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1 第 15 章 辽东栎的遗传多样性 15.1 概述 辽东栎 (Quercus liaotungensis Koidz.) 以其叶侧脉或裂片数较少以及壳斗鳞片扁平诸特征与蒙古栎 (Q.mongolica) 相区别 近年来一些研究表明, 辽东栎上述特征有一定的变化范围, 与蒙古栎相近, 不能截然分开 因此有赞同其作为蒙古栎的一个变种 辽东栎仅分布在我国, 是华北暖温带落叶阔叶林的主要建群种, 有重要的经济和生态意义 目前北京地区仅偏远山区尚存在次生的辽东栎林 东灵山的辽东栎, 其叶裂片数和壳斗鳞片性状变异范围更大, 居于典型辽东栎和典型蒙古栎之间 北京东灵山干旱的边缘群体和湿润的中央群体 13 种酶 30 个可能位点的统计比较说明, 辽东栎有很高水平的同工酶多样性 95% 以上的遗传变异存在于群体内, 群体间不足 5%, 说明其异交性 实际观察的杂合子比例大于 Hardy-Weinberg 平衡的预期值, 可能系杂合子优势 边缘群体丢失更多稀有等位, 可能是生境片段化减少了基因流, 导致更高水平的遗传漂变 两群体有相似的年龄结构, 特点是中间年龄段 (25~35 年 ) 植株数显著减少, 估计是最后一次砍伐的结果 同工酶分析表明, 幼树和大龄树在很多位点上的频率相近而与中年树差别很大 看来, 因砍伐而改变的群体的遗传结构, 通过 30 年的封山育林有了较大的恢复 用聚丙烯酰胺凝胶代替琼脂糖胶, 用银染代替溴乙锭染色, 极大地提高了随机扩增多态 DNA(RAPD) 的灵敏度, 重复性也良好 应用改良的 RAPD 和 DNA 扩增指纹 (DAF) 研究了上述两个群体的 DNA 多样性, 仅统计 2kb 以下片段, 每个引物可扩增出 9~27 条带 多态性比例随引物而异, 从 33%~100%, 显示出每个植株都有其专一的 DNA 组成 Shannon 表型指数统计表明, 中央群体多样性略高于边缘群体 群体间遗传分化很低, 仅为 5.0% 黑龙江省帽儿山典型蒙古栎和山西省关帝山典型辽东栎同工酶和 DNA 多样性均很高, 电泳型和北京地区的类似 同工酶遗传距离说明东灵山群体居帽儿山和关帝山之间, 而更接近典型蒙古栎 DNA Shannon 表型指数统计表明, 这三个地区群体内多样性占 85%, 地区间占 15%, 说明辽东栎和蒙古栎遗传组成相当接近 某些扩增带频率统计结果表明, 东灵山群体居于两种典型栎树群体之间, 而接近山西辽东栎 有的扩增带可能是辽东栎专一的, 通过杂交渗入北京地区群体, 而典型蒙古栎则没有 地理上大范围的双向基因流的存在说明两种栎材曾有长期连续分布的历史 形态 同工酶 DNA 和生态分布的多样性, 为辽东栎生态系统的恢复和重建提供了足够的遗传基础 本章作者 : 王洪新, 胡志昂, 钟敏, 恽锐, 钱迎倩

2 156 中国动植物的遗传多样性 15.2 分类和分布 辽东栎 (Quercus liaotungensis Koidz.) 是 G.Koidzumi(1912) 建立的一个新种, 以叶近无毛 有 5~7 裂, 与叶缘波状 叶柄有毛而和被 Mayr(1906) 定名为 Q.wutaishanica 的种相区别 这两个种叶侧脉都是 5~7 对, 不同于侧脉 7~16 对的蒙古栎 (Q.mongolica Fisch.ex Turcz.), 后者壳斗的鳞片突起 不久,Nabai(1915) 把辽东栎作为蒙古栎的变种 Q.mongolica Fisch.ex Turcz.var.liaotungensis Nakai 从此, 辽东栎的分类地位一直有争议 周汉藩 (1934) 没有提到 Q.wutaishanica, 而以叶大小和壳斗鳞片是否突起作为蒙古栎和辽东栎的主要区别 陈嵘 (1937) 也根据叶的长短, 再加上叶柄是否有毛来区分蒙古栎和辽东栎 崔友文 (1953) 分种检索表采用陈嵘 (1937) 的, 但在文中提到壳斗鳞片是否突起是分种的标准 胡先骕 (1955) 只强调鳞片的性状 从刘慎谔 (1955) 起陆续出版的很多地方植物志中都认同 Koidzumi(1912) 的意见, 以叶裂片数目和壳斗鳞片性状区分蒙古栎和辽东栎, 但都没有提到 Q.wutaishanica 各植物志对叶裂片的数目记载有出入, 蒙古栎的裂片有 7~9 7~10 7~11 7~13 和 8~10 不等, 而辽东栎有 5~7 5~8 5~9 不等, 说明两个种的种内在叶裂片数目上有相当的变异范围, 种间有重叠 (5~9 和 7~13) 另一个分种特征是壳斗鳞片形状, 早期都记载两个种分别有疣状突起或扁平, 截然可分 但是近来的出版物描述有些变化 马恩伟 (1990) 在马毓泉主编的 内蒙古植物志 一书中提到 : 辽东栎和蒙古栎体态极相似, 它们的叶缘及总苞的形状在发育不良时不易区别, 所以 根据目前掌握的情况, 辽东栎暂作蒙古栎的变种 有待深入研究 徐永椿等(1985) 在郑万钧主编的 中国树木志 里描述辽东栎的壳斗 小苞片长三角形 扁平或背部突起, 蒙古栎是 背部呈半球形瘤状突起 蒙古栎的分布除我国东北三省 内蒙和华北地区外, 俄国的远东地区及朝鲜 日本也有 辽东栎是中国特有种, 主要分布在华北地区, 包括辽东半岛 北京市 内蒙 河北 山东 山西 陕西和四川省 马恩伟 (1990) 认为蒙古栎是东北夏绿阔叶林的重要建群种, 辽东栎是华北夏绿阔叶林的重要建群种 在内蒙古东部以蒙古栎为主, 西部以辽东栎为主, 在赤峰市一带交错分布 徐永椿等 (1985) 称蒙古栎是东北 600m 以下主要的落叶阔叶树种, 在华北地区 800m 以上常与辽东栎混生 总之, 无论是分种的形态特征还是地理分布, 都说明辽东栎和蒙古栎在形态上和生态上均有区别, 但不是截然分明的两个物种 这在栎属是相当普遍的 早在 1859 年达尔文在 物种起源 里就提到 A.de Candolle 论全世界栎材的著名报告 现在认为一方面是种内的多态性, 另一方面是种间杂交和渗入 当不只一个种生长在同一生境时, 可以找到完整的一系列种间杂种 所以从 Borzi(1911) 到 Burger(1975) 都怀疑生物学种的概念是否能应用到栎属 Van Valen(1976) 更提出栎属可能是一个没有物种的分类群 A.de Candolle 的专著中提到在同一枝条上发生变异的 12 种以上的性状 正如 Asa Gray 在评论这篇报告时所说的 : 此等性状一般已带有物种的定义 后来很多学者在野外观察中都观察到这种现象 内蒙古植物志 提到的发育的变化即表型可塑性可能也是辽东栎和蒙古栎界限不清的非遗传原因 中国植物志 中 栎属 的作者傅国勋同意辽东栎应和 Mayr(1906) 描述的 Q.wutaishanica 合并, 因此辽东栎的学名应该用 Quercus wutaishanica Mayr

3 第 15 章辽东栎的遗传多样性 157 贺士元 (1984) 主编的 北京植物志 中推论北京市山区原始植被在海拔 800~1 200m 辽东栎是主要树种 ; 海拔 1 200~1 500m 的山区是以华北落叶松和辽东栎为主的针阔叶混交林 谢晋阳 陈灵芝 (1994) 在多年植被研究的基础上指出, 辽东栎在我国整个暖温带落叶阔叶林生态系统中的重要性, 并得出辽东栎作为北京地区 顶极物种 的初步结论, 说明辽东栎有极重要的经济和生态作用 由于长期 反复的砍伐, 北京市及其附近地区已无原始林, 只有门头沟区东灵山中国科学院北京森林生态系统定位站附近, 因小龙门林场几十年的封山育林, 使辽东栎林已经部分地恢复和发展 1991~1995 年, 我们选择了处于不同生境的辽东栎群体进行同工酶和 DNA 扩增片段长度多态性的研究, 为华北地区落叶阔叶林生态系统的恢复和重建提供遗传资料 我们选取的一个取样群体是位于北京市门头沟的北京市东灵山群体, 另两个群体是位于黑龙江省帽儿山老爷岭的典型蒙古栎群体和山西省关帝山庞泉沟的典型辽东栎群体 15.3 同工酶 东灵山群体东灵山辽东栎群体同工酶的研究主要进行了阳坡和阴坡群体各 50 株共计 13 种酶 30 个可能位点的对比分析, 从基因频率计算各种遗传结构参数 遗传多样性的测度采用 Nei(1978) 的方法 东灵山辽东栎同工酶空间遗传结构的研究结果表明辽东栎群体内存在丰富的遗传变异, 多态位点百分数为 86.6%, 等位基因平均数为 2.25, 两群体遗传结构的相似性程度很高, D=0.029,G ST 不到 5% 说明变异水平相近, 遗传多样性 95% 以上存在于群体内 没有发现群体专一的基因位点, 仅个别位点上两群体频率差异较大, 可能与对小生境 ( 主要是水分状况 ) 的适应有关 对不同年龄段的初步计算结果显示基因频率的动态变化可能有其适应意义 崖口群体丢失更多稀有基因可能是生境片段化造成的 ( 钟敏等 1995) Michaud et al.(1995) 也报道冬青栎 (Q.ilex L.) 边缘群体丢失罕见中性等位现象, 认为是不利环境有更强的选择压 上文所分析的主要是幼树 (65%),26~33 年生的中间年龄段仅 11 株 为此从附近其他 4 个群体分别采集幼树 48 株 中年树 31 株和老年树 64 株, 分析了有适应意义的 3 种酶的 11 个位点, 得到类似结果 由此可以看出, 人为破坏对天然辽东栎林遗传结构造成的影响 近年来栎树的群体遗传结构正在向天然林的结构转变, 遗传多样性的研究可用于退化生态系统恢复程度的监测 典型蒙古栎和典型辽东栎群体对帽儿山 东灵山和关帝山 3 个地区 5 种酶 13 个可能位点统计的遗传结构参数表明, 东灵山群体有最高的多样性, 遗传上位于帽儿山和关帝山之间 15.4 DNA 扩增多态性 随机扩增多态 DNA(RAPD)(Williams et al.1990) 和 DNA 扩增指纹 (DAF)(Caetano-

4 158 中国动植物的遗传多样性 Anolles et al.1991) 用于分析东灵山标准样地和崖口的两个群体的 DNA 多样性, 也用于分析典型蒙古栎和辽东栎群体 RAPD 和 DAF 是目前最常用的检测 DNA 扩增多态性的方法, 两者的差别见表 15-1 我们对比了两种电泳和染色方法对辽东栎 DNA 样品扩增产物的影响 (Hu et al.1995; 胡志昂等 1997), 结果说明,PAGE 和银染在分辨率和灵敏度上都优于琼脂糖电泳和溴乙锭染色 同一个 RAPD 产物用 Williams(1990) 方法只能分出 10 条带, 而用 PAGE 和银染能分出清晰的 24 条带 两种方法都证明 DAF 的带数比 RAPD 多, 说明短引物增加扩增子 (amplicon) 的数目 但 DAF 产物远大于 Williams et al.(1990) 的 RAPD, 主要是因为用了 PAGE 和银染 因为银染的高灵敏度, 所以每次电泳只要加 0.001~0.003ml 扩增产物, 扩增一次所得 20ul 产物可电泳 5~15 次 而用 EB 染色要加 0.005~0.015ml, 扩增一次只能点样 1~2 次 鉴于 10mer 的 RAPD 引物很容易成批购买到, 因此, 我们用 DAF 的 PAGE 和银染方法进行 RAPD 已应用于对栎属 锦鸡儿和野大豆的研究 实验的重复性均良好, 可提供高得多的 DNA 序列变化信息 东灵山湿润和干旱群体的对比用 9 个 RAPD 引物 (OPD OPH08 OPJ04 06) 和 3 个 DAF 引物 (8.6L 8.7b 8.9a) 分别对比分析了标准样地和崖口群体各 12 株植物芽的 DNA 扩增多态性 因为 RAPD 和 DAF 产物多数是显性标记 (Williams 1990;Prabhu,Gresshoff 1995), 如没有遗传分析, 不能区别纯合子和杂合子, 不能用 Nei(1978) 的基因多样性参数统计方法, 因此代之以 Shannon 表型信息指数 (Chalmers et al.1992): H=- Pi log 2 Pi Pi 是 i 扩增带的频率 Shannon 表型多样性可分为群体内多样性 Hpop 和种内多样性 Hsp, Hpop/Hsp 是群体内多样性百分数,Hsp-Hpop/Hsp 是群体间多样性比例, 相当于遗传分化系数 G ST 仅统计 2.0kb 以下的片段, 就有 12 个引物的扩增带数为 9~27, 其中多态百分数为 0.50~1.00, 百分数随引物而变化很大, 两群体间变化较小 标准样地的平均 DNA 多样性为 5.117, 略高于边缘的崖口群体的 群体间只占总多样性的 5.0%, 与同工酶 GST 数值接近 东灵山群体与典型蒙古栎和辽东栎的对比帽儿山 东灵山 关帝山群体 DNA 多样性均很高 Shannon 表型指数统计表明了三地区之间的 DNA 多样性占 15.2%, 是地区内遗传分化的 3 倍 有的扩增带如 OPD 可能是辽

5 第 15 章辽东栎的遗传多样性 159 东栎专有的, 通过杂交渗入东灵山群体 东灵山群体 OPH 398 的频率在帽儿山与关帝山群体之间 其他位点如 OPD OPJ OPD OPD 也表现东灵山群体的过渡性并更接近关帝山 东灵山群体的居中性质和形态分化一致 15.5 生态意义 虽然目前北京东灵山辽东栎群体处于退化生态系统正在恢复的阶段, 但在形态 蛋白质和 DNA 水平上均有与正常群体类似的遗传多样性水平, 反映了辽东栎的异交性 长生活史以及连续分布的历史 说明北京地区辽东栎具有恢复其建群种生态系统的充分的遗传潜力 东灵山及其他地区封山育林的实践也证明, 只要停止人为破坏, 生态系统的恢复和重建是可以实现的

程汉良 夏德全 吴婷婷 孟学平 吉红九 董志国 陈淑吟 对文蛤 青蛤 硬壳蛤 江户布目蛤 薄片镜蛤 和菲律宾蛤仔 种帘蛤科贝类和 个地理种 群文蛤 大连 连云港 湛江 防城港 的细胞色素 氧化酶亚基 基因片段的核苷酸序列进行了分析 以探讨这一序列在种质鉴定 种群遗传结构和分子系统发生研究中的应用价值 测序结果 表明 所有物种扩增片段长度均为 序列 含量 明显高于 含量 物种间共有变异位点 个 其中简约信息位点

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