256 WORLDCHINESEMEDICINE September207,Vol.2,No.9 导的中枢神经系统疾病, 由于其临床表现和病理变化与人类多发性硬化症非常相似, 因此, 目前常常制备动物 EAE 作为研究 MS 的实验模型 [] 前期研究发现, 补肾益髓 (BuShenYiSui,BS

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十吕潘
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1 世界中医药 207 年 9 月第 2 卷第 9 期 255 补肾益髓方及其拆方对自身免疫性炎小鼠和中 BDNF/TrkB 的影响师一民王永强张秋霞安陈振振辰赵 2 樊永平晖李李君玲 ( 首都医科大学中医药学院, 中医络病研究北京市重点实验室, 北京,00069;2 首都医科大学附属北京天坛医院, 北京,00050) 明王齐蕾放摘要目的 : 观察补肾益髓 (BuShenYiSui,BSYS) 方及其拆方补肾 (BuShen,BS) 和化痰活血 (HuaTanHuoXue,HTHX) 方对实验性自身免疫性炎 (ExperimentalAutoimmuneEncephalomyelitis,EAE) 小鼠和中源性神经营养因子 (Brain derivedneurotrophicfactor,bdnf) 与受体 TrkB 的影响方法 : 将 EAE 造模小鼠于当天和第 7 天背部皮下注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白 (MyelinOligodendrocyteGlycoprotein,MOG) 抗原, 并在免疫当天和第 2 天后腹腔注射百日咳毒素 (Pertusistoxin,PTX) 每日对小鼠进行不同药物的灌胃, 并于造模第 20 和 40 天分别取和, 采用实时荧光定量 RT PCR(qRT PCR) 与 WesternBlot 法检测 BDNF 和 TrkB 的表达结果 :BSYS 及其拆方 BS 方与 HTHX 方均可明显上调 EAE 小鼠和 BDNF 和 TrkBmRNA 与蛋白的表达, 与模型组比较, 差异均有统计学意义 (P<0 05 或 P<0 0) BSYS 方作用优于其 BS 与 HTHX 方, 但差异无统计学意义 (P>0 05) 结论:BSYS 及其拆方促进轴突修复的作用可能与增强 BD NF/TrkB 表达有关,BSYS 全方更有显著趋势关键词补肾益髓方 ; 拆方 ; 多发性硬化 ; 实验性自身免疫性炎 ; 源性神经营养因子 /TrkB EfectsofBushenyisuiFormulaandItsDecomposedFormulasonExpresionsofBDNF/TrkBinBrain andspinalcordofmicewithexperimentalautoimmuneencephalomyelitis ShiYimin,WangYongqiang,AnChen,ZhaoHui,LiJunling,QiFang,ZhangQiuxia, ChenZhenzhen,FanYongping 2,LiMing,WangLei (CapitalMedicalUniversity,Beijing00069,China;2BeijingTiantanHospitalAfiliatedCapital MedicalUniversity,Beijing00050,China) Abstract Objective:ToobserveefectsofBushenyisui(BSYS)formulaanditsdecomposedformulas,BuShen(BS)andHua TanHuoXue(HTHX),ontheexpresionsofbrain derivedneurotrophicfactor(bdnf)andtrkbinthebrainandspinalcordof micewithexperimentalautoimmuneencephalomyelitis(eae).methods:theeaemicewereinjectedsubcutaneouslywiththemy elinoligodendrocyteglycoprotein(mog) inthebackonthestdayandthe7th,andwereinjectedintraperitonealywithper tusistoxin(ptx).althemicewereadministeredintragastricalywiththediferentmedicineordistiledwateronceaday.the brainandspinalcordofmicewereremovedfortheexaminationonday20thand40th.theexpresionsofbdnfandtrkbmrna andproteinsweredetectedbyrealtimefluorescentquantitative(qrt PCR)andWesternBlotanalysis.Results:Theexpresionsof BDNFandTrkBinthebrainandspinalcordofEAEmiceweresignificantlyup regulatedbybsysanditsdecomposedbsand HTHX,comparedwiththeEAEmice(P<0 05).TheefectivetrendofBSYSontheaboveindexeswasbeterthanthatofthede composedbsandhthxformulas,buttherewasnostatisticalsignificance(p>0 05).Conclusion:TheefectofBSYSanditsde composedformulas,bsandhthx,onpromotingaxonalrepairmightberelatedtoenhancetheexpresionofbdnf/trkb,andthat ofbsyswasmoresignificant. KeyWords BuShenYiSuianditsdecomposedformulas;Multiplesclerosis;Experimentalautoimmuneencephalomyelitis;BD NF/TrkB 中图分类号 :R228;R242 文献标识码 :A doi:0.3969/j.isn 实验性自身免疫性炎 (ExperimentalAu toimmuneencephalomyelitis,eae) 是一种 T 细胞介基金项目 : 国家自然基金项目 ( , ); 北京市教委重点项目 (KZ ); 北京市属高等学校高层次人才引进与培养计划长城学者项目 (CIT&TCD ) 作者简介 : 师一民 ( ), 男, 在读硕士, 首都医科大学中医药学院, 主要从事中医药防治病的基础研究通信作者 : 李明 (963 ), 女, 博士, 教授, 研究方向 : 方剂配伍规律及功效机制研究,E mail:363863@63 com; 王蕾 (967 0 ), 女, 博士, 教授, 研究方向 : 中医药防治病的功效及机制研究,Tel:(00)839626,E mail:tmwangl@ccmu edu cn

2 256 WORLDCHINESEMEDICINE September207,Vol.2,No.9 导的中枢神经系统疾病, 由于其临床表现和病理变化与人类多发性硬化症非常相似, 因此, 目前常常制备动物 EAE 作为研究 MS 的实验模型 [] 前期研究发现, 补肾益髓 (BuShenYiSui,BSYS) 方对 MS 患者及其 EAE 动物模型具有明显的神经保护作用 [2] 拆方研究发现, 补肾益髓及其拆方补肾和化痰活血 (HTHX) 方均能降低 EAE 小鼠的神经功能评分, 减轻其和的病理炎性反应损伤, 减轻轴突损伤和促进其神经修复 [3 5] 但其促进损伤的轴突修复机制还不清楚研究证实, 神经营养因子能够促进神经细胞的存活生长分化在众多的神经生长因子中, 源性神经营养因子 (Brain derivedneurotro phicfactor,bdnf) 是成年大鼠内分布最为广泛的神经营养因子, 主要在皮质和海马中合成 BDNF 共有 2 个受体, 一个是低亲和力的 P75 受体, 另一个是高亲和力受体 Trk,BDNF 与 TrkB 结合后激活 RAS/ERK 与 PI3K/AKT 信号通路, 进而调节其下游分子来发挥其神经修复作用 [6 8] TrkB 受体在此信号通路中起着至关重要的作用其为了深入探讨补肾益髓及其拆方促进在轴突修复的作用机制, 本实验主要采用实时荧光定量 RT PCR(qRT PCR) 与 WesternBlot 法观察补肾益髓及其拆方补肾和化痰活血方对 EAE 小鼠与中 BDNF 和 TrkB 表达的影响材料与方法实验材料实验动物 70 只 SPF 级 C57BL/6 雌性小鼠 ( 体重 5~7g) 购于北京维通利华实验动物技术有限公司 [ 许可证号为 SCXK( 京 ) ] 动物饲养于首都医科大学实验动物中心 ( 许可证号 SYXK( 京 ) ) 的独立通气笼内, 温度 8~ 22, 相对湿度 40% ~60%, 自由饮水和饮食所有实验项目均通过首都医科大学伦理委员会批准 2 实验药物补肾益髓及其拆方补肾和化痰活血方均有北京亚东生物制药有限公司制备补肾益髓方由生地黄熟地黄浙贝母水蛭全蝎益母草等组成 ; 补肾方由生地黄熟地黄等组成 ; 化痰活血方由浙贝母水蛭全蝎益母草等组成醋酸泼尼松片 (PrednisoneAcetate,PA) 由天津力生制药有限公司生产, 梓醇 (Catapol,CA) 由杭州康木科技有限公司提供 3 主要试剂髓鞘少突胶质细胞糖蛋白 (Myelin OligodendrocyteGlycoprotein,MOG) 由北京旭和源生物科技有限公司合成 ; 灭活结核分支杆菌 (Myco bacteriumtuberculosis,tb, 货号 234) 由美国 BD 公司提供完全弗氏佐剂 (CompleteFreund sadju vant,cfa, 货号 F588) 百日咳毒素 (PertusisTox in,ptx, 货号 P7208) 均由美国 Sigma 公司提供 ;PCR 引物由大连 TaKaRa 公司合成,RNApreppure 动物组织总 RNA 提取试剂盒 ( 离心柱型 )(DP43), TIANScriptcDNA 第一链合成试剂盒 (KR04),Real MasterMix(SYBR Green) 试剂盒 (FP204),2 Taq PCR MasterMix(KT20 0),50bp DNA Ladder (MD08),MarkⅢ (MD03),GeneGreen 核酸染料 (RT20), 均购自天根生化科技有限公司 2 方法 2 分组与模型制备将小鼠随机分为 7 组 : 正常 (NC) 模型 (MO) PA 组 CA 组 BS 组 HTHX 组及 BSYS 组每组 0 只 EAE 造模小鼠于造模当天与造模后第 7 天背部皮下注射 0 2mL 抗原, 包括 MOG (50μg) CFA(00μL) 和 TB(0 3mg), 当天和第 2 天后腹腔注射 500ng 的 PTX NC 小鼠注射相同剂量的生理盐水 2 2 给药方法 BSYS 方组小鼠给予 BSYS 混悬液 (3 02g 生药 /kg 体重 ) 灌胃 ;BS 方组给予 BS 混悬液 ( 44g 生药 /kg 体重 );HTHX 方组给予 HTHX 混悬液 ( 57g 生药 /kg 体重 );PA 组小鼠给予 PA 混悬液 (5mg/kg 体重 );CA 组给予 CA(40mg/kg 体重 );NC 和 MO 组均给予等体积的蒸馏水灌胃次 /d, 共计 40d 2 3 标本采集于造模第 20 天 ( 急性期 ) 和第 40 天 ( 缓解期 ), 小鼠 0% 水合氯醛 (90mg/kg) 腹腔注射麻醉后, 取其及, 快速放入液氮后移至 -80 冷冻保存 2 4 qrt PCR 检测小鼠及中 BDNF TrkB mrna 的表达按照动物组织总 RNA 提取试剂盒说明书提取小鼠组织与组织 RNA, 然后根据 RT PCRkit 的说明反转录为 cdna 引物序列见表扩增条件为 95 5min 变性,95 0s,52 30s,72 30s, 共 40 个循环以基因 β tubulin 为内参对照,2 Ct(Ct 代表循环阀值 ) 表示 BDNF 和 TrkBmRNA 相对表达量 2 5 WesternBlot 检测小鼠及中 BDNF 和 TrkB 蛋白的表达取小鼠与组织, 按 7 的比例加入蛋白裂解液, 匀浆后, 置于冰上 30min, 4 离心 20min 后, 取上清液建立标准曲线, 每孔加上清液 00μL, 将 96 孔板置于 37, 反应 20min 后, 严格按照试剂盒说明书步骤进行检测

3 世界中医药年月第卷第期用酶标仪测定ｍ处吸光值制作标准曲线计组小鼠和的ＴＢｍＲＮＡ表达明显下降算样本浓度根据样本蛋白浓度稀释使其终浓度为Ｐ与组比较各观察组均能显著升 μｇ μｌ取样本 μｌ含 μｇ蛋白蛋白样品进十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶ＳＤＳ行高ＴＢｍＲＮＡ表达尤其和ＹＳ方组差异有统计学意义Ｐ而治疗各组之间差异无统ｍ脱脂奶粉室温封闭ＧＥ电泳电转见表计学意义Ｐｈ分别加入ＢＤＮＦＴＢ β ｂ的单克隆抗体过夜后ＴＴ洗膜次每次ｍ加入辣根过氧化物酶标记的二抗抗兔小鼠室温孵育ｈ洗膜次每次ｍ后于暗室进行胶片曝光显影和定影通过ＩｍｇＪ图像分析系统测定各蛋白条带的灰度值以目的蛋白条带的灰度值与内参 β ｂ条带灰度值的比值表示各蛋白的相对表达水平表引物序列基因表组小鼠和中ＴＢｍＲＮＡ的变化第天第天 ± 第天第天 ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ＨＴＨＸ ± ± ± ± ＹＳ ± ± ± ± 注与组比较Ｐ与组比较ＰＰＹＳ及其拆方和ＨＴＨＸ方对ＥＡＥ小鼠扩增产物长度ｂ引物序列ＢＤＮＦ上游ＴＡＧＴＴＧＧＡＡＧＣＣＴＧＡＡＴＧＡＡＴＧ与脊髓中ＢＤＮＦ蛋白表达的影响ＷＢ结果显示第天和第天组小鼠和的ＢＤＮＦ蛋白表达较组明显下降Ｐ与下游ＣＴＧＡＴＧＣＴＧＧＡＡＣＣＧＧＡＣＴＡＡＧＣＧＴＴＧＡＣＣＣＧＧＡＧＡＴＢ上游下游ＡＡＡＣＴＴＴＡＡＧＣＣＧＧＡＡＴＣ组比较各观察组均能显著升高ＢＤＮＦ蛋白表达尤但治疗各其和ＹＳ方组更为明显Ｐ统计学方法所有实验数据应用ＳＰＳＳ珋统计软件处理计量资料以ｘ± 表示采用单因组之间差异无统计学意义Ｐ见图表素方差分析组间比较采用ＬＳＤ检验以Ｐ为差异有统计学意义表组小鼠和中ＢＤＮＦ蛋白的变化天第第天第天第天结果 ± ＹＳ及其拆方和ＨＴＨＸ方对ＥＡＥ小鼠 ± ± ± ± 与中ＢＤＮＦｍＲＮＡ表达的影响ＱＲＴＰＣＲ结 ± ± ± ± ± 果显示在造模的第天和第天组小鼠 ± ± ± ± 和的ＢＤＮＦｍＲＮＡ表达较组明显下降Ｐ与组比较各观察组均能显著升高ＢＤ ± ± ± ± ± ± ± ± ＨＴＨＸ ± ＹＳ ± ± ± ± ± 注与组比较Ｐ与组比较ＰＰＮＦｍＲＮＡ表达尤其和ＹＳ方组差异更为明显Ｐ但治疗各组差异无统计学意义见表珋± 表组小鼠和中ＢＤＮＦｍＲＮＡ的变化ｘ第天第天 ± 第天第天 ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ＨＴＨＸ ± ± ± ± ＹＳ ± ± ± ± 图各组小鼠中ＢＤＮＦ蛋白的表达注与组比较Ｐ与组比较ＰＰＹＳ及其拆方和ＨＴＨＸ方对ＥＡＥ小鼠与中ＴＢｍＲＮＡ表达的影响ｑｒｔＰＣＲ结果显示在造模第天和第天时和组比较图组小鼠中ＢＤＮＦ蛋白的表达

4 ＷＯＲＬＤＣＨＩＮＥＳＥＭＥＤＩＣＩＮＥＳｍｂＶＮＹＳ及其拆方和ＨＴＨＸ方对ＥＡＥ小鼠ＣＳＰＧ则显著上升说明神经轴突损伤后神经细胞与中ＴＢ蛋白表达的影响内运输物质塑性等方面发生障碍经过ＹＳ及ＷＢ结果显示第天和第天组小鼠和的ＴＢ蛋其拆方与ＨＴＨＸ方治疗后上述指标得到了明显与组比白表达较组明显下降Ｐ改善说明ＹＳ及其与ＨＴＨＸ方对ＥＡＥ小Ｂ蛋白表达尤其较各观察组均能显著升高Ｔ鼠轴突损伤修复作用但其作用机制不清楚近年和ＹＳ方组更为明显Ｐ但治疗各组之间来研究发现轴突修复再生过程中存在着多种影响差异无统计学意义Ｐ见图表因素神经营养因子类物质的缺乏是导致再生困难的主要因素之一ＢＤＮＦ与其ＴＢ受体参与了神经保护作用ＭＳ和ＥＡＥ小鼠ＢＤＮＦ表达显著降低基因敲除ＢＤＮＦ缺失后制备ＥＡＥ小鼠模型其神经损伤症状加重本实验也发现ＥＡＥ小鼠的神经营养因子ＢＤＮＦ及其受体ＴＢ的基因和蛋白图组小鼠中ＴＢ蛋白的表达变化表达无论在急性期还是在缓解期均明显降低但在ＭＳ患者脱髓鞘区域ＢＤＮＦ表达增高推测是起到神经保护和自我修复作用外源性ＢＤＮＦ可以延长其潜伏期降低神经功能评分而经过ＹＳ及其拆方与ＨＴＨＸ方治疗后ＢＤＮＦＴＢ的表图组小鼠中ＴＢ蛋白的表达Ｂ蛋白的变化表组小鼠和中Ｔ第天第天 ± ± 第天增加神经营养因子及其受体的表达有关并且ＹＳ ± 全方较拆方的作用更有显著趋势进一步的研究发 ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ＨＴＨＸ ± ＹＳ ± ± ± ± 注与 ± 组比较Ｐ与 ± 与ＨＴＨＸ方能够促进轴突再生修复的实验结果推测ＹＳ及其拆方促进轴突修复的作用机制可能与天第达明显增加结合前期发现的ＹＳ及其拆方 ± 组比较ＰＰ讨论ＢＤＮＦ是年由德国生物学家Ｂｄ及其同事首次从猪中纯化并发现具有防止神经元死亡功能的一种蛋白质是目前研究最为广泛的神经营养因子之一内嗅皮层是位于颞叶邻近海马的区域内嗅皮层和海马通过纤维投射和神经元换元形成内嗅皮层海马环路内嗅皮层是ＢＤＮＦ产生的ｃｈ和主要部位并能够转运到海马ＭＭ认为ＢＤＮＦ和ＴＢ的减少会降低突触可塑性和损伤神经元是皮层和海马损伤的主要原因有研究结果显示ＢＤＮＦ与其受体ＴＢ共同作用可现ＢＤＮＦＴＢ活化后激活其下游信号的ＰＩＫＡＫＴ通路并参与了轴突损伤后的神经修复研究ＭＳ患者大白质的基因表达发现ＰＩＫＡＫＴ信号通路有助于内环境的稳定与神经保护作用上述研究为ＹＳ方治疗ＭＳ的机制提供的部分客观依据深入的作用机制还有待进一步研究参考文献王维治神经系统脱髓鞘疾病Ｍ北京人民卫生出版社房玲樊永平赵晖等补肾益髓方防治多发性硬化的研究进展Ｊ中医药导报安辰王永强师一民等补肾益髓方及其拆方对实验性自身免疫性炎小鼠和中 β ＡＰＰ和ＭＡＰ表达的影响Ｊ中国中医急症安辰王永强师一民等补肾益髓方及其拆方对实验性自身免疫性炎小鼠的神经保护作用及ＮＦ和ＣＳＰＧ表达的影响Ｊ中华中医药杂志增加突触可塑性促进轴突及树突生长增加突触末师一民王永强安辰等补肾益髓方及其拆方对实验性自身免端密度并激活下游的ＰＩＫＡＫＴ通路发挥神疫性炎小鼠和中Ｔ和Ｂｂ表达的影响经保护作用本课题组的前期研究发现ＥＡＥ小鼠存在轴突ｂ损伤状态主要表现在神经细胞骨架蛋白 β ＮＦ及ＭＡＰ显著下降而 β ＡＰＰＰＴ及Ｊ世界中医药ＹｈＡＣＰＭＰｃｂｄｎｆＴＢｇｇｍｃｄｄＪＤｖｎｂＧｚｚａＭＡｖｄＧＧｚｚＢＣＣｄ

5 世界中医药 207 年 9 月第 2 卷第 9 期 259 molecularmechanismsregulatingneuronalgrowthbybrain derived neurotrophicfactor[j].cytoskeleton(hoboken).206,73(0): [8] 师一民, 李明, 王蕾, 等. 神经营养因子在多发性硬化神经再生修复中的作用研究进展 [J]. 医学综述,206,22(24): [9]PilyPK,GrosbergS.Howdospatiallearningandmemoryoccurin thebrain:coordinatedlearningofentorhinalgridcelsandhippocam palplacecels[j].jcognneurosci,202,24(5): [0]BuzsákiG,MoserEI.Memory,navigationandthetarhythm inthe hippocampal entorhinalsystem[j].natneurosci,203,6(2): []LuB.BDNFandactivity dependentsynapticmodulation[j].learn Mem,2003,0(2): [2]MarchetiC,MarieH.HippocampalsynapticplasticityinAlzheimer sdisease:whathavewelearnedsofarfromtransgenicmodels[j].rev Neurosci,20,22(4): [3]YangLC,LiJ,XuSF,etal.L 3 n butylphthalidepromotesneuro genesisandneuroplasticityincerebralischemicrats[j].cnsneu roscither.205,2(9): [4]ZhaoW,LuoC,WangJ,etal.3 N butylphthalideimprovesneuronal morphologyafterchroniccerebralischemia[j].neuralregenres, 204,9(7): [5]XingM,SunQ,WangY,etal.HydroxysafloryelowA increases BDNFandNMDARsinthehippocampusinavasculardementiarat model[j].brainres,206,642: [6]FangM,YuanY,LuJ,etal.Scutelarinpromotesmicroglia mediated astrogliosiscoupledwithimprovedbehavioralfunctionincerebralis chemia[j].neurochemint,206,97:54 7. [7]DeSantiL,AnnunziataP,SesaE,etal.Brain derivedneurotrophic factorandtrkbreceptorinexperimentalautoimmuneencephalomye litisandmultiplesclerosis[j].jneurolsci,2009,287( 2):7 26. [8]LeeDH,GeyerE,FlachAC,etal.Centralnervoussystem rather thanimmunecel derivedbdnfmediatesaxonalprotectiveefects earlyinautoimmunedemyelination[j].actaneuropathol,202, 23(2): [9]Makar,TK.,Trisler,D,Sura,KT.etal.Brainderivedneurotrophic factortreatmentreducesinflammationandapoptosisinexperimental alergicencephalomyelitis[j].jneurolsci,2008,270( 2): [20]GraumannU,ReynoldsR,SteckAJ.Molecularchangesinnormal appearingwhitematerinmultiplesclerosisarecharacteristicofneu roprotectivemechanismsagainsthypoxicinsult[j].brainpathol, 2003,3(4): ( 收稿责任编辑 : 杨觉雄 ) ( 上接第 254 页 ) [20]ParianteCM,MilerAH.Glucocorticoidreceptorsinmajordepres sion:relevancetopathophysiologyandtreatment[j].biolpsychia try,200,49(5): [2]MülerM,HolsboerF,KeckME.Geneticmodificationofcorticoste roidreceptorsignaling:novelinsightsintopathophysiologyandtreat mentstrategiesofhumanafectivedisorders[j].neuropeptides, 2002,36(2 3):7 3. [22]OwensM,HerbertJ,JonesPB,etal.Elevatedmorningcortisolisa stratifiedpopulation levelbiomarkerformajordepresioninboyson lywithhighdepresivesymptoms[j].procnatlacadsciusa, 204,(9): [23] 刘晓萌, 张荣, 董世芬, 等. 乌灵菌粉贯叶连翘复方制剂干预对慢性不可预知应激大鼠模型抗抑郁作用及机制的研究 [J]. 中国比较医学杂志,206,26(5):8 86. [24] 胡霖霖, 张永华. 百合逍遥散对抑郁模型大鼠行为学及 HPA HPT HPG 轴的影响 [J]. 中医杂志,204,55(9): [25]SenguptaJN,SahaJK,GoyalRK.Stimulusresponsefunctionstudies ofesophogealmechanosensitivenociceptorsinsympatheticaferents ofposum[j].jneurophsiol,990,64: [26] 孙燕, 柳锋霖, 宋耿青, 等. 急性和慢性束缚应激对大鼠内脏敏感性和神经内分泌的影响 [J]. 中华消化杂志,2006,26():38 4. [27]RomeoRD.PubertalmaturationandprogrammingofHypothalamicp ituitary adrenalreactivity[j].front.neuroendocrinol,200,3: [28] 梁佳, 卢峻, 王俊仁, 等. 不同针刺方法对慢性应激抑郁大鼠下丘 CRH 基因表达及血清 ACTH CORT 的影响 [J]. 北京中医药大学学报,202,35(4): [29] 贾宝辉, 李志刚, 时宇静, 等. 电针对慢性应激模型大鼠行为学及 HPA 轴相关激素的影响 [J]. 针刺研究,2004,29(4): [30] 游伟, 时宇静, 韩焱晶, 等. 电针对慢性应激抑郁模型大鼠糖皮质激素及其受体基因表达的影响 [J]. 针刺研究,200,35(4): [3]HorowitzMA,ZunszainPA.Neuroimmuneandneuroendocrineab normalitiesindepresion:twosidesofthesamecoin[j].annny AcadSci,205,35(): ( 收稿责任编辑 : 王明 )

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