& 14$151.'7 1354'7 '&!#",#,#,," " #""&.#,#$ *+& 14'$7*.. %.'2*44)&$# #"## +,"" # &.,*! "*+"& ! 5&#" "## "," # # ",&!"4.**"*+*.& *4/!.'$4%+$1.4*&$#".# ##&4/,"+& 下转第 *" 页!

6 期 麻姣姣 翟妮娜 杨 柳 等 隐源性脑梗死患者反常性栓塞量表评分与右向左分流严重程度的关系 *" &$*+""& )4' /!*1.54* *4!.* &." " +"#", ##&' *.& "4.74$!$1.*!.!)&/#"##+ ##,6 #/+ "&$.*+*"&.4$$4* $)4' /!1.4* /4&*4 #"++ #/ 2/.$" &#/"+"+ "& * 孙丽萍 温朝阳 & 心脏超声和经颅多普勒超声诊断右向左分流的研究进展 & 中国卒中杂志 "+& 江南 & 肺动静脉瘘的临床诊断和外科治疗 /& 郑州大学 & 陈晓丽 刘运财 张扬 等 & 肺动静脉瘘合并反常性 复发性脑栓塞一例 & 中华神经科杂志..& /*.%.%4%*14* /&", -,++ ### -,&!".+ #."+& 12!!.$$.2 */2!*&4#,"#,-,,##" &#+ "."+.& $4'4*!!/2!**'/4) &,6",#,", -#,#&$"+ &.)12'/.74%2*73.' *$4'7 1&+ #,, "6 -"#,,&#"# "".+"& )2!.*!2/24*542)&+ ##" #"-+ -,,#",,#, &)"*"+.& "$114'5 141$ 12*'4*$&+ #-",,",###&.,!".".+.&./4.$*2$.*2'/2*4!&!+ #"####, ",#,#&$*+ & * 郑华光 王伊龙 陈启东 等 & 反常性栓塞风险量表在合并卵圆孔未闭的隐源性卒中或短暂性脑缺血发作患者中的应用 & 中国卒中杂志."+..& 1.4*/4*1.54**4!.*&*# "#","# "-+ #2&' +.& 1.4* /4*1.54* */.'74.'2'2 4 &',"##- "-,&$.*"+.& )1.'.*'./1.)..$14)1!.&/+ ##,,"# ##.,#-",+& ##"#..+& )4' /!/.1.*41*1.54* *&/# #," #,"",6"&., "..* *+*& '.).'$1)32$13.!.!12!!.$&+,"##&""#!" *& 编辑 韩维栋 上接第." 页.*2$$2!!'25!4*74*!&+ 514'7.'751 &" #,#,,,"## #-##+ &$## "& #"#,"#+ *7*'/!.''$$.'/4*$&##" #, #&#.,&./,+& *+&.%2%$/.'14')2!2' /& 232/.!'.).!*.!!.)'2 &' +##$-", -#"#,,"+ #+""#,,,#&+ # #",&/,* /,+.& *+*& *..!*/*1 $.'/4*$&$##+ "7.*.+*42$7.$2'&#",##+,&4 /,"* # ')+#&," *"" ""*+""& "*& 编辑 卓选鹏!

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$ 西安交通大学学报 医学版 第 卷 变应性鼻炎 (*,7.,.#..-%& 是由过敏原 引起的鼻部炎症性疾病 主要症状是鼻塞 鼻腔分泌物增多 鼻腔瘙痒 目前认为遗传和环境如过敏原 均参与 %& 发病 '+* 样受体 '+*4*.,+, '& 是表达于不同细胞的模式识别受体家族 在过 敏性疾病中 第 卷第 期 年 月 西安交通大学学报 医学版!"#$## %&'& & 临床研究 变应性鼻炎患者血液嗜酸性粒细胞富集群中 和 的变化及其相关性 张晓文 张慧云 王 维 湛萌萌 何韶衡 锦州医科大学附属第一医院 变态反应与临床免疫研究中心 辽宁锦州 苏州市相城人民医院中心实验室 江苏苏州 $ 摘要 目的 探讨变应性鼻炎 %& 患者血液嗜酸性粒细胞富集群中 '&'&'& 和 '& 的变化及其相关性 探索其在

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